中药"参阳"方冲剂对舌鳞癌SD大鼠外周血淋巴细胞亚群的调节作用

目的 在临床前瞻性研究已表明中药“参阳”方冲剂能够延长口腔鳞癌术后患者的生存期并提高生存率的基础上，观察“参阳”方冲剂对舌鳞癌SD大鼠外周血淋巴细胞亚群的影响并探讨其可能的免疫学机制。方法80只SD大鼠采用0．002％4-硝基喹啉-1-氧化物自然饮水喂养36周，诱发建立舌鳞癌动物模型共61只，随机分为4组：“参阳”方冲剂高剂量组16只，“参阳”方冲剂正常剂量组、阳性对照(刺五加)组和空白对照组各15只。药物干预15天，分别于给药前1天、给药结束后1天采集外周静脉血，双色荧光抗体标记流式细胞术分析淋巴细胞亚群的变化，自身前后对照配对t检验进行统计学分析。结果“参阳”方冲剂能增加外周血CD3 CD4 T淋巴细胞与CD3-CD161a NK细胞百分比，提高CD4 ／CD8 比值，降低CD3 CD8 T淋巴细胞百分比。对外周血CD3-CD161a NK细胞百分比提高方面，其效果优于刺五加。结论纠正机体T淋巴细胞亚群的紊乱并提高CD3-CD161a NK细胞比例，可能是“参阳”方冲剂发挥抗癌作用的主要效应机制之一。     

三氧化二砷对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨不同剂量三氧化二砷(As2O3)对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制。方法体外培养人口腔鳞癌细胞株SCC-4,将处于对数生长期的SCC-4细胞接种于24只裸鼠后腿皮下,建立裸鼠移植瘤模型。荷瘤裸鼠随机分为四组,每组6只,分别为对照组(A)、As2O3低剂量组(B组)、中剂量组(C组)和高剂量组(D组)。分别于肿瘤细胞接种第6、9、12、15、18、21天按上述剂量给予裸鼠腹腔注射As2O3,对照组注射生理盐水。停药1周后处死动物,完整取出瘤块,测量肿瘤重量和体积,计算肿瘤抑制率,免疫组织化学法检测各组标本中Ki67、cleaved caspase-3、CD31的表达情况,计数阳性细胞数及微血管密度(MVD)并进行统计学分析。结果As2O3低、中、高剂量组均能抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,中剂量组移植瘤体积抑制率最大为64.95%,低剂量组为32.99%,高剂量组为44.33%。免疫组化结果显示,用药后As2O3中剂量组Ki67的表达及MVD值明显低于对照组,凋亡蛋白cleaved capase-3的表达显著高于对照组(P<0.01),高剂量组凋亡蛋白cleaved capase-3的表达亦显著高于对照组(P<0.01),MVD值明显低于对照组(P<0.05),低剂量组Ki67、cleaved caspase-3、CD31的表达与对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。用药前各组裸鼠体重无差异(P>0.05),用药后高剂量组裸鼠体重显著低于对照组和中、低剂量组(P<0.05)。结论 As2O3对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤具有一定的抑制作用,其可能的机制为抑制肿瘤细胞增殖及血管生成,诱导肿瘤细胞凋亡。As2O3对口腔鳞癌细胞裸鼠移植瘤的抑制作用与剂量有关。     

沙培林对人舌鳞癌细胞株的抑制作用

沙培林(Sapylin)在临床上治疗口腔鳞癌具有一定效果。本文研究了 Sapylin 对舌鳞癌细胞株(Tca8113)细胞的抑制作用机理。实验证实:Sapylin 能抑制 Tca8113细胞的 DNA 合成;Sapylin 含量为0.015KE/ml～0.00375KE/ml,其抑制率为53.8%～61.3%。含量为1.0KE/ml时,培养8天后的Tca8113细胞集落形成率为0。提示 Sapylin 有抑制舌鳞癌细胞 Tca8113的作用。     

田基黄对舌癌细胞株TSCCa裸鼠移植瘤抑制作用的研究

本研究的目的是探讨田基黄在裸小鼠体内的抑瘤作用。将体外培养的人舌鳞癌细胞株TSCCa接种于12只裸鼠皮下,建立移植瘤模型,观察田基黄和平阳霉素对TSCCa细胞移植瘤的抑瘤效果。结果田基黄和平阳霉素对TSCCa细胞移植瘤的抑制率分别为78.3％和81.7％,两者无显著性差异,提示田基黄对口腔鳞癌有较好的治疗作用。     

三氧化二砷对舌癌细胞鼠移植瘤的抑瘤作用

目的 探讨三氧化二砷在Ｓｃｉｄ小鼠体内的移植瘤抑制作用及可能作用机理。方法 将体外培养的人舌鳞癌细胞系Ｔｃａ８１１３细胞接种于Ｓｃｉｄ小鼠皮下,建立移植瘤模型,观察Ａｓ２Ｏ３对Ｔｃａ８１１３细胞移植瘤的抑瘤效果。结果 Ａｓ２Ｏ３对Ｔｃａ８１１３细胞移植瘤的抑制率为４９．１６％,且存在较煌诱导细胞凋亡作用。     

田基黄对舌癌细胞株TSCCa裸鼠移植瘤抑制作用的研究

本研究的目的是探讨田基黄在裸小鼠体内的抑瘤作用。半本外培养的人舌鳞癌细胞株ＴＳＣＣａ接种于１２呆裸鼠皮下，建立移植瘤模型，观察田基黄和平阳霉素对ＴＳＣＣａ细胞移植瘤的抑瘤效果。结果田基黄和平阳霉素对ＴＳＣＣａ细胞移植瘤的抑制率分别淡７８．３％和８１．７％，两者无显著性差异，提示田基黄对口腔鳞癌有较好的治疗作用。     

外周血DC-CIK对人舌鳞癌细胞系Tca8113的抑瘤作用

目的:探讨体外致敏成熟树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)共培养细胞群对人舌鳞癌细胞系Tca8113移植瘤裸鼠的体内抑瘤效果.方法:人舌鳞癌外周血分离培养DC,体外诱导培养CIK细胞,将致敏成熟的DC与CIK体外扩增获得共培养细胞群DC-CIK细胞;于裸鼠单侧腋下接种Tca8113,将实验动物分为对照组A、实验组B和实验组C;接种后24h,A组移植瘤区注射生理盐水,B组于对侧腋下注射DC-CIK,C组同侧腋下注射DC-CIK,饲养4周;观察移植瘤的成瘤时间、成瘤率、生长曲线及组织学观察,采用SAS 6.12软件包对数据进行t检验、方差分析和x2检验.结果:A组平均成瘤时间为7.63d,B组为9.5d,C组为12d,A、C组有显著差异(P=-0.0132);注射后2周,A组成瘤率为100％,B组为87.5％,C组为62.5％,P＞O.05;观察期内,从移植瘤生长曲线观察,A组瘤体增长最快,B组其次,C组最慢,A、B组无显著差异(P＞0.05),A、C组差异显著(P=0.036).结论:致敏DC-CIK共培养细胞对Tca8113移植瘤裸鼠有一定的体内抑瘤效应.     

人内皮抑素基因导入对裸鼠舌鳞癌移植瘤的抑制影响

目的:探讨经体内注入人内皮抑素(humanendostatin,hES)基因治疗口腔鳞癌的可行性。方法:荷瘤人舌鳞癌Tca8113细胞裸鼠瘤体内和肌内分别注射含hES的基因质粒,观察转入hES基因对舌鳞癌移植瘤生长的影响,免疫组织化学检测肿瘤组织中hES及血管内皮细胞生长因子(vascularvesselendotheliacellgrowthfactor,VEGF)的表达,Weidern法行肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)计数,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率,采用精确概率法和单因素方差分析进行统计学处理。结果:荷瘤注射hES后第16天,瘤体注射组抑瘤率为75.0%,肌内注射组抑瘤率为66.1%(P<0.01)。免疫组织化学检测结果显示,hES在瘤体注射组和肌内注射组肿瘤中的表达率分别为90.0%和85.0%,均高于对照组的20.0%(P<0.01)。2实验组肿瘤MVD值分别为18.60±3.44和16.70±2.63,均低于对照组的22.40±3.41(P<0.01)。流式细胞仪检测发现,瘤体注射和肌内注射hES基因质粒后,肿瘤细胞凋亡率分别为11.36%±3.20%和8.08%±2.00%,均高于对照组的1.80%±0.50%(P<0.01)。结论:注射hES基因具有抑制舌鳞癌Tca8113细胞移植瘤生长的效应。     

三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27侵袭能力的影响

目的 检测三氧化二砷对人舌鳞癌细胞CAL-27体内、外侵袭能力的影响并探讨其相关作用机制。方法 体外采用黏附实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、免疫荧光染色和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对CAL-27细胞黏附、迁移及侵袭能力的影响;体内采用免疫组织化学和蛋白质印迹法检测三氧化二砷对裸鼠移植瘤中CD44和基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9表达的影响。结果 三氧化二砷作用后,实验组CAL-27细胞的黏附、迁移及侵袭能力明显低于对照组（P〈0.05）,细胞骨架微丝解聚,微管结构模糊、紊乱,MMP-2和MMP-9的表达下降;三氧化二砷降低了裸鼠移植瘤中CD44、MMP-2和MMP-9的表达。结论 低浓度的三氧化二砷可降低人舌鳞癌细胞CAL-27细胞黏附能力,改变细胞骨架排列,下调CD44、MMP-2和MMP-9的表达,进而抑制癌细胞的侵袭能力。     

A-NK 细胞对舌鳞癌裸鼠皮下移植瘤抑制作用的实验研究

目的：探讨 A-NK 细胞治疗裸鼠舌鳞癌移植瘤的效果。方法：分离培养人 A-NK 细胞;建立舌鳞癌 Tca8113-Tb 细胞皮下移植瘤模型,随机分为2组（n ＝7）对照组裸鼠瘤旁注射生理盐水,实验组裸鼠瘤旁注射 A-NK 细胞,观察33 d 后,处死裸鼠,剥离移植瘤,称瘤重,绘制肿瘤生长曲线。结果：治疗15～33 d 时实验组肿瘤体积均小于对照组（P ＜0．05）,观察33 d 后,实验组和对照组瘤重（g）分别是为0．96±0．38和3．74±1．22（P ＜0．05）。结论：A-NK 细胞在裸鼠体内具有抗肿瘤效应。     

人舌鳞癌Tca8113细胞荷瘤裸鼠体内诱导耐药性的实验研究

目的：探讨人舌鳞癌细胞荷瘤裸鼠体内化疗药物持续刺激状态下,肿瘤的生长及其耐药性的变化情况。方法：采用BALB／c-nu／nu裸鼠皮下接种Tca8113细胞悬液,待裸鼠成瘤后,采用卡铂（Carboplatin,CBP）进行小剂量长期暴露法诱导肿瘤耐药,以观察体内肿瘤耐药性的产生、肿瘤的生长变化及其各种耐药蛋白的表达。用免疫组化法检测部分耐药蛋白表达情况,RT-PCR检测相关耐药基因表达情况。结果：诱导后Tca8113／卡铂在免疫组化和RT-PCR检测中,MRP、GST-π等表达升高,TopoⅡ表达降低。结论：利用荷瘤裸鼠体内给药诱导肿瘤耐药性的产生可以更好地模拟临床舌鳞癌MDR的发生发展过程及其生物学特性,为多药耐药性及其逆转的进一步研究提供了一个有价值的研究平台。     

加热联合黄体酮对人舌癌耐药细胞株Tca8113/BLM耐药性的影响

目的:研究加热(hyperthermia, HT)联合黄体酮(progresterone, Prog)对人舌癌细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM耐药性的影响.方法:采用MTT法检测加热41 ℃ 1 h后联合Prog对人舌癌亲本细胞Tca8113和耐药细胞Tca8113/BLM化疗药物的敏感性;流式细胞仪(FCM)检测细胞内阿霉素(ADM)浓度聚积以及细胞膜上P-gp和MRP的表达.结果:与黄体酮作用细胞相比,加热41 ℃ 1 h联合2 μmol/L Prog作用细胞后,Tca8113和Tca8113/BLM细胞的IC_50显著下降(P<0.01),且各组之间均有显著差异(P<0.01),ADM浓度聚积在2 种细胞中明显增加(P<0.01),细胞膜上的P-gp 和MPR荧光强度显著下降(P<0.01).结论:加热联合Prog能协同增加细胞内药物浓度的聚积,显著提高细胞对化疗药物BLM的敏感性,其二者协同作用与降低细胞膜上的P-gp和MRP的表达有关.     

高迁移率族蛋白N2对人舌癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用研究

目的 研究高迁移率族蛋白N2（HMGN2）对人舌癌裸鼠移植瘤生长的抑瘤作用。方法 裸鼠腋下注射接种舌鳞癌细胞 Tca8113以建立裸鼠移植瘤模型,接种 7d成瘤后,设立阴性对照组、 HMGN2蛋白组和阳性对照组,在瘤体周边分别注射含 washingbufferⅡ、 HMGN2蛋白和顺铂的细胞培养基。观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,经过4次给药后处死裸鼠,取出瘤块,称其质量计算抑瘤率,并行苏木精-伊红（HE）染色观察形态学变化。结果 成功建立舌癌裸鼠移植瘤模型。HMGN2蛋白组和阳性对照组肿瘤体积明显小于阴性对照组。裸鼠体重在整个实验过程中并没有明显的变化。阴性对照组、HMGN2蛋白组、阳性对照组的肿瘤质量平均值分别为（0.38±0.19）、（ 0.21±0.15）、（0.23±0.16）g,3组间的差异无统计学意义。HMGN2蛋白组和阳性对照组的抑瘤率分别为45.71%和39.44%。肿瘤经肉眼观察可见阴性对照组瘤块较大,HE染色可见 HMGN2蛋白组和阳性对照组细胞坏死明显。结论 HMGN2蛋白可以明显抑制人舌癌裸鼠移植瘤的生长。     

EGFR抑制剂西妥昔对舌鳞癌多药耐药细胞Tca8113/CBP细胞内阿霉素浓度的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂西妥昔在舌鳞癌多药耐药中的作用.方法 Westernblot方法检测舌癌细胞系Tca8113及多药耐药细胞系Tca8113/CBP EGFR的表达,流式细胞术检测EGFR受到抑制后舌癌多药耐药细胞Tca8113/CBP细胞内阿霉素浓度的影响.结果 细胞系Tca8113和Tca8113/CBP均有EGFR的表达(P＞0.05).EGFR受到抑制后,Tca8113/CBP细胞内阿霉素浓度升高(P＜0.05).结论 EGFR抑制剂西妥昔可使舌癌多药耐药细胞细胞内药物浓度升高.     

口腔鳞癌细胞中bcl-2、bax的量子点双标免疫荧光成像研究

目的:利用量子点对口腔鳞癌细胞内bcl-2、bax蛋白进行双标免疫荧光成像研究。方法:利用量子点QD605和QD545通过双标免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下对人舌癌Tca8113细胞内bcl-2、bax蛋白同时观察识别。结果:不同粒径量子点可同时对舌癌细胞bcl-2、bax蛋白特异性识别,在激光共聚焦显微镜下观察到舌癌细胞bcl-2和bax蛋白高表达。QD605标记的bcl-2蛋白表现为红色荧光,QD545标记的bax蛋白表现为绿色荧光,2种蛋白在细胞内同一位置重叠呈现黄色荧光。激光连续照射1 h,3种颜色的荧光均未明显衰减。结论:量子点能同时对细胞内的2种蛋白进行双标免疫荧光成像。     

口腔鳞癌手术后中药治疗远期疗效观察

作者曾对２３８例口腔鳞癌术后应用中药“参阳”方的疗效进行前瞻性的研究,本文继续对已生存４～８年的５６例病员门诊随访结果进行分析．结果是生存情况：７年生存期原治疗组高于原对照组１２．５％,原治疗组３０例均健在,而原对照组中的２６例,２例带瘤生存,１例死亡;Ｔ细胞亚群测定中,复发死亡者的ＣＤ８值均升高,ＣＤ４／ＣＤ８比值均下降;中医辨证中,正常者及肾气虚者的例数以治疗组为多,而阴虚与气阴两虚者,治疗组低于对照组;由上提示：经“参阳”方治疗者有较好的远期疗效．     

醋酸棉酚对人舌鳞癌Tca8113细胞生长及人类错配修复基因1甲基化水平的影响

目的 研究醋酸棉酚（ GAA）对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响和对人类错配修复基因 1（hMLH1）甲基化水平的影响,初步探讨其抗肿瘤机理。方法 应用 MTT法检测 GAA对Tca8113细胞生长的影响;应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应（nMSP）检测 Tca8113细胞在 GAA作用 48、72 h后hMLH1基因甲基化状态的改变情况。结果 MTT检测显示,作用 24~72 h,GAA对Tca8113细胞生长具有抑制作用;nMSP检测显示,以终浓度 30、15 μmol•L-1的GAA作用于 Tca8113细胞 48、72 h后, hMLH1基因甲基化条带的平均光度值降低,与未经药物处理组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 GAA能抑制舌鳞癌细胞的生长,并能降低 hMLH1基因的甲基化水平。 GAA去甲基化作用可能是其具有抗肿瘤作用的机制之一。     

BALB/c����ϵС������ͻ�����ϸ��������������ѧ�����о�

目的建立BALB／c近交系小鼠腭胚突间充质（EPM）细胞体外培养模型并研究其生物学特性。方法芩研究于2012年11月至2013年7月在山西医科大学医学寄生虫研究所进行。采用机械分离及胰蛋白酶消化法,简便、准确、快速地获得高成活率的BALB／c近交系小鼠EPM细胞,采用免疫组化法鉴定细胞,并进行细胞增殖和形态学观察。结果EPM细胞为成纤维细胞样细胞,呈梭型,单层漩涡状排列,排列无序,细胞核大,核分裂像较多。免疫组化染色显示,角蛋白标记为阴性,波形蛋白标记为阳性。EPM细胞呈指数生长,有较强的增殖能力。结论建立的BALB／c近交系小鼠EPM细胞体外培养技术模型可较好地保持EPM细胞的基本生物学特性。