多药耐药相关蛋白1与人肝细胞耐砷性关系的研究

目的探讨多药耐药相关蛋白1（MRP1）与人肝细胞（L-02）耐砷性之间的关系。方法采用人肝细胞L-02细胞株,噻唑兰法（MTT）进行24h急性NaAsO2毒性试验,选择细胞生存率在90％～95％时的NaAsO2浓度为诱导浓度,同时设1组不加砷诱导的L-02细胞作为同步对照。置于细胞培养箱中37℃,5％CO2常规培养6周,定期换液传代,每周用MTT法计算半数致死浓度（LC50）及细胞的生存率;6周后,将加砷诱导的L-02肝细胞与同步对照细胞在培养基中培养至细胞80％融合,然后进行24h急性砷毒性试验（NaAsO2终浓度为0、2．5、5．0、10μmol／L）;采用real-time PCR检测细胞内MRP1mRNA的表达情况;MTT法检测细胞的存活率;石墨炉原子吸收光谱法检测各组细胞内总砷浓度。结果实验组细胞MRP1mRNA的表达明显高于对照组（P〈0．05）;24h急性砷毒性试验中,实验组不同砷浓度下细胞生存率和LC50明显高于对照组（均P〈0．001）;实验组细胞内总砷浓度明显较同步对照组低（P〈0．001）。结论L-02肝细胞具有可诱导的对砷的耐受性,其耐砷性与MRP1高表达有关。     

甲基莲心碱对人卵巢癌顺铂耐药逆转的体外研究

目的研究甲基莲心碱（Nef）在人卵巢癌耐药细胞SKOV3／顺铂（DDP）对DDP敏感性中的作用,初步探讨其化疗增敏的作用机制。方法采用MTT比色法筛选Nef对细胞株的无毒剂量,并测定Nef干预后SKOV3／DDP对DDP耐药性的变化;免疫细胞化学法检测Nef对SKOV3／DDP细胞GST-π竹蛋白表达的影响;RT—PCR法分析Nef作用SKOV3／DDP细胞株不同时间GST-π mRNA水平表达的差异。结果不同浓度DDP与Nef联合应用使DDP对SKOV3／DDP细胞IC50明显下降,且逆转倍数随药物作用时间延长而增大,24h、48h、72h分别为1．15、1．91、2．28倍（P〈0．01）;镜下SKOV3／DDP细胞较SKOV3细胞高表达GST-π,经Nef作用72h后其GST-IT表达明显下降（P〈0．01）;无毒剂量Nef作用1、3、5d后SKOV3／DDP细胞内GST-π mRNA转录水平随作用时间延长而降低（P〈0．01）。结论Nef能有效逆转SKOV3／DDP细胞的耐药性,其逆转机制可能与下调GST-π基因高表达有关。     

长期缺氧对肺腺癌SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶表达及耐药性的影响

目的 探讨长期缺氧对SPCA1细胞谷胱甘肽转移酶（GST-π）表达的影响及耐药性的改变。方法 SPCA1细胞常氧（20％O2）和缺氧（0．5％O2）条件下作用16h后，提取RNA和蛋白，用定量RT-PCR的方法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和GST-π mRNA的表达情况，用Western blotting法检测HIF-1α蛋白；制备细胞悬液，用流式细胞仪测定GST-π表达；通过克隆形成实验分析SPCA1细胞对阿霉素和丝裂霉素的药物敏感性。通过 RNA干扰技术下调HIF-1α表达后，分为对照组和干扰组，观察GST-π的表达。结果 设常氧组GST-π mRNA表达率为1，缺氧组为12．2。常氧组GST-π蛋白阳性表达率为（35．78±1．25）％，缺氧组为（72．13±2．11）％。与常氧组比较缺氧组HIF-1α表达明显增加。计算1％克隆存活的药物浓度，阿霉素处理细胞，常氧组浓度为（0．29±0．05）μg／ml；缺氧组浓度为（0．48±0．07）μg／ml；丝裂霉素处理细胞，常氧组浓度为（0．71±0．10）μg／ml；缺氧组浓度为（0．79±0．12）μg／ml。干扰HIF-1α后，HIF-π mRNA与对照组比较下降了70％，而GST-π mRNA稍有下降。GST-π蛋白表达常氧条件下对照组为（32．14±1．23）％，干扰组为（30．88±1．65）％；缺氧条件下对照组为（64．78±2．45）％，干扰组为（67．42±2．21）％。结论 长期缺氧可诱导SPCA1细胞HIF-1α和GST-π表达增加，对阿霉素耐药性增加，对丝裂霉素没有影响，HIF-1α和GST-π并没有直接的相关性。     

谷胱苷肽-S-转移酶-π表达对非小细胞肺癌化疗效应的影响及临床意义

目的探讨在非小细胞肺癌（NSCLC）患者中谷胱苷肽-s-转移酶-π（GST-π）表达与临床病理类型、分化程度、临床分期及其与化疗疗效的关系。方法用免疫组化方法检测50例肺癌组织中GST-π的表达,回顾性分析其与临床病理类型、分化程度、临床分期及化疗疗效的关系。结果GST-π的表达在肺癌组织中和良性肺组织具有显著差异（P〈0．05）,GST-π表达与肺癌组织病理类型、分化程度和化疗疗效有相关性,具有统计学意义（P〈0．05）GST-π在肺腺癌中阳性率的表达较鳞癌高（P〈0．05）,分化程度越高,表达越低（P〈0．05）,GST-π阴性表达组化疗有效率显著高于阳性组（P〈0．05）,而与TNM分期无相关性（P〉0．05）。结论GST-π阳性表达对指导临床NSCLC化疗有一定指导意义。     

膀胱移行细胞癌癌组织中耐药基因的表达及意义

目的探讨膀胱移行细胞癌癌组织中耐药基因的表达及意义。方法应用免疫组化法检测65例膀胱移行细胞癌中耐药基因P-糖蛋白（P—gp）、谷胱甘肽-s-转移酶（GST-π）、拓扑异构酶Ⅱ（TOpoⅡ）、胸苷酸合成酶（稿）的表达,并分析其与临床病理特征及预后的关系。采用Cox比例风险模型对上述基因的表达与预后关系行单因素和多因素分析。结果P-gp阳性45例,定位于肿瘤细胞膜和细胞质,与肿瘤组织类型、UICC分期有关（P〈0．05）;TOpoⅡ阳性20例,定位于细胞核,与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0．05）;GST-π阳性58例,定位于细胞质和细胞核,与各指标间均相关（P〈0．05）;TS阳性18例,定位于细胞质,与组织类型、淋巴结转移、UICC分期有关（P〈0．05）。多因素Cox比例风险模型分析示TOpoⅡ、GST-π表达与膀胱移行细胞癌患者预后有关（P〈0．05）。结论膀胱移行细胞癌中耐药基因表达水平对化疗药物的选择有指导意义;TOpoⅡ、GST-π可作为判断膀胱移行细胞癌患者预后的指标。     

GST-π在CagA阳性Hp感染胃黏膜组织中的表达

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染胃黏膜组织中谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）的表达及与Hp细胞毒力相关基因A（CagA）的关系。方法将198例慢性非萎缩性胃炎胃黏膜根据^13C呼气实验及病理切片改良Giemsa染色法分为Hp阴性组和阳性组，PCR扩增行CagA检测、免疫组化行GST-π表达检测。结果Hp阳性及阴性组中GST-π阳性率分别为52．78％、67．78％，组间比较有显著差异（P〈0．05）；Hp阳性组中，CagA阳性和阴性者GST-π阳性率分别为38．18％、67．93％，亦有统计学差异（P〈0．01），CagA阳性亚组中GST-π阳性率与Hp阴性组比较有显著差异（P〈0．01）。结论Hp感染可降低胃黏膜GsT-π的表达，削弱GST-π对胃黏膜损伤的保护作用，而CagA因子可能是其因素之一。     

保尔佳对白血病细胞系K562/A02耐药性的逆转作用

应用MTT法测定不同浓度保尔佳作用后，K562、K562／A02细胞对柔红霉素（DNR）的敏感性变化，流式细胞仪测定1．5μg／ml保尔佳对细胞内Rh123浓度及糖蛋白p-170、谷胱甘肽S-转移酶π（GST-π）多药耐药相关蛋白表达的影响。发现保尔佳在无毒剂量（1．5μg／ml）能增强DNR对K562／A02的毒性作用，逆转倍数为5．93倍；能增加K562／A02细胞内Rh123浓度，下调P-170、GST-π的表达。提示保尔佳是一种潜在的白血病化疗增敏剂。     

tBHQ对无机砷诱导HaCaT细胞凋亡中的保护作用

目的观察tBHQ对内源性线粒体凋亡通路和凋亡相关蛋白Bel-2等蛋白表达的影响,探讨tBHQ在无机砷诱导HaCaT细胞凋亡过程中的作用。方法采用分光光度法检测Caspase-3蛋白活力;Westernblot法分析细胞内Caspase-3、CytC、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果NaAsO2单独作用于HaCaT细胞24h,线粒体中CytC蛋白表达降低,而胞浆中CytC蛋白表达则随染砷剂量的增加而明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,线粒体中CytC蛋白表达明显恢复,胞浆中CytC蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而明显回落。此外,NaAsO。单独作用于HaCaT细胞24h,Procaspase-3蛋白表达降低,而Caspase-3活化程度均显著高于对照组（P〈0．01）,tBHQ预处理12h后再暴露于NaAsO2,Procaspase-3蛋白表达均明显高于相同浓度砷单独作用组,而且Caspase-3酶活力得到明显抑制,差异均具有统计学意义（P〈0．05）。NaAsO：单独作用于HaCaT细胞24h,与对照组相比Bcl-2蛋白表达降低,而Bax蛋白表达明显升高。tBHQ预处理12h后再分别暴露于NaAsO2,Bcl-2蛋白表达明显恢复,而Bax蛋白表达则随tBHQ剂量的增加而减少。结论tBHQ能够影响线粒体凋亡途径拮抗NaAsO2诱导的人皮肤角质细胞凋亡;tBHQ能够诱导调控凋亡相关蛋白Bcl-2／Bax从而发挥抗凋亡作用。     

ARG1基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路的影响

目的观察ARGl基因对染砷后293T细胞MAPK信号通路表达的影响,探讨其在肿瘤细胞耐药中的作用。方法取pcDNA3．1-ARG1．293T细胞（观察组）、pcDNA3．1-293T细胞（空白组）、293T细胞（对照组）,均以0、1、4、8μmol／L的NaAsO,染毒处理48h,采用Westernblot检测JNK、ERK蛋白。结果JNK表达量在转染前后各组均随着NaAsO,浓度的升高而增加,但观察组JNK明显低于空白组、对照组（P均〈0．05）;观察组ERK表达量在NaAsO：浓度1、4μmol／L随浓度升高而增加,在8μmol／L表达量有所下降,但各浓度仍均高于空白组、对照组（P均〈0．05）。结论ARG1基因可能通过参与ERK信号通路的激活,抑制JNK信号通路的表达,破坏MAPK信号通路对细胞增殖凋亡的精确调节,参与肿瘤细胞耐药的产生。     

当归多糖对肝细胞Hepcidin表达的影响

目的探讨当归多糖(ASP)对人肝癌细胞Hep G2和人正常肝细胞L-02 Hepcidin表达的抑制作用。方法体外培养Hep G2和L-02细胞,RT-PCR检测不同浓度(0、100、200、400 mg/L)的ASP诱导不同时间(0、24、48、72 h和96 h)对两种细胞Hepcidin mRNA影响。Western印迹观察400 mg/L ASP诱导96 h对两种细胞Hepcidin表达的抑制作用。结果与对照组(0 mg/L)相比,浓度高于200 mg/L ASP能够显著下调Hep G2和L-02细胞Hepcidin mRNA表达(P0. 001); 400 mg/L ASP连续作用48 h后对Hep G2和L-02细胞产生显著的Hepcidin抑制效应且抑制强度呈时间相关性; 400 mg/L ASP连续作用96 h后显著抑制Hep G2和L-02细胞Hepcidin表达(P0. 001)。结论 ASP可以抑制Hep G2和L-02细胞中Hepcidin的表达。     

无机砷对红系相关因子-2及其抑制因子mRNA表达的影响

目的观察亚砷酸钠（NaAsO2,sodium arsenite）对Chang肝细胞株核转录因子红系相关因子（nuclear factor ery-throid 2-related factor 2,Nrf2）及其胞浆抑制因子Keap1（Kelch-like ECH-associated protein 1）的mRNA表达水平的影响。方法分别以不同浓度NaAsO2（0、50、200、400μmol/L）暴露人类Chang肝细胞株12 h,采用AlamarBlue法测定细胞增殖活性,采用RT-PCR法测定Nrf2和Keap1的mRNA表达水平。结果 50μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性与对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）,而200μmol/L和400μmol/L NaAsO2暴露组的细胞增殖活性均显著低于对照组（P〈0.05）;50、200、400μmol/L的NaAsO2暴露12 h,Nrf2和Keap1的mRNA表达水平与对照组比较均显著下降（P〈0.05）,且呈剂量-反应关系。结论高浓度无机砷暴露能抑制Chang肝细胞株Nrf2和Keap1的mRNA表达水平,并可能与无机砷造成机体的高氧化应激水平有关。     

活性氧在亚砷酸钠诱导Chang肝细胞凋亡中的作用

目的研究在亚砷酸钠（NaAsO2）诱导人Chang肝细胞株的凋亡过程中细胞内活性氧（ROS）和还原型谷胱甘肽（GSH）的作用。方法通过流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,采用2′,7′-二乙酰二氯荧光素（DCFH-DA）检测细胞内ROS水平,应用DTNB法测定细胞内GSH含量。结果与对照组相比,在5～30μmol/LNaAsO2浓度范围内,随着NaAsO2浓度的增高,Chang肝细胞凋亡率、细胞内ROS水平及GSH含量均升高（P〈0.05） 5mmol/L N-乙酰半胱氨酸（NAC）可显著抑制NaAsO2诱导的细胞凋亡的发生（P〈0.05）及细胞内ROS水平的升高（P〈0.05）,但细胞内GSH含量继续升高（P〈0.05）。结论砷诱导的Chang肝细胞的凋亡可能主要取决于细胞内ROS的产生,而不是细胞内GSH含量的下降。     

胃癌多药耐药相关蛋白表达的临床分析

背景：胃癌对化疗药物原发或继发不敏感可致肿瘤多药耐药。目的：探讨胃癌组织中多药耐药相关蛋白P糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）-xL、Bcl-xL的表达及其意义。方法：收集胃癌手术标本113例,每例标本选取肿瘤组织、距病灶5cm以上的正常胃黏膜组织各1块。以免疫组化法检测多药耐药相关蛋白P-gp、GST-π、Bcl-xL的定位和表达,并与胃癌主要临床病理特征行相关性分析。结果：胃癌组织的P—gp、GST-π、Bcl-xL阳性表达率（48．7％对5．3％,P〈0．05;62馏％对25．7％,P〈0．05;83．2％对23．0％,P〈0．05）和高表达率（18．6％对0％,P〈0．05;23．9％对0％,P〈0．05;71．7％对0％,P〈0．05）均明显高于正常胃黏膜组织,胃癌组织P-gP、GST-π、Bcl-xL二者间表达呈正相关（P〈0．05）。胃癌组织GST-π、Bcl-xL阳性表达与肿瘤组织分化程度呈正相关（P〈0．05）．胃癌组织P-gP、GST-π、Bcl-xL表达与患者的性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移和临床分期均不相关（P〉0．05）。结论：胃癌组织多药耐药相关蛋白P-gP、GST-π、Bcl-xL表达与胃癌的发生相关,且肿瘤组织GST-π、Bcl-xL表达与分化程度呈正相关,可作为判断胃癌患者预后的指标．     

GST-π基因与胃癌病理类型及TNM分期的关系

目的探讨GST-π基因表达与胃癌病理类型及TNM分期之间的相关性及在胃癌早期诊断中的作用。方法采用免疫组化SP法，检测265例胃癌石蜡包埋的肿瘤蜡块中GST-π基因表达情况。结果正常胃黏膜中两种基因均无表达。GST-π基因表达阳性率为65．3％（173／265），与肿瘤病理学分型差异有显著性（P〈0．05），与TNM分期间差异无显著性（P〉0．05）。结论GST-π的阳性率为65．3％，在高分化胃癌组织中表达阳性率高于低分化癌、印戒细胞癌及黏液细胞癌，提示应注意临床化疗药物的敏感性。提高治疗效果。     

MRP3、GST-π在食管鳞状细胞癌中的表达及与预后的关系

目的研究肿瘤耐药相关基因MRP3、GST-π在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法应用免疫组化法检测76例食管鳞状细胞癌患者MRP3、GST-π的表达,同时回顾性研究这些表达与食管鳞状细胞癌发生、浸润及转移等临床病理参数的关系。应用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型分析其与患者预后的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中,MRP3在不同临床分期、有或无淋巴结转移组之间阳性表达率的差异有统计学意义（P〈0.05）;GST-π在不同临床分期、不同浸润深度组之间阳性表达率的差异有统计学意义（P〈0.05）。单因素生存分析表明,MRP3、GST-π阳性表达组的生存率虽低于阴性表达组,但差异无统计学意义（P〉0.05）。Cox模型多因素分析表明,肿瘤临床分期是影响生存期的独立因素（P〈0.05）。结论检测MRP3、GST-π的表达对食管鳞状细胞癌化疗方案的制定、判断预后有重要的指导意义。     

乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ的表达变化及意义

目的观察乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、PgP、GST-π、TopoⅡ的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测170例乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、PgP、GST-π、TopoⅡ,分析其与乳腺癌临床病理指标的关系。结果乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ的阳性表达率分别为51．76％、78．24％、43．53％、62．35％、62．35％。CerbB-2的表达与乳腺癌直径及淋巴结转移有关（P均〈0．05）,Ki-67、Pgp的表达与乳腺癌组织学分级、淋巴结转移有关（P均〈0．05）,TopoⅡ的表达与乳腺癌组织学分级有关（P〈0．05）。Ki-67的阳性表达与CerbB-2、TopoⅡ呈明显正相关（r=0．176、0．355,P均〈0．05）,Pgp阳性表达与TopoⅡ呈正相关（r=0．168,P〈0．05）。结论乳腺癌组织中CerbB-2、Ki-67、Pgp、GST-π、TopoⅡ均有较高表达;除GST-π外,均与乳腺癌的发展有关,是判断其预后的重要指标。     

肺癌患者GST-π基因表达的临床意义

目的 探讨肺癌组织谷胱甘肽-S-转移酶-π（GST-π）基因表达及其对化疗疗效的影响.方法 采用逆转录多聚酶链反应对60例经纤维支气管镜活检肺癌组织和20例非癌良性肺组织进行GST-πmRNA定量检测,肺癌患者行至少2个周期的铂制剂化疗.结果 肺癌组织GST-πmRNA表达阳性率（45.0%）明显高于良性肺组织（15.0% ,P＜0.05）,腺癌和鳞癌阳性率较高,分别为64.7%和45.5%,GST-πmRNA表达与肿瘤组织病理类型有相关性（P＜0.05）,GST-πmRNA阴性表达组化疗有效率（63.6%）显著高于阳性组（18.5%,P＜0.05）,组织GST-πmRNA表达与化疗疗效有相关性（P＜0.05）.结论 肺癌组织恶变过程中GST-πmRNA基因表达水平增加,GST-π可以作为肺癌耐药的预后因子,GST-π表达对临床化疗疗效判断有一定指导意义.     

用单细胞凝胶电泳观察氟砷单独及联合对淋巴细胞DNA损伤

目的 观察氟、砷单独及联合作用对正常人淋巴细胞DNA的损伤作用及特点。方法 采用单细胞凝胶电泳（SCGE）实验，观察不同剂量氟、砷单独及联合应用对正常人淋巴细胞DNA的损伤。结果 人淋巴细胞在浓度为0．1、0．5μmol／L的NaAsO2及浓度为10、50μmol／L的NaF染毒24h后，均引起明显的DNA泳动（彗星尾）并呈现明显的剂量-效应关系；氟砷联合作用淋巴细胞，在0．5μmol／L NaAsO2＋50μmol／L NaF的剂量下，细胞DNA的损伤呈现出协同作用（P〈0．01）。结论 NaAsO2与NaF均可引起DNA损伤；低剂量NaAsO2与NaF联合作用时，则呈现协同作用。     

大肠癌耐药基因与临床预后关系的探讨

目的探讨大肠癌耐药基因P-糖蛋白（P-gp）、谷胱甘肽-s-转移酶（GST-π）、拓扑异构酶Ⅱ（TOpoⅡ）、胸苷酸合成酶（TS）的表达及其与临床预后的关系。方法应用免疫组织化学方法检测71例大肠癌中P-gp、TOpoⅡ、GST-π、TS的表达。结果P-gp的表达与肿瘤组织类型、UICC分期有关（P〈0.05），与肿瘤浸润深度及淋巴结转移无关；TOpoⅡ的表达与肿瘤侵犯深度、淋巴结转移有关（P〈0.05），与肿瘤组织类型、UICC分期无关；GST-π的表达与各个指标之间均相关（P〈0.05）；TS的表达与组织类型、淋巴结转移、UICC分期有关（P〈0.05），与肿瘤侵犯深度无关。经多因素Cox比例风险模型分析显示：UICC分期、肿瘤组织类型及TOPOⅡ、GST-π的表达与大肠癌患者术后生存率有关（PS〈0.05）。结论大肠癌中P-gp、TOpoⅡ、GST-π、TS的检测对肿瘤化疗药物的选择具有重要意义；UICC分期、组织类型及TOpoⅡ、GST-π的表达可作为大肠癌患者独立的预后因素。     

PTEN基因在非小细胞肺癌中表达的临床研究

目的研究PTEN基因在人非小细胞肺癌中表达情况，探讨PTEN基因在人肺癌发生、发展过程中的可能作用。方法采用免疫组化方法检测143例非小细胞肺癌、20例正常肺组织及良性病变中PTEN蛋白表达情况。结果在正常肺组织及肺良性病变组织中无失表达：肺癌组织中失表达率57．34％（82／143），两者比较有显著性差异（P〈0．001）；肺癌组织中PTEN基因表达水平与肿瘤细胞分化程度、TNM分期、淋巴结转移程度存在相关性（P〈0．001）；PTEN蛋白失表达组．肺癌患者的术后五年生存率显著低于表达组（P〈0．001）；吸烟组患者PTEN基因失表达率显著高于无吸烟组（P〈0．001）。结论PTEN蛋白失表达与肺癌的发生、发展及预后有关；多因素分析PTEN基因失表达是影响非小细胞肺癌预后的独立因素。