精子凋亡检测技术的研究进展

人类睾丸是一种具有高度增殖能力的组织，但成人睾丸中产生的成熟精子的数量要比预计生成的精子数少20％～75％。大量研究表明睾丸中生精细胞这种自发性变化是通过凋亡而发生的，凋亡在精子发生的生理病理过程中扮演一个重要的角色。细胞凋亡，又称程序性细胞死亡（PCD），是指在体内外因素的诱导下，由基因调控而发生的自主性细胞有序死亡。过去对精子凋亡检测技术研究并不多，主要是方法学的不足，随着技术的发展和研究的深入，精子凋亡检测方法逐渐增多。现就目前精子凋亡检测原理、方法及其临床应用作一综述。     

先天性双侧输精管缺如伴生精功能障碍一例

先天性双侧输精管缺如（congenital bilateral absence of vas deferens,CBAVD）是梗阻性无精子症的常见原因之一,睾丸生精功能一般正常,除了常见的囊性纤维化穿膜传导调节蛋白（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR）基因突变外,黏附G蛋白耦联受体G2（adhesion G protein-coupled receptor G2,ADGRG2）基因突变以及拷贝数变异也被认为是CBAVD的发病机制。本文报告1例CBAVD伴生精功能障碍的病例,睾丸组织病理学提示唯支持细胞综合征。全外显子组测序未发现该患者CFTR、ADGRG2以及无精子症相关基因存在致病变异,拷贝数变异分析也未发现有意义的拷贝数变异。该病例的确切遗传学病因尚未可知。CBAVD与生精功能障碍并存的临床现象,提示无精子症遗传病因的复杂性。     

无精症和少精子症患者的细胞遗传学和分子遗传学检测

目的:对无精症和少精子症患者进行外周血染色体及Y染色体微缺失检测,探讨生精功能障碍的遗传学机制,为临床治疗和遗传咨询提供参考。方法:运用细胞遗传学核型分析技术和多重PCR技术对133例生精功能障碍患者进行染色体核型分析和Y染色体AZF因子扩增,并以40例已生育男性作为对照组。结果:实验组中61例无精子症患者中,细胞遗传学核型数量异常13例,异常发生率21.31%,同时发现AZF微缺失6例,异常发生率9.84%;72例少精患者细胞遗传学核型异常11例,异常发生率15.28%,同时发现AZF微缺失7例,异常发生率9.72%。40例对照组Y染色体核型和AZF位点无缺失。结论:染色体异常和AZF的缺失是引起男性无精子和少精子并造成男性不育的重要原因之一,对男性不育人群进行细胞遗传学核型分析和AZF检测十分必要。     

生精障碍相关的CDYLs基因家族研究进展

CDY（chromodomain protein,Y-linked）基因位于Y染色体AZF区段,是Y染色体微缺失所导致的生精障碍的候选基因之一。CDY基因起源于常染色体CDYLs（CDY-like）基因mRNA的反转录转座。在进化过程中,CDYLs基因家族通过增加新的外显子从而获得蛋白功能的多样性。CDYLs/CDY蛋白包含2个重要的结构域：氨基端的chromo结构域可结合甲基化的组蛋白,主要参与基因沉默的过程;羧基端的crotonase结构域可能参与组蛋白乙酰化的催化,可能在精子发生中发挥重要作用。综述CDYLs/CDY基因的进化、功能及其临床意义。     

男性原发不育患者遗传学研究

目的:寻找男性不育的遗传学依据并对男性不育患者Y染色体AZF基因进行诊断,为开展针对男性不育的辅助生殖技术提供理论依据。方法:对83例原发性无精子症及少精子症患者进行外周血淋巴细胞培养及染色体核型分析,同时采用多重PCR的方法进行Y染色体AZF区15个STS位点微缺失检测,并以30例正常生育男性为对照。结果:13例患者存在染色体异常,其中7例为无精子症,占53.8%(7/13),6例为少精子症,占46.2%(6/13),且1例存在AZFb+AZFc的微缺失。在70例染色体核型正常的无精子症和少精子症患者中8例存在AZF基因的微缺失,2例存在AZFa的微缺失,缺失构成比为25.0%(2/8);1例存在AZFb的微缺失,缺失构成比为12.5%(1/8);2例存在AZFc的微缺失,缺失构成比为25.0%(2/8);1例存在AZFb+AZFc的微缺失,缺失构成比为12.5%(1/8);1例存在AZFb+AZFc+AZFd的微缺失,缺失构成比为12.5%(1/8);1例存在AZFa+AZFb+AZFc的微缺失,缺失构成比为12.5%(1/8)。正常男性对照组染色体核型均正常并且不存在AZF基因的微缺失。实验组与正常男性对照组比较Y染色体AZF区域的微缺失率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:男性染色体异常及Y染色体AZF区域的微缺失与男性原发性无精子症和少精子症密切相关。     

精子代谢与男性不育的相关性研究进展

精子发生和成熟中涉及到多种与代谢相关的过程,任何一种代谢异常都可引起精子活动力、受精能力等受损,最终导致男性不育的发生,如精子中活性氧簇过度产生引起的氧化应激反应,损害了精子的运动和获能;在临床上,男性不育症患者的精浆与正常男性相比,其代谢物成分表现出明显的变化,也可反映精子发育和成熟过程的异常,并间接表明这可能与男性不育相关。本文从精子代谢的相关途径、精子代谢组学检测与精子活动力及临床男性不育症的相关性等方面进行综述。     

非梗阻性无精子症的遗传学研究进展

非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia, NOA)是困扰全世界不育男性的严峻问题, 但是目前还不完全清楚其具体的遗传学致病因素。近些年, 随着对生物信息学以及基因学研究的不断深入, 越来越多的致病基因被发现。针对NOA的遗传学研究对象主要包括染色体异常、染色体微缺失、基因突变以及表观遗传修饰等。在本文中, 我们对这些发现进行了简单的总结与评估, 有助于大家进一步了解关于NOA的遗传学研究进展。     

抑制素B对精子发生障碍的诊断参考价值

抑制素B是睾丸分泌的一种糖蛋白激素,受垂体卵泡刺激素(FSH)特异调控,具有昼夜分泌节律性并随年龄增加而变化。成年男性抑制素B几乎全部来自于睾丸,且其组装过程大部分在生精细胞内完成,而后释放到循环和精浆,因此血清和精浆抑制素B水平与精子发生同步。由于使用高特异性抗体,酶联免疫吸附法（双抗体夹心ELISA法）可精确测定具有生物活性的抑制素B,满足科研和临床的需要。抑制素B的浓度在精子发生障碍时会出现变化,通过测定其浓度可对精子发生状态作出评估,在鉴别梗阻性与非梗阻性无精子症方面也具有较高的特异性与敏感性。     

运动对男性生殖影响的研究进展

运动对男性生殖的作用具有双重性,即合理运动有益于生殖内分泌,超负荷运动却常会损害男性的生育力。合理运动量的体能锻炼,卵泡刺激素（FSH）水平相比锻炼前上升,黄体生成激素（LH）和睾酮（T）水平显著上升;改善睾丸局部微环境,还改变生殖细胞的表观遗传修饰,有利于后代健康。超负荷运动则使睾丸微环境的温度显著上升,热应激可损伤精子的结构和功能并最终导致男性生育力下降;超负荷运动还抑制促性腺激素释放激素（GnRH）神经元和垂体功能,干扰生殖激素分泌。此外,运动还使精子DNA CpG岛相关基因发生明显的去甲基化,影响微小RNA（miRNA）表达水平,影响表观遗传。综述运动对男性生殖的影响及其机制。     

抑制素B对精子发生障碍的诊断参考价值

抑制素B是睾丸分泌的一种糖蛋白激素,受垂体卵泡刺激素（FSH）特异调控,具有昼夜分泌节律性并随年龄增加而变化。成年男性抑制素B几乎全部来自于睾丸,且其组装过程大部分在生精细胞内完成,而后释放到循环和精浆,因此血清和精浆抑制素B水平与精子发生同步。由于使用高特异性抗体,酶联免疫吸附法（双抗体夹心ELISA法）可精确测定具有生物活性的抑制素B,满足科研和临床的需要。抑制素B的浓度在精子发生障碍时会出现变化,通过测定其浓度可对精子发生状态作出评估,在鉴别梗阻性与非梗阻性无精子症方面也具有较高的特异性与敏感性。     

Multiplex Sequence-Tagged Site PCR for Efficient Screening of Microdeletions in Y Chromosome in Infertile Males with Azoospermia or Severe Oligozoospermia

The multiplex STS-PCR method was used to detect microdeletions in the long arm of the Y chromosome (Yq) of cytogenetically normal men. One hundred infertile men with azoospermia or oligozoospermia were screened with the multiplex PCR method using 58 STSs, which are specific to Yq for detecting microdeletions on this chromosome. Correlations between the microdeletions on Yq and phenotypes of spermatogenetic disturbance were also examined. Ten patients (10%) had microdeletions on Yq. Seven of the 60 azoospermic patients (11.7%), and 3 of the 40 oligozoospermic patients (7.5%) had microdeletions on Yq. None of the patients showed microdeletions in the AZFa region, but 2 had deletions in the AZFb region, another 2 in the AZFc region, including DAZ, and 1 had deletions in both the AZFb and in the AZFc, including RBM and DAZ. Single microdeletions were found in 4 patients, all of them in the AZFc around DAZ, and 1 patient had 2 microdeletions in the AZFb. The improved multiplex STS-PCR method efficiently detected microdeletions in 10% of azoospermic or severe oligozoospermic men who were cytogenetically normal. All of these microdeletions were presented in the AZFb and/or AZFc regions. This suggests that these regions contain candidate genes for spermatogenesis.     

110例男性不育患者染色体异常核型临床分析

目的:对110例男性染色体核型进行临床分析,探讨男性染色体畸变与其表型效应的关系。方法:外周血淋巴细胞培养,染色体常规G显带分析。结果:110例男性外周血染色体异常核型中常染色体结构异常占23.6%;性染色体数目异常占70.0%;性染色体结构异常占6.4%。男性染色体异常核型中无精子症占68.2%少精症占2.7%;配偶有反复自发流产、生育死胎、畸胎占29.1%。110例男性染色体异常核型涉及除19、20号染色体外其他染色体。结论:染色体畸变是导致男性不育的重要因素,对久治不愈的不孕不育应检查染色体以排除染色体畸变的可能。     

囊性纤维化跨膜传导因子基因与男性不育

囊性纤维化(cysticfibrosis,CF)是白种人的一种常见致命性常染色体隐性遗传病,由囊性纤维化跨膜传导因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)基因突变所致。CFTR基因突变在男性不育中多表现为先天性双侧输精管缺如、单侧输精管缺如和精子质量低下。卵胞浆内单精子注射(ICSI)技术使囊性纤维化患者有了生育后代的机会,但同时可能将突变的基因遗传给下一代。因此,胚胎植入前的遗传学诊断与遗传学风险评估非常重要,应该避免将有基因突变的胚胎植入母体子宫,提高生育质量。     

DNA甲基化与男性不育关系的研究进展

在严重的精子缺乏患者中普遍存在异常的表观遗传变化,已经发现亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)、PAX8、NTF3、SFN、HRAS、JHM2DA等基因DNA甲基化改变与不育患者中异常的精液参数有关,这些基因通常是高甲基化的.甲基化和去甲基化的正确调控对个体正常发育至关重要,微小的DNA甲基化异常与许多疾病有关,包括男性不育.阐述男性生殖细胞中正常的DNA甲基化,并对已经发现的异常DNA甲基化和男性不育的关系进行综述,从中探究男性不育的某些遗传学病因.     

抗苗勒管激素与男性生殖相关疾病的研究进展

抗苗勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH),又名苗勒管抑制素(Mullerian inhibiting substance,MIS),最早发现于男性胎儿,因抑制其苗勒管的发育而命名,对男性性分化具有重要作用。目前研究发现AMH在男性生殖相关领域有更加广泛的临床应用,主要体现在5个方面:(1)诊断两性畸形患者是否存在男性性腺,血清AMH比Y染色体敏感度更高,且是青春期评估睾丸功能较好的标志物;(2)与血清AMH水平比较,精浆AMH与睾丸生精功能显著相关,与精液质量呈正相关,是鉴别梗阻性、非梗阻性无精子症特异性较高的标志物;(3)精浆AMH是目前预测严重少、弱精子症患者精液冷冻-复苏率较好的指标;(4)精浆AMH水平可预测重组人卵泡刺激素(rh FSH)治疗特发性少、弱精子症的疗效;(5)对生育期需接受放化疗的男性肿瘤患者生育力的评估,精浆AMH是目前特异性最高的生物标志物。     

PROBABILITY OF SPERM DETECTION IN NONOBSTRUCTIVE AZOOSPERMIC MEN UNDERGOING TESTICULAR SPERM EXTRACTION PROCEDURES UNRELATED TO CLINICAL PARAMETERS

The study was conducted to evaluate the significance of preoperative clinical parameters for detection of mature testicular sperm cells in nonobstructive azoospermic men. Sixty-five consecutive men with nonobstructive azoospermia underwent testicular sperm extraction procedures. Testicular samples were analyzed histologically with patterns classified as mature spermatogenesis (normal or partial), arrest of spermatogenesis, and Sertoli cell only. Testicular sperm cells were isolated for use in an IVF/ICSI program. Histologic patterns and detection rate of sperm cells were correlated to clinical characteristics. Mature sperm cells were found in all levels of serum FSH. The men were divided into 3 groups based on their clinical characteristics (serum FSH level and testicular size). The distribution of the different testicular histologic patterns, as well as detection rate of sperm cells, was similar in all groups. No correlation was found between serum levels of FSH, LH, prolactin, or testosterone and sperm presence. None of these parameters, nor the testicular size and consistency, can serve as predictive variables of the histological pattern or the presence of mature sperm cells in the testicular biopsies in cases of nonobstructive azoospermia. Until an effective predictive tool is available, a trial of sperm retrieval is recommended for all azoospermic men independent of their clinical characteristics.     

精囊的生理功能与男性不育的关系

精囊作为男性生殖系统的重要附属性腺,在男性生殖过程中发挥重要作用。精囊分泌多种物质,如果糖、抗坏血酸、凝集酵素和前列腺素等。前列腺素及多种蛋白质具有多种作用,包括精液凝固、调节精液的黏稠度、维护精子DNA的稳定性以及抗氧化作用等。精囊发育不良与精囊相关疾病如精囊炎、精囊囊肿等,均会造成男性不育症的发生。精囊镜的普及与广泛应用也为精囊相关疾病的诊断及治疗提供了一种新的手段和治疗策略。现就精囊生理功能及其功能障碍引起男性不育的最新进展作一综述。     

41例男性特发性低促性腺激素性性腺功能减退症的临床分析

目的：探讨男性特发性低促性腺激素性性腺功能减退症（IHH）的临床特征和治疗。方法：2011年3月—2013年3月在南京医科大学第一附属医院生殖医学科男科就诊的IHH导致的41例男性不育患者中,13例为kallmann综合征,7例有隐睾病史。41例患者中,35例接受人绒毛膜促性腺激素（hCG）联合人绝经促性腺素（HMG）治疗,给予hCG、HMG治疗3～24个月;6例拒绝接受此研究方案。结果：治疗后,35例患者均感觉体力改善,性欲增强,同时第二性征得到不同程度的发育。27例患者疗程超过6个月,且双侧睾丸总体积、卵泡刺激素和睾酮水平均较治疗前显著上升,差异有统计学意义[（7.1±2.9）mL vs. （9.1±3.9）mL,（1.2±0.8）IU/L vs. （2.0±0.8）IU/L,（1.1±0.8）nmol/L vs. （12.5±2.7）nmol/L,均P＜0.05]。35例接受治疗的患者中分别有4,7,5例在治疗第3,6,9个月出现精子,共16例,其中11例患者的配偶在治疗过程中自然妊娠。 结论：男性IHH的临床特征为睾丸功能低下, hCG联合HMG是有效的治疗方法,可明显改善患者临床症状并恢复部分生育能力。     

蛋白质乙酰化与精子DNA稳定性和精子活力

表观遗传学参与调节精子发生和精子形成,其中组蛋白及非组蛋白乙酰化对生精细胞染色质结构重建以及精子活力起关键作用。环磷酸腺苷（cAMP）反应元件连接蛋白（CREB）的结合蛋白（CREB-binding protein,CBP）和p300是两个乙酰化酶,能使核心组蛋白发生乙酰化,其乙酰化作用能被乙酰化酶抑制剂（INHAT）所抑制。睾丸特异的布罗莫结构域（BRDT）蛋白为保守的核蛋白,能够识别乙酰化和非乙酰化的组蛋白。在精子发生早期,BRDT调节基因转录;在精子形成阶段,BRDT识别高度乙酰化组蛋白,接着组蛋白被鱼精蛋白替代,从而使精子形成致密的染色质。非组蛋白α微管蛋白（α-Tubulin）去乙酰化则降低精子活力,在少弱精患者精子中乙酰化α微管蛋白（acetylated α-tubulin,Ac-α-Tu）明显下降。