大鼠蛋白激酶Cγ基因小发卡RNA慢病毒载体的构建及其干扰效率的鉴定

目的：研究指出蛋白激酶Cγ（PKCγ）在脊髓水平上参与了伤害性信号的传递,文中拟构建大鼠PKCγ基因的小发卡RNA（shRNA）慢病毒载体,并在细胞水平鉴定其干扰效率。方法：根据PKCγ-mRNA序列,选择3条19nt的靶序列,设计并合成包含正、反义靶序列的互补DNA链,退火后插入到pLVTHM载体的H1启动子后获得重组质粒,同时构建一个非特异性对照质粒。将所构建的质粒与pMDLg-pRRE、pR sv-REV、pMD2G共转染293T细胞,包装产生慢病毒后,分别感染C6细胞,经免疫印迹技术（W estern b lot）检测PKCγ基因的蛋白表达水平以评价慢病毒载体的抑制效率。结果：测序证实成功构建了3个大鼠PKCγ基因shRNA慢病毒载体,分别感染C6细胞后pLV-PKC2和pLV-PKC3可明显降低PKCγ蛋白的表达,其中以pLV-PKC2（靶向位点：＋1913＋1931）的慢病毒抑制效率最高。结论：成功构建了大鼠PKCγ基因shRNA慢病毒载体,且慢病毒载体pLV-PKC2能特异、高效地抑制PKCγ基因的表达。     

抑制C5L2表达对Th17细胞功能和小鼠肾移植急性排斥反应的作用

目的：探讨补体C5a关键受体C5L2表达抑制后,对小鼠肾移植急性排斥反应模型中Th17细胞功能以及急性排斥反应的影响。方法：构建特异性C5L2干扰腺病毒,通过小鼠尾静脉注射入小鼠急性肾移植排斥模型,检测其血肌酐,ELSA检测Th17相关细胞因子白细胞介素（interleukin, IL）-6、IL-17以及肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF）-γ的变化,同时检测小鼠肾组织病理改变。结果：成功建立小鼠急性肾移植排斥模型,将构建的C5L2干扰腺病毒尾静脉注射后,小鼠血清Cr水平下降,IL-6、IL-17以及TNF-γ水平下降,急性排斥反应减轻。结论：特异性C5L2干扰腺病毒可以抑制Th17细胞功能,减轻肾移植急性排斥反应。     

栀子苷对类风湿性关节炎大鼠Th17/Treg平衡和局部炎症因子的影响

目的考察栀子苷对类风湿性关节炎大鼠Th17/Treg平衡和局部炎症因子的影响。方法建立大鼠胶原诱导关节炎模型,通过病理切片观察踝关节组织变化,ELISA检测血清TNF-α,Western blot法检测转录因子Foxp3和ROR-γt的蛋白表达,免疫组化法检测关节滑膜组织IL-10、IL-17表达。结果模型组血清TNF-α、IL-17以及ROR-γt和关节滑膜IL-17表达较正常组显著升高(P0.01),而模型组血清IL-10浓度以及Foxp3和关节滑膜IL-10表达较正常组显著降低(P0.01),栀子苷中、高剂量组血清TNF-α、IL-17浓度以及ROR-γt和关节滑膜IL-17表达较模型组显著降低(P0.05~0.01),而血清IL-10浓度、Foxp3和关节滑膜IL-10表达较模型组显著升高(P0.05~0.01)。结论大鼠胶原诱导关节炎模型成模之后Treg/Th17会失衡,栀子苷可升高IL-10、Foxp3表达,降低IL-17、ROR-γt表达,提示其可能通过诱导Treg细胞生成同时抑制Th17细胞分化,从而恢复病变部位Treg/Th17的平衡。     

过敏性紫癜患者治疗前后其外周血TGF-β和IL-6在纯真CD4~+T细胞分化为Th17细胞和调节性T细胞过程中变化

目的:观察以疏风清热、活血化瘀立法治疗过敏性紫癜(HSP)前后,外周血转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素6(IL-6)在纯真CD4+T细胞(Naive T)分化为辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)的过程中的变化。方法:使用流式细胞仪检测36例住院患者治疗前后和健康对照组外周血Th17、Treg的水平,使用实时荧光定量PCR仪检测TGF-β、IL-6和转录因子ROR-γt的水平,比较其差异。结果:(1)HSP患者治疗后与治疗前(急性期)相比较,IL-6和Treg的水平升高(P0.05),Th17和ROR-γt的水平降低(P0.05),TGF-β的水平无明显差异(P0.05);(2)HSP患者治疗前与健康对照组相比较,Th17和ROR-γt的水平明显升高(P0.05),IL-6和Treg的水平降低(P0.05),TGF-β的水平无明显差异(P0.05);(3)HSP患者治疗后与健康对照组相比较,IL-6和Treg的水平升高(P0.05),Th17和ROR-γt的水平降低(P0.05),TGF-β的水平无明显差异(P0.05)。结论:以疏风清热、活血化瘀立法治疗过敏性紫癜,能明显干预患者的外周血TGF-β、IL-6、ROR-γt、Th17及Treg的水平,对患者免疫功能的调节作用明确,临床效果显著,极大的提高了临床诊疗能力。     

不同培养方法对体外诱导分化Th17细胞的影响

目的:Th17细胞缺乏特异性表面标记,难以分离纯化活细胞,通过调整细胞因子浓度和不同培养方法,以获得高纯度Th17细胞亚群?方法:选用C57BL/6J 小鼠脾脏获得单个核细胞,磁珠分选获得CD4+?CD44-Naive T细胞?建立不同Th17诱导培养体系,通过流式细胞术检测获得Th17细胞的比例,荧光定量PCR方法检测ROR-γt?IL-17 mRNA表达水平,ELISA方法检测细胞培养上清中IL-17浓度,以寻找最佳培养条件?结果:TGF-β+IL-6+IL-23可诱导Th17细胞,但比例较低;加入TNF-α?IL-1β?anti-IFN-γ?anti-IL-2可进一步提高Th17比例,但后期培养呈衰减趋势;使用U型96孔板培养Th17细胞明显优于24孔板培养,细胞分化呈稳定上升趋势,培养第9天Th17细胞可达(91.85 ± 1.05)%?IL-17?ROR-γt mRNA与Naive T细胞相比明显上调(P < 0.001),IFN-γ?IL-4?Foxp3 mRNA表达量低(P < 0.001),细胞培养上清液中IL-17浓度明显升高(P < 0.001)?结论:调整细胞因子诱导方案?缩小培养面积可不同程度提高Th17细胞诱导比率,且培养面积的影响作用更为显著?     

Th17/IL-17与病毒性肝炎的研究进展

病毒性肝炎是由多种肝炎病毒引起的一组全身性传染病。其中乙型、丙型多呈慢性感染,少数病例可发展为肝硬化或肝细胞癌。辅助性T细胞(Th17)细胞是近年来发现的不同于Th1、Th2及调节性T细胞(Treg)细胞的CD4+T细胞亚群,IL-17是Th17细胞的重要效应因子,具有强大的促炎作用,维甲酸相关核孤儿受体γt则是其重要的转录因子。有研究发现Th17细胞能够抑制T淋巴细胞的细胞不良反应,增加肝炎病毒的持续感染,导致肝炎的慢性化。     

人GLUT3基因RNA干扰病毒载体的构建与鉴定

目的：筛选出人GLUT3基因有效的RNA干扰(RNA interference,RNAi)序列,并构建出慢病毒RNAi载体。方法：根据GLUT3基因mRNA序列设计合成siRNA片段4个,分别定向克隆至pLV-shRNA载体上,并将构建的质粒转染HeLa细胞,运用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测GLUT3mRNA的表达量验证其干扰效果。筛选出其中有效的质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞进行包装,收获并浓缩重组慢病毒颗粒,测定病毒颗粒滴度后,将病毒感染U251胶质瘤细胞以测定感染慢病毒干扰载体后胶质瘤细胞内GLUT3的表达情况。结果：重组RNAi质粒pLV-shRNA-GLUT3-1,pLV-shRNA-GLUT3-2,pLV-shRNA-GLUT3-3,pLV-shRNA- GLUT3-4经测序证实质粒载体构建成功;4个干扰质粒在HeLa细胞中均可以明显抑制GLUT3-mRNA的表达。pLV-shRNA-GLUT3可以在293T细胞中成功包装。收集293T细胞分泌的病毒上清浓缩后测定病毒颗粒LV-GLUT3滴度为1.5×109 TU/mL。与感染阴性对照慢病毒颗粒(0.3641±0.044)相比,胶质瘤U251细胞感染慢病毒颗粒LV- GLUT3后,GLUT3蛋白相对表达明显降低(0.108±0.016,t=16.267,P<0.001)。结论：成功构建了人GLUT3基因有效的慢病毒RNAi载体,为进一步研究GLUT3的生物学功能奠定了基础。     

腺病毒载体基因转移系统的建立及其在脑肿瘤中的高效表达

构建了含有CMV启动子调控的HSV－tk基因的重组质粒pAdCMVtk，将其与缺陷型腺病毒Ad5大框架pJM17一起共转染病毒包装细胞293细胞，获得有感染能力但复制缺陷的重组腺病毒AdCMVtk，以其感染大鼠C5脑胶质瘤细胞后用PCR方法证实HSV-tk基因能被腺病毒有效转入靶细胞。用带报告基因LacZ的腺病毒感染大鼠C5脑胶质瘤细胞，经x-gal染色，证明腺病毒载体的基因转移效率可达100％。     

姜黄素对关节炎大鼠T细胞的影响

目的观察姜黄素对Ⅱ型牛胶原蛋白诱导的关节炎模型大鼠T细胞的影响。方法将24只建模成功的关节炎SD大鼠随机分为姜黄素A组、姜黄素B组、模型组,每组8只;同时选取8只健康SD大鼠作为正常组。建模第14天,姜黄素A、B组分别腹腔注射25、50 mg·kg-1姜黄素,正常组和模型组腹腔注射等体积的含10%DMSO的生理盐水。建模第14—44天评估各组大鼠关节肿胀程度;第44天处死大鼠,分离大鼠脾脏淋巴细胞,采用CCK8法检测脾脏淋巴细胞活性,采用流式细胞术检测脾脏淋巴细胞Th1、Th2、Th17细胞比例,采用ELISA法检测血清IFN-γ、IL-4、IL-17A浓度。结果建模第42、44天,与模型组比较,姜黄素A、B组关节肿胀评分均显著降低（P<0.05或P<0.01）。姜黄素A、B组脾脏淋巴细胞活性,Th1、Th17细胞比例及血清IFN-γ、IL-17浓度均较模型组显著降低,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论姜黄素通过抑制关节炎大鼠T细胞活性、调节Th1与Th17细胞分化比例及抑制炎症因子产生,改善免疫性关节炎症状。     

黑色素浓集激素受体2基因siRNA重组腺病毒载体构建及鉴定

目的:构建黑色素浓集激素受体2(MCHR2)siRNA重组腺病毒载体,并在稳定表达MCHR2的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MCHR2的siRNA干扰序列,用分子克隆的方法克隆到穿梭载体pSES-HUS上,得到pSES-HUS-MCHR2siRNA,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MCHR2siRNA,在HEK293细胞中包装成重组腺病毒,感染稳定表达MCHR2的CHO细胞株,RT-PCR及Western Blot检测腺病毒对细胞MCHR2表达的影响.结果:成功构建McHR2siRNA重组腺病毒载体.MCHR2siRNA重组腺病毒显著抑制CHO细胞中MCHR2的表达.结论:构建的Adeasy-MCHR2 siRNA腺病毒能有效地抑制CHO细胞中MCHR2表达,为研究MCHR2的功能及其与肥胖的关系提供了有效的工具.     

免疫性血小板减少症患者Th17/Treg细胞失衡与特异性转录因子表达异常

目的探讨Th17/Treg细胞失衡以及特异性转录因子表达异常在免疫性血小板减少症(ITP)中的临床意义。方法入组ITP患者40例,应用流式细胞术(FCM)检测Th17与Treg细胞、RT-PCR技术检测Th17特异性转录因子ROR-γt和Treg特异性转录因子Foxp3表达水平以及Aim Plex流式高通量技术检测Th17细胞因子IL-17A与IL-22以及Treg细胞因子TGF-β与IL-10水平。20例健康者作为正常对照组。结果与对照组相比较,ITP组Th17、Treg与Th17/Treg比值均显著降低(P 0.05),Th17细胞因子IL-17A与IL-22表达水平均显著升高(P 0.05),Treg细胞因子TGF-β与IL-10表达水平均显著降低(P 0.05)。Th17特异性转录因子ROR-γt与Treg特异性转录因子Foxp3表达水平均显著升高(P 0.05)。结论 ITP患者存在Th17/Treg细胞失衡以及特异性转录因子表达异常,反应了ITP患者机体免疫功能紊乱。     

定点整合型基因治疗腺病毒载体的构建

目的：构建定点整合型基因治疗腺病毒载体。方法：以逐步亚克隆法将腺病毒伴随病毒的两个末端倒转重复序列与neo基因表达盒克隆至pAdE1CMV，其中HCMV启动子控制下的neo基因表达盒位于腺病毒伴随病毒两个末端倒转重复序列之间，将得到的转移载体pAdE1CMVITREXneoDNA和pJM17DNA以脂质体法共转染293细胞，G418法连续筛选重组腺病毒。以病毒核酸酶切及感染293细胞的CPE（cytopathiceffect　）观察鉴定是否获得重组腺病毒。结果：获得有腺病毒伴随病毒的两个末端倒转重复序列和位于其间的neo基因表达盒的重组腺病毒vAd－AAV。结论：重组腺病毒vAd－AAV的构建成功将为基因治疗提供定点整合型腺病毒载体。     

儿童非细菌性下呼吸道感染血清Th源细胞因子在发病中的作用

目的：探讨非细菌性下呼吸道感染发病机理与免疫功能的关系。方法：对急性非细菌性下呼吸道感染62例患儿，取鼻咽部分泌物采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（桥联酶标法）（法血清和酶联免疫吸附）检测为呼吸道合胞病毒（RSV）、流感病毒（Flu）A，B型、副流感病毒（PIV）1、2、3型、腺病毒（ADV）3．7型，肺炎支原体（Mp）。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清γ-干扰素（IFNγ-）、自细胞介素一4（IL-4）水平，并进行统计学和相关性分析。结果：非细菌性下呼吸道感染患儿血清IFN-γ降低，IL-4升高，二者呈显著负相关性（γ=-07296，P〈0．01），提示Th1细胞功能被抑制，分泌IFN-γ减少，Th2细胞功能异常增高，分泌IL-4增多。结论：非细菌性下呼吸道感染存在细胞免疫功能异常，Th1／Th2比例失衡，Th2细胞过度活化，其细胞因子偏移分泌状态，类似哮喘样免疫反应-Th2占优势，具有诱发和发展哮喘的免疫病理基础。     

Rac1及其突变体重组腺病毒载体的构建与鉴定

目的构建大鼠Rac1及其突变体Rac1Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N腺病毒表达载体,并制备出病毒,为进一步研究Rac1在间充质干细胞（MSCs）迁移中的作用奠定基础。方法以pMD-19-T-Rac1、pMD-19-T-Rac1Q61L、pMD-19-T-Rac1G12V、pMD-19-T-Rac1T17N为模板,扩增Racl及其突变体Rac1Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N,酶切连接到带有GFP标记的pAdTrack-CMV上,PmeI线性化重组质粒pAdTrack-CMV-Rac1及其突变体重组质粒,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒载体,经PacI线性化后转染QBI-293A细胞包装病毒,收获腺病毒重组病毒子,检测病毒滴度并进行间充质干细胞病毒感染复数的鉴定。结果测序结果显示,Racl及其突变体Rac1Q61L、Rac1G12V、Rac1T17N序列正确,成功包装出重组病毒子后经2～3次扩增得到约为107pfu/ml高效价重组病毒子,感染间充质干细胞后发现150 MOI为最适病毒感染复数。结论成功构建了Racl及其突变体重组腺病毒载体pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1Q61L、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1G12V、pAdEasy-1-pAdTrack-CMV-Rac1T17N,获得了Racl重组病毒子Ad-Rac1、Ad-Rac1Q61L、Ad-Rac1G12V、Ad-Rac1T17N。     

穿心莲内酯对溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞IL-23/IL-17轴的影响

目的 研究穿心莲内酯对溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单个核细胞IL-23/IL-17轴的调控作用,以探讨其治疗UC的可能作用机制。方法 提取溃疡性结肠炎患者外周血单个核细胞,培养后处理分成空白对照组、低浓度穿心莲内酯(10μg/mlAG)组、中浓度穿心莲内酯(20μg/mlAG)组、高浓度穿心莲内酯(30μg/mlAG)组。基于IL-23/IL-17轴,ELISA法检测IL-23浓度、Western blot法检测Th17细胞相关转录因子ROR-γt表达水平、流式细胞法检测Th17(CD4⁺IL-17⁺)细胞亚群占CD4⁺T细胞比例及ELISA法检测下游促炎性细胞因子IL-17A水平。结果 与空白对照组比较,低、中、高浓度穿心莲内酯均能降低UC患者IL-23水平(P=0.000),降低Th17细胞亚群的比例(P=0.000)、Th17细胞相关转录因子ROR-γt表达水平(P=0.000)及相关促炎性细胞因子IL-17A水平(P=0.000),并且呈剂量依赖效应。结论 穿心莲内酯通过下调IL-23/IL-17轴,即下调IL-23水平,抑制Th17细胞分化,从而减少下游促炎性细胞因子的释放,起到抑制UC炎性反应的作用。     

小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:构建小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的死亡受体(Mouse killer,MK)基因干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MK的siRNA干扰序列,将其克隆到穿梭载体psES-HUS上,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MKsiRNA,在HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒.用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞,RT-PCR及Western Blot检测基质细胞中MK的mRNA及蛋白表达水平.结果:Adeasy-SES-HUS-MKsiRNA混合液均效价为6.8 X 10~(11)pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞48h后,MK的mRNA及蛋白水平均显著下调.结论:构建的MK干扰表达腺病毒能有效地抑制MK基因的表达,为进一步研究MK在小鼠子宫基质细胞的功能提供了有效的工具.     

LRIG3基因特异性siRNA腺病毒表达载体的构建与鉴定

目的 构建并鉴定针对LRIG3 基因的小干扰RNA(LRIG3-siRNA)腺病毒表达载体,为膀胱癌基因治疗的研究提供有效的实验工具.方法 设计可形成小发夹结构的LRIG3-siRNA模板cDNA 序列,克隆至缺陷型腺病毒质粒pSilencer-U6neo,构建LRIG3-siRNA表达质粒pSilencer-LRIG3.鉴定正确后,将pSilencer-LRIG3转染至HEK293细胞,包装成复制缺陷型腺病毒pAd-LRIG3.大量扩增pAd-LRIG3,氯化铯梯度离心纯化,测病毒滴度.pAd-LRIG3 感染人膀胱癌细胞T24,RT-PCR法检测LRIG3 mRNA的表达.结果酶切分析、测序鉴定表明pSilencer-LRIG3构建成功,PCR分析表明pAd-LRIG3含有LRIG3-siRNA 序列.pAd-LRIG3可抑制 LRIG3 mRNA的表达.结论 含有LRIG3-siRNA 的重组腺病毒构建成功,且具有抑制LRIG3基因mRNA 表达的功能.     

ZBTB20基因干扰腺病毒的制备及功能鉴定

目的 制备靶向锌指蛋白ZBTB20基因的干扰腺病毒。方法 根据ZBTB20基因序列设计人鼠通用的干扰序列，定向克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-U6-GFP的BamHⅠ和HindⅢ位点。PmeⅠ酶切线性化的重组穿梭载体pShuttle-shZBTB20导入含有腺病毒载体pAdEasy-1的细菌，使同源重组产生重组腺病毒载体pAd-shZBTB20。用PacⅠ酶切线性化该重组腺病毒载体，转染293A细胞以包装腺病毒颗粒，用TCID50法鉴定病毒滴度，并在人肝癌Huh7细胞和小鼠肝脏组织中验证该病毒的干扰效率。结果 成功构建了人鼠通用的ZBTB20基因干扰腺病毒载体，获得高活性的ZBTB20干扰腺病毒Ad-shZBTB20，滴度为3.2x1010 IU/ml。该干扰腺病毒感染人肝癌细胞株96 h可使ZBTB20 mRNA降低至对照的20%；尾静脉注射7天后可显著下调肝脏内源性ZBTB20蛋白的表达，并使其靶基因甲胎蛋白mRNA表达水平升高200倍以上。结论 所制备的ZBTB20干扰腺病毒能有效抑制人和小鼠ZBTB20的蛋白表达及其生物学效应，为ZBTB20功能研究和干预应用提供技术手段。     

人K562细胞糖皮质激素受体基因阻断模型的建立

目的 利用腺病毒载体介导的RNAi技术,建立糖皮质激素受体基因阻断的人K562细胞模型。方法 将针对糖皮质激素受体发挥RNAi效应的合成寡核苷酸序列连入含有绿色荧光蛋白基因的腺病毒穿梭质粒pRNAT-H1.1/Adeno中,在含有pAdEasy-I病毒骨架的BJ5183大肠菌内进行同源重组;重组体通过脂质体介导转染293T细胞,并在293细胞内包装为具有感染能力的病毒颗粒,通过反复感染扩增病毒以达感染靶细胞的适当滴度,通过绿色荧光表达来监测腺病毒扩增;应用Western blot法检测人K562细胞感染病毒后糖皮质激素受体蛋白的表达。结果 重组腺病毒穿梭质粒psiGR/Adeno和重组腺病毒pAdEasy-siGR的成功构建;转染腺病毒载体的293T细胞表达绿色荧光,随着时间逐渐增强并且出现明显的细胞病变效应,经过3轮扩增,病毒达到合适的滴度;受腺病毒感染的K562细胞内糖皮质激素受体蛋白表达明显降低。结论 可以成功构建针对糖皮质激素受体基因的RNAi腺病毒载体,为进一步研究糖皮质激素受体的生物学功能奠定基础。     

Betatrophin重组腺病毒过表达载体的构建

［摘要］目的: 应用基因同源重组技术,构建及鉴定携带小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究betatrophin的功能奠定基础。方法: 根据基因库中登录的小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)序列,经化学合成得到含BamHⅠ/ AgeⅠ酶切位点的小鼠betatrophin基因全长cDNA质粒,将其酶切后插入到带有增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的GV314载体CMV MCS 3FLAG SV40 EGFP中,得到重组病毒穿梭质粒pGV314 betatrophin;经BamHⅠ/ AgeⅠ双酶切后,与线性化的pDC315病毒基因组质粒体外同源重组,构建含有目的基因的腺病毒载体Ad betatrophin,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,利用聚合酶链式反应（PCR）、蛋白质印迹法及测序鉴定重组的腺病毒。结果： 阳性克隆质粒Ad betatrophin在HEK293T细胞中成功包装出重组病毒,经PCR、蛋白质印迹及测序检测表明重组腺病毒包装成功。结论： 成功构建了携带小鼠betatrophin基因的复制缺陷型重组腺病毒过表达载体。