基于海马CA1区微量注射AMPA对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区阳性细胞的影响探讨逍遥散的调节机制

目的运用免疫组化方法,对比海马CA1区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区AMPA受体亚基阳性细胞的影响,探讨逍遥散调节肝郁脾虚证的机制。方法 25只SD雄性大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、AMPA组和逍遥散组。以21 d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型,于模型大鼠双侧海马CA1区,埋管微量注射AMPA受体的激动剂AMPA,逍遥散组造模方法和AMPA组尽可能相似,突出逍遥散和AMPA干预的可比性。运用免疫组化方法检测杏仁核基底外侧区(BLA区)AMPA受体的2个重要亚基谷氨酸受体1(GluR1)和谷氨酸受体2(GluR2)的阳性细胞数变化情况,比较逍遥散组和AMPA组上述指标的变化趋势是否一致。结果造模21 d后,在杏仁核BLA区,与正常组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均无统计学意义(均P>0.05);与模型组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均有统计学意义(均P<0.01),且2组GluR1阳性细胞数表达均较模型组增高,GluR2阳性细胞数表达均较模型组降低,2组阳性细胞数表达升降趋势一致。各组阳性细胞积分光密度结果与阳性细胞数结果一致。结论结合前期实验,从免疫组化角度进一步推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马AMPA受体的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,从而治疗肝郁脾虚证。     

逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠海马和杏仁核AMPA受体亚基基因表达的影响

目的 探讨逍遥散治疗肝郁脾虚证的基因调节机制.方法 75只SD大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、6-氰基-7-nitroquinoxaline-2,3-二酮(CNQX组)和逍遥散组.以21 d慢性束缚造模型组,在此基础上,运用脑立体定位仪微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体的拮抗剂造CNQX组,加造假手术组为了评估手术创伤对模型的影响程度.逍遥散组造模方法和CNQX组尽可能相似,突出逍遥散和CNQX二者干预的可比性.运用RT-PCR一步法检测海马CA1、CA3和杏仁核AMPA受体的2个重要亚基GluR1 mRNA、GluR2 mRNA的表达变化,比较CNQX组和逍遥散组在各区指标变化趋势是否一致.结果 在海马CA1和CA3区,正常组、CNQX组和逍遥散组间GluR1 mRNA和GluR2 mRNA表达均无统计学意义(P＞0.05);在基底外侧杏仁核BLA区,CNQX组由于拮抗AMPA受体,GIuR1 mRNA和GluR2 mRNA均表达最低,但正常组和逍遥散组间均无统计学意义(P＞0.05).排除了手术创伤等混杂因子,逍遥散组和CNQX组上述2个指标RT-PCR表达结果在海马和杏仁核变化趋势均相似.结论 逍遥散对肝郁脾虚证模型大鼠海马和杏仁核AMPA受体亚基基因表达的调节机制可能和CNQX的调节机制吻合.CNQX通过拮抗杏仁核AMPA受体,抑制杏仁核兴奋,缓解海马各区受损.进而推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马的"兴奋一抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证.     

束缚应激大鼠AMPA受体和相关蛋白变化及逍遥散对其影响

目的观察慢性束缚应激状态下海马及杏仁体AMPA受体和相关蛋白的变化及逍遥散的作用。方法使用捆绑的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21d后检测模型大鼠海马CA1区、基底外侧杏仁核(BLA)谷氨酸受体2/3(GluR2/3)、N-乙基顺丁烯二酰亚胺敏感性的融合蛋白(NSF)、PKC作用蛋白1(PICK1)的积分吸光度(IOD)和阳性神经元数。结果7 d模型组大鼠海马CA1区和BLAGluR2/3 IOD较7 d正常组显著增高(P<0.01,P<0.05);7 d模型组海马CA1区GluR2/3阳性神经元数及PICK1 IOD较7 d正常组增高(P<0.05,P<0.01),7 d治疗组(逍遥散)上述指标与7 d模型组相比有显著差异(P<0.01,P<0.05),与7 d正常组比较无差异;21 d模型组与21 d正常组比较,海马CA1区GluR2/3 IOD显著降低(P<0.05)、NSF IOD升高(P=0.06),BLA GluR2/3阳性神经元数增多(P=0.090)、PICK1阳性神经元数减少(P=0.075),21 d治疗组上述指标与正常组比较无显著性差异。结论7 d和21 d束缚应激对AMPA受体影响的变化趋势不同,海马CA1区与BLA的变化趋势也不一致,逍遥散对21 d束缚应激状态下AMPA受体的变化调节较强。     

辛伐他汀对谷氨酸损伤的大鼠海马组织中AMPA受体GluR2表达的影响

目的 研究辛伐他汀对谷氨酸损伤的大鼠海马组织中AMPA受体GluR2表达的影响。  方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、谷氨酸损伤组、辛伐他汀10 mg/kg组和20mg/kg组。连续灌胃给药10d后,麻醉状态下对大鼠行侧脑室注射,假手术组大鼠给予注射4μL生理盐水,其余组大鼠给予注射等体积谷氨酸溶液,2h后,每组取5只大鼠,断头取脑,分离海马组织,采用RT-PCR方法观察大鼠海马组织中GluR2的mRNA表达情况;其余大鼠用多聚甲醛灌流后取出海马组织做病理切片,采用免疫组织化学方法观察其蛋白表达情况。  结果 与假手术组相比,谷氨酸损伤组大鼠海马组织中GluR2在mRNA和蛋白水平的表达均降低(P＜0.01);辛伐他汀(10、20mg/kg)组大鼠海马组织中GluR2的mRNA和蛋白水平的表达均明显升高。  结论 影响AMPA受体GluR2的表达可能是辛伐他汀抗谷氨酸损伤作用的机制之一。     

行为训练对胎儿生长受限子鼠学习记忆能力及海马NR2B、GluR1表达的影响

目的 探讨行为训练对胎儿生长受限(FGR)子鼠学习记忆能力及海马符氨酸受体NR2B和GluR1表达的影响.方法 被动吸烟法建立大鼠FGR模型,将子鼠分为FGR组及正常组,两组再各自随机分为训练组和非训练组,于生后2、4月行Morris水迷宫行为训练,应用避暗实验和跳台实验检测学习记忆能力,采用免疫组织化学法观察海马脑区谷氨酸受体NR2B及GluR1的表达情况.结果 学习记忆成绩比较,FGR组差于正常组,训练组优于非训练组;FGR训练组学习成绩提高明显,模型因素及训练凶素有交互效应(P<0.05);NR2B、GluR1在海马CA1区、CA3区的表达比较,FGR组低于正常组;训练组CA1区GluR1、NR2B的表达量明显高于非训练组;2月龄CA1区GluR1的表达,模型因素及训练因素有交互效应(p<0.05).结论 行为训练可提高FGR子鼠学习记忆能力,可能与海马CA1区谷氨酸受体NR2B、GluR1的表达上调有关.     

逍遥散对大鼠慢性束缚应激脑区NMDAR2A和NMDAR2B蛋白的调节作用

目的观察海马及杏仁核NMDAR2A和2B蛋白在束缚应激状态下蛋白表达变化及逍遥散的调节作用。方法采用每天捆绑3 h的方法制作慢性束缚应激动物模型,并用逍遥散进行干预,分别于7 d后和21 d后用Western blot方法检测各组大鼠海马CA1区、CA3区、齿状回（DG）和杏仁核的NMDAR2A和2B蛋白表达的情况。结果在分离的4个部位（CA1,CA3,DG和杏仁核）,发现NR2A和NR2B分子在其中都有表达。NR2A的表达：在CA3和DG区,7 d和21 d模型组的表达降低,差异具有统计学意义（P〈0.05和P〈0.01）,逍遥散组的表达升高,差异具有统计学意义（P〈0.05和P〈0.01）。NR2B的表达情况和NR2A基本一致。结论逍遥散对NR2A和NR2B有明显的调节作用,在海马的CA3和DG区最明显,对7 d和21 d的应激模型都有不同程度的改变作用,以维持机体原来的平衡状态。提示逍遥散对神经突触性的改变有生理性保护作用。     

疏肝解郁方对大鼠吗啡条件性位置偏爱期间前额叶皮质和伏核中GluR1、GluR2蛋白表达变化的影响

目的 研究吗啡条件性位置偏爱期间疏肝解郁方对大鼠前额叶皮质和伏核中谷氨酸受体1(GluR1)、谷氨酸受体2(GluR2)蛋白表达的影响.方法 采用Western blot实验方法定量检测GluR1和GluR2蛋白表达的变化.结果 与正常对照组比较,吗啡模型组GluR1和GluR2的蛋白表达均明显升高(P<0.01).与...     

肝郁脾虚证大鼠双侧海马CA1区注射AMPA后行为的变化及逍遥散的调节作用

目的从行为学角度进一步探讨逍遥散治疗肝郁脾虚证的调节机制。方法 75只SD雄性大鼠随机分为5组,正常组、模型组、假手术组、α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)组和逍遥散组。以21 d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型,于模型大鼠双侧海马CA1区,埋管微量注射AMPA受体的激动剂AMPA,逍遥散组造模方法和AMPA组尽可能相似,突出逍遥散和AMPA 2种干预的可比性。于第1、7、14、21 d分别比较AMPA组和逍遥散组行为变化各项指标趋势是否一致。结果模型组大鼠逐步呈现肝郁脾虚证表现,AMPA组、逍遥散组大鼠焦躁状态逐步得到抑制。造模第21天,与正常组比较,AMPA组和逍遥散组大鼠穿格次数、站立次数、修饰次数等指标均无统计学意义(P>0.05)。结论从宏观行为学角度,初步推断逍遥散可能通过纠正杏仁核和海马的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,来治疗肝郁脾虚证。     

逍遥散对慢性不可预知温和应激肝郁脾虚型抑郁症大鼠海马区IL-6、TNF-α影响

目的观察逍遥散对慢性不可预知温和应激肝郁脾虚型抑郁症大鼠海马区炎性因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,研究逍遥散治疗肝郁脾虚型抑郁症的可能作用机理。方法 30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、逍遥散组(C组),逍遥散组在每天下午造模前灌服逍遥散悬浊液(0.092 5 g/100 g),模型组及正常组灌服等量的超纯水。7周后观察各组大鼠的宏观表现、进食量、体质量变化、糖水实验及旷场实验。第51天,用免疫组化方法记录大鼠海马区IL-6、TNF-α的变化。结果实验第50天,B组进食量明显减少,体质量减轻,行为学检测明显,同时,B组大鼠海马区IL-6、TNF-α平均光密度明显高于A组及C组,而C组大鼠海马区IL-6、TNF-α介于A组及B组间,A组与B组,B组与C组,两两比较,P0.05,差异有统计学意义。结论慢性不可预知温和刺激肝郁脾虚型抑郁症模型可引起大鼠海马区IL-6、TNF-α分泌增加;逍遥散可以有效地抑制肝郁脾虚抑郁症大鼠海马区IL-6、TNF-α的分泌,这可能是逍遥散治疗肝郁脾虚型抑郁症的作用机理之一。     

GluR1在大鼠海马结构的表达

目的：观察AMPA受体亚单位GluR1在大鼠海马的表达．方法：在多聚甲醛固定的海马切片上，用免疫组化SP法观察GluR1在正常成年大鼠海马结构的表达与分布。结果：GluR1在正常大鼠海马有广泛表达，在CA3区的起层、锥体细胞层和透明层及齿状回门区内的中间神经元表达最强，阳性表达在CA1区主要见于神经元的胞膜和突起，而在CA3区还可见于胞质。结论：GluR1在海马CA1区和CA3区的表达不同，这种差异可能与海马不同区域具有不同功能有关。     

AMPA受体GluR2亚基研究进展

GluR2亚基由于其mRNA Q/R位点编辑,使得它在AMPA受体中的相对含量决定了AMPA受体的钙离子不通透性。在多种神经性损伤或退行性疾病中,神经元GluR2表达下调,Ca2＋内流增加。但是目前关于GluR2下调机制,GluR2在神经元死亡或耐受中的作用及机制尚未完全阐明。本文就AMPA受体GluR2亚基调控及其与神经元损伤关系的研究进展作一综述。     

缺血损伤后突触后膜GluR2含量变化及机制

目的探讨缺血损伤后突触后膜谷氨酸受体2(glutamate receptor 2, GluR2)含量变化、机制及其在神经元延迟性死亡中的作用.方法采用PI染色、比色分析和双重免疫荧光技术定量观察神经元死亡、膜表面及突触GluR2含量变化及途径.结果缺血损伤神经元死亡数量明显增加;膜表面GluR2总量、含GluR2的突触数目以及突触部位GluR2含量都明显降低(P<0.05),而胞内GluR2含量则显著增加,采用高渗糖预处理阻断内吞过程可显著抑制膜表面GluR2的降低过程.结论缺氧损伤后膜GluR2内吞过程增强,导致了膜表面GluR2含量降低,缺乏GluR2的AMPA受体增加,进而介导了Ca2 的快速内流,引起神经元延迟性死亡.     

海人藻酸受体亚基GluR6真核表达载体的构建及其表达

目的构建海人藻酸受体亚基GluR6的真核细胞表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法根据GenBank数据库中GluR6的cDNA序列（Z11548）,分3段分别设计并合成3对引物。从大鼠海马组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,分别克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后,将该3段cDNA片段依次与pcDNA3.1（＋）载体定向连接。将鉴定正确的重组体以脂质体法转染至COS-7细胞中,免疫印迹法检测GluR6蛋白质表达水平。结果克隆了GluR6的cDNA,并构建了其真核表达载体GluR6-pcDNA3.1,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;免疫印迹分析显示,GluR6在COS-7细胞中表达水平较高。结论成功构建GluR6-pcDNA3.1真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。     

GluR2在大鼠蜗核的年龄依赖性表达及与突触发育的关系

目的 检测α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体亚型GluR2和突触小泡蛋白(SYP)在不同年龄大鼠蜗核中的表达,探讨GluR2的表达规律及与突触发育的关系.方法 选取2、3、4、6、8和10周SD大鼠,应用免疫荧光组化方法观察各年龄大鼠GluR2及SYP在蜗核中的表达及其相互关系.结果 GluR2在不同年龄大鼠蜗核神经元中均有表达,生后2、3周时表达较弱,4周时逐渐增强,6周达高峰,之后急剧下降,10周表达最弱.GluR2在大鼠耳蜗背侧核颗粒细胞层表达较强,在分子层和多极细胞层表达较弱.SYP在不同年龄大鼠蜗核神经元中均有表达,生后2周表达最弱,4周显著增强,6周为高峰,8周时骤然降低并稳定表达.结论 大鼠生后发育过程中蜗核GluR2及SYP的表达呈现基本一致的年龄依赖性规律,GluR2在蜗核的表达可能与蜗核突触成熟及功能发育有关,其年龄依赖性表达现象可能是中枢神经系统感觉功能发育及可塑性的重要机制.     

大鼠高架十字迷宫中的行为表现及海马GluR1蛋白水平的性别差异

目的:探讨雌雄性SD大鼠在高架十字迷宫中各臂的探索时间及其海马内的GluR1蛋白水平是否存在性别差异.方法:将11只雄性和10只雌性SD大鼠放在高架十字迷宫中测试5 min,30 min后快速取出测试大鼠的两侧海马,在-80℃冰箱保存,然后提取蛋白质,用Western印迹方法检测海马内GluR1的蛋白水平.结果:与雄性...     

外源性NO在细胞水平对GluR6 S-亚硝基化的作用

目的观察外源性一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）和亚硝基谷胱甘肽（GSNO）在细胞水平对GluR6 S-亚硝基化的影响。方法将本事构建的pEGFP—GluR6质粒转染HEK293细胞24h后,加不恫浓度外源性NO供体SNP和GSNO处理30min后收集蛋白,用生物素转换法检测GluR6S—亚硝基化水平。结果给了不同浓度SNP时GluR6的s一亚硝基化均增高,并存给予1mmol／LSNP时其亚硝基化水平达最高。另外,给予200μmoL／L GSNO时GluR6的S-亚硝基化也增高。结论在过表达GIuR6的HEK293细胞中,外源性NO供体SNP和GSNO均能使GluR6 S-亚硝基化水平增高。结果提示,在体外,外源性NO能直接诱导GluR6 S-亚硝基化。     

GluR2在大鼠蜗核的年龄依赖性表达及与突触发育的关系

目的检测α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)受体亚型GluR2和突触小泡蛋白(SYP)在不同年龄大鼠蜗核中的表达,探讨GluR2的表达规律及与突触发育的关系。方法选取2、3、4、6、8和10周SD大鼠,应用免疫荧光组化方法观察各年龄大鼠GluR2及SYP在蜗核中的表达及其相互关系。结果GluR2在不同年龄大鼠蜗核神经元中均有表达,生后2、3周时表达较弱,4周时逐渐增强,6周达高峰,之后急剧下降,10周表达最弱。GluR2在大鼠耳蜗背侧核颗粒细胞层表达较强,在分子层和多极细胞层表达较弱。SYP在不同年龄大鼠蜗核神经元中均有表达,生后2周表达最弱,4周显著增强,6周为高峰,8周时骤然降低并稳定表达。结论大鼠生后发育过程中蜗核GluR2及SYP的表达呈现基本一致的年龄依赖性规律,GluR2在蜗核的表达可能与蜗核突触成熟及功能发育有关,其年龄依赖性表达现象可能是中枢神经系统感觉功能发育及可塑性的重要机制。     

枸杞多糖对精神分裂症模型大鼠海马中GluR1表达及认知功能的影响

目的  探讨枸杞多糖（LBP）对精神分裂症模型（Sz）大鼠海马中GluR1表达及认知功能影响。 方法  选取36只健康SD大鼠,随机分3组,每组12只,分别为正常对照组、模型组及药物干预组（Sz+LBP）。Sz及Sz+LBP腹腔注射地卓西平马来酸盐0.6 mg/（kg·d）,连续注射14 d制造精神分裂症模型,Sz+LBP同时灌胃枸杞多糖100 mg/（kg·d）。正常对照组在相应时段注射等剂量的正常生理盐水。造模成功后,分别评估各组大鼠的行为学改变,进行Morris水迷宫,比较3组大鼠的定位航行和空间探索时间以及采用免疫荧光染色、Western blot法测定海马中GluR1蛋白的表达。结果  Sz的运动量、共济失调、刻板行为评分以及海马中GluR1均高于正常对照组（P <0.01）,Sz+LBP的运动量、共济失调及刻板行为评分均低于Sz,明显抑制精神分裂症大鼠海马中GluR1的表达（P <0.01）。结论  枸杞多糖对精神分裂症模型大鼠海马具有保护作用,其机制与海马中GluR1表达来改善其认知功能相关。