乙型肝炎病毒前C区基因变异的研究

作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ｅ系统阳性的慢件乙型肝炎（乙肝）患者血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，筛选出乙肝ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）阳性／乙肝ｅ抗体（抗—ＨＢｅ）阴性和ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ阳性各２０份ＰＣＲ阳性血清，分别用人工合成的ＨＢＶ前Ｃ区基因寡核苷酸探针Ｍ０（无突变），Ｍ１（１点突变），Ｍ２（２点突变）进行斑点杂交，结果发现ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ附性慢性乙肝患含有１７例（占８５％）在１８９６位核苷酸发生点突变，形成终止密码，其中１０例（占５０％）发生２点突变。选突变ＰＣＲ产物直接测序，同样证实点突变的存在。提示乙肝患含ＨＢｅＡｇ阳性自然转换为抗—ＨＢｅ阳性、并不一定是病毒复制减弱，而可能足ＨＢＶＤＮＡ前Ｃ区发生了基因变异。     

聚合酶链反应在乙型肝炎病毒感染诊断中的意义

用ＰＣＲ法检测１６６例乙型肝炎病毒感染者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果显示：ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性，ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性和ＨＥｂＡｇ阳性组，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为９６．２％、２８．６％、９３．５％、ＨＢｓＡｇ单项阳性者中，检出ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性７８例（孕妇占１９．２％），阳性率８１．３％。另外，在２０例血清标志物全部阴性对照组中发现ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性１例，阳性率５．     

生物素探针分子杂交试验检测乙型肝炎患者血清HBV－DNA的意义

用生物素探针分子杂交试验检测６１７例临床各类型乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，总阳性率为３５．６６％（２２０／６１７），各临床类型间无差异性。ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率：在ＨＢｅＡｇ阳性患者中为６７．０２％（１８７／２７９），而ＨＢｅＡｇ阴性患者中为９．７６％（３３／３３８）；在ＨＢｓＡｇ阳性患者中为３９．１５％（２１１／５３９），而ＨＢｓＡｇ阴性患者中为１１．５４％（９／７８）；抗－ＨＢｅ阳性者为８．１７％（１７／２０８）；抗－ＨＢｓ阳性者为１２．５％（５／４０）。２３例非乙型肝炎患者均未检出血清ＨＢＶ－ＤＮＡ。检测结果表明本方法是一种快速、简便、特异、敏感、无同位素污染的方法。     

非放射性HBV－DNA探针在乙型肝炎病毒检测中的应用

以地高辛甙元随机引物法标记ＨＢＶ－ＤＮＡ探针，以此探针检测慢性乙型肝炎患者的血清、肝组织，同时以ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ。结果：血清ＮＢｅＡｇ阳性率２７％（１０／３７），血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率５７．１％（２０／３５），两者有显著性差异。血清ＨＢｃＡｂ阳性率７８．４％（２９／３７），肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率８３．８％（３１／３７），两者无显著性差异。血清与肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率有显著性差异。提示：血清ＨＢＶ－ＤＮＡ检测是较ＨＢｅＡｇ更为准确客观反映血液带毒状况的指标。而准确反映肝脏带毒状况的指标是肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ检测。当ＨＢｅＡｇ阴转，血清ＨＢＶ－ＤＮＡ阴性而肝组织ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性时，需注意肝硬化及肝癌的发生。     

丁型肝炎病毒标志物检测的临床意义

报道在１６０例乙肝中检出３１例ＨＤＶ感染者，慢活肝、肝硬化中阳性率分别为２７．３％（２１／７７）、２５．０％（６／２４），高于慢迁肝中阳性率３．２％（１／３１）（Ｐ＜０．０５）。８例抗ＨＤＩｇＭ阳性者中ＨＤＡｇ阳性者滴度低，ＨＤＡｇ阴性者滴度高；３例抗ＨＤＩｇＧ、ＩｇＭ同时阳性者病情活动且重，单纯抗ＨＤＩｇＧ阳性者病情轻。ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ阳性中ＨＤＶ感染率分别为１９．４％（６／３１）、１０．２％（５／４９），抗ＨＢｅ阳性、ＨＢＶＤＮＡ阴性中ＨＤＶ感染率分别为３０．６％（１９／６２）、２９．３％（２２／７５），提示ＨＤＶ感染对ＨＢＶ复制有抑制作用，对肝脏慢性化起一定促进作用，抗ＨＤＩｇＭ阳性者说明肝内有ＨＤＶ复制，病情活动。     

HBV DNA在HBsAg阴性的原发性胆管细胞性肝癌石蜡包埋肝组织中的检出

对２４例酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）ＨＢｓＡｇ阴性的原发性胆管细胞性肝癌的石蜡包埋肝组织，应用ＰＣＲ－ＥＢ法检测了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，并与ＥＬＩＳＡ法检测的血清免疫学标志物（乙肝５项：ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ）结果进行对比。结果显示血清学乙肝５项均阴性的及ＨＢｓＡｇ阴性但其它４项中至少有１项阳性的胆管细胞性肝癌石蜡包埋肝组织中，ＨＢＶＤＮＡ阳性检出率分别为３８．９％和４５．８％，证实ＨＢｓＡｇ血清学阴性者肝组织中仍有ＨＢＶＤＮＡ存在     

血清、白细胞HBV－DNA的PCR检测结果与HBV血清复制标志的关系

３０例慢性乙型肝炎患者中，有５３．３％的病人用ＰＣＲ可从清和白细胞中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ；ＨＢｅＡｇ阳性和抗－ＮＢｃ－ＩｇＭ阳性的患者１００％可以检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，而仅抗－ＨＢｃ－ＩｇＭ阳性的患者ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为６６．７％。１３例乙肝血清学复制标志阴性的病人中有５例（３８．５％）也可检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ。在ＨＢｓＡｇ转阴的３例病人中有１例可从白细胞中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ。     

地高辛标记寡核苷酸探针对慢性乙肝患者前C基因突变的检测

目的　研究慢性乙肝患者乙肝病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区突变情况。方法　用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛标记的寡核苷酸探针Ｍ０（野毒株）、Ｍ１（１８９８位变异株）、Ｍ２（１８９８／１９０１位变异株）对１６５例慢性乙肝患者前Ｃ区突变情况进行检测。结果　其中１２例ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（＋）,抗ＨＢｅ（－）,抗ＨＢｃ（＋）患者,ＨＢＶＤＮＡ阳性率为１００％,突变株检出率为８．３％。１５３例ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（－）,抗ＨＢｅ（＋）,抗ＨＢｃ（＋）患者,ＨＢＶＤＮＡ总阳性率为１６．３％,突变株总检出率为８４％。结论　前Ｃ基因突变株主要存在于抗ＨＢｅ阳性的慢性乙肝患者体内,ＰＣＲ结合地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术,操作简便快捷,利于临床推广应用。     

生物素探针分子杂交试验检测乙型肝炎患者血清HBV—DNA的意义

用生物素探针分子杂交试验检测６１７临床各类乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，总阳性率为３５．６５％（２２０／６１７），各临床类型间无差异性。ＨＢＶ－ＤＮＡ检出率：在ＨＢｅＡｇ阳性患者中为６７．０２％（１８７／２７９），而ＨＢｅＡｇ阴性性患者中为９．７６％（３３／３３８）；在ＨＢｓＡｇ阳性患者中为３９．１５％（２１１／５３９），而ＨＢｓＡｇ阴性患者中为１１．５４％（９／７８）；抗－ＨＢｅ阳性者为８．     

血清,白细胞HBV—DNA的PCR检测结果与HBV血清复制标志的关系

３０例慢性乙型肝炎患者中，有５３．３％的病人用ＰＣＲ可从血清和白细胞中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ；ＨＢｅＡｇ阳性和抗－ＨＢｃ－ＩｇＭ阳性的患者１００％可以检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，而仅抗－ＨＢｃＩｇＭ阳性的患者ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为６６．７％。１３例乙肝血清学复制标志阴性的病人中有５例（３８．５％）也可检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ。在ＨＢｓＡｇ转阴的３例病人中有１例可从白细胞中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ。     

抗-HBe阳性慢性乙型肝炎临床特点

目的　探讨抗 HBe阳性慢性乙型肝炎的临床特点。方法　对住院的慢性乙型肝炎 5 4 0例进行回顾性分析。结果　抗 HBe阳性慢性乙型肝炎占全部慢性乙型肝炎病例的 4 3 1%。随着肝炎慢性化程度的加重 ,抗 HBe阳性的检出率有增高趋势。抗 HBe阳性患者中HBVDNA检出率为 3 9 1% ;抗 HBe阳性慢性乙型肝炎的发病次数、转氨酶峰值均比HBeAg阳性慢性乙型肝炎高。结论　部分抗 HBe阳性患者HBV仍持续复制 ,抗 HBe阳性患者易造成肝炎慢性化 ,病情易反复     

苦参素注射液联合替比夫定治疗慢性乙型肝炎疗效分析

目的了解苦参素注射液和替比夫定联合治疗的效果。方法本文71例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组,治疗组34例,同时使用苦参素注射液和替比夫定12周,随后单用替比夫定40周;对照组37例,单用替比夫定52周。疗程中,定期检测ALT、HBeAg、抗HBe、HBV DNA,并做YMDD变异检测。结果全部患者完成1年治疗,治疗组与对照组血清转换率分别为41.2%(14/34)和21.6%(8/31),两组差异无显著性(P=0.08)。治疗组未发生YMDD变异,对照组有5例发生YMDD变异,治疗组血清ALT及HBV DNA基线水平与血清转换率明显相关(P=0.04),在ALT>2.0 ULN及血清HBVDNA>1.0×107拷贝/mL患者中,治疗组HBeAg/抗HBe血清转换率明显高于对照组(分别为52.0%和25.8%,P=0.04及63.2%和28.6%,P=0.03)。在肝组织HBV DNA表达水平较高的患者中,治疗组血清转换率高于对照组(分别为46.2%和9.5%,P=0.03)。结论苦参素与替比夫定联合治疗对于ALT中度以上升高,HBV DNA高水平复制疗效优于单用替比夫定。并对于延迟及减少YMDD变异相关性耐药有一定作用。     

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎31例临床疗效观察

目的研究拉米夫定对血清乙型肝炎病毒-脱氧核糖核酸(HBV-DNA)阳性的慢性乙型肝炎病毒感染患者的疗效和安全性.方法61例患者随机分成拉米夫定治疗组(31例)和对照组(30例).治疗组每日口服拉米夫定100mg,疗程1年,对照组采用一般保肝、退黄、降酶治疗.结果治疗组累计75%患者血清HBV-DNA阴转,最终持续阴转率70%.对照组HBV-DNA累计阴转率33.3%,最终阴转率为23.8%,两组疗效比较P＜0.05.治疗前丙氨酸转氨酶(ALT)增高的患者,52周时治疗组的复常率83.8%,对照组为25.8%,P＜0.05,治疗组累计53.8%患者血清HBeAg阴转,最终持续阴转率53.8%.对照组HBeAg累计阴转率13.3%,最终阴转率为6.0%,两组疗效比较P＜0.05.两组不良反应发生率比较,差别无显著性P＞0.05.结论拉米夫定能明显降低血清HBV-DNA水平,促使ALT恢复正常,不良反应轻,耐受性好.     

未经抗病毒治疗的慢乙肝患者YMDD变异基因的检测及分析

目的：为了解未经拉米呋定及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患中是否存在HBVYMDD基因变异。方法；应用微板核酸杂交-核酸定量法检测29例病史超过半年以上，肝功能异常的慢性乙肝患的HBV-DNA及YMDD变异基因。结果：29例慢性乙肝患YMDD变异阳性6例，阴性23例，阳性率为20.69%,6例变异性。结论：显示在未经抗病毒治疗的慢性肝患中存在YMDD变异株，其与野生株一样是自然存在，加以重视并提高检测方法的灵敏度，有助于提高YMDD变异基因检测的阳性率。     

拉米夫定联合白细胞介素2治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

目的评价拉米夫定联合白细胞介素2治疗慢性乙型肝炎的疗效和安全性.方法将97例患者随机分为观察组(拉米米夫定联合白细胞介素2)和对照组(单用拉米夫定).拉米夫定疗程至少12个月.观察组联合白细胞介素2,时间为6个月.其中,观察组50例,对照组47例,观察期24个月.结果 6个月时,观察组与对照组ALT的复常率分别为82.0%和68.1%(P＞0.05);12个月时分别为90.0%和70.2%(P＜0.05).6个月时两组HBeAg阴转率、HBeAg/抗HBe的血清转换率和HBV DNA阴转率差异无显著性(P＞0.05);12个月时,两组HBeAg阴转率和HBeAg/抗HBe的血清转换率差异仍无显著性(P＞0.05),但观察组HBV DNA阴转率(92.0%)显著高于对照组(70.2%)(P＜0.05).至24个月时,观察组患者血清ALT复常率、HBV DNA阴转率、HBeAg阴转率均显著高于对照组患者(P均＜0.05).用药12个月、24个月时两组HBV YMDD阳性率相比差异均无显著性(P＞0.05).结论拉米夫定联合白细胞介素2治疗CHB安全有效,优于单用拉米夫定.     

血清HBV DNA与乙肝病型及e系统之间关系探讨

目的 探讨血清ＨＢＶ ＤＮＡ与乙肝病型及ｅ系统之间的关系。方法 采用ＰＣＲ法对３１０例乙肝病毒携带者及乙肝患者进行血清ＨＢＶ ＤＮＡ检测,同时用ＥＬＩＳＡ法进行乙肝标志物测定。结果 各病型ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率以慢性肝炎和无症状携带者最高,与急性肝炎肝硬变组比较差异显著;ＨＢｅＡｇ阳性病例中ＨＢＶ ＤＮＡ阳性率以无症状携带者,急性肝炎、慢性肝炎（轻）组最高,与慢性肝炎（中）、肝硬变组比较差异显著;在     

慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA载量与肝功能指标关系研究

目的研究慢性乙型肝炎患者不同临床分型与HBVDNA载量及肝功能之间的关系。方法分别采用实时荧光定量PCR法及速率法对482例慢性乙型肝炎(CHB)进行血清HBVDNA定量和ALT、AST检测,根据其临床分型分为e--CHB、e+-CHB,分别观察其与HBVDNA载量、ALT、AST水平关系。结果 e--CHB与e+-CHB相比,前者年龄远大于后者(P<0.01),血清HBVDNA载量低于后者(P<0.01),血清ALT、AST水平高于后者(P<0.01)。e--CHB组随血清HBVDNA载量升高,其ALT、AST水平进行性升高(P<0.05),e+-CHB组血清ALT、AST水平与HBVDNA载量无关。结论 CHB不同临床分型在病毒学、生化学存在明显不同,对于e+-CHB患者HBeAg阳性是判断HBV复制的良好指标,其体内HBVDNA载量与肝脏炎症程度无关。e--CHB患者体内HBVDNA载量与肝内炎症程度相关,应重视对e--CHB患者的随访和治疗。     

慢性乙型肝炎血清HBV DNA水平变化的观察

目的：观察慢性乙型肝炎12周血清乙型肝炎病毒DNA（HBV DNA）水平变化情况。方法：回顾性分析了84例未接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎12周血清HBV DNA自发性变化的情况,并根据患者基线谷丙转氨酶（ALT）水平、乙型肝炎e抗原（HBeAg）阴性及阳性分组,分析基线ALT水平、HBeAg阴性或阳性对HBV DNA下降水平的影响。结果：①HBeAg阳性组基线HBV DNA水平与12周时HBV DNA水平变化比较,差异无统计学意义;HBeAg阴性组基线HBV DNA与12周时HBV DNA水平变化比较,差异无统计学意义;②ALT〉5 ULN组基线HBV DNA水平与12周时HBV DNA下降比较,差异有统计学意义;ALT≤2 ULN组基线HBV DNA水平与12周时HBV DNA下降水平比较,差异无统计学意义;2 ULN〈ALT≤5ULN组基线HBVDNA与12周时HBVDNA下降水平比较,差异无统计学意义。结论：慢性乙型肝炎12周血清HBVDNA水平存在一定水平的下降,且与肝脏炎症程度有相关性,而与HBeAg阴性或阳性无相关性。     

苦参素胶囊治疗慢性乙型肝炎的疗效观察

目的探讨苦参素胶囊治疗慢性乙型肝炎的疗效及免疫机制。方法选择120例慢性乙型肝炎患者：血清ALT异常,但小于正常值2倍;HBeAg（＋）;血清HBVDNA〉105copies/mL。按照随机数字表分为治疗组与对照组。对照组59例单纯予以常规保肝药物治疗,治疗组61例在对照组给药的基础上加用苦参素胶囊200mg/d,3次/d。疗程均为12周。观察两组在用药后ALT情况、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、HBeAg/抗HBe血清转换、乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）转阴率及外周血T细胞亚群情况。结果治疗组在改善肝功能、乙肝病毒e抗原（HBeAg）转阴率、HBeAg/抗HBe血清转换率、乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）转阴率方面明显优于对照组。两组治疗均对T细胞亚群有调节作用,能使CD4＋上升,CD8＋下降,CD4＋/CD8＋上升,但治疗组优于对照组（P〈0.05）。结论苦参素胶囊可以提高慢性乙型肝炎患者细胞免疫,具有抗HBV作用。可应用于临床上尚未达到核苷类抗乙肝病毒药物使用指针的慢性乙型肝炎患者（肝功能ALT异常,但小于正常值2倍;HBeAg（＋）;血清HBVDNA〉105copies/mL）的抗病毒治疗。