妇科肿瘤中Skp2的研究进展

细胞S期激酶相关蛋白是泛素-蛋白酶体通路中E3连接酶-SCF复合物的底物识别序列,是一种癌蛋白,与细胞周期调控因子、癌基因、抑癌基因关系密切,对细胞周期G1/S期关卡起调控作用,在许多恶性肿瘤中表达增高,与肿瘤的发生、发展、浸润及转移关系密切,可以作为判断肿瘤预后的一个有价值的预后指标,并可以作为抗癌药物和基因治疗的新靶点.     

妇科肿瘤中Skp2的研究进展

细胞S期激酶相关蛋白是泛素-蛋白酶体通路中E3连接酶-SCF复合物的底物识别序列，是一种癌蛋白，与细胞周期调控因子、癌基因、抑癌基因关系密切，对细胞周期GI／S期关卡起调控作用，在许多恶性肿瘤中表达增高，与肿瘤的发生、发展、浸润及转移关系密切，可以作为判断肿瘤预后的一个有价值的预后指标，并可以作为抗癌药物和基因治疗的新靶点。     

Protein Kinase A Associates with Meiotic Arrest of Mouse Oocytes via An Interaction with AKAP7γ

目的:探讨小鼠卵母细胞G2期阻滞中,AKAP7γ是否是介导蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)锚定在Cdc25B底物蛋白处的A型激酶锚定蛋白(A-kinase anchoring proteins,AKAPs).方法:以PKA锚定阻断剂Ht31处理G2期阻滞的小鼠卵母细胞,观察Cdc25B-S321的磷酸化状态,以免疫共沉淀方法检测PKA RII-AKAP7γ-Cdc25B的相互作用.结果:在G2期阻滞的小鼠卵母细胞中,Ht31处理后Cdc25B-S321不能被PKA磷酸化,同时PKA RIl-AKAP7γ及AKAP7γ-Cdc25B存在相互作用.结论:在小鼠卵母细胞中,PKA通过AKAP7γ锚定在胞质中的Cdc25B底物蛋白处,磷酸化其321位丝氨酸,使卵母细胞减数分裂阻滞在G2期,PKA RII-AKAP7γ/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中发挥重要作用.     

AKAP7γ介导蛋白激酶A在小鼠G2期卵母细胞发挥阻滞作用

目的:探讨小鼠卵母细胞G2期阻滞中,AKAP7γ是否是介导蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)锚定在Cdc25B底物蛋白处的A型激酶锚定蛋白(A-kinase anchoring proteins,AKAPs)。方法:以PKA锚定阻断剂Ht31处理G2期阻滞的小鼠卵母细胞,观察Cdc25B-S321的磷酸化状态,以免疫共沉淀方法检测PKA RII-AKAP7γ-Cdc25B的相互作用。结果:在G2期阻滞的小鼠卵母细胞中,Ht31处理后Cdc25B-S321不能被PKA磷酸化,同时PKA RII-AKAP7γ及AKAP7γ-Cdc25B存在相互作用。结论:在小鼠卵母细胞中,PKA通过AKAP7γ锚定在胞质中的Cdc25B底物蛋白处,磷酸化其321位丝氨酸,使卵母细胞减数分裂阻滞在G2期,PKA RII-AKAP7γ/Cdc25B通路在小鼠卵母细胞减数分裂阻滞中发挥重要作用。     

E3泛素连接酶CUL2在宫颈癌中的研究进展

泛素化是蛋白质翻译后调控的重要途径.作为体内最大的E3泛素连接酶家族,Cullin-Ring类E3泛素连接酶广泛参与调控机体内细胞周期蛋白和转录因子的降解.其中,CUL2作为骨架分子形成CUL2泛素连接酶复合物,在希佩尔-林道(von Hippel-Lindau,VHL)肿瘤抑制因子相关受体底物的泛素化降解中发挥重要的...     

PCOS患者脂肪组织IRS-1、IRS-2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化的研究

目的:研究多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate-1,IRS-1)及胰岛素受体底物-2(insulin recep-tor substrate-2,IRS-2)蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化,探讨PCOS产生胰岛素抵抗(insulinresistance,IR)的分子机制。方法:用放射免疫法检测各实验组血清促黄体生成素(luteini-zing hormone,LH)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)、睾酮(testosterone,T)、血清空腹胰岛素(fasting insulin,FIN)的水平;用葡萄糖氧化酶法测定血浆空腹血糖(fast-ing plasma glucose,FPG);用HOMA(homeostasis model assessment,HOMA)模型计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);用Western blot检测IRS-1及IRS-2蛋白的表达,应用免疫沉淀及增强化学发光法检测二者的酪氨酸磷酸化程度。结果:(1)PCOS IR组患者血清LH、LH/FSH、T、FIN及HOMA-IR均显著高于PCOS非IR组与对照组(均P(0.05);(2)PCOSIR组与PCOS非IR组及对照组相比,IRS-1蛋白表达量明显下降(P(0.05),IRS-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);(3)PCOS IR组IRS-1及IRS-2蛋白质酪氨酸磷酸化程度显著降低(均P(0.05)。结论:PCOS患者脂肪组织IRS-1蛋白表达下降,IRS-1及IRS-2蛋白质酪氨酸磷酸化程度降低,由此导致的受体后信号转导障碍可能是产生胰岛素抵抗的机制之一。     

蛋白激酶CK2与精子发生关系的研究进展

CK2是一种在真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,可通过对底物的磷酸化作用,或通过蛋白质的相互作用,影响精子发生过程中的许多关键蛋白,从而调节生殖细胞的分化、发育、释放和凋亡。CK2作为一种新的男性不育候选基因,与精子发生密切相关,为男性不育的临床诊断和治疗提供了又一新的依据和思路。     

ADAM10、E-cad及flt-1在重度子痫前期胎盘中的表达及意义

目的通过对孕妇胎盘组织中解聚素金属蛋白酶10(a disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)及其底物E-钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cad)、底物受体血管内皮生长因子受体-1(like tyrosine kinase-1,Flt-1)的检测,探讨三种因子与子痫前期发病的关系。方法采用RT-PCR和Western Blot方法分别检测39例重度子痫前期组和39例正常妊娠组胎盘组织中三种因子mRNA和蛋白的表达。结果重度子痫前期组ADAM10和Flt-1mRNA表达(1.7347±0.1705和1.1325±0.0823)均高于正常妊娠组(1.0512±0.0932和0.8254±0.0752),其蛋白质水平也均高于正常妊娠组(P0.001)。而两组E-cad mRNA(0.3277±0.0251,0.5996±0.0450)和蛋白表达(0.4789±0.1148和0.7601±0.1260)低于正常妊娠组(P0.001)。结论重度子痫前期胎盘组织中ADAM10、Flt-1过度表达及E-cad低表达可能与子痫前期的发生和发展相关。     

E3泛素连接酶在卵巢癌中作用的研究进展

卵巢癌是全球第一致死的妇科肿瘤。E3泛素连接酶家族是泛素-蛋白酶体系统的重要成分,此家族包括很多蛋白质,可催化多种蛋白底物的泛素化,促进其被蛋白酶体系统降解。迄今为止,E3泛素连接酶在多种肿瘤细胞生物学过程中均发挥着重要作用,包括细胞增殖、凋亡及周期调控等。本文现就不同E3泛素连接酶在卵巢癌中的作用及相关的靶向治疗做一综述。     

肥胖影响子宫内膜蜕膜化机制的研究进展

子宫内膜蜕膜化是胚胎植入、胎盘形成以及维持妊娠的必要条件,蜕膜化受损与多种不良妊娠结局有关。目前肥胖人群显著增多,对健康有不同程度的损害,肥胖女性子宫内膜间质细胞中蜕膜化标志物催乳素和胰岛素样生长因子结合蛋白1的mRNA表达明显降低,且肥胖对蜕膜化过程中涉及的孕激素相关蛋白、胰岛素受体底物2、信号转导与转录激活因子3、Wnt蛋白等相关因子及蜕膜免疫细胞均有影响,认为肥胖与蜕膜化受损具有密切的关系。研究肥胖与子宫内膜蜕膜化受损的相关性,有助于进一步了解子宫内膜蜕膜化受损的发病机制,对预防蜕膜化受损、改善不良妊娠结局具有重要意义。深入开展此方面的研究可能为肥胖型反复妊娠丢失患者的诊治提供新思路。     

罗格列酮对体外培养的PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨罗格列酮改善PCOS卵巢局部胰岛素抵抗的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后黄素化颗粒细胞行体外培养,分别用不同浓度罗格列酮(0nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L、10000nmol/L)处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblotting分别检测卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA的表达及蛋白含量。结果:①基础状态下,PCOS组IRS-1mRNA表达及蛋白含量较对照组显著增加;IRS-2mRNA表达及蛋白含量较对照组显著降低(P<0.05);②不同浓度罗格列酮作用后,PCOS组IRS-1mRNA及蛋白表达显著降低,IRS-2mRNA及蛋白表达显著增加,并呈剂量依赖性,而正常对照组无变化。结论:PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白表达异常有关;罗格列酮可通过提高黄素化颗粒细胞IRS-2的表达,降低IRS-1的表达,改善PCOS患者卵巢局部胰岛素抵抗。     

多囊卵巢综合征合并胰岛素抵抗患者脂肪组织胰岛素受体底物2蛋白的表达及酪氨酸磷酸化的研究

目的检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者脂肪组织胰岛素受体底物(IRS)2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化的程度,探讨发生PCOS合并胰岛素抵抗(IR)的机制。方法采用蛋白印迹(Westernblot)法,检测PCOS合并IR患者19例(PCOS合并IR组)、PCOS非IR患者17例(PCOS非IR组)及因单纯子宫肌瘤行子宫切除术的患者20例(对照组)的IRS2蛋白的表达;并采用免疫组化技术,检测IRS2在脂肪组织中的分布;采用免疫沉淀及增强化学发光法,检测IRS2的酪氨酸磷酸化程度。结果(1)PCOS合并IR组、PCOS非IR组及对照组IRS2蛋白表达分别为115±026、113±026及100±025,3组比较,差异无统计学意义(P>005)。(2)PCOS合并IR组、PCOS非IR组及对照组IRS2蛋白酪氨酸磷酸化程度分别为077±016、091±025及100±012,3组比较,差异有统计学意义(P<005);PCOS非IR组与对照组比较,差异无统计学意义(P>005)。结论PCOS合并IR患者脂肪组织的IRS2蛋白酪氨酸磷酸化程度的降低,可能是发生IR的机制之一。     

胰岛素抵抗与复发性流产相关性研究进展

<正>胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是指各种原因使胰岛素促进葡萄糖摄取和利用的效率下降,机体代偿性分泌过多的胰岛素产生高胰岛素血症。胰岛素抵抗的发生机制多为胰岛素信号通路异常所致,其缺陷可能存在于其经典的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/Akt通路的多个环节中,以自身受体磷酸化、胰岛素受体底物蛋白(insulin receptor substrate,IRS)、葡萄糖转运分子(glucose transporter,GLUT)的异常为其主要原因^[1]。     

PCOS患者卵巢胰岛素抵抗的发生机理探讨

目的:探讨胰岛素抵抗/高胰岛素血症在PCOS生殖功能障碍中的作用。方法:收集行IVF-ET治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞,行体外培养,分别用不同浓度胰岛素处理细胞48h,采用RT-PCR和Westernblot检测黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达。采用放射免疫法检测血清性激素及空腹血清胰岛素(FIN)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FPG)水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:①PCOS患者血清LH、LH/FSH、T、FIN及HOMA-IR均明显高于对照组(P<0.05);②0mU/ml胰岛素时,PCOS组黄素化颗粒细胞IRS-1mRNA及蛋白的表达水平明显高于对照组(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平较对照组明显降低(P<0.05);③10mU/ml胰岛素对二组患者黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2mRNA及蛋白的表达均无影响(P>0.05);④100mU/ml或1000mU/ml胰岛素作用后,二组患者IRS-1mRNA及蛋白的表达水平均明显增高(P<0.05),而IRS-2mRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:PCOS患者胰岛素抵抗/高胰岛素血症通过提高卵巢颗粒细胞IRS-1的表达,降低IRS-2的表达参与患者卵巢生殖功能障碍的发生。     

芳香酶及其抑制剂在妇科领域中的应用

芳香酶是细胞色素P450与还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸一细胞色素P450还原酶构成的复合物，是雄激素转化为雌激素过程中的关键酶。芳香酶能作用于不同组织中特异性的雄激素底物，产生不同活性的雌激素，如在脂肪组织中，芳香酶作用的底物为肾上腺皮质产生的雄烯二酮，产物为雌酮；在卵巢组织中主要底物为睾酮，其产物为雌二醇，少部分为由雄烯二酮转化生成的雌酮。芳香酶抑制剂(aromatase inhibition，AI)就是通过抑制该酶的活性来阻断雌激素合成的。     

肝脏组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路参与降低胎儿生长受限大鼠的胰岛素敏感性

目的 探讨肝脏组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinosital 3-kinase/protein kinase B,PI3-K/AKT)信号通路在胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)大鼠胰岛素敏感性降低中的作用. 方法 母鼠受孕后第1天始随机分为对照组和低蛋白组,各10只.低蛋白组孕鼠采用低蛋白饮食法(粗蛋白含量为8.00％)建立FGR仔鼠模型.测定对照组和低蛋白组FGR仔鼠生后3、7、14、30、60及90 d(每组每个时间点取雄性仔鼠8只)空腹血浆葡萄糖和血清胰岛素,计算胰岛素抵抗指数及胰岛素敏感指数.实时荧光定量聚合酶链反应技术检测雄性仔鼠生后7、14、30、60及90 d肝脏组织胰岛素受体底物1、2和葡萄糖转运蛋白4 mRNA表达水平,采用Western印迹技术测定胰岛素受体底物1、PI3-K(p110β亚基)、AKT、磷酸化AKT蛋白表达水平.采用简单相关及多重线性回归分析肝脏组织中PI3-K/AKT信号通路关键分子表达改变与胰岛素敏感性变化间的关系. 结果 (1)低蛋白组新生仔鼠平均出生体重为(4.92±0.36)g,低于对照组的(6.43±0.59)g,差异有统计学意义(t=14.73,P＜0.05).低蛋白组仔鼠中FGR发生率为88.2％(97/110),其中雄性仔鼠FGR发生率为94.1％ (48/51).(2)生后60 d时FGR仔鼠空腹血浆葡萄糖开始高于对照组,直至90 d.FGR仔鼠空腹血清胰岛素和胰岛素抵抗指数30 d时显著高于对照组,持续至90 d.FGR仔鼠胰岛素敏感指数自30 d始即显著低于对照组,直至90 d,差异均有统计学意义(P均＜0.05).(3)与对照组相比,FGR仔鼠7d时胰岛素受体底物1、2 mRNA表达均显著降低(0.45±0.02与0.68±0.03,t=16.633,P＜0.05;0.34±0.10与0.70±0.19,t=4.864,P＜0.05),并持续至生后90 d(0.48±0.03与0.59±0.05,t=5.237,P＜0.05;0.49±0.20与0.70±0.11,t=2.253,P＜0.05);胰岛素受体底物1、PI3-K及磷酸化AKT蛋白表达自14d时出现降低(0.22±0.05与0.52±0.11,t=7.024,P＜0.05;0.46±0.03与0.97±0.08,t=17.508,P＜0.05;0.62±0.10与0.89±0.08,t=6.100,P＜0.05),持续至生后90 d(1.11±0.08与1.32±0.14,t=3.714,P＜0.05;0.63±0.07与1.00±0.19,t=5.206,P＜0.05;0.28±0.03与0.45±0.10,t=4.880,P＜0.05).(4)FGR仔鼠磷酸化AKT蛋白表达量与胰岛素敏感指数呈正相关(r=0.704,P＜0.05);磷酸化AKT蛋白表达量分别与空腹血浆葡萄糖、空腹血清胰岛素和胰岛素抵抗指数变化呈负相关(r分别为-0.609、-0.561和-0.577,P均＜0.05). 结论 FGR仔鼠肝脏组织中PI3-K/AKT信号通路中某些关键分子表达发生变化,可能参与了胰岛素抵抗的发生.     

二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达

目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显著升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显著下降(P0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。     

睾酮对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性影响的机制研究

目的:探讨睾酮(T)对离体3T3-L1脂肪细胞胰岛素(Ins)信号通路影响的分子机制。方法:将3T3-L1前脂肪细胞诱导成熟,用10-5 mol/L T处理12 h,免疫印迹检测细胞Ins受体底物-1(IRS-1)的酪氨酸磷酸化水平及其总蛋白IRS-1、葡萄糖转运蛋白-4(GLUT-4)的表达,以及Ins刺激下膜蛋白GLUT-4的表达。加入核因子-κB(NF-κB)或ERK1/2的抑制剂预处理,再用免疫印迹检测细胞总蛋白中IRS-1的酪氨酸磷酸化水平及其总蛋白IRS-1、GLUT-4的表达,以及Ins刺激下膜蛋白GLUT-4的表达,[3H]-2-脱氧葡萄糖([3H]-2-DG)掺入法检测葡萄糖摄取率。结果:10-5 mol/L睾酮处理12 h与非T处理组相比,细胞总蛋白IRS-1及GLUT-4的表达均增多(P0.05),但使Ins刺激下的IRS-1的酪氨酸磷酸化水平及膜蛋白GLUT-4的表达减少(P0.05),加入ERK1/2或NF-κB的抑制剂后,IRS-1的酪氨酸磷酸化水平及膜蛋白GLUT-4的表达、葡萄糖摄取率能部分逆转。结论:ERK1/2/NF-κB信号通路是睾酮引起胰岛素抵抗(IR)的途径之一。     

蛋白质SUMO化修饰循环通路在胚胎发育中的作用

小分子泛素样调节蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)化修饰是一种可逆的蛋白质翻译后调节形式。SUMO与泛素结构相似,但功能迥异。SUMO底物可定位于细胞核、细胞膜及细胞质,绝大多数为转录因子和表观调节子。SUMO通过E1激活酶、E2结合酶和E3连接酶与靶蛋白上特定的赖氨酸位点共价结合,调节细胞功能,如控制细胞周期、调控转录、调节亚细胞定位等。近年许多研究证明,SUMO化修饰在早期胚胎发育中发挥重要作用。在胚胎发育过程中,蛋白质SUMO化修饰参与调控胚胎发育的多个环节中的多个分子事件,如维持染色体的完整性、分离控制着丝点聚集、调控生殖细胞发育及减数分裂成熟等。总结最新的研究成果,概括SUMO化修饰在胚胎发育中的作用。但由于该项研究刚刚起步,SUMO化循环通路在胚胎发育中的全部生理学功能仍有待进一步研究。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制物与妇科恶性肿瘤的浸润及转移

细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)的降解被认为是肿瘤侵蚀正常组织和开始转移的信号及重要途径。近年来 ,大量研究证实 ,基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＭＭＰｓ)及其组织抑制物 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＴＩＭＰｓ)在这一过程的代谢平衡调节中起决定性作用[1] 。一、ＭＭＰｓ的结构及调节1.ＭＭＰｓ家族的种类及结构 :ＭＭＰｓ是一组结构中含Ｚｎ2 和Ｃａ2 的蛋白水解酶家族 ,共有 14个成员。根据其作用底物不同可分为 4类[…