抗人肺腺癌单克隆抗体—天花粉蛋白新型免疫毒素的制备及体外抗肿瘤活性研究

应用异型双功能连接剂ＳＰＤＰ将抗人肺腺癌单克隆抗体ＣＭＵ１５Ａ与天花粉蛋白（ＴＣＳ）交联，制备出新型免疫毒素。应用的ＭＴＴ法检测其对人肺腺癌细胞系ＡＧＺＹ—８３Ａ的选择性杀伤活性。结果表明，ＣＭＵ１５Ａ—ＴＣＳ结合物具有高效靶向杀伤肺腺癌细胞能力，优于游离ＴＣＳ及单抗与ＴＣＳ混合物；与对非靶细胞的细胞毒作用相比较差异非常显著。提示该结合物是一种很有价值的免疫治疗剂，为今后的实验和临床应用提供了资料。     

抗CEA单抗与天花粉蛋白偶联物制备及其抗肿瘤研究

本文报道选用自制抗CEA单抗为载体,以结晶的天花粉蛋白为弹头药物经SPDP双功能交联剂偶联成免疫毒素。通过对免疫毒素纯化、鉴定、免疫活性和抗肿瘤效应测定,探讨其用于人结肠癌导向治疗可行性。     

抗人肺腺癌单克隆抗体—天花粉蛋白免疫毒素对荷人肺…

通过抗人肺腺癌单抗ＣＭＵ１５Ａ与天花粉蛋白的结合物即免疫毒素ＣＭＵ１５Ａ－ＴＣＳ对荷人肺腺癌裸鼠的导向治疗，观察了此免疫毒素在动物体内对实体瘤的导向性及靶向抑癌效果。结果：＾９９ｍＴｃ标记单抗经腹腔注射后２４ｈ在实体瘤内出现明显的靶向浓聚；此免疫毒素具有明显的靶向抑癌效果，腹腔用药和肿瘤内用药的抑瘤率分别为７６％和９９．４％；且可明显延长荷瘤裸鼠的生存时间；在整个疗程中未见明显的毒副作用发生。为免     

抗人T细胞CD3,CD7—PAPs免疫毒素的研制

选用抗人T细胞CD3、CD7两株杂交瘤细胞制备合单克隆抗体（McAb）腹水，经一系列免疫化学方法纯化、鉴定后，分别以SPDP为交联剂将两种McAb与商陆毒蛋白（PAPs）偶联，构建了两种抗人T细胞免疫毒素（IT）。鉴定结果表明，IT抗体活性保持良好，并能特异而高效地杀伤T细胞及T淋巴白血病细胞CEM。本结果为探讨单抗IT联合效应及其在异体／自体骨髓净化移植治疗白血病等方面的应用研究奠定了基础。     

抗人肺腺癌单克隆抗体—天花粉蛋白免疫毒素对荷人肺腺癌裸鼠模型的导向治疗

通过抗人肺腺癌单抗ＣＭＵ１５Ａ与天花粉蛋白的结合物即免疫毒素ＣＭＵ１５Ａ—ＴＣＳ对荷人肺腺癌裸鼠的导向治疗，观察了此免疫毒素在动物体内对实体瘤的导向性及靶向抑瘤效果，结果：￣（９９ｍ）Ｔｃ标记单抗经腹腔注射后２４ｈ在实体瘤内出现明显的靶向浓聚；此免疫毒素具有明显的靶向抑瘤效果，腹腔用药和肿瘤内用药的抑瘤率分别为７６％和９９．４％；且可明显延长荷瘤裸鼠的生存时间；在整个疗程中未见明显的毒副作用发生。为免疫毒素的临床应用提供了重要的基础资料。     

抗人T细胞单克隆抗体与商陆毒蛋白结合物的制备及其抗白血病细胞活性

将美洲商陆抗病毒蛋白通过二硫键与抗人T细胞单克隆抗体Wu71偶联制备免疫毒素。结合物经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫双扩散和间接荧光检测,表明该结合物对人T淋巴细胞白血病CEM细胞显示很强的杀伤作用,在10~(-9)mol/L浓度下可杀灭76.4%的靶细胞,而对抗原阴性的SP_2/O细胞杀灭作用很弱。~(14)C-亮氨酸掺入蛋白质合成抑制试验显示结合物在10~(-9)mol/L时可抑制72.4%的蛋白质合成。这一免疫毒素有可能用于白血病自体骨髓移植时白血病细胞的体外清除。     

免疫毒素EGF-TCSredlk的表达及其活性测定

目的 表达新型免疫毒素EGF-TCSredlk,并进行抗人胃癌细胞活性的初步测定.方法 利用大肠杆菌系统表达抗胃癌重组免疫毒素EGF-TCSredlk,表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化并进行特异性杀伤活性检测.结果 该新型免疫毒素以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化,应用四甲基偶氮唑盐...     

天花粉蛋白诱导人宫颈癌HeLa细胞调亡的分子机制研究

目的：利用基因芯片技术研究天花粉蛋白对人宫颈癌Hela细胞基因表达谱的影响,以深入探讨其作用的分子机制.方法：提取药物处理前后HeLa细胞RNA并逆转录成cDNA,在获得的cDNA上分别标记CY3和CY5两种荧光物质,然后与BiostarH-I 表达谱芯片杂交,扫描后对获得的数据用GenePix Pro 3.0软件分析.结果：两组间存在差异性表达基因78条,其中与细胞黏附及细胞间相互作用相关的MGST3、LGALS3BP等16条基因表达下降,与细胞凋亡密切相关的NOP56、TNFSF10、CASP9、DFFB等62条基因表达上调.结论：基因芯片技术能高通量分析天花粉蛋白作用于HeLa细胞的相关靶基因,为进一步揭示天花粉蛋白的抗癌机制提供了新的思路.     

人醛缩酶A单克隐抗体的制备及人肝癌醛缩酶A的纯化

本文提纯并鉴定了人醛缩酶A、B、C(human Aldolase A、 B、C,hA-LD-A、B、C)。用hALD-A和佐剂免疫Balb/C小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和P3-X63-Ag8.653骨髓瘤细胞用50％PEG作融合剂进行融合,融合率100％,用ELISA进行筛选,hALD-B、C作为阴性对照,选取仅对hALD-A有反应的阳性孔作克隆化,得到3株抗hALD-A的杂交瘤细胞株。克隆化的杂交瘤细胞扩增后注入经过降植烷处理的Balb/C小鼠腹腔。腹水经过盐析和DEAE-Cellulose52层析后,得到纯化的McAb,亚类分别为IgG2b、IgGI、IgM,腹水效价分别为1×10-11,1×10-8,1×10-9, 亲合常数分别为7.5×1010、3.5×109、2.3×109 3株细胞株分泌的单克隆抗体通过Im-munoblotting得到证实。 用McAb与CNBr-Sepharose 4 B偶合制合制成了亲和层析柱,从人肝癌组织中提纯了ALD-A。SDS-PAGE显示为单一区带,但其电涂迁移率较hALD-A滞后。     

天花粉蛋白体外诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:本研究探讨天花蛋白(Trichosanthin,TCS)对HL-60细胞凋亡的影响。方法:采用MTT比色法测定细胞的增殖抑制率;光学显微镜、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:TCS抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,随作用时间的延长、TCS浓度的增加,增殖抑制及促凋亡作用更加明显。结论:TCS对HL-60细胞有时间和剂量依赖性的细胞凋亡诱导效应。     

抗CD3、CD7单抗-PAPs免疫毒素的构建及其联合杀伤效应

[目的]应用抗人T淋巴细胞单抗(抗CD3和抗CD7),分别与商陆抗病毒蛋白(PAPs)偶联构成两种免疫毒素,并探讨这两种免疫毒素在体外联合对T淋巴细胞和T淋巴母细胞(CEM细胞)的杀伤效应。[方法]选用抗CD3和抗CD7杂交瘤细胞制备单克隆抗体腹水,经纯化后以SPDP为交联剂,将两种单抗分别与商陆抗病毒蛋白偶联构建成抗CD3和抗CD7单抗免疫毒素;分别以及联合后对T淋巴细胞和CEM细胞进行体外细胞毒试验。[结果]构建的两种单抗-PAPs免疫毒素活性良好,其特异性杀伤T淋巴细胞和T淋巴母细胞CEM细胞的效应比单一抗CD3-PAPs和抗CD7- PAPs更强,对照组仅有轻微的杀伤效应。[结论]成功地构建了抗 CD3和抗 CD7单抗-PAPs免疫毒素,及其不同抗原决定簇的单抗免疫结合物,并证明联合应用抗CD3-PAPs和抗CD7-PAPs免疫毒素有相加的杀伤效果。     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白(hLN)的单克隆抗体(McAb)。方法用纯化的人层粘连蛋白(hLN)作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验(ELISA)筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株(2A1、3B5、2C4、4D1),培养上清的ELISA效价分别为:1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为:1×106、1×107、1×106、1×105;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。     

胶滴肿瘤药敏检测技术在大肠癌治疗中的应用

从CD-DST的技术原理及特点;在大肠癌的临床治疗和科研中的应用等方面的应用进行综述。认为作为一种先进的体外药敏检测技术,在临床治疗和肿瘤的相关科学研究中有过成功的报道,但主要在肺癌和妇科肿瘤中多见,大肠癌中的应用还有待拓宽。大肠癌中的应用还有待拓宽。     

天花粉蛋白对宫颈癌HeLa细胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表达的影响

目的:研究天花粉蛋白对人宫颈癌HeLa细胞的诱导凋亡作用并探讨其对凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达的影响。方法:不同浓度天花粉蛋白分别处理Hela细胞24~72h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞周期,WesternBlot检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达。结果:天花粉蛋白对HeLa细胞的生长具有抑制作用,显微镜下观察到细胞圆缩,染色体凝聚等凋亡细胞的形态学改变,流式细胞仪直方图上亦出现特征性的亚二倍体峰,随着天花粉蛋白浓度的增加,Bax基因的表达增加而Bcl-2的表达减少。结论:天花粉蛋白可诱导宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,Bcl-2蛋白的减少与Bax蛋白表达增多可能是HeLa细胞凋亡的机制之一。     

抗CD4单抗-PAP免疫毒素对T淋巴母细胞样CEM细胞的体外效应

[目的]构建抗CD4单克隆抗体-商陆抗病毒蛋白(PAP)免疫毒素(抗CD4-PAP),分别在体外测定其对T淋巴母细胞样细胞CEM和对照Raji细胞的细胞毒杀伤效应.[方法]以SPDP为交联剂,将纯化的抗CD4单抗与商陆抗病毒蛋白交联成抗CD4-PAP免疫毒素,在体外分别与CEM和Raji细胞进行杀伤试验.[结果]10-9mol/L抗CD4-PAP对CEM细胞产生的细胞毒效应约为60%,而对Raji细胞的细胞毒效应低于10%.抗CD4-PAP免疫毒素在体外对骨髓单个核细胞的CFU无抑制效应,[结论]抗CD4-PAP免疫毒素对T淋巴母细胞样CEM有明显的抑制效应,可能替代抗CD3单抗作为器官移植抗排斥反应及导向免疫治疗T淋巴细胞白血病的临床治疗研究.