大肠癌患者外周血中癌细胞角蛋白20的检测

目的 :以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测外周血大肠癌细胞 ,探讨大肠癌患者外周血中癌细胞存在的临床意义。方法 :应用RT PCR方法检测 47例不同Dukes分期结肠癌患者及其肝转移患者外周血中大肠癌细胞角蛋白 2 0 (CK2 0 ) ,并以大肠癌组织 (2 0例 )和正常健康人外周血 (2 0例 )为对照。结果 :正常健康人外周血中未见CK2 0mRNA表达 ,大肠癌患者外周血中CK2 0mRNA检出率达 40 4% (19/ 47) ,DukesB ,C ,D期患者外周血CK2 0mR NA检出率分别为 2 5 0 % (5 / 2 0 ) ,41 2 % (7/ 17)和 87 5 % (7/ 8) ,(P <0 0 5 )。肝转移患者CK2 0mRNA检出率为87 5 % (7/ 8) ,无肝转移患者检出率为 30 8% (12 / 39) (P <0 0 1)。结论 :CK2 0可作为肿瘤标志物 ,用于检测外周血中的大肠癌细胞 ,预测肿瘤复发及转移 ,识别高危患者     

巢式逆转录多聚酶链反应检测大肠癌外周血中CK20mRNA

目的：研究大肠癌患者外周血中CK20mRNA作为大肠癌细胞微转移的标示。方法：巢式逆转录多聚酶反应（RT－PCR）法。结果：CK20mRNA巢式TR－PCR最低可检测到每50ml血液中仅存5个结肠癌细胞的存在;大肠癌组32例,外周血中CK20mRNA阳性率56．26％（18／32）;对照组中CK20mRNA均为阴性。结论：CK20mRNA巢式RT－PCR可作为大肠癌细胞微转移的敏感而特异的检测方法。     

大肠癌患者外周血细胞角蛋白-20信使核糖核酸与白细胞介素-10联合检测的临床意义

目的 联合检测大肠癌患者外周血细胞角蛋白－20信使核糖核酸（CK－20 mRNA)与血浆中白细胞介素－10（IL－10）,并评价其临床意义。方法 应用RT－PCR检测大肠癌患者外周血CK－20mRNA；应用ELISA检测其血浆IL－10浓度。结果 对照组25例健康查体者，其外周血中未见CK－20mRNA的表达；观察组46例大肠癌患者，25例外周血中CK－20mRNA表达阳性。大肠癌患者外周血CK－20mRNA的表达与Dukes分期关系为：A组20．0％（1／5），B期27．3％（3／11），C期61．1％（11／18），D期83．3（10／12）；其中C，D期与A，B期比较差异有高度显著性（P＜0．01）。大肠癌患者血浆IL－10浓度明显高于健康查体者，且与Dukes分期显示相关。外周血CK－20mRNA阳性表达的大肠癌患者血浆IL－10水平高于阴性者。结论 联合检测大肠癌患者外周血CK－20mRNA与IL－10，掌握检测大肠癌转移的相关指标，可以及时全面地了解大肠癌患者病情进展情况。     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血中阳性表达的临床意义

目的：研究大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，探讨CK20 mRNA阳性表达与肿瘤病理指标的关系，观察大肠癌患者手术前、后外周血中CK20 mRNA表达的变化情况。方法：采用巢式逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）的方法，对大肠癌42例、原发性肝细胞肝癌5例、对照组（非癌肿）10例患者手术前、后不同时间外周血中肿瘤细胞的靶基因CK20 mRNA表达进行检测。结果：对照组（非癌肿）10例及原发性肝细胞肝癌5例手术前、后外周血中CK20 mRNA均为阴性表达。大肠癌组42例，手术前外周血中CK20 mRNA阳性表达率为50．0％（21／42），手术后48h外周血中CK20 mRNA阳性表达率为59．5％（25／42）。大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达率与肿瘤细胞病理分化程度无关，与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移有关。结论：大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，有助于判断大肠癌的预后及鉴别原发性肝细胞肝癌和大肠癌肝转移。手术操作会促使肿瘤细胞向血液中播散，手术过程中应加强预防措施以减少癌细胞的播散。     

CK20mRNA在胃癌患者外周血中的表达及及其临床意义

目的：研究胃癌患者外周血中CK20mRNA表达以判断癌细胞有无血行播散。方法：采用巢式逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）的方法,对胃癌30例,原发性肝细胞肝癌5例、对照组（非癌肿）10例患者手术前、后不同时间外周血中肿瘤细胞的靶基因CK20mRNA进行检测。结果：对照组（非癌肿）10例及原发性肝细胞肝癌5例手术前、后外周血中CK20mRNA均为阴性表达。胃癌组30例,外周血中CK20mRNA手术前阳性表达率26．7％（8／30）,手术后48小时阳性表达率则为33．3％（10／30）。胃癌外周血中CK20mRNA的阳性表达率与细胞病理分化程度无关,与UICC病理贫苦无关,但与肝脏转移有关。结论：胃癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达可作为癌细胞血行播散的标志;有助于判断胃癌的预后;有助于鉴别原发性肝细胞肝癌和胃癌肝转移。胃癌手术中应采用“不接触肿瘤的游离技术”以养活癌细胞的播散。     

改良巢式逆转录聚合酶链反应检测大肠癌血中微转移

目的探讨改良巢式RT-PCR法检测大肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达情况,并分析其与微转移的关系,建立一种简便、快速的检测血中癌细胞微转移的方法。方法采用改良的巢式RT-PCR技术检测大肠癌患者及正常对照组外周血CK20mRNA的表达。结果CK20mRNA在正常对照组中均无表达,在大肠癌患者中阳性表达率为55.4%（62/112）。不同细胞分化程度大肠癌患者其外周血中CK20mRNA阳性表达率无显著性差异（P〉0.05）;而不同Dukes分期大肠癌患者其外周血中CK20mRNA阳性表达率有显著性差异（P〈0.05）。结论改良的巢式RT-PCR技术检测血中微转移大肠癌细胞的CK20mRNA具有简便、快速、灵敏的优点,有助于癌细胞微转移的早期诊断,有助于指导辅助化疗和监测疗效。     

大肠癌患者手术前后血循环中癌细胞CK20m RNA检测的临床意义

目的:研究手术对大肠癌患者血循环中癌细胞的影响。方法:应用RT-PCR技术,检测82例大肠癌患者术前和术后血循环中CK20mRNA的表达。结果:在所有大肠癌患者血循环中术前有42.7%的患者CK20mRNA表达阳性,CK20mRNA阳性检出率与Dukes分期、淋巴结转移、肝转移有显著性差别。手术后在所有大肠癌血循环中有59.8%的患者CK20mRNA表达阳性,较术前阳性表达明显增多(P<0.05)。结论:血循环中癌细胞的存在是大肠癌的一种常见的早期事件,手术刺激可增加肿瘤细胞向血循环中释放。     

联合检测大肠癌患者外周血CK20和CEA的临床意义

目的 探讨同时检测2种肿瘤标志物与大肠癌的临床意义。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法和酶联免疫法联合检测157例患者外周血中细胞角蛋白（CK20）和癌胚抗原（CEA）。结果 CK20、CEA联合检测总阳性率90．79％，明显高于单项检测的阳性率77．63％和67．11％；其阳性结果与病理分期有关。结论 CK20和CEA阳性表达是大肠癌患者外周血存在癌细胞的重要证据，提示预后不良，联合检测CK20、CEA可提高大肠癌的检出率。     

大肠癌患者手术期间门静脉血中癌细胞CK20mRNA的检测及意义

目的:研究手术刺激对大肠癌患者门静脉血中癌细胞的影响。方法:应用RT-PCR技术,检测82例大肠癌患者术前和术后门静脉血中CK20mRNA的表达。结果:手术前54.9%的患者CK20mRNA表达阳性,CK20mRNA阳性检出率与Dukes分期、淋巴结转移、肝转移存在差别有显著性。手术后门静脉血中有76.8%的患者CK20mRNA表达阳性,较术前阳性表达明显增多(P<0.005)。结论:门静脉血液中癌细胞的存在是大肠癌的一种常见的早期事件,手术刺激可增加肿瘤细胞向门静脉血中释放。     

乳腺癌患者血中角蛋白mRNA基因的表达

目的 分析乳腺癌患者外周血液中角蛋白（CK19）mRNA基因的表达。方法 取20例经病理证实的乳腺癌患者外周血，用Tirizol法提取总RNA，然后进行RT－PCR荧光定量检测，并与正常人群进行对照。结果 正常人群外周血中无CK19表达，20例乳腺癌中有6例阳性表达，总阳性率为29．65％，其中单纯癌阳性率为30．7％（4／13），浸润性导管癌阳性率为28．6％（2／7）。结论 CK19可作为检测外周血循环癌细胞的标志物。     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及意义

目的探讨大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的表达及临床意义。方法采用巢式RT-PCR技术检测48例大肠癌患者手术前、后外周血CK20mRNA的表达情况，并以12例健康志愿者为阴性对照，以胃腺癌细胞株BGC-823作阳性对照。结果CK20mRNA术前阳性表达率分别为60．4％，阳性表达率与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移具有相关性（P〈0．05），而与分化程度、肿霜邵位、患者性别无明显相关性（P〉0．05）；术后CK20mRNA阳性表达率明显高于术前（P〈0．05）；12例健康志愿者无一例阳性表达，胃腺癌细胞株BGC-823均为阳性表达。结论CK20mRNA作为标志物用于检测大肠癌的血循环微转移是可靠的，手术操作可促使肿瘤细胞释放入血。     

喉癌患者外周血CK19mRNA及CK20mRNA的表达

目的研究喉癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达,探讨其I临床意义。方法采用巢式RT-PCR技术检测喉癌患者术前外周血中CK19mRNA、CK20mRNA的表达。结果48例喉癌患者外周血中CK19mRNA阳性率为37．5％（18／48）,CK20mRNA阳性率45．8％（22／48）。10例肿瘤组织中CK19mRNA阳性率为100％（10／10）。CK20mRNA阳性率80％（8／10）;10例声带息肉患者外周血为阴性对照,CK19mRNA阳性率为10％（1／10）,CK20mRNA阳性率为0。结合临床病理资料,喉癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA表达与喉癌T分期、临床分期及淋巴结转移存在相关性,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论采用巢式RT—PCR技术,对喉癌患者外周血单个核细胞CK19mRNA和,或CK20mRNA的检测,在分子生物学水平对喉癌细胞对周围组织的浸润及局部扩散提供了参考,有助于指导临床治疗。     

运用荧光PCR进行大肠癌患者外周血中CK20表达的研究

目的 探讨荧光PCR法检测大肠癌患者外周血中CK20的表达情况并分析其与微转移的关系。方法 运用荧光RT—PCR技术对大肠癌患者外周血CK20的表达进行检测。结果 40例大肠癌患者外周血中检出CK20表达的有26例，检出率为65％。结论 运用荧光RT—PCR技术检测外周血中CK20的表达可以监测癌症微转移的发生，适于临床推广。     

CK19、CK20 mRNA在上皮性恶性肿瘤患者外周血中的表达及其意义

目的：分析上皮性恶性肿瘤患者外周血中CK19、CK20mRNA的表达水平，探讨其临床病理意义。方法：随机选择和收集53例上皮性恶性肿瘤患者的外周血，应用巢式RT－PCR法联合检测其CK19、CK20mRNA表达情况，另取15例上皮性肿瘤组织的为阳性对照，15例非肿瘤患者外周血为阴性对照。结果：53例肿瘤患者外周血中CK19阳性率为35．8％（19／53，CK20阳性率41．5％（22／53），两者至少1项阳性者69．8％（31／53）。15例肿瘤组织中CK20阳性率为100％（15／15），CK19阳性率86％（13／15）；15例阴性对照CK19阳性2例，CK20阳性1例，结合肿瘤的临床病理资料分析，肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达与肿瘤浸润深度，临床分期及淋巴结转移存在明显的相关性，而与肿瘤患者的年龄，性别，肿瘤分化程度无明显相关。结论：CK19、CK20mRNA可作为检测上皮性肿瘤外周血微转移的靶基因。联合检测肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA可增加外周血循环癌细胞的检测率。     

CK20mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的探讨大肠癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达可否作为肿瘤细胞血行播散的标志.方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测34例大肠癌患者术前、术后外周血中细胞角蛋白（CK20mRNA）.结果对照组（非癌肿）20例及原发性肝细胞肝癌6例外周血中CK20mRNA均为阴性表达.大肠癌组34例,手术前外周血中CK20mRNA阳性表达率为64.17%,手术后72h外周血中CK20mRNA阳性表达率为67.65%.大肠癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达率与肿瘤细胞病理分化程度无关,与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移有关.结论大肠癌患者外周血中CK20mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志,有助于大肠癌预后的判断.手术操作会促使肿瘤细胞向血液中播散,手术过程中应加强预防措施以减少癌细胞的播散.     

肺癌转移监测—影像学与细胞角蛋白19—mRNA对照应用研究

目的：建立一种利用影像学和细胞角蛋白19－mRNA(CK19-mRNA)全面评估肺癌患者癌细胞转移状况的方法。并探讨其临床意义。方法：利用影像学手段检测肺癌患者临床肿瘤转移灶,同时采用逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）方法检测肺癌区域性淋巴结和肺癌患者外周血CK19－mRNA表达,来评估肺癌患者亚临床转移（微转移）情况。结果（1）在临床癌转移灶检测方面,影像学具有较高的灵敏度,能够发现1cm以上的转移灶,（2）在亚临床转移检测方面：（1）将CK19 RT－PCR和传统的病理学检测方法进行对比9枚病理学检测阳性淋巴结CK19RT－PCR均为阳性,31枚病理学检测为阴性的淋巴结中有10枚CK19 RT－PCR阳性。（2）将CK19 RT－PCR和影像学进行对比,有5枚淋巴结经CT或MRI确诊为转移（标准为短径大于1cm),CK19 RT-PCR均为阳性;而经CT或MRI诊断为可疑或无临床意义的35枚淋巴结中,CK19 RT－PCR有14枚阳性。（3）30例肺癌患者外周血标本中有12例CK19 RT－PXR阳性（40％）,15例肺良性病变及5例正常人外周血中只有1例阳性。结论：（1）影像学检查是诊断肺癌临床转移可靠和主要的手段,具有很高的灵敏性。（2）在微转移检测方面,CK19 RT－PCR可作为一个标志物来检测肺癌微转移,并且有很高的灵敏度和特异度。（3）CK19RT－PCR结合影像学检查,有助于全面评估肺癌患者的转移状况;定期检测外周血CK19－mRNA,尚可作为疗效的观察指标。     

骨桥蛋白mRNA在大肠癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的检测大肠癌外周血中的骨桥蛋白（OPN）mRNA的表达,探讨其与临床病理分期及淋巴转移的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应技术检测52例大肠癌患者（大肠癌组）外周血单个核细胞中OPN mRNA的表达,并以33例大肠腺瘤患者（大肠腺瘤组）及20例健康人（健康对照组）外周血作为对照。结果 OPN mRNA在大肠癌组外周血单个核细胞中表达的阳性率为65.4%,大肠腺瘤组OPN mRNA阳性率为33.3%,健康对照组外周血中均无靶OPN mRNA表达。大肠癌组与大肠腺瘤组OPN mRNA阳性表达率均高于健康对照组（P均〈0.01）,大肠癌组OPN mRNA阳性表达率高于大肠腺瘤组（P〈0.05）。随着大肠癌Dukes分期的升高,其外周血单个核细胞中OPN mRNA表达阳性率逐渐增高（P〈0.05）。有淋巴结转移的表达阳性率高于无淋巴结转移及对照组（P均〈0.01）;无淋巴结转移患者与大肠腺瘤组之间差异无统计学意义。结论外周血单个核细胞中OPN mRNA阳性表达对大肠癌的淋巴转移及预后判断具有一定价值。     

CK20mRNA和hTERTmRNA表达与大肠癌患者外周血微转移的临床研究

目的：检测大肠癌患者外周血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA和人端粒酶逆转录酶（hTERT）mRNA的表达,探讨其能否作为判断大肠癌患者外周血微转移及预后的分子生物学指标．方法：采用RT-PCR技术检测大肠癌32例、肠道良性病变11例和健康体检者20例的外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA的定性和半定量表达．以人胃腺癌细胞株SGC-7901作阳性对照．实验数据采用SPSS13．0forWindows软件包统计分析．结果：①CK20mRNA和hTERTmRNA在大肠癌患者外周血中的阳性表达率分别为50．0％和56．2％,相对系数分别为0．89±0．17和0．88±0．17;在肠道良性病变患者外周血中阳性表达率分别为9．1％和0％,相对系数分别为0．11和0;在健康体检者外周血中阳性表达率及相对系数均为0．大肠癌患者与肠道良性病变患者、健康体检者相比,CK20mRNA和hTERTmRNA的表达均有统计学差异（P〈0．05）．②CK20mRNA和hTERTmRNA阳性表达率和相对系数与临床分期、远处转移均有关（P〈0．05）;其阳性表达率与浸润深度、淋巴结转移无关,但相对系数与之均有关（P〈0．05）．阳性表达者生存率低于阴性者（P〈0．05）．结论：大肠癌患者外周血中存在CK20mRNA和hTERTmRNA的表达,与临床分期及患者生存密切相关,提示CK20mRNA和hTERTmRNA的表达能预测大肠癌患者外周血微转移,可判断预后．     

肝癌患者围手术期外周血黑色素瘤抗原-1mRNA和甲胎蛋白mRNA检测与术后复发的关系

目的 探讨肝细胞癌患者围手术期外周血MAGE-1mRNA和甲胎蛋白(AFP)mRNA表达水平其与术后转移复发的关系。方法 通过巢式RT—PCR,在围手术期检测了45例肝细胞癌患者外周血MAGE-1mRNA和AFPmRNA,并进行平均11个月的随访。同时以22例肝炎后肝硬化、11例肝血管瘤、12例肝转移癌患者和20例健康志愿者外周血标本作为对照组进行了MAGE-1mRNA和AFP mRNA的对比检测。结果 MAGE-1mRNA在12例肝转移癌患者外周血中的检出率为33．3％(4／12);肝炎后肝硬化、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。AFP mRNA在肝炎后肝硬化患者外周血中的检出率为13．6％(3／22),在肝转移癌、肝血管瘤患者和健康志愿者中均未检出。45例肝细胞癌患者外周血中,MAGE-1mRNA／AFP mRNA的检出率分别是术前42．2％(19／45)／51．1％(23／45),术后7d20％(9／45)／24．4％(11／45),术后28d15．6％(7／45)／22．2％(10／45)。统计分析提示,术后28d肝细胞癌患者外周血检出MAGE-1 mRNA／AFPmRNA预示患者近期复发。并且双标志物联合检测较单标志物检测对预测复发具有更高的敏感性。结论采用巢式RT—PCR的方法联合检测肝细胞癌患者术后28d外周血中癌特异性的MAGE-1 mRNA和肝细胞特异性的AFP mRNA有助于预测肝细胞癌患者术后的转移复发。     

大肠癌患者外周血微转移的分子诊断

目的 探讨大肠癌患者外周血微转移的分子诊断方法。方法 以非同位素RT-PCR方法，检测21例大肠癌患者术前和术后外周血中大肠癌细胞的标志物细胞角蛋白20(cytokemtin，CK20)，同时检测10例健康者外周血作对照。结果 21例病人外周血中查出CK20阳性表达14例，阳性率66．67％，10例健康者外周血均无CK20表达。结论 检测大肠癌患者外周血微转移癌细胞有助于早期诊断大肠癌肝脏微转移。