玻璃体内注射辅酶Q10对NaIO3诱导的AMD模型小鼠的保护作用

目的　探讨玻璃体内注射水溶性CoQ10对NaIO₃诱导的年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）的保护作用。方法　66只昆明小鼠分为3组:对照组、NaIO₃诱导组（小鼠尾静脉注射NaIO₃）和CoQ10修复组，小鼠尾静脉注射NaIO₃后玻璃体内分别注射高浓度（2.0 g·L^-1）和低浓度（0.1 g·L^-1）的CoQ10，注射平衡液做假处理组。在建模后第7天取材，行常规组织切片、HE染色、GFAP染色、Iba1染色，检测NaIO₃诱导的视网膜病变和CoQ10对该种病变的修复效果。结果　注射NaIO₃ 7 d后，HE染色结果显示，NaIO₃诱导组小鼠视网膜外核层每10 μm 长度的细胞数由正常水平（29.13±3.97）个减少至（17.50±4.03）个，差异有统计学意义（P<0.01）；GFAP染色结果显示，Müller细胞发生反应性胶质化，与对照组相比每250 μm×250 μm面积的细胞数由（21.17±4.26）个增加至（28.67±2.80）个，差异有统计学意义（P<0.01）；Iba1染色结果显示，小胶质细胞呈现出“阿米巴状”的激活形态，每250 μm×250 μm面积的细胞数由（6.71±2.29）个增加至（22.14±3.76）个，差异有统计学意义（P<0.01）。分别对NaIO₃诱导组小鼠玻璃体内注射高、低浓度的CoQ10（2.0 g·L^-1和0.1 g·L^-1）后，与假处理组相比，其中注射高浓度CoQ10（2.0 g·L^-1）组外核层细胞数目显著增加（P<0.05），而低浓度CoQ10（0.1 g·L^-1）组没有显著差异（P>0.05）。并且，Müller细胞反应性胶质化程度减弱，GFAP阳性细胞数恢复至（23.83±3.87）个；小胶质细胞分枝增多，Iba1阳性细胞数恢复至（16.86±3.29）个，与NaIO₃诱导组相比，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　玻璃体内注射CoQ10可通过减轻Müller细胞的反应性胶质化和抑制小胶质细胞的激活而减缓视网膜感光细胞退化，对AMD起到保护作用。     

氢离子对碘酸钠诱导的小鼠年龄相关性黄斑变性视网膜的保护作用及机制

目的　探讨氢离子（H⁺）对碘酸钠（NaIO₃）诱导的小鼠年龄相关性黄斑变性视网膜的保护作用及机制。方法　选取60只8~10周龄SPF级健康C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组、NaIO₃组、H⁺组,每组20只。H⁺组小鼠灌胃富含H⁺水（每只每天6 mL）预治疗7 d,对照组及NaIO₃组小鼠灌胃相同剂量的自来水;NaIO₃组、H⁺组小鼠按20 mg·kg^-1剂量鼠尾静脉注射NaIO₃溶液,对照组小鼠鼠尾静脉注射相同剂量的生理盐水;H⁺组小鼠继续灌胃富含H⁺水（每只每天6 mL）治疗5 d,对照组及NaIO₃组小鼠给予相同剂量的自来水。然后对小鼠行眼底照相、OCT、视网膜电图、FFA检查,取小鼠眼球行HE染色,Western blot检测Caspase8表达情况。结果　NaIO₃组小鼠视网膜厚度［（232.370±17.060）μm］与对照组［（316.265±5.314）μm］、H⁺组［（296.406±27.411）μm］间差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,对照组与H⁺组之间差异无统计学意义（P=0.122）。NaIO₃组a波振幅低于对照组和H⁺组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,对照组a波振幅与H⁺组间差异亦有统计学意义（P=0.036）。对照组和H⁺组b波振幅均高于NaIO₃组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,对照组b波振幅与H⁺组间差异无统计学意义（P=0.121）。FFA显示,对照组小鼠无血管渗漏,NaIO₃组小鼠的视网膜血管有大面积渗漏区,H⁺组小鼠视网膜渗漏面积较NaIO₃组明显减少。HE染色结果表明,NaIO₃组小鼠视网膜色素上皮层变薄甚至消失,并且出现大量的黑色沉积物,H⁺组小鼠视网膜黑色沉积物较NaIO₃组减少。对照组（0.406±0.161）和H⁺组（0.543±0.302）视网膜中Caspase8相对表达量均明显低于NaIO₃组（1.498±0.219）,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。对照组与H⁺组间差异无统计学意义（P=0.501）。结论　H⁺通过抑制Caspase8凋亡途径抑制NaIO₃诱导的视网膜黄斑变性。     

枸杞子提取物对光诱导视网膜损伤的保护作用

目的　探索枸杞子提取物对人视网膜色素上皮（ARPE-19）细胞及C57BL/6J小鼠视网膜光诱导损伤的保护作用。方法　ARPE-19细胞分为正常细胞对照组,光诱导细胞损伤组,细胞低、中、高剂量组（0.1 g·L^-1、0.5 g·L^-1、1.0 g·L^-1枸杞子提取物+光诱导细胞损伤）,测定各组细胞活力以及细胞内活性氧（ROS）含量的变化。40只C57BL/6J小鼠随机分为正常动物对照组,光诱导动物损伤组,动物低、中、高剂量组（280 mg·kg^-1、370 mg·kg^-1、460 mg·kg^-1枸杞子提取物+光诱导动物损伤组）,每组8只。各剂量枸杞子提取物干预组小鼠在6周龄开始给予枸杞子提取物灌胃,8周后再给予10 000 lux光照射24 h;光照结束后ERG评估各组小鼠视网膜功能,OCT检测视网膜外核层（ONL）厚度,FFA检测视网膜血管渗漏情况,HE染色后对视网膜ONL细胞进行计数,同时检测血清中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果　光诱导细胞损伤组ARPE-19细胞活力下降为正常细胞对照组的61.88%,细胞内ROS含量为正常细胞对照组的1.52倍;细胞低、中、高剂量组ARPE-19细胞活力较光诱导细胞损伤组均明显上升,细胞内ROS含量均明显下降,并均呈剂量依赖性（均为P＜0.05）。与动物对照组相比,光诱导动物损伤组小鼠ERG暗适应a波、b波振幅和明适应b波振幅均明显下降,动物低、中、高剂量组各波的振幅均得到不同程度改善。光诱导动物损伤组小鼠视网膜出现萎缩灶、血管渗漏和血管末端成珠样结构,视网膜ONL厚度变薄,为（52.18±4.23) μm,ONL每列细胞数明显减少,为（17.63±1.30）个;动物低、中、高剂量组小鼠视网膜病理改变及视网膜ONL厚度与ONL每列细胞数均得到不同程度改善,尤其动物高剂量组改善最为明显,ONL厚度为（59.72±2.76）μm, ONL每列细胞数为（20.00±1.51）个,与光诱导动物损伤组相比差异均有统计学意义（P=0.007、0.004）。相对于光诱导动物损伤组,动物低、中、高剂量组小鼠血清SOD、GSH-Px活性均明显提高,MDA含量均明显下降,且均呈剂量依赖性（均为P＜0.05）。结论　枸杞子提取物可以一定程度上保护视网膜免受光损伤。     

小胶质细胞介导的炎症反应在衣霉素所致的小鼠视网膜损伤中的作用

目的　探讨小胶质细胞介导的炎症反应在衣霉素所致的小鼠视网膜损伤中的作用。方法　取50只C57/BL6J小鼠,随机分为5组,每组10只;DMSO组给予小鼠玻璃体内注射DMSO溶液1 μL;衣霉素低剂量组给予小鼠玻璃体内注射50 mg?L^-1衣霉素1 μL,衣霉素中剂量组注射100 mg?L^-1衣霉素1 μL,衣霉素高剂量组注射150 mg?L^-1衣霉素1 μL;对照组给予相同条件下喂养。采取小鼠玻璃体内注药建模后,分别进行OCT检查及HE染色观察小鼠视网膜组织形态改变;进行闪光视网膜电图检测评估视网膜视功能;免疫荧光染色及Western blot检测视网膜中Iba1及IL-6的表达情况。结果　与对照组相比,衣霉素低剂量组视网膜各层结构紊乱,视网膜外层呈波浪状改变,并出现细胞核排列紊乱;衣霉素中剂量组及高剂量组视网膜各层结构紊乱更加明显,并出现神经上皮与色素上皮的浅层脱离,IS/OS层及外丛状层消失。造模后第7天,闪光视网膜电图结果显示:对照组与DMSO组a波及b波振幅无差异;与对照组相比,衣霉素低剂量组、中剂量组及高剂量组a波、b波振幅下降,且呈剂量依赖性,其中a波振幅下降更为明显,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与对照组相比,衣霉素低剂量组、中剂量组及高剂量组视网膜内核层及外核层中Iba1表达量明显增多,且呈剂量依赖性（均为P<0.05）;IL-6视网膜中呈现与Iba1相似的表达。结论　小胶质细胞参与衣霉素所致的小鼠视网膜损伤过程,并产生相关炎症因子引起视网膜功能及结构改变。     

甘草查尔酮A对过氧化氢致视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的　研究甘草查尔酮A（licochalcone A,LCA）对过氧化氢（H₂O₂）致视网膜神经节细胞（retinal ganglion cells,RGC）损伤的保护作用,为LCA在青光眼治疗方面的应用提供初步的实验依据。方法　体外培养RGC-5细胞,随机分为对照组（正常培养基培养）、H₂O₂组（培养基中加入200 μmol·L^-1 H₂O₂）、LCA组（培养基中除加入200 μmol·L^-1 H₂O₂外,还分别加入10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1、40 μmol·L^-1的LCA溶液）,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blotting检测各组细胞中Bax、Bcl-2和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平,ELISA法检测各组细胞中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性。结果　CCK-8法检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组的细胞存活率分别为（63.7±5.4）%、（78.8±6.3）%和（72.3±6.9）%,与H₂O₂组的（54.3±3.9）%相比,20 μmol·L^-1 LCA组增殖最显著（P＜0.05）。流式细胞术检测结果显示,10 μmol·L^-1、20 μmol·L^-1和40 μmol·L^-1LCA组细胞凋亡率分别为（21.1±1.9）%、（12.3±1.3）%和（14.8±2.0）%,与H₂O₂组的（29.3±2.0）%比较,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。Western blotting检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组Bcl-2蛋白的表达均增加,Bax和Cleaved Caspase-3蛋白的表达均降低,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。ELISA法检测结果显示,与H₂O₂组比较,不同浓度LCA组RGC-5的丙二醛含量均降低,但超氧化物歧化酶活性均显著增加（均为P＜0.05）。结论　LCA能缓解H₂O₂诱导的RGC损伤,其作用机制可能与抑制细胞凋亡和氧化应激有关。     

NMNAT1缺失对小鼠视网膜双极细胞和无长突细胞的影响

目的　探索烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶1（NMNAT1）缺失对视网膜神经元细胞结构及功能的损伤作用。方法　利用NMNAT1^fl/fl小鼠与Six3启动子下表达Cre重组酶的转基因（Six3-Cre）小鼠杂交,获得NMNAT1条件基因敲除小鼠及其同窝对照小鼠,实时荧光定量PCR和Western blot进行检测。在基因敲除小鼠出生后第0、4、10、30天（P0、P4、P10、P30）取材,制作冰冻切片,分别进行HE染色测量视网膜厚度,免疫荧光染色鉴定受损细胞类型以及检测恢复蛋白和视紫质表达水平。结果　与同窝对照小鼠相比,基因敲除小鼠在P0时视网膜并没有明显的形态差异,视网膜厚度比较差异无统计学意义（P>0.05）;到P4时基因敲除小鼠表现出视网膜内层和外层中的分层破坏和大规模细胞死亡,基因敲除小鼠P4时距视神经500 μm、1000 μm、1250 μm的视网膜厚度均明显低于同窝对照小鼠（均为P<0.05）,而距视神经1750 μm的视网膜厚度尚未受影响（P>0.05）;基因敲除小鼠P10时距视神经500 μm、1000 μm、1250 μm、1750 μm的视网膜厚度均低于同窝对照小鼠（均为P<0.05）。基因敲除小鼠全部视网膜内外层的退化在 P30 时几乎完成。此外,与同窝对照小鼠相比,P4时基因敲除小鼠视网膜神经节细胞、双极细胞和无长突细胞的数量差异均没有统计学意义（均为P>0.05）,P10时视网膜神经节细胞没有显著差异（P>0.05）,基因敲除小鼠双极细胞、无长突细胞分别减少了约75%、51%（均为P<0.05）。与同窝对照小鼠相比,基因敲除小鼠在P4时视网膜几乎不表达恢复蛋白和视紫质（均为P<0.05）。结论　NMNAT1缺失主要导致视网膜双极细胞和无长突细胞损害以及恢复蛋白和视紫质缺失。     

不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤大鼠视网膜细胞凋亡的影响

目的　探讨不同剂量N-乙酰-5-羟色胺（N-acetylserotonin,NAS）对视网膜缺血-再灌注损伤（retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI）大鼠视网膜细胞凋亡的影响。方法　成年SD大鼠随机分为正常对照组、RIRI 组和 NAS 组。采用高眼压法建立RIRI大鼠模型。NAS组按照给药剂量的不同分为NAS低剂量组（5 mg·kg^-1）、NAS中剂量组（10 mg·kg^-1）和NAS高剂量组（20 mg·kg^-1）,造模前后30 min腹腔注射NAS。HE染色法观察各组大鼠视网膜形态学的改变,免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中活性Caspase-3的表达,TUNEL法检测各组视网膜细胞凋亡的变化。结果　HE染色结果显示,NAS中剂量组大鼠视网膜各层细胞排列最整齐,视网膜内层厚度［（53.24±1.68）μm］显著薄于RIRI组［（60.54±2.52）μm］及NAS低剂量组［（56.78±1.78）μm］（均为P<0.01）,NAS中剂量组视网膜神经节细胞数［（1113.65±74.40）个·mm^-2］显著多于RIRI组［（719.89±83.67）个·mm^-2］及NAS低剂量组［（882.09±55.62）个·mm^-2］（均为P<0.01）。免疫组织化学结果示,视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数RIRI组［（246.08±19.23） 个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（196.95±19.83）个·mm^-2、（142.77±18.25）个·mm^-2、（133.10±15.19）个·mm^-2］均显著多于正常对照组［（95.37±10.93）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜中活性Caspase-3阳性细胞数量显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。TUNEL检测结果显示,TUNEL阳性细胞数RIRI组［（225.45±18.93）个·mm^-2］及NAS低、中、高剂量组［（175.06±17.69）个·mm^-2、（108.85±13.41）个·mm^-2、（100.37±13.53）个·mm^-2］均多于正常对照组［（81.98±11.29）个·mm^-2］（均为P<0.01）;NAS中剂量组视网膜TUNEL阳性细胞数显著少于RIRI组及NAS低剂量组（均为P<0.01）。结论　腹腔注射NAS治疗可减轻RIRI大鼠视网膜细胞凋亡,具有神经保护作用,中剂量NAS治疗方案最佳。     

miR-22-3p对蓝光暴露下大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及其机制

目的　探讨miR-22-3p对蓝光暴露下的大鼠视网膜神经节细胞（RGC）的保护作用及机制。方法　取36只清洁级SD大鼠, 将12只SD大鼠随机分为2组:对照组与蓝光暴露组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养;蓝光暴露组大鼠先进行暗适应24 h,随后采用复方托吡卡胺散瞳,将大鼠暴露在蓝光（光照强度1500 lux）下2 h;另取24只大鼠随机分为4组:对照组、蓝光暴露组、AAV-miR22组、AAV-miR22&PTEN组,每组6只。对照组采用正常的12 h明暗循环饲养,其余3组均接受蓝光暴露处理,AAV-miR22组注射1 μL含 2.5×10⁹ vg(基因组拷贝数)的AAV-7m8-miR-22-3p,AAV-miR22&PTEN组注射1 μL含2.5×10⁹ vg的AAV-7m8-miR-22-3p&PTEN,对照组与蓝光暴露组向大鼠玻璃体内注射1 μL生理盐水,注射结束使用氧氟沙星眼膏预防感染。取大鼠眼球组织行HE染色,在光学显微镜下观察检测神经节细胞层（GCL）、GCL至外核层 (ONL)的厚度,其中包含有内丛状层（IPL）、内核层(INL)、外丛状层（OPL）;采用NeuN免疫荧光组织化学染色标记RGC,计数视网膜上NeuN标记的阳性细胞数;TUNEL染色检测细胞凋亡;采用Lipofectamine 2000转染试剂盒转染阴性对照、miR-22-3p mimic、miR-22-3p inhibitor至RGC-5细胞,转染48 h后测定miR-22-3p表达量,转染成功即可采用Western blot检测PTEN蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR检测miR-22-3p表达,Western blot检测PTEN、p-Akt、Akt与Nrf2蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验在酶标仪上测定荧光素酶活性。结果　HE染色结果证实:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织萎缩,视网膜GCL、GCL至ONL厚度变薄（P<0.05）。另外,NeuN免疫荧光组织化学染色发现:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织RGC数减少（P<0.05）。实时荧光定量PCR实验结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内miR-22-3p相对表达量降低（P<0.05）。Western blot检测结果显示:与对照组相比,蓝光暴露组大鼠视网膜组织内PTEN蛋白的表达水平升高,Nrf2蛋白的表达水平和p-Akt/Akt蛋白表达比值均降低（均为P<0.05）;miR-22-3p能够负向调控PTEN蛋白在RGC内的表达水平（P<0.05）。HE染色结果显示:过表达miR-22-3p能够缓解蓝光诱导的大鼠视网膜萎缩,并且能够提高大鼠视网膜GCL、GCL至ONL厚度。NeuN免疫荧光组织化学染色结果证实:过表达miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN表达提高蓝光暴露大鼠视网膜上RGC数。TUNEL实验结果证实:miR-22-3p能够通过抑制PTEN表达缓解蓝光诱导的大鼠视网膜RGC凋亡。结论　miR-22-3p能够通过靶向抑制PTEN的表达,激活PI3K/Akt/Nrf2通路,缓解蓝光诱导的大鼠RGC凋亡。     

c-Myc抑制剂10058-F4对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠模型Th17细胞比例及细胞因子表达的影响

目的　探讨c-Myc抑制剂10058-F4对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）小鼠模型光感受器间维生素A类结合蛋白1-20（IRBP_1-20）特异性辅助性T细胞17（Th17）细胞比例及细胞因子表达的影响。方法　取健康C57BL/6J小鼠（8~10周龄）6只,采用随机数字表法将小鼠分为正常对照组、EAU组,每组3只。EAU组小鼠腹腔内注射350 ng百日咳毒素,单后足和脊柱两侧皮下注射含150 μg IRBP_1-20、0.8 mg结核分枝杆菌H37RA和弗氏不完全佐剂的乳化剂以诱导EAU模型;正常对照组小鼠不给予特殊干预。免疫后13 d,行间接检眼镜检查并通过小动物视网膜成像系统可视化检测小鼠眼底炎性病灶,HE染色观察视网膜组织病理学改变,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测T细胞和眼球组织中c-Myc mRNA的表达。将EAU模型小鼠T细胞分为对照组和10058-F4组,10058-F4组T细胞加入50 μmol·L^-1 10058-F4,对照组T细胞不给予药物干预。培养6 h后,洗去药物,将两组T细胞与IRBP_1-20（10 mg·L^-1）及骨髓来源树突细胞共培养,同时加入20 μg·L^-1 白细胞介素（IL）-23（Th17细胞诱导条件）。采用qRT-PCR检测c-Myc、维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）、IL-17A、IL-17F和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF） mRNA相对表达量,ELISA检测共培养细胞上清液中IL-17含量,流式细胞仪检测共培养细胞中Th17细胞比例。结果　本研究EAU组小鼠模型建立成功。qRT-PCR检测结果显示,EAU组小鼠T细胞、眼球组织中c-Myc mRNA相对表达量分别为1.85±0.37、2.31±0.47,较正常对照组（1.01±0.02、0.99±0.05）均明显升高,差异均有统计学意义（P=0.017、0.008）;10058-F4组T细胞c-Myc mRNA相对表达量为0.57±0.03,明显低于对照组（1.04±0.02）,差异有统计学意义（P<0.001）。ELISA检测结果显示,10058-F4组共培养细胞上清液中IL-17含量明显低于对照组,差异有统计学意义（P=0.025）。流式细胞仪检测结果显示,10058-F4组共培养细胞中Th17细胞比例为（17.97±0.91）%,明显低于对照组［（22.50±0.90）%］,差异有统计学意义（P=0.004）。qRT-PCR检测结果显示,10058-F4组T细胞RORγt、IL-17A、IL-17F、GM-CSF mRNA相对表达量分别为0.52±0.11、0.51±0.06、0.58±0.15、0.75±0.03,明显低于对照组（1.01±0.01、1.00±0.01、1.02±0.02、1.01±0.02）,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　c-Myc抑制剂10058-F4可显著降低T细胞中c-Myc表达水平,抑制Th17细胞特异性转录因子RORγt表达及效应细胞因子IL-17A、IL-17F、GM-CSF的产生,负向调控IRBP_1-20特异性Th17细胞免疫反应。     

川芎嗪对过氧化氢致大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的抑制作用及机制

目的　探讨川芎嗪对H₂O₂诱导的大鼠视网膜神经节细胞（retinal ganglion cell,RGC）氧化损伤的抑制作用及其机制。方法　在DMEM培养基中培养RGC-5细胞。将细胞分成5组:正常对照组:不做任何处理；阴性对照组:用20 g·L^-1川芎嗪孵育24 h；氧化损伤组:用100 μmol·L^-1的H₂O₂孵育24 h；川芎嗪低浓度组:用20 g·L^-1川芎嗪孵育24 h后加入100 μmol·L^-1的H₂O₂孵育12 h；川芎嗪高浓度组:用40 g·L^-1川芎嗪孵育24 h后加入100 μmol·L^-1 的H₂O₂孵育12 h。通过MTT法测定细胞增殖情况，荧光标记法检测RGC-5细胞内活性氧含量，Hoechst-PI染色观察细胞凋亡情况，使用721D分光光度计测定细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果　MTT法测定结果显示，氧化损伤组RGC-5细胞活性明显下降(24.67%±2.90%)，与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。与氧化损伤组比较，川芎嗪低、高浓度组RGC-5细胞活性分别提高到51.33%±4.35%和60.00%±3.65%，差异均有统计学意义(均为P<0.05)。荧光标记法显示，氧化损伤组DCF荧光信号明显增强，不同浓度川芎嗪干预后，荧光信号强度逐渐减弱。Hoechst-PI染色显示，氧化损伤组凋亡细胞数增多，甚至出现红染的坏死细胞，细胞凋亡率为66.00%±2.98%；川芎嗪干预后，凋亡及坏死细胞逐渐减少，川芎嗪低、高浓度组细胞凋亡率分别为52.33%±4.11%和46.04%±3.52%，两组细胞凋亡率与氧化损伤组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与阴性对照组比较，氧化损伤组RGC-5细胞内SOD、GSH-PX含量明显下降，MDA含量升高，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与氧化损伤组比较，川芎嗪高浓度组SOD、GSH-PX含量升高，MDA含量下降，差异均有统计学意义（均为P<0.05）。与氧化损伤组比较，川芎嗪低浓度组 SOD 与MDA含量变化不大（均为P>0.05），GSH-PX含量升高（P<0.05）。结论　川芎嗪通过改变RGC-5细胞内抗氧化酶表达发挥对氧化损伤的RGC的保护作用。     

香烟烟雾对小鼠视网膜组织病理学结构的影响

目的　探讨香烟烟雾对小鼠视网膜组织病理学结构的影响。方法　选取12只C57BL雄性小鼠,随机分为对照组（6只）及实验组（6只）。对照组不做特殊处理,实验组小鼠暴露于香烟烟雾中,每天2次,每次30 min,持续暴露12周后处死。取两组小鼠左眼分别行HE染色、免疫荧光染色及TUNEL染色观察视网膜各层结构的变化、三级β-微管蛋白（class III β-tubulin,Tuj1）的表达及视网膜内细胞凋亡情况;两组小鼠右眼在透射电子显微镜下观察视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞超微结构的改变。结果　对照组及实验组小鼠视网膜全层厚度分别为（216.53±7.43）μm和（182.27±4.98）μm,视网膜神经纤维层厚度分别为（11.49±0.56）μm和（4.62±1.07）μm,内网状层厚度分别为（52.08±3.17）μm和（37.28±2.86）μm,两组相比差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。对照组和实验组视网膜神经节细胞层内细胞数分别为（389.72±4.56）个和（378.71±2.16）个,差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较,实验组神经节细胞的细胞核部分形状不规则,排列疏密不均,局部可见细胞核缺失,Tuj1免疫荧光染色的荧光强度实验组较对照组减弱。TUNEL染色结果显示,两组视网膜各层均未见明确阳性染色。透射电子显微镜下观察,实验组RPE细胞内细胞基底部褶皱数量明显减少、局部有缺失。结论　香烟烟雾对小鼠视网膜神经层的组织病理学结构及RPE细胞的超微结构均有一定影响。     

原纤维蛋白-2(FBN2)抗体玻璃体内注射对小鼠视网膜变性的影响

目的　探讨原纤维蛋白-2（fibrillin-2,FBN2）抗体玻璃体内注射对小鼠视网膜变性的影响。方法　选取18只8周龄C57BL/6J小鼠,随机分为3组:正常对照组、PBS组、FBN2抗体组,每组6只。正常组小鼠不做任何处理,PBS组小鼠双眼玻璃体内注射4 μL PBS溶液,FBN2抗体组小鼠双眼玻璃体内注射4 μL FBN2抗体（0.2 g·L^-1）,每周注射1次,连续3周。利用眼底照相和视网膜电流图（ERG）分别检测3组小鼠眼底改变和视网膜功能。PAS染色法观察小鼠视网膜形态并测量眼球后极部视网膜、外核层以及内核层厚度,采用实时定量PCR和ELISA检测小鼠视网膜中FBN2 mRNA和蛋白的表达。结果　眼底照相显示:FBN2抗体组小鼠眼底出现明显渗出,黄白色似玻璃膜疣样沉积物以及色素沉着的病理改变,且随时间延长病理改变加重。ERG结果显示:每次注射后FBN2抗体组暗适应视杆细胞反应b波和暗适应混合细胞反应a波振幅均低于正常对照组和PBS组,差异均有统计学意义(均为P＜0.05),且两者振幅在抗体注射3次后均最低,分别为(13.28±3.41)μV和(21.67±8.81)μV;在注射2次和3次后,FBN2抗体组暗适应混合细胞反应b波振幅均低于正常对照组和PBS组,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）,且该波振幅在抗体注射2次时最低为(59.12±18.00)μV;正常对照组和PBS组之间,各振幅差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。PAS染色结果表明:FBN2抗体组视网膜厚度和外核层厚度 ［（129.33±15.38）μm、（23.39±3.93）μm］均低于正常对照组［(197.68±13.50）μm、（46.54±7.44）μm］和PBS组［（198.27±8.28）μm、（38.92±2.39）μm］,差异均有统计学意义（均为P＜0.05）;正常对照组和PBS组之间比较,差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。ELISA检测显示:FBN2抗体组视网膜中FBN2蛋白的相对表达［(0.15±0.01）ng·mg^-1］低于正常组［(0.17±0.01）ng·mg^-1］和PBS组［(0.17±0.02）ng·mg^-1］ （均为P＜0.05）。PCR结果显示:FBN2抗体组视网膜中FBN2 mRNA的相对表达低于正对照组和PBS组。结论　玻璃体内注射FBN2抗体能够降低小鼠视网膜中FBN2蛋白的表达,引起小鼠发生视网膜变性 。     

不同N-乙酰-5-羟色胺(NAS)给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤的影响

目的探讨腹腔与尾静脉注射N-乙酰-5-羟色胺(N-acetylserotonin,NAS)两种给药途径对大鼠视网膜缺血-再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)组织病理学、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法健康无眼疾成年Sprague-Dawley雄性大鼠54只,采用随机数字表法分为正常对照组(n=6)、RIRI腹腔组(n=12)、RIRI静脉组(n=12)、NAS腹腔组(n=12)和NAS静脉组(n=12),后四组采用升高眼压法建立大鼠RIRI模型。NAS腹腔组、NAS静脉组于建模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射NAS(10 mg·kg^-1),RIRI腹腔组、RIRI静脉组于造模前30 min分别经腹腔、尾静脉注射同等剂量的生理盐水。RIRI后24 h,采用免疫组织化学染色检测各组大鼠视网膜中活性Caspase-3的表达,TUNEL染色检测各组视网膜细胞凋亡情况;RIRI后7 d,HE染色观察各组视网膜组织病理学变化。结果HE染色结果示,正常对照组大鼠视网膜各层细胞排列整齐、规则;RIRI后7 d,RIRI腹腔组与RIRI静脉组大鼠视网膜细胞排列稀疏、紊乱,形态不规则,视网膜内层厚度变薄;NAS腹腔组视网膜细胞形态较规则,排列较规整;NAS静脉组视网膜各层形态及细胞排列均趋于正常。NAS静脉组视网膜内层厚度(91.67±1.43)μm显著高于NAS腹腔组(87.80±1.33)μm、RIRI腹腔组(82.37±1.09)μm和RIRI静脉组(82.81±0.90)μm,差异均具有统计学意义(均为P<0.05);且NAS静脉组视网膜神经节细胞数(616.90±79.51)个·mm^-2显著高于NAS腹腔组(529.25±92.05)个·mm^-2、RIRI静脉组(434.42±87.17)个·mm^-2、RIRI腹腔组(390.72±72.12)个·mm^-2,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。免疫组织化学染色结果发现,RIRI后24 h,NAS静脉组活性Caspase-3阳性细胞数(145.01±22.54)个·mm^-2少于NAS腹腔组(221.34±30.84)个·mm^-2,差异具有统计学意义(P<0.05),二者活性Caspase-3阳性细胞数均显著少于RIRI静脉组(380.54±41.25)个·mm^-2和RIRI腹腔组(387.79±26.72)个·mm^-2,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。TUNEL染色结果示,RIRI后24 h,NAS静脉组TUNEL染色阳性细胞数(1468.03±128.40)个·mm^-2少于NAS腹腔组(1968.96±254.98)个·mm^-2,差异具有统计学意义(P<0.05),二者TUNEL染色阳性细胞数均显著少于RIRI静脉组(2122.77±165.76)个·mm^-2和RIRI腹腔组(2140.53±177.96)个·mm^-2,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。结论腹腔及静脉注射NAS治疗均可减少视网膜细胞凋亡,从而减轻RIRI大鼠视网膜损伤,且静脉注射给药的疗效优于腹腔给药。     

蓝光照射对小鼠视网膜形态和功能的损伤作用

目的通过观察蓝光照射对C57BL/6J小鼠视网膜形态和功能的影响,探讨非渗出性年龄相关性黄斑变性(AMD)的模型。方法采用投币法将20只8周龄清洁级C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组和蓝光照射组。蓝光照射组小鼠暗适应24 h后暴露于10000 lx蓝光下5 d,正常对照组小鼠按12 h/12 h正常光照/黑暗的周期饲养于正常光照环境5 d。采用光相干断层扫描成像(OCT)活体检查各组小鼠视网膜厚度变化,采用视网膜电图(ERG)检查各组小鼠视网膜功能变化。于光照结束后24 h采用颈椎脱臼法处死小鼠并制备眼球壁标本,采用免疫荧光染色法测定小鼠视网膜中视紫红质(Rho)、紧密连接蛋白(ZO-1)和β-catenin蛋白表达。结果蓝光照射组小鼠视网膜上部和下部距视盘200、400、600、800和1000μm处视网膜外核层厚度均较正常对照组变薄,差异均有统计学意义(均P<0.05)。蓝光照射组小鼠暗适应和明适应b波振幅分别为(305.50±41.52)μV和(119.50±6.67)μV,分别低于正常对照组的(415.50±28.77)μV和(139.75±8.26)μV,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常对照组小鼠RPE细胞呈正六边形,视网膜各层形态规则,Rho、ZO-1和β-catenin荧光较强;蓝光照射组小鼠RPE细胞形态不规则,ZO-1染色减弱或消失,β-catenin染色和Rho蛋白荧光强度减弱。结论蓝光照射小鼠视网膜变薄,视网膜功能减弱。     

视网膜光凝联合玻璃体内注射雷珠单抗治疗缺血型视网膜分支静脉阻塞（BRVO）致黄斑水肿的疗效

目的　观察视网膜光凝联合玻璃体内注射雷珠单抗治疗缺血型视网膜分支静脉阻塞（retinal branch vein occlusion,BRVO）致黄斑水肿的疗效。方法　选取在鞍山市中心医院眼科就诊的BRVO患者60例60眼,随机分为三组,20例行玻璃体内注射雷珠单抗治疗（A组）、20例行视网膜激光光凝治疗（B组）、20例行视网膜激光光凝联合玻璃体内注射雷珠单抗治疗（C组）。术前行最佳矫正视力（best corrected visual acuity,BCVA）、裂隙灯、眼底及眼压、眼底荧光血管造影（fundus fluorescein angiography,FFA）、光学相干断层扫描（optical coherence tomography,OCT）检查;术后第1天进行BCVA、裂隙灯及眼压检查;术后1个月、2个月、3个月分别行BCVA、裂隙灯、眼底及眼压检查,并利用OCT观察黄斑水肿。通过观察上述指标比较三组术后BCVA及黄斑中心凹厚度（central macular thickness,CMT）是否存在差异。结果　三组患者治疗后1个月、2个月、3个月BCVA较治疗前均有提高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。治疗后2个月、3个月,A组BCVA为0.26±0.14、0.26±0.14,优于B组的0.39±0.10、0.40±0.10,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。治疗后3个月,C组BCVA为0.14±0.11,优于A组0.26±0.14,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗后1个月、2个月、3个月,C组BCVA为0.30±0.13、0.20±0.12、0.14±0.11,优于B组0.43±0.10、0.39±0.10、0.40±0.10,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。三组患者治疗后1个月、2个月、3个月CMT较治疗前均有提高,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。治疗后1个月、2个月、3个月,C组CMT为（318.85±71.48）μm、（287.15±56.71）μm、（255.05±60.90）μm,优于A组（347.00±67.59）μm、（305.10±47.44）μm、（282.40±36.26）μm和B组（417.05±63.94）μm、（394.80±57.18）μm、（375.90±55.10）μm,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。治疗后2个月、3个月,A组CMT优于B组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。结论　视网膜激光光凝联合玻璃体内注射雷珠单抗治疗BRVO致黄斑水肿疗效较好,效果优于单纯视网膜激光光凝或单纯玻璃体内注射雷珠单抗。     

T、B淋巴细胞联合免疫缺陷对急性高眼压小鼠视网膜神经细胞的影响

目的研究T、B淋巴细胞联合缺陷对急性高眼压小鼠视网膜神经细胞的影响。方法选取重度联合免疫缺陷（SCID）小鼠和野生型C57BL／6小鼠各16只。2种小鼠分别随机取6只不做任何处理作为正常对照组,剩余10只作为模型组。采用前房穿刺的方法建立缺血一再灌注模型,每只小鼠取右眼为实验眼,左眼为模型对照眼。通过荧光金逆行标记技术,观察并计数再灌注后21d存活的视网膜神经节细胞（RGCs）;同时进行视网膜切片苏木精一伊红染色,观察再灌注后21d视网膜形态并测量内核层厚度。结果正常对照组SCID小鼠和C57BL／6小鼠的RGCs形态和数量、视网膜结构及厚度均无明显差异。视网膜缺血一再灌注损伤后21d,SCID小鼠RGCs的存活率为91％±5％,C57BL／6小鼠RGCs的存活率为78％±5％,二者比较差异有统计学意义（P=0．003）;SCID小鼠实验眼内核层厚度为（33．52±2．13）μm,模型对照眼为（34．06±3．00）μm,二者比较差异无统计学意义（P〉0．05）;C57BL／6小鼠实验眼内核层厚度为（22．44±1．70）μm,模型对照眼为（31．06±3．75）μm,二者比较差异有统计学意义（P=0．004）。结论急性高眼压模型中,T、B淋巴细胞联合免疫缺陷小鼠RGCs的存活率较高,视网膜损伤明显轻于野生型C57BL／6小鼠。     

木犀草素对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠TLR4/Syk/NF-κB信号通路及视网膜的影响

目的 探讨木犀草素对视网膜缺血-再灌注损伤(RIRI)大鼠Toll样受体4(TLR4)/脾脏酪氨酸激酶(Syk)/核因子-κB (NF-κB)信号通路及视网膜的影响.方法 40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、木犀草素低剂量组(5 mg·kg-1)、木犀草素高剂量组(10 mg·kg-1),每组10只,除对照组外,其余...     

雷珠单抗辅助玻璃体视网膜手术治疗增生型糖尿病视网膜病变

目的　观察雷珠单抗辅助玻璃体视网膜手术（vitreoretinal surgery,VRS）治疗Ⅴ期增生型糖尿病视网膜病变（proliferative diabetic retinopathy,PDR）的疗效。方法　将PDR（Ⅴ期）患者随机分为治疗组（42例42眼）和对照组（42例42眼）,治疗组患者行VRS手术前3~5 d辅助应用雷珠单抗,对照组患者仅行VRS。观察两组患者术中出血率、手术时间、医源性裂孔及眼内填充物等术中情况和术后1个月、3个月、6个月最佳矫正视力、黄斑中心凹视网膜厚度及并发症等情况。结果　治疗组和对照组患者手术时间分别为（78.07±8.58）min和（127.79±12.21）min,术中患者出血率、医源性裂孔发生率、硅油填充率治疗组分别为9.52%、2.38%、33.33%,对照组分别为40.48%、16.67%、69.05%,两组比较差异均有统计学意义（均为P<0.05）。术后1个月、3个月、6个月,治疗组的有效率分别为90.48%、76.19%、57.14%,对照组的有效率分别为61.90%、52.38%、47.62%;治疗组和对照组患者的黄斑中心凹视网膜厚度分别为（255.55±13.80） μm、（247.19±13.48） μm、（276.69±20.78）μm和（292.88±20.50） μm、（271.26±25.96） μm、（282.45±18.70）μm。术后1个月、3个月治疗组患者的有效率、黄斑中心凹视网膜厚度及并发症的发生均明显低于对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）。术后3个月治疗组患者的无菌性眼内炎症和视网膜再增殖发生率均低于对照组,差异均有统计学意义（均为P<0.05）;两组患者玻璃体再出血和新生血管再生长发生率差异均无统计学意义（均为P>0.05）。术后6个月治疗组患者的有效率、黄斑中心凹视网膜厚度及并发症发生率和对照组比较差异均无统计学意义（均为P> 0.05）。结论　雷珠单抗辅助VRS,能显著减少PDR患者术中的出血,缩短手术时间、降低医源性裂孔发生率和硅油填充率,有助于PDR患者术后近期视功能的恢复,提高了PDR患者的近期临床治疗效果。