烧伤后胰岛素受体信号传导缺陷机理的研究

目的：为了探索烧伤后胰岛素受体信号传递缺陷的机理，以阐明烧伤胰岛素抵抗的分子基础。方法：采用ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层杆纯化大鼠肝脏和肌肉细胞膜胰岛素受体，通过胰岛素受体蛋白γ－３２Ｐ磷酸化的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ放射自显影和外源底物磷酸化，观察烫伤大鼠早期胰岛素受体β－亚基自身磷酸化和受体酪氨酸蛋白激酶（ＩＲ－ＴＰＫ）活性变化。结果：３０％ＴＢＳＡⅢ°烫伤３ｄ大鼠肝和肌肉胰岛素受体β－亚基自身磷酸化能力明显下降；胰岛素受体ＴＰＫ活性亦明显降低并对胰岛素刺激的反应性明显减退。结论：胰岛素受体信号偶联障碍可能是烧（创）伤后胰岛素抵抗发生的分子基础。     

烧伤后胰岛素受体信呈传导缺陷机理的研究

目的：为了探索烧伤后胰岛素受体信号传递的缺陷的机理，以阐明烧伤胰素抵抗的分子基础，方法：采用ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层杆纯化大鼠肝脏和肌肉细胞膜胰岛纱受体，通过胰岛素受体蛋白γ－＾３２Ｐ磷酸化的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ放射自显影和外源底物磷酸化，观察烫伤大鼠早期胰岛素受体β－亚基自身磷酸化和受体酪氨酸蛋白激酶（ＩＲ－ＴＰＫ）活性变化，结果３０％ＴＢＳＡⅢ°烫伤３ｄ大鼠肝和肌肉胰岛素受体β－亚基自     

甜菜碱对大鼠肝细胞膜表皮生长因子受体及其酪氨酸蛋白激酶的作用

目的：研究甜菜碱对大鼠肝细胞膜表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＥＧＦ）受体及其酪氨酸蛋白激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＴＰＫ）活性的影响。方法：应用受体的放射配基结合分析法（ｒａｄｉｏｌｉｇａｎｄｂｉｎｄｉｎｇａｓａｙｏｆｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＲＢＡ），比较实验组和对照组之间１２５ＩＥＧＦ与其受体的结合情况；受体酪氨酸蛋白激酶活性测定法，以大鼠肝细胞膜可溶性蛋白为酪氨酸蛋白激酶来源，比较实验组和阴性组之间受体蛋白自身磷酸化作用的差异。结果：２６ｎｍｏｌ·Ｌ－１～５．２ｍｍｏｌ·Ｌ－１的甜菜碱均能抑制正常大鼠肝细胞膜ＥＧＦ受体与其配基的结合，这种抑制作用为非竞争性抑制；１０与１００μｍｏｌ·Ｌ－１的甜菜碱可激活酪氨酸蛋白激酶活性，而１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的甜菜碱则抑制酪氨酸蛋白激酶活性。结论：甜菜碱可以抑制ＥＧＦ受体与其配基的结合并影响ＥＧＦ受体的酪氨酸蛋白激酶活性。     

肝细胞生长因子对肝细胞酪氨酸蛋白激酶内源性底物的磷酸化作用

肝细胞生长因子对肝细胞酪氨酸蛋白激酶内源性底物的磷酸化作用侯伟健，王殿鸿（基础医学院生物化学教研室）关键词肝细胞生长因子，受体，酪氨酸，磷酸化作用肝细胞生长因子（Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＨＧＦ）是一种无种属特异性，对肝细胞增殖和...     

肝切除诱导c-met受体酪氨酸磷酸化及组织再生的调控机制

目的：探讨部分肝切除（PH）诱导残余肝细胞膜受体c-met酪氨酸磷酸化及肝再生的调控机制.方法：采用PH建立急性肝损伤再生模型,用免疫沉淀和免疫印迹等方法评价肝损伤后组织再生、功能恢复和c-met酪氨酸磷酸化的变化以及染料木黄酮对它们的影响.结果：急性PH能显著诱导膜受体c-met酪氨酸磷酸化,且在术后1 h升至最高（P＜0.05）;染料木黄酮能有效减少PH后早期c-met酪氨酸磷酸化,且抑制肝再生和功能恢复（P＜0.05）.结论：PH可能诱导c-met受体激活,参与肝细胞生长因子（HGF）介导的肝组织再生调控,且残余肝细胞内酪氨酸蛋白激酶的活性上调,对肝组织的再生及其损伤后的功能恢复有明显作用.     

大鼠骨骼肌胰岛素受体的部分纯化及其特征

目的：对大鼠骨骼肌胰岛素受体的结构和特征进行分析。方法：采用麦胚凝集素琼脂糖凝胶（ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）部分纯化骨骼肌胰岛素受体；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、胰岛素结合实验以及受体自身磷酸化和外源性底物磷酸化实验，分析受体的结构，并研究其特征。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明骨骼肌胰岛素受体由两处分子量分别为１３５×１０３ｕ和９５×１０３ｕ亚基组成；受体结合实验经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图分析表明受体与胰岛素结合呈负协同效应，最大结合容量为（０．９６±０．３４）ｐｍｏｌ／ｍｇ，受体β－亚基能自身磷酸化，且能激活受体内在酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性，并呈胰岛素剂量依赖关系。结论：ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ纯化的骨骼肌胰岛素受体纯度和活性较好，其结构和特征与其他组织胰岛素受体相同     

胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶在重度烫伤大鼠胰岛素抵抗中作用的研究

以３０％体表面积背部皮肤全层烫伤大鼠为模型，通过建立肝细胞膜和骨骼肌细胞膜外源性底物磷酸化的分析方法，观察烫伤后３ｄ胰岛素刺激的胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶海性的改变，探讨创伤后胰岛素抵抗的分子机理。     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素受体底物1的表达和酪氨酸磷酸化的影响

目的：探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响骨骼肌细胞的葡萄糖代谢。方法：分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠骨骼肌细胞。软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）与骨骼肌细胞共同孵育６、１２、２４ｈ，提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测胰岛素受体和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１）的蛋白水平，同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体β亚单位和ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化程度。结果：（１）软脂酸或油酸作用后骨骼肌细胞的胰岛素受体蛋白质表达量无改变。（２）骨骼肌细胞与软脂酸或油酸共同孵育１２和２４ｈ后胰岛素受体β亚单位的酪氨酸磷酸化显著降低。（３）骨骼肌细胞在软脂酸或油酸作用后各个时间点的ＩＲＳ１蛋白质量均明显降低。（４）骨骼肌细胞经软脂酸或油酸作用后ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化在各个时间点均显著降低。结论：游离脂肪酸可能通过抑制骨骼肌细胞的ＩＲＳ１蛋白质表达和胰岛素受体的酪氨酸磷酸化以及ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化阻滞胰岛素信号传导，引起骨骼肌胰岛素抵抗     

人胎肝刺激因子对肝毒剂致小鼠亚细胞器的功能变化的影响

人胎肝刺激因子具有明显的保肝作用。本文采用Ｄ－半乳糖胺及ＣＣｌ４损伤小鼠肝脏，进一步观察人胎肝刺激因子（ｈＨＳＳ）对肝损伤引起的微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶和混和功能氧化酶（Ｐ４５０）活性的保护作用，结果发现，肝损伤后，两种酶活性均明显降低，而预先经ｈＨＳＳ处理后，上述两种酶活性均有不同程度的恢复或增加。结果表明，ｈＨＳＳ的保肝作用，可能与保护肝细胞的钙稳定及加强肝细胞代谢酶活性有关。     

甜菜碱对大鼠肝细胞膜表皮生长因子受体及其酪氨酸蛋白激酶 …

目的；研究甜菜碱对大鼠肝细胞膜表皮生长因子受体及其酪氨酸蛋白激酶活性的影响。方法：应用受体的放射配基结合分析法，比较实验组和对照组之间＾１２５Ｉ－ＥＧＦ与其受体的结合情况；受体酪氨酸蛋白激酶活性测定法，以大鼠肝细胞可溶性蛋白为酪氨酸蛋白激酶来源，比较实验组和阴性组之间受体蛋白自身磷酸化作用的差异。     

Effects of insulin receptor tyrosine protein kinase on insulin resistance after scalding in rats

Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｏｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｆｔｅｒｓｃａｌｄｉｎｇｉｎｒａｔｓ￥（毛旭虎）（许霖水）ＭａｏＸｕｈｕ，ＸｕＬｉｎｓｈｕｉ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢ...     

Influence of berberine on protein tyrosine kinase of erythrocyte insulin receptors from type 2 diabetes mellitus

Objective： Bererine has been used to treat type 2 diabetes mellitus in Chinese traditional medicine because of its hypoglycemic effect. In this report, we compared the intrinsic tyrosine kinase activities of erythrocyte insulin receptors from type 2 diabetes mellitus with or without stimulation by berberine in vitro. Methods- Preparations containing insulin receptors were obtained from soluble human erythrocytes, and the insulin receptors were partially purified by affinity chromatography. The tyrosine kinase activity was measured by the exogenous substrate phosphorylation. Results： Both the membrane tyrosine kinase activity and the purified receptor tyrosine kinase activity from diabetics decreased significantly compared with those of normal individuals （reduced by 67.4% and 47.2%, respectively）. After incubation with berbefine, there is a statistical difference in the activity of membrane tyrosine kinase for diabetic patients （ a 150% increase）. Berefine had no effect on the tyrosine kinase activity of purified insulin receptors. Conclusion： We concluded from these results that berbefine was able to improve the insulin sensitivity by increasing the protein tyrosine kinase activity of membrane-bound insulin receptors from type 2 diabetes mellitus.     

人肝刺激因子对实验性急性肝损伤的保护作用及其机制的研究

从健康孕妇水囊引产4～6月龄的胎儿取肝,按 LaBrecque 法提取人肝刺激因子(hHSS)。将 hHSS 注入切除34%肝的 SD 大鼠腹腔,用~3H—胸腺嘧啶掺入肝 DNA 法,证实所提取 hHSS 具有生物学活性。用半乳糖胺(D—Gal)给昆明种小鼠造成急性肝损害。观察 hHSS 对这种急性肝损伤动物的保护作用及其机制。结果如下:(1)hHSS 明显降低 D—Gal 中毒小鼠的死亡率。(2)hHSS 显著降低 D—Gal 引起的血清 CPT 和 GOT 升高的幅度。(3)预先给 hHSS,则 D—Gal 引起的肝组织形态变化均减弱或不出现。(4)电子显微镜检查,hHSS 处理后由 D—Gal 引起的一些细胞器的变化均减轻或不出现。(5)hHSS 明显降低 D—Gal 所引起肝组织丙二醛的含量,说明 hHSS 有抗脂质过氧化作用。(6)hHSS 能保证膜流动性正常和脆性正常。根据上述实验资料,肯定了人肝刺激因子的存在,hHSS 具有保肝作用,其保肝机制为 hHSS 可抗膜脂质过氧化,保护肝细胞质膜、线粒体膜和微粒体膜的流动性和正常脆性。人胎肝产生 hHSS,hHSS 又可以保护肝细胞,这一肝细胞自我保护物质及其机制的阐明,对肝炎的防治可能具有应用价值。     

人肝刺激因子的提取及其保肝作用的初步观察

采用水囊引产眙儿(胎龄4～6个月),提取肝刺激因子(hHSS),用~3H—胸腺嘧啶核苷测其活性,观察到 hHSS 可使34%肝切除的大鼠对~3H—胸腺嘧啶核苷掺入再生肝 DNA 率明显增加。将 hHSS 预先注入半乳糖胺损伤的小鼠体内,结果观察到:hHSS 极明显地降低半乳糖胺中毒的死亡率(P<0.01),明显地抑制半乳糖胺所致的血清 GPT 和 GOT 的高水平。电镜检查表明,hHSS 可保护肝细胞的超微结构(线拉体、内质网等)免受半乳糖胺的损伤。这些结果证明,从人胎肝中可提取 hHSS,而 hHSS 具有保护肝脏免受肝毒剂—半乳糖胺的毒害作用。     

人胎肝刺激因子对大鼠实验性肝纤维化影响的研究

本工作从健康孕妇水囊引产４～６个月龄的胎儿取肝，采用ＬａＢｒｅｃｑｕｅ方法提取肝刺激因子，称人肝刺激因子（ｈｕｍａｎＨｅｐａｔｉｃＳｔｉｍｕｌａｔｏｒＳｕｂｓｔａｎｃｅ，ｈＨＳＳ）。将ｈＨＳＳ注入肝部分切除之大白鼠体内，用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入肝ＤＮＡ法测定其生物活性。结果表明，我们提取的ｈＨＳＳ刺激肝细胞ＤＮＡ合成较对照组增加６倍。采用皮下注射６０％ＣＣｌ４豆油溶液和饮用低浓度的乙醇制备慢性肝损伤动物模型，以观察ｋＨＳＳ对大鼠实验性慢性肝纤维化的影响。实验结果表明，（１）ｈＨＳＳ可以明显降低ＣＣｌ４－乙醇所致慢性肝损伤时肝组织羟脯氨酸含量的升高，在实验第２８、４２天差异具显著性（Ｐ＜０．０５，０．０１）。（２）病理组织学观察表明，ｈＨＳＳ可以明显降低ＣＣｌ４－乙致慢性肝损伤时肝组织纤维化的程度。在实验的第４２天差异具显著性（Ｐ＜０．０１）。本工作结果提示，肝再生刺激因子可能是一种有希望应用于临床治疗慢性肝病的生物制剂。     

G protein-coupled receptors as targets for prolactin actions

Prolactin (PRL) is known to be involved in a wide range of biological functions including osmoregulation, lactation, reproduction, and immunomodulation. The first step in PRL action involves its interaction with a specific membrane receptor that belongs to the cytokine receptor superfamily. In spite of the lack of a kinase domain, receptors of the cytokine superfamily induce tyrosine phosphorylation of cellular substrates including the receptors. The role of PRL in female reproductive functions is well known and a direct effect on ovarian and testicular steroidogenesis has been established. In the ovary, PRL binds to a specific membrane receptor and exerts an inhibitory effect on follicular steroidogenesis. This effect is the result of an impairment involving FSH stimulation of G protein-coupled receptors (GPCR) and cyclic AMP-mediated activation of aromatase cytochrome P450 gene expression. This observation may indicate a direct connection between tyrosine phosphorylation and follicle-stimulating hormone (FSH) receptor (FSHR) transduction pathways, as is the case for growth factor receptors with intrinsic tyrosine kinase activity, which share several downstream signaling elements with GPCRs. Some studies leading to our understanding of these pathways are reviewed.     

哇巴因诱导血液肿瘤细胞增殖的信号通路研究

目的揭示哇巴因诱导急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat增殖的信号传导途径.方法采用MTT、Western Blot等方法,观察哇巴因及不同激酶抑制剂对Jurkat细胞生长的影响,同时检测酪氨酸活化水平和丝裂原活化蛋白激酶MAPK（ERK1/2）的磷酸化程度.结果哇巴因促使Jurkat细胞膜酪氨酸磷酸化水平增高,并激活ERK1/2.激酶抑制剂PD98059,PP2,HerbimycinA和PP3均可阻断哇巴因诱导ERK1/2 的活化并抑制哇巴因诱导Jurkat细胞的增殖.结论哇巴因激活钠泵的信号传导功能,引起细胞膜酪氨酸磷酸化水平增高,MAPK（ERK1/2）信号途径级联样活化,从而导致Jurkat的增殖反应.Src激酶和EGFR参与了钠泵介导的信号传导.     

重组人肝刺激因子非融合性蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达和纯化

目的构建人肝刺激因子(human hepatic stimulator substance,hHSS)体外表达体系。方法hHSS基因片段经PstⅠ和NdeⅠ消化后,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pT7-7载体,通过限制性酶切图谱分析及DNA测序反应鉴定hHSS基因。再将pT7-7-hHSS表达载体转化到BL21(DE3)中表达,通过超滤膜及阴离子交换柱纯化,获得目的蛋白。结果表达产物在15 000处有一明显条带,蛋白质肽指纹图谱分析与预期结果相符,经Western blot杂交印证,该15 000蛋白质为hHSS。结论通过构建pT7-7-hHSS原核表达体系,能正确高效地表达hHSS。     

光动力疗法对H22细胞蛋白酪氨酸激酶及磷酸酶活性的影响

目的探讨光动力作用对肿瘤细胞信号转导系统的影响.方法运用放射免疫及酶联免疫的方法,检测光动力作用后H22细胞胞浆蛋白酪氨酸激酶及磷酸酶活性的动态变化,比较各组有无显著差异.结果光动力作用后,H22细胞蛋白酪氨酸激酶活性随时间的延续而出现先升后降的动态变化,而蛋白酪氨酸磷酸酶活性在光动力作用后则相应伴随有一个先降后升的动态变化.结论光动力作用能够促使H22细胞蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶的活性改变,反映了蛋白酪氨酸残基磷酸化与去磷酸化的即时调节机制,提示胞内信号转导系统的激活.