应用PCR检测HL－60细胞诱导分化前后c－myc癌基因的扩增

应用ＰＣＲ方法研究了维甲酸（ＲＡ）和二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ基因扩增的变化。结果：ＨＬ－６０细胞内ｃ－ｍｙｃ基因扩增为１１，经ＲＡ诱导６ｄ后，其扩增程度无明显变化，而ＤＭＳＯ诱导３ｄ后，ｃ－ｍｙｃ基因扩增出现下降，至５ｄ，较未诱导分化前下降约３０％。提示了ＲＡ和ＤＭＳＯ对ＨＬ－６０细胞不同的诱导分化机制。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c—myc基因表达的抑制和诱导分化作用

研究ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法 采用针对原癌基因ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５‘ｄ（ＣＴＴ ＣＴＣ ＧＡＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＧ）３「与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。     

鬼臼叉甙诱导HL—60细胞分化时c—myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（１８ｍｅｒ，２１ｍｅｒ）对人白血病ＨＬ－６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达的抑制作用。用ＨＬ－６０活细胞计数，ＲＮＡ含量的ＲＴ－ＰＣＲ测定和ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的免疫组化染色检查，结果：两个反义核苷酸都以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，增殖抑制率为１１－７５％。反义核酸还抑制ｃ－ｍｙｃＲＮＡ和Ｍｙｃ蛋白的表达，而对ｃ－ｍｙｃ基因正常表达的红白血病细胞Ｋ５６２的增殖和ＰＨＡ刺激的人淋巴细胞的增殖     

脂质体介导c—myc反义核酸对HL—60细胞作用的研究

原癌基因ｃ－ｍｙｃ参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在白血病细胞株ＨＬ－６０ 中有很高的表达。ｃ－ｍｙｃ通过扩增活化或基因重排而异常激活,在白血病的发生和发展中可能起着重要的作用。　目的　通过脂质体介导ｃ－ｍｙｃ反义核酸转染ＨＬ－６０ 细胞,观察其抑制细胞生长增殖、促进分化、诱导凋亡,降低ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 和蛋白表达水平,探讨反义核酸的抗肿瘤作用机制。　方法　ＨＬ－６０ 细胞在３７℃、５％ＣＯ２ 条件下,培养于１０％ 小牛血清１６４０ 培养液中,细胞接种密度为４×１０７／Ｌ,反义核酸终浓度为１μｍ ｏｌ／Ｌ,反义核酸与脂质体比例为１ μｍ ｏｌ（６．５ μｇ）∶１０ μｇ,无血清转染６ ｈ。实验同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体无义组等对照组。连续培养４ 天。通过锥虫蓝拒染实验测定细胞的生长能力;ＮＢＴ还原实验和瑞特－姬姆萨染色测定细胞的分化能力;免疫细胞化学染色检测ｃ－ｍｙｃ蛋白表达;ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 水平;吖啶橙／溴化乙锭染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;ＤＮＡ抽提及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成。　结果　脂质体转染ｃ－ｍｙｃ反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０     

亚硒酸钠对HL—60细胞的分化诱导作用

目的观察亚硒酸钠对人急性髓系白血病ＨＬ－６０细胞系的诱导分化作用。方法ＨＬ－６０细胞在含８×１０－６ｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠的ＲＰＭＩ１６４０培养液中置３７℃、５％ＣＯ２、９５％空气、饱和湿度培养５天，于第５天查细胞形态学及硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）试验。结果硒在上述条件下可使ＨＬ－６０细胞形态学分类中较成熟细胞的比例增高（Ｐ＜０．０５），ＮＢＴ试验阳性率增高（Ｐ＜０．０１）。结论硒在一定条件下可能有潜在的诱导分化作用     

鬼臼叉甙诱导HL－60细胞分化时c－myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关系。结果：与ＲＡ一样，小剂量ＶＰ－１６能诱导ＨＬ－６０细胞向粒系分化。并且在ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ蛋白水平明显降低。ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞其ｃ－ｍｙｃ蛋白降低与其诱导分化作用呈负相关。结论：实验结果提示，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化可能是ＶＰ－１６诱导ＨＬ－６０细胞分化的机制之一。     

人早幼粒白血病细胞系HL—60体外诱导分化研究

用体外短期液体培养技术，观察ＲＡ和不同来源的造血调控因子对ＨＬ－６０细胞增殖与分化的影响。以生长曲线和倍增时间作为观察各种试剂对ＨＬ－６０细胞增殖作用的指标；以ＮＢＴ还原反应和细胞形态变化作为分化成熟的指标。结果是ＲＡ、ＰＨＡ－ＬＣＭ单用时对ＨＬ－６０细胞均有抑制增殖和诱导分化作用，ＰＷＭ－ＳＣＭ、ＬＰ３－ＣＭ仅部分抑制增值、而ＦＧＦ、Ｈｕ－ＣＳＦ和ＥＰＯ等无效。各种造血生长因子分别与ＲＡ合用时，     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（18mer，21mer）对人白血病HL—60细胞中c－myc基因表达的抑制作用。用HL－60活细胞计数，RNA含量的RT－PCR测定和c－myc基因蛋白的免疫组化染色检查。结果：两个反义寡核苷酸都能抑制HL－60细胞的增殖，增殖抑制率为11％～75％。反义核酸还抑制c－mycmRNA和Myc蛋白的表达，而对c－mcy基因正常表达的红白血病细胞K562的增殖和PHA刺激的人淋巴细胞的增殖没有影响。结论：反义寡核苷酸能抑制c－myc基因的过度表达。     

老年急性淋巴细胞白血病细胞中c—myc基因的表达及其临床意义

目的：探讨c-myc基因在老年急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义。方法：采用免疫细胞组织化学染色方法,检测28例老年急性淋巴细胞白血病病人化疗前后及26例非白血病的c-myc基因的表达水平。结果：急性淋巴细胞白血病组c-myc基因表达较非白血病明显增高,两者呈显著性差异（P＜0．01）,急性淋巴细胞白血病组中,化疗后完全缓解与不缓解病人c-myc基因的表达有显著差异（P＜0．05）,结论：c-myc基因在老年急性淋巴细胞白血病细胞中高表达,而且与化疗疗效密切相关,提示c-myc基因对于老年急性淋巴细胞白血病的诊断,疗效评价及预后估计均有一定意义。     

c—myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 研究c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响。方法 用针对c-myc mRNA 5'端非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸与HL60细胞、分离的急性粒细胞白血病病人白细胞共培养10h,用凋亡细胞计数、DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仪等方法测白血病细胞的调亡。结果 c-myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细胞凋亡,且此作用随着作用浓度的提高而增加;此反义核酸只诱导白血病患者的白血病细胞凋亡,对正常白细胞的凋亡无影响。结论 c-myc反义核酸可以通过诱导白血病细胞凋亡来治疗急性粒细胞白血症,且该作用的特异性好。     

大鼠脑损伤时神经细胞c—fos,c—jun和c—myc基因表达变化

目的 观察大鼠脑损伤不同时间皮质神经细胞早期快反应基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ表达变化。方法 应用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、原位杂交和免疫组织化学方法检测皮质神经细胞中ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｍｙｃ的表达。结果 脑损伤后１５ｍｉｎ,伤测皮质神经细胞出现上述３种基因ｍＲＮＡ的表达,随时间的延长,表达逐渐增加,于伤后３ｈ达高峰并持续至伤后２５ｈ伤后,伤后７２ｈ恢复至对照水平ｃ－ｆｏｓ、ｃ－     

急性非淋巴细胞白血病细胞中原癌基因c—myc的表达

研究急性非淋巴细胞白血病细胞中原癌基因ｃ－ｍｙｃ的表达及临床意义。方法采用蛋白质免疫印渍和单克隆抗体免疫细胞化学染色方法检测３０例ＡＮＬＬ细胞中原癌基因ｃ－ｍｙｃ的表达。结果１９例表达阳性，阳性率为６３％。ＡＮＬＬ中白血病细胞的阳性细胞百分率为２９％－９６％，ｃ－ｍｙｃ在不同病人的白血病细胞中表达水平不一样；ｃ－ｍｙｃ的表达和患者骨髓中白血病细胞百分率显著相关，和患者年龄，性别，外周血白细胞计数。     

联苯双酯对HL—60白血病细胞的诱导分化作用

为探讨抗肝炎药物联苯双酯对人早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０的影响。应用细胞生物学的方法进行ＨＬ－６０细胞生长曲线，ＮＢＴ还原能力，细胞吞噬活力，酸性磷酸酶活力测定。ＤＤＢ能抑制ＨＬ－６０细胞增殖。ＨＬ－６细胞用ＤＤＢ处理６天后，近５０％的细胞可获得硝基蓝四氮唑还原能力，同样浓度的ＤＤＢ处理４天后，其ＨＬ－６０细胞的吞噬能力也明显增强；细胞形态学观察发现ＤＤＢ处理的ＨＬ－６０细胞分化趋向于成熟的中笥粒     

特异性切割大鼠c—myc癌基因mRNA核酶的设计

核酸(ribozyme)为具有催化活性的RNA分子,能序列特异性地切割靶RNA.与传统的蛋白质酶所不同的是,核酶通过两侧的引导序列与底物以碱基互补形成杂交链,具有更高的底物特异性;核酶切割完靶RNA后即从杂交链上解离下来,可对新的靶RNA进行切割.因此,核酸成为近年来基因治疗的一种新方法.锤头状核酶具有分子小、设计简单、易于合成的特点,人们对核酸在基因治疗中作用的研究大部分是采用锤头状核酸.我们以Forster等总结的由13个保守碱基和3个螺旋区组成的锤头状核酸为模型,选择大鼠c-myc癌基因mRNA为靶RNA,在计算机辅助下设计了能特异性切割大鼠c-myc癌基因mRNA的核酸.     

人脑胶质瘤组织中c—myc基因的扩增和重排及异常表达

癌基因结构及表达异常与肿瘤的发生发展有着密切的关系，作者在于考察胶质瘤中ｃ－ｍｙｃ基因的状况。采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交和ＲＮＡ打点杂交的方法以正常人脑组织为对照观察了７例人脑胶质瘤组织中ｃ－ｍｙｃ基因在ＤＮＡ和ＲＮＡ水平的改变。７例人脑胶质瘤标本中ｃ－ｍｙｃ基因有不同程度的扩增和重排。其ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达幅度是正常组织的１．６－４．０倍。在胶质瘤中有ｃ－ｍｙｃ基因的异常。     

生物素标记核酸探针检测白血病患者c—myc原癌基因的表达水平

用两种方法制备生物素ｃ－ｍｙｃ癌基因探针，通过ＲＮＡ－ＤＮＡ斑点杂交技术，检测了白血病３０例和２种白血病细胞株中ｃ－ｍｙｃ原癌基因的ＲＮＡ表达水平，结果显示，白血病细胞株，急性白血病和慢性粒细胞性白血病急性变患者的ｃ－ｍｙｃ的ＲＮＡ表达水平明显高于正常人和患其它血液病的患者，提示ｃ－ｍｙｃＲＮＡ水平的判定可提供一些有意义的临床信息，同时探讨了生物素和光敏生物素标记核酸探针的优越性。     

c－myc癌基因在原发皮肤恶性黑色素瘤中的扩增与表达

目的：为探讨c—myc癌基因在恶黑中的扩增与表达。方法：采用原位杂交和免疫组化法检测了c—myc癌基因的扩增和p62myc的表达。结果：发现恶黑中无c—myc扩增。无转移的浸润性恶黑中，p62myc阳性率为82．14％，伴淋巴结转移的浸润性恶黑阳性率为83．33％。两者间无显著差异。但两者表达强度分别为80．00％和57．17％，伴淋巴结转移组高于无转移组。结论：p62myc高强度表达可能与恶黑转移有关。