丙型肝炎病毒 NS4A蛋白在胰腺细胞 cDNA文库中的结合蛋白基因的筛选

目的:从人胰腺细胞cDNA文库中筛选出与丙型肝炎病毒(HCV)NS4A蛋白存在相关作用并且参与糖、脂类代谢过程的结合蛋白,为研究HCV影响糖、脂类代谢的分子生物学机制提供实验依据.方法:构建pGBKT7-NS4A作为诱饵质粒,转化酵母菌株AH109,用SD/-Trp筛选阳性菌落.配合两种重组酵母菌株AH109与Y187...     

HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体相互作用对细胞基因表达的影响

目的 探讨HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互作用后对细胞基因表达的影响.方法 分别构建HCV NS4A及CAML真核表达载体pCMV/Myc-NS4A及pcDNA3.1/HisA-CAML,分别转染pCMV/Myc-NS4A(实验组)及pCMV/Myc空载体(对照组)至稳定表达CAML的293细胞,提取总mRNA,逆转录为cDNA,基因芯片技术检测转染NS4A对稳定表达CAML细胞株基因表达谱的影响.结果 与细胞凋亡有关的Rho蛋白信号转导相关基因有7种,4种呈现上调表达,3种呈现下调表达.结论 转染HCV NS4A后的293-CAML细胞的基因表达谱发生了一系列改变,尤其是一些与细胞凋亡相关的Rho蛋白信号转导途径相关基因.HCV NS4A可能通过与CAML相互作用对细胞凋亡过程产生影响,并且主要以负调节为主,从而赋予细胞对凋亡的抵抗,并可能因此导致病毒感染的慢性化.     

信号素3A和基质金属蛋白酶-14在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 检测非小细胞肺癌组织中信号素3A(Semaphorin3A和基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的表达关系,探讨联合检测Semaphorin3A及MMP-14对预后的判断价值.方法 94例非小细胞肺癌术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,选择80例正常肺组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测二组中Semaphorin3A和MMP-14的表达,分析肿瘤中Semaphorin3A及MMP-14的关系.结果 观察组中Semaphorin3A蛋白表达的阳性率明显低于对照组,观察组中MMP-14表达的阳性率明显高于对照组.观察组中Semaphorin3A及MMP-14表达的阳性率均与肿瘤的胸膜侵犯、淋巴结转移、淋巴结转移个数、分化程度、脉管浸润及PCNA的表达密切相关;Semaphorin3A蛋白的表达与肿瘤的最大直径密切相关;Semaphorin3A及MMP-14的表达具有负相关性,生存分析显示Semaphorin3A及MMP-14的表达与预后相关.结论 非小细胞肺癌组织中Semaphorin3A低表达、MMP-14高表达时促进肿瘤的发生和进展,二者可能具有负向协同作用,术后联合检测Semaphorin3A及MMP-14的表达对判断预后有一定价值.     

细胞色素酶CYP3A4基因多态性研究进展

背景 药物代谢酶的基因多态性是导致药物在体内处置和反应存在明显个体差异的重要因素之一,而细胞色素酶P450家族的CYP3A4 (cytochrome P450 3A4)酶是药物及外源性物质的主要代谢酶.CYP3A4基因多态性是导致这些药物代谢个体差异的主要原因.目的 就CYP3A4基因多态性对药物代谢的影响作一综述.内容 CYP3A4主要分布于肝脏和小肠内,其基因结构、酶活性的个体差异以及遗传多态性的种族差异,是导致药物作用和副作用个体差异的主要原因,甚至与许多疾病包括肿瘤等的发病有关.趋向 对CYP3A4基因多态性的研究将有助于提高药物疗效,避免副作用发生,预防和治疗某些疾病尤其是肿瘤等疾病.     

乙型肝炎病毒X蛋白对DNA甲基转移酶3A/3B表达的影响

目的观察乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对QSG7701细胞中DNA甲基转移酶（DNMT）3A/3B表达的影响。方法本研究室前期构建好的重组表达质粒pcDNA-X及空载体pcDNA3.0分别转染QSG7701细胞,经含G418的选择性培养基筛选获得稳定转染HBV-X基因的细胞克隆（pcDNA-X/QSG7701）及稳定转染空载体pcDNA3.0的细胞克隆（pcDNA3.0/QSG7701）。采用RT-PCR、Westernblot分别检测转染细胞中HBxmRNA和HBx蛋白的表达。Real-timePCR检测3种细胞DNMT3A/3BmRNA的表达情况。免疫组织化学法检测3种细胞DNMT3A/3B蛋白的表达情况。结果RT-PCR、Westernblot检测结果显示pcDNA-X/QSG7701细胞中有HBxmRNA及HBx蛋白的表达。Real-timePCR结果显示pcDNA-X/QSG7701中DNMT3A/3BmRNA表达水平显著高于pcDNA3.0/QSG7701及未转染的细胞QSG7701（P〈0.05）。免疫组织化学检测结果显示pcDNA-X/QSG7701细胞中DNMT3A/3B蛋白表达水平显著高于pcDNA3.0/QSG7701及QSG7701细胞（P〈0.05）。结论稳定转染HBV-X基因的人源性永生化非瘤性肝细胞QSG7701中DNMT3A/3BmRNA和蛋白的表达水平均显著升高,提示HBV-X基因在mRNA及蛋白水平能上调转染细胞中DNMT3A/3B的表达,而细胞中DNMT3A/3B表达的增加是否能进一步影响癌基因、抑癌基因的表达水平,从而导致细胞癌变,尚有待进一步研究。     

血清基质金属蛋白酶-3在强直性脊柱炎发生发展中的研究进展

强直性脊柱炎是一种累及脊柱和骶髂关节的慢性进行性炎性病变,病情严重及晚期的患者可因广泛关节强直而残疾。目前其发病机制尚未完全明确,临床上也尚缺乏特异性较高的血清学诊断指标。基质金属蛋白酶-3(MMP-3)是针对强直性脊柱炎研究较为深入的血清生物学标志物,通过MMP-3的研究可进一步探讨强直性脊柱炎的早期诊断、病情进展及有效治疗药物。本文综述了血清MMP-3在强直性脊柱炎发生、发展中的作用及其研究进展。     

钙蛋白酶抑制剂、α-硫辛酸单用及联用治疗癌性恶病质

目的 探讨钙蛋白酶(caplain)抑制剂ALLN(N-acetyl-Leu-Leu-Norleucinal)、α-硫辛酸(α-LA)单用及联用对癌性恶病质小鼠的治疗效果及其机制.方法 结肠腺癌Colon26 (C26)细胞接种于小鼠前腋窝皮下构建恶病质模型.药物干预7d后检测去瘤体质量、腓肠肌湿重、血生化、细胞因子水平、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、肿瘤组织核因子-κB(NF-κB)表达及骨骼肌中caplain-1和泛素mRNA表达.结果 荷瘤对照组caplain-1与泛素mRNA表达值分别为0.84 ±0.10、2.68±0.08,ALLN组、α-LA组、ALLN+ α-LA组caplain-1表达值分别为0.59 ±0.07、0.65±0.07、0.57 ±0.04,泛素mRNA表达值分别为2.29±0.07、2.34 ±0.05、2.20±0.10,均低于荷瘤对照组(P＜0.05),其他指标亦有不同程度的改善(P＜0.05).结论 caplain抑制剂和α-硫辛酸均具改善癌症恶病质的作用,两者联合应用效果更好.     

血清25-(OH)D 3、vaspin及Hcy对老年糖尿病肾病患者病变严重程度的评估价值

目的:探讨血清25-羟基维生素D 3[25-(OH)D 3]、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)及同型半胱氨酸(Hcy)对老年糖尿病肾病(DN)患者病变严重程度的评估价值。 方法:选取本院2016年1月至2019年8月收治的113例老年DN患者作为A组,选取80例同期在本院接...     

14-3-3ζ蛋白在肝细胞癌发生发展中的作用及研究进展

14-3-3ζ蛋白作为细胞内信号传导过程的主要调控因子,在肝细胞癌(HCC)的发生发展中发挥着重要的作用。多项研究表明,14-3-3ζ蛋白在HCC中表达明显增加,并参与细胞增殖、侵袭及凋亡等多种细胞进程。另外,14-3-3ζ蛋白可通过与多种靶蛋白结合来调节多种信号通路从而促进HCC的发生发展,表明其可能可以作为HCC早期诊断、预后预测、化疗耐药性及治疗的潜在生物学标志物。14-3-3ζ蛋白的过表达,与HCC患者的复发转移风险的增加及生存率降低相关。笔者对14-3-3ζ蛋白在HCC中的表达调控、生物学功能及其对HCC发生发展的影响及相关研究进展作一综述。     

靶向紫杉醇纳米晶-胱天蛋白酶-3复合物对肺动脉高压大鼠肺血管重构的影响

目的 观察靶向紫杉醇纳米晶-胱天蛋白酶-3(caspase-3)复合物对肺动脉高压大鼠肺血管重构的治疗效果。方法 选择SPF级健康成年雄性SD大鼠56只,8周龄,体重220～250 g。随机分为七组：对照组(N组)、模型组(M组)、模型+紫杉醇组(T组)、模型+caspase-3组(C组)、模型+紫杉醇复合caspase-3组(TC组)、模型+靶向紫杉醇纳米晶组(GN1组)和模型+靶向紫杉醇纳米晶-caspase-3复合物组(GN2组),每组8只。N组不建立模型,其余组大鼠颈部皮下注射野百合碱60 mg/kg建立肺动脉高压模型。建模第21、25、29天,T组、C组、TC组、GN1组和GN2组分别经尾静脉注射紫杉醇、caspase-3、紫杉醇复合caspase-3简单混合溶液、靶向紫杉醇纳米晶、靶向紫杉醇纳米晶-caspase-3复合物(紫杉醇所用剂量为0.4 mg/kg, caspase-3为0.04 mg/kg)。于建模第35天测定大鼠平均肺动脉压力(mPAP),分别称取大鼠右心室(RV)、左心室与室间隔(LV+S)的重量,计算右心室肥厚指数[RV/(LV+S)],Western b...     

丙型肝炎病毒基因型和抗病毒治疗病毒学应答的相关性研究

目的探讨慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染者病毒基因型对聚乙二醇化干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗病毒学应答的影响。方法采用PCR产物直接测序法检测71例HCV感染者的HCV基因型。所有患者接受聚乙二醇化干扰素皮下注射,联合口服利巴韦林抗病毒治疗。分析HCV基因型对快速病毒学应答（RVR）、早期病毒学应答（EVR）、治疗结束时病毒学应答（ETVR）和持续病毒学应答（SVR）的影响。结果71例患者中,HCV基因1b型48例,占67.6%;2a型12例,占16.9%;3a型6例,占8.5%;3b型2例,占2.8%;6a型1例,占1.4%;未分型2例,占2.8%。治疗4周时,基因1型组和非1型组的RVR分别为27.1%和87.0%,差异具有统计学意义（χ2=22.4076,P=0.000002）。治疗12周时,基因1型组和非1型组的EVR分别为39.6%和13.0%,差异有统计学意义（χ2=5.1216,P=0.02363）。疗程结束时,基因1型组和非1型组的ETVR分别为68.8%和100%,差异无统计学意义（χ2=2.9520,P=0.08577）。已停药随访24周的患者出现SVR者,基因1型组、非1型组分别为62.22%和100%,差异具有统计学意义（χ2=8.3797,P=0.00379）。结论我国HCV感染者基因型以1b型和2a型为主。基因1型HCV感染者的RVR、EVR和SVR均低于非基因1型者。     

雷迪帕韦-索非布韦治疗丙型肝炎病毒/人类免疫缺陷病毒共感染者肝纤维化的疗效及安全性

目的探讨雷迪帕韦(LDV)-索非布韦(SOF)治疗丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)共感染者肝纤维化的疗效及安全性。 方法选取2014年3月至2015年6月西安市第八医院收治的HCV/HIV共感染者60例,根据患者是否有肝纤维化分为肝纤维化组(30例)和无肝纤维化组(30例)。肝纤维化组和无肝纤维化组患者均采用LDV/SOF固定剂量400 mg/d和常规抗HIV治疗方案分别治疗24周和12周。比较两组患者抗HCV治疗结束后病毒学应答(EOT)、持续病毒学应答12(SVR12)、持续病毒学应答24(SVR24)、不良反应以及生命健康评估(SF-12)情况。 结果随访期间,失访8例,失访率为13.3%。无肝纤维化组和肝纤维化组患者治疗结束后EOT、SVR12、SVR24病毒学应答率差异均无统计学意义(P均> 0.05)。两组患者均出现不良反应,不良反应发生率为100%;两组患者常见不良反应差异均无统计学意义(P均> 0.05)。随访12周和24周,两组患者躯体健康评分和心理健康评分差异均无统计学意义(P均> 0.05)。治疗结束时患者SF-12评估身体健康评分差异有统计学意义(Z=－2.125、P= 0.028)。 结论LDV/SOF用于治疗HCV/HIV共感染者SVR较高。虽然治疗后不良反应发生率较高,但可通过对症治疗缓解。     

2008-2018年某院167例丙型肝炎病毒合并人类免疫缺陷病毒感染者的临床特征及治疗

目的探讨丙型肝炎病毒（HCV）合并人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者的临床特征及治疗现状,为HIV/HCV共感染的治疗提供科学指导。 方法基于医院信息系统真实世界数据,提取2008年5月至2018年5月新疆维吾尔自治区第六人民医院（传染病医院）和新疆维吾尔自治区人民医院收治的167例HIV/AIDS患者的病历资料。依据医嘱记录,对HIV/HCV共感染者按照抗HCV方案分为聚乙二醇化干扰素α-2b（PegIFNα-2b）联合利巴韦林（RBV）治疗组（PegIFN组、62例）,普通干扰素联合RBV治疗组（IFN组、46例）与直接抗病毒药物（DAAs）治疗组（DAAs组、59例）;分析3组患者CD4⁺ T淋巴细胞、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的变化、病毒学应答及不良反应发生率。 结果共收集659例HIV/AIDS感染者的临床资料,其中合并HCV感染共计167例,合并感染率为25.34%。HCV基因型别主要为：3b型43例、3a型41例、1b型32例、6a型21例、未分出亚型25例、2a型5例,以3型最多,占50.29%（84/167）。其中经静脉吸毒感染占29.40%（142/483）,性传播占14.20%（23/162）,其他占14.29%（2/14）。125例患者无明显症状,42例患者出现虚弱、发热、盗汗、肝硬化、淋巴结肿大等症状。肝功能检查发现：肝功能正常者56例（56/167、33.53%）,肝功能异常者111例（111/167、66.47%）,其中12例为肝硬化代偿期,7例为肝硬化失代偿期。HIV/HCV共感染率自2008年的37.25%下降至2018年的15.00%,且呈逐年下降,趋势卡方检验显示差异有统计学意义（χ² = 263.190、P < 0.001）。HIV/HCV共感染者CD4⁺ T细胞计数显著高于单纯HIV/AIDS患者（t = 7.203、P < 0.001）,总胆红素（TBil）（t = 29.101、P < 0.001）、ALT（t = 25.382、P < 0.001）、AST（t = 30.984、P < 0.001）、HIV RNA（t = 9.190、P < 0.001）均显著低于单纯HIV/AIDS患者,差异均有统计学意义。各组患者治疗后CD4⁺ T淋巴细胞数均较治疗前升高,且DAAs组患者高于PegIFN组和IFN组;3组患者治疗后ALT、AST水平均较治疗前降低,且DAAs组患者高于PegIFN组和IFN组,差异具有统计学意义（CD4⁺ T淋巴细胞数：F = 4.252、P = 0.016;ALT：F = 125.400、P < 0.001;AST：F = 37.990、P < 0.001）。DAAs组患者早期病毒学应答率（EVR）（96.61%）高于PegIFN组（77.42%）和IFN组（71.74%）;DAAs组患者治疗结束病毒学应答率（ETVR）（96.61%）高于PegIFN组（72.58%）和IFN组（63.04%）;DAAs组患者持续病毒学应答率（SVR）（94.92%）高于PegIFN组（69.35%）和IFN组（67.39%）;差异均有统计学意义（EVR：χ² = 13.011、P = 0.001;ETVR：χ² = 19.227、P < 0.001;SVR：χ² = 14.474、P < 0.001）。DAAs组患者乏力、发热、白细胞下降、血红蛋白下降、血小板下降发生率均低于PegIFN组和IFN组,差异均有统计学意义（乏力：χ² = 6.678、P = 0.035;发热：χ² = 12.485、P = 0.002;白细胞下降：χ² = 10.256、P = 0.006;血红蛋白下降：χ² = 13.962、P = 0.001;血小板下降：χ² = 11.681、P = 0.003）。 结论HIV/HCV共感染率较高,以HCV基因3型最为常见,感染率呈逐年下降趋势,主要通过静脉吸毒途径传播。DAAs治疗HIV/HCV共感染更有利于患者免疫功能、肝功能的恢复,获得更高SVR,安全性较高。     

Effect of new oral direct acting antiviral therapy on sexual function in male patients with hepatitis C virus

Hepatitis C virus (HCV) infection is a major health problem all over the world including Egypt. Chronic HCV infection is usually accompanied by decrease of libido and erectile dysfunction. This study aimed to evaluate the efficacy of new oral direct acting antiviral (DAA) therapy on sexual function of male patients with HCV. This study was conducted on 200 male participants divided into two groups, first group included 100 male patients with HCV and the second group included 100 healthy age matched males as a control. Patients received DAA for three months and virological free status was confirmed by polymerase chain reaction. All participants were subjected to full history taking, general examination and local genital examination, assessment of sexual function by a validated Arabic version of the international index of erectile function-5. Laboratory investigations included liver functions serum testosterone, free testosterone, sex hormone-binding globulin and bioavailable testosterone. Results of this study showed that patients with HCV suffer from sexual dysfunction than controls that significantly improved after DAA therapy, and this is accompanied by increasing of bioavailable testosterone. It could be concluded that beside its effectiveness in treatment of HCV infection, DAA therapy can improve sexual function in male patients with HCV.     

HCV NS3对人肝细胞磷酸化酪氨酸相关蛋白表达的影响

目的:研究HCV NS3对人肝细胞磷酸化酪氨酸相关蛋白表达的影响。方法:通过脂质体稳定转染分别建立表达HCV NS3蛋白的pRcHCNS3/QSG细胞，空白质粒转染细胞pRcCMV/QSG。用Western Blot和免疫细胞化学分别检测磷酸化p44/42，磷酸化p38，磷酸化SAPK/JNK在pRcHCNS3/QSG细胞和pRcCMV/QSG细胞及未转染的QSG7701细胞的表达差异及细胞内的定位;免疫共沉淀实验检测HCV NS3对磷酸化酪氨酸蛋白表达水平的影响。结果:pRcHCNS3/QSG细胞，pRcCMV/QSG细胞，未转染的QSG7701细胞抽提的总蛋白中均可检测出磷酸化p44/42，磷酸化p38，磷酸化SAPK/JNK的表达，阳性信号定位于细胞核。上述3种蛋白在pRcHCNS3/QSG细胞的表达较pRcCMV/QSG细胞和未转染的QSG7701细胞表达增强，其磷酸化酪氨酸蛋白的表达也较其他两对照组增强。结论:HCV NS3可能通过影响酪氨酸蛋白激酶的表达及活性，使一系列受酪氨酸蛋白激酶调节的蛋白质如MAPK分子异常磷酸化而活化，激活下游信号转导通路，导致肝细胞无限增殖和肿瘤形成。     

Response to antiviral therapy in liver transplant recipients with recurrent hepatitis C viral infection: a single center experience

Jain A, Sharma R, Ryan C, Safadjou S, Kashyap R, Mantry P, Maliakkal B, Orloff M. Response to antiviral therapy in liver transplant recipients with recurrent hepatitis C viral infection: a single center experience.
Clin Transplant 2010: 24: 104–111. © 2009 John Wiley & Sons A/S.   Abstract: 
Introduction:  Recurrence of hepatitis C virus (HCV) in hepatic allograft is a major concern after successful liver transplant (LTx).
Aim:  To examine the response rate to pegylated interferon (PEG–IFN) and ribavirin in post-LTx patients with HCV recurrence.
Patients and methods:  Between January 2003 and September 2006, 60 patients with biopsy proven HCV recurrence (46 males and 14 females) received PEG–IFN 2a (n = 40) or IFN 2b (n = 20) with ribavirin. All patients were followed until July 2007.
Results:  Fourteen patients (23.3%) tolerated antiviral therapy for less than six months and 10 (16.7%) discontinued therapy between six and 11 months. PEG–IFN dose was reduced in 21 (35%) patients and ribavirin dose was reduced in 16 (26.7%) patients. Overall, 55% patients achieved end of treatment response (EOT) and 35% sustained virological response (SVR). Mean Hepatitis Activity Index and Fibrosis Score pre-therapy was 5.8 ± 1.9 and 1.7 ± 1.3 and post-therapy, it was 4.4 ± 2.1 and 2.4 ± 1.6, respectively. Overall, three yr patient and graft survival was 73.9% and 69.2%, respectively. The patients with SVR had significantly lower viral load compared with other groups (p = 0.028).
Conclusion:  PEG–IFN and ribavirin therapy achieved 55% EOT and 35% SVR; 60% patients tolerated therapy. Biochemical response was observed in all groups of patients irrespective of virological response.     

CYP3A4 and P-Glycoprotein Activity in Healthy Controls and Transplant Patients on Cyclosporin vs. Tacrolimus vs. Sirolimus

This study aimed to determine the impact of maintenance immunosuppressive therapy with cyclosporin A (CsA), tacrolimus (FK506) and sirolimus (Rapa) on the in vivo activity of both intestinal and hepatic cytochrome P450 3A4 (CYP3A4) and P-glycoprotein (PGP) in renal transplant patients. The activity of these four elimination pathways was measured by the recently validated intravenous (iv) and per oral (po)14C erythromycin breath and urine test. In addition, overall hepatic P450 activity was measured by the (13)C aminopyrin breath test. Three groups of stable renal transplant patients on maintenance therapy with corticosteroids (CS) and mycophenolate mofetil (MMF) plus either CsA or FK506 or Rapa were examined. A significant increase in intestinal CYP3A4 activity and a significant decrease in hepatic and intestinal PGP activity was seen in patients on CsA in comparison with those on FK506 or Rapa (p < 0.01). A similar analysis in six healthy volunteers at baseline and after intake of CsA, FK506 and Rapa confirmed the results seen in the patients. There was no difference in CYP3A4 and PGP activity in the patients taking either FK506 or Rapa and healthy controls. These data suggest that a different pattern of drug interactions might be expected in patients treated with CsA vs. FK506/Rapa.     

常染色体隐性遗传Alport 综合征一家系COL4A3及COL4A4基因突变分析

目的 通过对有近亲婚配史的Alport综合征一家系Ⅳ型胶原α3和α4链的 COL4A3/COL4A4 基因分析，明确常染色体隐性遗传Alport综合征的基因突变,为该病的基因诊断和家系遗传咨询提供更为全面的理论基础&#65377; 方法 PCR扩增先证者DNA COL4A3/COL4A4 基因的共98个外显子，经直接测序，寻找突变位点，对有意义的突变经限制性内切酶AvaⅡ酶切在家系中分析验证&#65377; 结果 在该患者中共发现1个错义突变和10个序列变异&#65377;其中在COL4A3 基因上发现一个位于42号外显子上的错义突变 G3725A,导致蛋白质Gly1242Asp的突变&#65377;错义突变在患者中是纯合子，携带者中是杂合子，其他正常家系成员及筛查100条正常人染色体，未发现该突变&#65377;10个序列变异为单核苷酸多态性改变&#65377; 结论 报道了一个国内较少见的常染色体隐性遗传Alport 综合征家系，同时经基因突变筛查发现Ⅳ型胶原α3链的一个新的致病性的基因突变&#65377;