槲寄生黄酮苷对大鼠心室肌细胞钾离子通道的作用

目的观察槲寄生黄酮苷对大鼠心室肌细胞钾离子通道的作用,探讨槲寄生黄酮苷抗心律失常作用机制。方法应用全细胞膜片钳技术记录槲寄生黄酮苷对大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)的影响。结果应用50μg/ml和250μg/ml两种浓度的槲寄生黄酮苷分别使大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)在实验电压-120mV时从给药前(-26.23±9.52)pA/pF减少到(-20.82±7.88)pA/pF,(-18.11±7.89)pA/pF(n=7,P<0.05);使大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)在实验电压+50mV时,从给药前(26.14±6.67)pA/pF减少到(16.41±6.23)pA/pF,(13.25±3.78)pA/pF(n=4,P<0.05)。结论槲寄生黄酮苷抑制大鼠心室肌细胞IK1,Ito可能是其抗心律失常作用的一个机制。     

通络药物对心肌细胞钠钙离子通道的影响

目的观察通络药物参松养心胶囊提取干粉溶液对单个豚鼠J0室肌细胞膜钠通道电流（INa）、L型钙通道电流（ICa,L）的影响。方法用钙外液将参松养心胶囊干粉配制成不同浓度（1％、0．5％、0．25％）。用酶解法分离单个心室肌细胞,并用全细胞膜片钳记录技术记录电流。结果当药物浓度0．5％时,可以使INA峰值电流密度从（27．2±5．4）pA／pF降至（14．9±2．8）pA／pF,平均抑制率为44．8％±7．7％（n=5,P〈0．05）;药物浓度为1％,0．5％,0．25％时,分别对ICa,L的峰值电流密度的抑制率为50．7％±5．6％,44．8％±6．5％,和19．2％±1．1％,（n=5,P〈0．05）。药物可以使INA、ICa,L的电流密度-电压曲线上移,但均不改变其激活、峰值和反转电位。结论参松养心胶囊提取干粉溶液对,INA、ICa,L具有阻滞作用,这可能是其抗心律失常和心肌保护作用药理机制的一部分。     

藻酸双酯钠对豚鼠心室肌细胞离子电流的作用

目的:观察藻酸双酯钠(Polysaccharide sulfate,PSS)对豚鼠单个心室肌细胞离子流的影响。方法:采用Ⅰ型胶原酶分离单个豚鼠心室肌细胞的方法,利用全细胞膜片箝记录技术,在不同箝制条件下,记录并分析了PSS对L-型Ca2+电流(ICa,L)、内向整流K+电流(IK1)的影响。结果:①PSS使ICa,L的激活时间常数变大,电流幅度减小,Ⅰ-Ⅴ曲线上移。在箝制电位为+10 mV时,PSS在6-9 min内使ICa,L的激活时间常数从(0.92±0.10)ms增加到了(1.15±0.11)ms(n=5,P<0.052);ICa,L的电流幅度从(16.80±1.71)pA/pF下降至(13.86±1.67)pA/pF(n=5,P<0.01)。②PSS可使IK1的内向成分和外向成分均增加。当箝制电位在-170 mV时,PSS能使IK1内向电流幅度从(224±16.17)pA／pF增加至(257±17.36)pA／pF(n=7,P<0.01);箝制电位在-50 mV时,PSS使IK1的外向电流幅度从(8.89±0.86)pA／pF增加至(10.38±1.18)pA／pF(n=7,P<0.05)。在反转电位附近时(-70--120 mV),PSS的作用不明显。PSS能使IK1的激活时间常数减小,当箝制电位在-160 mV时,激活时间常数从加药前的(1.05±0.11)ms减小到了加药后的(0.78±0.90)ms(n=7,P<0.01);同时,IK1的电导值变大,从(2.53±0.17)nS／pF增加到了(2.82 ±0.20)nS／pF(n=7,P<0.05)。结论:PSS对L-型Ca2+电流有抑制作用,对内向整?     

AngⅡ对人心房肌细胞膜钾通道电流的影响及替米沙坦的拮抗作用

目的: 观察AngⅡ对人心房肌细胞膜钾电流的作用,揭示其参与房性心律失常的电生理机制,为应用AngⅡ受体拮抗剂治疗房性心律失常提供实验基础.方法: 急性分离单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳方法记录内向整流钾电流(Ik1)、短暂外向钾电流(Ito).实验分4组:对照组,AngⅡ(0.1 μmol/L)组,替米沙坦(0.01 μmol/L)组,AngⅡ 替米沙坦组.结果: 与对照组相比,0.1 μmol/L AngⅡ使人心房肌细胞膜Ito峰值电流密度明显下降(pA/pF, 6.55±0.52 vs 12.65±1.06,P＜0.01), 在-100mV电压下使IK1 峰值电流密度显著升高 (pA/pF, -9.31±1.02 vs -5.23±0.98, P<0.01).0.01 μmol/L替米沙坦对人心房肌细胞膜Ito IK1无明显影响,但可拮抗AngII的作用;AngⅡ 替米沙坦组的Ito峰值电流密度 (pA/pF,11.74±1.28 )和IK1 峰值电流密度(pA/pF, -6.13±1.15) 与AngⅡ组相比有显著差别(P＜0.01).结论: AngⅡ对人心房肌细胞具有明显的电生理学作用,0.1 μmol/L AngⅡ可促进人心房肌细胞膜IK1并抑制Ito,替米沙坦可拮抗AngⅡ对人心房肌细胞膜钾电流的作用.     

丹参酮Ⅱ-A对大鼠心室肌细胞膜钾电流的影响

目的　研究丹参酮Ⅱ A(tanshinone ,TSN)对酶解分离的大鼠单个心室肌细胞的内向整流钾电流 (Ik1 )和瞬时外向电流 (Ito)的影响。方法　采用膜片钳全细胞记录技术。结果　应用CdCl2 0 .3mmol·L- 1 阻断钙电流发现 :TSN可抑制Ik1 和Ito。 1 0、2 0、40 μmol·L- 1 使Ik1 稳态电流由用药前 - 32 66 5pA± 381 6pA分别降至 - 2 90 1 0pA±52 8 3pA(P <0 .0 5 ,n =7) ,- 2 581 .0pA± 335 .7pA(P <0 .0 1 ,n=7) ,- 1 931 .9pA± 2 1 9.2pA(P <0 .0 1 ,n =7) ,抑制率分别为 1 2 1 %、2 3 4%、32 8%。较低浓度的TSN对Ito的作用不明显 ,较高浓度有抑制作用。 1 0、2 0、40 μmol·L- 1 使Ito峰值由用药前 2 374 4pA± 2 2 2 9pA分别降至 2 1 4 9 4pA± 341 3pA(P >0 .0 5 ,n =7) ,1 893 .1pA± 350 .8pA(P <0 .0 5 ,n=7) ,1 661 .3pA± 360 .0pA(P <0 .0 5 ,n =7) ,抑制率分别为 9%、2 0 1 %、30 0 %。结论　由于TSN对钾通道的阻滞作用 ,这可能为其抗心律失常的重要机制     

参松养心胶囊干粉提取液对兔肺静脉肌袖心肌细胞动作电位和部分离子通道的影响

目的 探讨参松养心胶囊干粉提取液对兔肺静脉肌袖心肌细胞(PVC)动作电位和某些离子通道的影响,对治疗心房颤动的可能机制.方法 采用全细胞膜片钳技术的电流钳记录动作电位和电压钳制记录兔肺静脉肌袖心肌细胞动作电位、L-型钙离子通道电流(LCa-L)、内向整流钾电流(IK1)和瞬时外向钾电流(ITo),并观察不同浓度参松养心干粉提取液对动作电位和各离子通道电流的影响.结果 参松养心干粉提取液明显延长PVC动作电位时程(APD),APD90基础状态下(187±49)ms,在浓度5 mg/ml时延长至(286±76)ms(P<0.05),在浓度10 mg/ml时延长至(312±82)ms(P<0.05);参松养心胶囊干粉提取液对PVC的LCa-L、IK1,和ITo电流呈浓度依赖性抑制作用.结论 参松养心胶囊干粉通过对肺静脉多个离子通道的作用,可能对心房颤动起到治疗作用.     

哇巴因诱发大鼠心律失常作用靶点的研究

目的　观察哇巴因对大鼠心室肌细胞动作电位时程、钾通道的作用 ,探讨哇巴因诱发心律失常的作用机制 ,为寻找新的抗心律失常药物提供依据。方法　应用全细胞膜片钳技术记录哇巴因对大鼠心肌细胞动作电位时程 (APD)、内向整流钾电流 (Ik1 )、瞬时外向钾电流 (Ito)的作用。结果　①哇巴因 5μmol/L使大鼠心室肌细胞动作电位时程从给药前的 86 .3ms± 2 5 .2ms(APD90 ) ,缩短至 58.9ms± 2 0 .8ms(n =5 ,P <0 .0 1 ,给药 1 0min) ;②哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞内向整流钾电流 ,使Ik1 从 - 1 868pA± 1 88pA增加到 - 2 393pA± 367pA(刺激电压 - 1 2 0mV ,n=1 0 ,P <0 .0 1 ) ;③哇巴因 5μmol/L可增加大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流 ,使Ito从 1 2 73pA± 31 8pA增加到 1 70 7pA± 486pA(刺激电压 +60mV ,n =5 ,P <0 .0 1 )。结论　哇巴因诱发室性心律失常可能与它缩短心室肌细胞动作电位时程有关 ,而Ito的增加使二期平台期缩短 ,Ik1 的增加使三期复极加快 ,均参与了动作电位时程缩短的过程。同时增加Ik1 将影响静息膜电位 ,可能使膜反应性增强     

HEK293细胞内源性电压门控钾离子通道电生理学特性研究

目的探讨人胚胎肾细胞(HEK293细胞)内源性电压门控钾通道的电生理特性,避免HEK293细胞上内源性离子通道对外源性离子通道表达时的干扰。方法利用全细胞膜片钳技术分析了HEK293细胞内源性电压门控钾通道的电生理特性。结果在HEK293细胞上去极化电压从-80 mV开始可触发1个外向电流。在+100 mV时电流为(422.78±68.87)pA,电流密度为(21.91±3.20)pA/pF。钾通道阻断剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、4-氨基吡啶(4-aminopyri-dine,4-AP),在将细胞外液钾浓度由4 mmol/L提高到40 mmol/L时,对外向电流有影响。结论正常培养的HEK293细胞本身有内源性的钾通道。该外向电流可能包括了IK、IK1、IKur和Ito。     

小鼠心室肌细胞钾电流及动作电位特征

目的比较小鼠左心室、右心室及室间隔心肌细胞的钾电流、动作电位的特征.方法采用全细胞膜片钳技术.结果左、右心室肌细胞的动作电位特征和Ito, Ik1钾电流密度无差异;与左心室比较,室间隔细胞存在两种特征的Ito,Ikslow (5.9pA/pF±1.35pA/pF,+50mV) 电流密度低型和Itof(3.47pA/pF±1.1pA/pF) and Ikslow (4.75pA/pF±1.5pA/pF)电流密度均低型;室间隔细胞亦存在两种特征的动作电位,一种与左、右心室无差异,另一种明显延长.结论小鼠心脏细胞存在不同的电生理特征分布,这种分布是由于编码通道的基因分布不同造成的.     

高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响

目的研究高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。方法采用急性酶解分离法获得大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录Ito和Ik1,观察50μmol/L姜黄素对Ito和Ik1的影响。结果 50μm/L姜黄素对Ito和Ik1通道电流的抑制率分别是(84±11)%(P<0.05)和(59±8)%(P<0.01)。它使Ito和Ik1通道电流密度-电压曲线电流幅度减小,但不改变其整流特性。结论 50μmol/L姜黄素能明显抑制大鼠心室肌细胞Ito和Ik1电流,提示其可能存在心脏毒性作用。     

乳酸左氧氟沙星对豚鼠心肌细胞延迟整流钾电流的影响

目的:观察氟喹诺酮类药物左氧氟沙星(levofloxacin,LVFX)对豚鼠心肌细胞延迟整流钾电流(IK)的影响。方法:采用酶消化的方法分离出单个豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳技术记录不同浓度的LVFX对豚鼠心室肌细胞IK的影响。结果:①SPX和LVFX浓度依赖地抑制IK的脉冲电流和尾电流,但不影响其原有的电压和时间依赖性。②当LVFX作用浓度分别为0.1,1,10,100,1000μM时,在+50 mV去极化电压下,测得IK的脉冲电流较对照组依次减少了(11.81±1.71)%,(14.51±2.12)%,(22.78±3.58)%,(29.59±2.89)%,(38.13±2.44)%;尾电流依次减少了(6.05±251)%,(12.19±1.49)%,(17.75±2.74)%,(30.05±1.49)%,(48.18±3.71)%。结论:LVFX在不同的浓度下对豚鼠心肌细胞的IK有不同程度的抑制。     

人心肌细胞的分离方法和充血性心力衰竭患者心房肌细胞钾电流的特征

目的：探索人类心房肌细胞的分离方法及充血性心力衰竭（CHF）患者心房肌细胞延迟整流钾电流（Ik）和内向整流钾电流（Ik1）的特征。方法：酶法分离心肌细胞；全细胞膜征钳法记录电流。结果：两种酶学分离方法均能成功地分离出合格的心肌细胞。其中，用I型胶原酶和蛋白酶分离出的活细胞的比例约为40%-50%，而且理想的细胞较多；而用V型胶原酶则仅能分离出1%-3%的活细胞。细胞分离过程受消化酶的类型、季节、病种、心功能等多种因素的影响。以上任一因素发生变化，分离细胞的质和量均会发生改变。利用掌握的全细胞膜片钳技术，我们对人心肌细胞上的钾电流进行了探索。结果显示，在充血性心衰患者心房肌细胞上，存在着Ik和Ik1。其中，Ik的激活较慢，其电流轨迹在刺激开始后缓慢上升，至刺激中止前达到顶点。复极至-30mV时，可引导出Ik的尾电流。与时间依赖性电流相比，此电流的幅值较小。与Ik相比，Ik1的激活较快，激活后迅即趋于稳态，不失活。当膜电位处于不同的电位水平时，Ik1分别表现为内向电流和外向电流，并且随着膜电位的增大，内向电流逐渐减小，外向电流则越来越大。结论：人心肌细胞的分离过程受多种因素的影响。对于CHF患者而言，其心房肌细胞上存在着Ik和Ik1，这两种电流具有不同的电生理特征。     

安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的：通过研究安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响，以探讨其抗心律失常的作用机制。方法：采用膜片钳全细胞记录技术记录了安律胶囊对单个豚鼠心室肌细胞钾电流的影响。结果：①安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使IK1幅值从给药前的（-2．06±0．29，nA）降低到（-1．95±0．34、-1．67±0．43和-1．62±0．25，nA），大剂量具有显著的统计学意义（P〈0．05）；在对IK1时效关系的实验中，在200斗g／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值钾电流为（-1．60±O．27,nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（-1．56±0．35，-1．34±0．26和-1．26±0．29，nA），无统计学意义（P〉0．05）。②安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使Ito1幅值从未给药时的（1．14±0．17，nA），降低到（1．13±0．17、1．10±0．16和1．06±0．13，nA），但无统计学意义（P〉0．05）。③安律胶囊清膏2、20、200μg／L可剂量依赖性的降低Ik，分别使Ik幅值从给药前的（1．45±0．15，nA），降低到（1．42±0．15、1．29±0．10和1．20±0．11，nA），中剂量组具有显著的统计学意义（P〈0．05），大剂量具有极为显著的统计学意义（P〈0．01）；在对Ik时效关系的实验中，在200μg／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值电流为（1．45±0．15，nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（1．21±0．10，1．20±0．12和1．11±0．13，nA），无统计学意义（P〉0．05）。结论：安律胶囊对IK1有-定的阻滞作用且可剂量依赖性的阻滞Ik，但不具有时间依赖性，对Ito1无阻滞作用，这是其抗心律失常作用的机理之一。     

参松养心胶囊对兔心肌梗死1周后瞬间外向钾电流跨壁异质性的影响

目的探讨参松养心胶囊对急性心肌梗死(AMI)1周后心外膜梗死边缘区心肌细胞瞬间外向钾电流(Ⅰ_(to))的影响。方法30只兔随机分为3组:对照组、AMI组和参松养心胶囊+AMI组各10只,后2组采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立兔心肌梗死模型。采用膜片钳技术观察参松养心胶囊对左心室梗死边缘区心外膜(Epi)、心内膜(Endo)和中层(M)心室肌细胞Ⅰ_(to)密度及Ⅰ_(to)失活曲线的改变。结果AMI组细胞的Ⅰ_(to)电流密度明显降低,Epi与M、Endo之间差异较明显(P<0.01);参松养心胶囊+AMI组Epi细胞Ⅰ_(to)电流密度进一步降低,与AMI组Epi细胞比较差异有统计学意义(P<0.01),而3层细胞间差异无统计学意义(P>0.05)。3组Ⅰ_(to)失活曲线形态无明显变化,参松养心+AMI组Endo细胞失活曲线右移,与AMI组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论心肌梗死对Ⅰ_(to)的跨壁异质性有明显影响,参松养心胶囊减弱心肌梗死后Ⅰ_(to)的跨壁异质性。     

Effects of Chinese herbs on multiple ion channels in isolated ventricular myocytes

Background Shensong Yangxin (SSYX) is one of the compound recipe of Chinese materia medica. This study was conducted to investigate the effects of SSYX on sodium current (I(Na)), L-type calcium current (I(Ca,L)), transient outward potassium current (I(to)), delayed rectifier current (I(K)), and inward rectifier potassium currents (I(K1)) in isolated ventricular myocytes. Methods Whole cell patch-clamp technique was used to study ion channel currents in enzymatically isolated guinea pig or rat ventricular myocytes. Results SSYX decreased peak I(Na) by (44.84±7.65)% from 27.21±5.35 to 14.88±2.75 pA/pF (n=5, P&lt;0.05). The medicine significantly inhibited the I(Ca,L). At concentrations of 0.25, 0.50, and 1.00 g/100 ml, the peak I(Ca,L) was reduced by (19.22±1.10)%, (44.82±6.50)% and (50.69±5.64)%, respectively (n=5, all P&lt;0.05). SSYX lifted the I-V curve of both I(Na) and I(Ca,L) without changing the threshold, peak and reversal potentials. At the concentration of 0.5%, the drug blocked the transient component of I(to) by 50.60% at membrane voltage of 60 mV and negatively shifted the inactive curve and delayed the recovery from channel inactivation. The tail current density of I(K) was decreased by (30.77±1.11)% (n=5, P&lt;0.05) at membrane voltage of 50 mV after exposure to the medicine and the time-dependent activity of I(K) was also inhibited. Similar to the effect on I(K), the SSYX inhibited I(K1) by 33.10% at the test potential of –100 mV with little effect on reversal potential and the rectification property. Conclusions The experiments revealed that SSYX could block multiple ion channels such as I(Na) I(Ca,L), I(k), I(to) and I(K1), which may change the action potential duration and contribute to some of its antiarrhythmic effects.     

CPUHY002对大鼠心肌细胞瞬时外向钾电流的影响

目的观察一种新合成的磷酸二酯酶Ⅲ(PDEⅢ)抑制剂CPUHY002对大鼠心肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)的影响。方法采用全细胞膜片钳技术考察CPUHY002对急性分离大鼠心肌细胞和H9c2细胞系Ito的作用。结果在+50 mV下,CPUHY002对急性分离细胞和H9c2细胞系的Ito呈浓度依赖性抑制,其半数有效抑制浓度(IC50)分别为0.98μmol/L和0.91μmol/L;1μmol/L CPUHY002可使I-V曲线明显下移,Ito峰值分别下降(39.10±2.30)%和(47.32±2.06)%,激活曲线右移,失活曲线左移(未见于H9c2),恢复曲线无显著变化。结论 CPUHY002可浓度依赖性地抑制大鼠心肌细胞Ito。     

多非力特对豚鼠心室肌细胞的电生理作用

目的探讨多非力特对心肌细胞电生理作用的特点。方法（1）应用膜片钳全细胞技术记录单个豚鼠心室肌细胞膜延迟整流性钾流（IK）,观察不同浓度多非力特对IK的影响,并探讨IK的快速激活成分（IKr）的电生理特性。（2）标准微电极技术记录豚鼠右室乳头肌细胞动作电位,观察不同浓度多非力特灌流前后动作电位各参数的变化。结果（1）多非力特0.01～0.5μmol/L呈浓度依赖性抑制IK的时间依赖性外向钾流（IK.time）和尾电流（IK.tail）,但浓度再增大至1μmol/L后,此抑制作用趋于最大。对-20mV钳制电压下IK.time、IK.tail的抑制程度比＋50mV时更明显（P〈0.05或0.01）。（2）通道动力学分析发现,多非力特1μmol/L使IK.tail快失活过程消失,慢失活时间常数无明显变化（P〉0.05）。（3）多非力特敏感的电流成分在-40mV开始呈电压依赖性快速激活,峰值电压为0,开始出现内向整流,其IK.tail也呈电压依赖,无内向整流,但膜电位达＋20mV后达饱和,以上均符合IKr的特点。（4）多非力特对动作电位的影响：0.5和1.0μmol/L浓度下可使动作电位时程（APD30、APD90）均明显延长（P〈0.05或〈0.01）,且呈反转频率依赖性。结论多非力特对IK的作用符合特异性IKr阻滞剂的特点,并呈反转频率依赖性延长APD,是其抗心律失常作用的电生理基础。     

Delayed rectifier potassium current in dissociated bullfrog primary afferent neurons

Cultured bullfrog dorsal root ganglion cells were voltage-clamped in the whole-cell configuration. The classical delayed rectifier potassium current (IK) was separated from other ionic currents. Tetraethylammonium (1-50 mM) depressed the amplitude of IK in a concentration-dependent manner, a complete block occurring with 30 mM. With the concentration of potassium ions in the superfusate at 20 mM, the reversal potential of IK amounted to about -30mV. IK was activated between -30 and +70 mV. The half activation of IK occurred at +15 mV. The amplitude of IK was increased e-fold with 13.6 mV depolarization. The time constant of IK de-activation was shortened with membrane hyperpolarization (tau congruent to 4 ms at -100 mV). Finally, reciprocal time constant (tau -1) of the de-activating IK was increased e-fold with congruent to 13 mV hyperpolarization. It appears that the properties of IK in amphibian afferent neurons are comparable to those which have been observed with respect to the IK of the squid giant axons (Hodgkin and Huxley, 1952).     

法乐四联症儿童肥厚右心室细胞瞬间外向钾电流的研究

目的观察压力增高导致的人肥厚心室组织离子通道的特性.方法应用酶解分离技术从法乐四联症(F4)患儿的心脏右室得到单个细胞,应用膜片钳全细胞记录技术观察了细胞Ito1的特征.结果将钙电流阻断后,去极化至-20mV～+60mV时均可记录到Itn1,激活后电流衰减速度不随去极化程度的增强而改变,在0、20、40、60mV时分别为123ms±6ms、131ms±10ms、122ms±6ms、122ms±6ms,去极化至60mV时的电流密度为4.7pA/pF±0.8pA/pF,半数最大激活电位为4.1mV±2.8mV,半数最大失活电位出现在-41mV±4mV,失活后再激活的恢复时间常数为83ms±4ms.这种电流可被10mM4-AP基本抑制.结论肥厚的人右室细胞存在Itn1,通道动力学特征与成人心房肌细胞类似.