姜黄素前体化合物诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的观察姜黄素前体化合物诱导膀胱癌细胞凋亡的生物学效应,并探讨其可能的机制。方法N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素、N-马来酰-甘氨酸酯姜黄素分别作用于人膀胱癌EJ细胞、肾小管上皮HKC细胞6~24 h后,采用台盼蓝活细胞拒染法检测细胞生长活性,透射电镜观察细胞超微结构改变,DNA片段化原位荧光标记技术、流式细胞术检测细胞凋亡及比率。结果10μmol.L-1~40μmol.L-1的N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素、N-马来酰-甘氨酸酯姜黄素作用6~24 h后,EJ细胞生长抑制率分别为6.11%~66.23%(P<0.05)、8.96%~68.21%(P<0.05),呈浓度、时间依赖性;部分癌细胞出现凋亡形态学改变,DNA直方图上可见“亚G1峰”,12 h细胞凋亡率分别为10.13%~23.36%(P<0.05)、12.42%~28.56%(P<0.05)。两种前体化合物对HKC细胞生长的抑制作用较同浓度姜黄素降低(P<0.05)。结论姜黄素前体化合物能在体外有效诱导膀胱癌EJ细胞凋亡,降低对正常二倍体细胞生长的抑制作用,为深入研制肿瘤靶向性化疗药物提供了新的途径。     

LY294002联合姜黄素对人膀胱癌EJ细胞的体外抑制作用

目的 研究磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)特异性抑制剂LY294002与姜黄素联合对体外培养的人膀胱癌EJ细胞的抑制作用.方法 用MTT法,检测姜黄素单独或联合PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002对人膀胱癌EJ细胞的抑制率;用流式细胞技术及Western blotting法,检测药物单独或联合...     

N-保护的甘氨酸活性酯的抗生育作用

最近研究证明,许多化学的和内源性的物质具有抑制精子顶体酶(Acrosin)的蛋白水解作用,因而减少卵细胞的受精机会。精子顶体酶的酶促作用与胰蛋白酶的蛋白水解作用相似,因而前者也可被胰蛋白酶抑制剂所抑制。小鼠阴道内每天给予10mg/kg 的一系列N-苯酯基甘氨酸、L-亮氨酸和 L-脯氨酸酯,它们的受精抑制率与 N-α-对-甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲酮及对-甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲酮一样都是100％。由于乙     

多胺合成抑制剂DFMO抗人膀胱癌EJ细胞增殖的实验观察

目的 :探讨多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸 (α- difluoeom ethyl- ornithine,DFMO)抗人膀胱癌 EJ细胞增殖的作用。方法 :活细胞显微摄影、伊红染色细胞计数、绘制细胞生长曲线方法。结果 :4m mol～ 8mmol DFMO可以抑制人膀胱癌 EJ细胞的增殖 ,并具有剂量依赖性 ;外源性腐胺可以阻止 DFMO上述作用。结论 :DFMO抗人膀胱癌 EJ细胞增殖的作用是通过抑制多胺生物合成而实现的 ;抑制多胺生物合成可能是治疗膀胱瘤的一种有效途径。     

羟基喜树碱对3种人膀胱癌细胞体外生长作用的实验研究

目的探讨不同浓度的羟基喜树碱(HPT)对3种人膀胱癌细胞(EJ细胞、T24细胞及5637细胞)体外生长的抑制作用。方法通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度HPT对EJ细胞、T24细胞、5637细胞体外生长的抑制率,从而筛选出能够抑制多种膀胱癌细胞体外生长的药物浓度。结果当加入的HPT浓度≥5ng/ml时,实验组3种膀胱细胞的OD值低于对照组,且呈剂量递减;生长抑制率高于对照组,且呈剂量逆增,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 HPT浓度在≥5ng/ml时对3种膀胱癌细胞体外生长有较好的抑制作用。     

阿糖胞苷5′-缬氨酸酯前体药物的小肠吸收机制

目的研究阿糖胞苷的5′-缬氨酸酯前体药物在大鼠小肠内的吸收情况。方法运用单向灌流模型研究药物在小肠内的吸收机制,利用高效液相色谱法测定药物和酚红在灌流液中的浓度。结果阿糖胞苷5′-缬氨酸酯前体药物的小肠渗透率是原药阿糖胞苷的10.6倍,在小肠内的吸收存在浓度依赖性,能够被小肠寡肽转运蛋白的专属底物头孢氨苄明显抑制。结论阿糖胞苷5′-缬氨酸酯前体药物是小肠寡肽转运蛋白的底物,在大鼠小肠内的吸收是由小肠寡肽转运蛋白介导的主动转运过程。     

姜黄素对人食管癌EC9706细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨姜黄素(Curcumin)对人食管癌EC9706细胞增殖、细胞凋亡及侵袭的影响及其分子机制。方法应用0、40、80、120、160μmol/L姜黄素处理EC9706细胞24~72h后,采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖抑制率;RT-PCR检测转录因子Ets-1及MMP9(基质金属蛋白酶)mRNA的表达。结果姜黄素作用后,EC9706细胞生长明显减慢,抑制率5.5%~76.2%(P<0.05),呈时间-剂量效应关系;Ets-1及MMP9 mRNA表达降低,且两者之间有相关性,有统计学意义(P<0.01)。结论姜黄素能明显抑制EC9706细胞的增殖及侵袭能力,其机制可能与抑制Ets-1及MMP9表达相关,这可能是姜黄素抑制肿瘤细胞增殖及侵袭的机制之一。     

抗溃疡药Dalargin

化学名 N_2-[N-[N-[N-(N-L-酪氨酰-D-丙氨酰)甘氨酰]-L-苯丙氨酰]-L-亮氨酰]-L-精氨酸合成本品是多肽化合物,用逐步增长多肽链的标准法合成,从游离精氨酸碳末端用取代氨基酸的活性酯开始,经以下中间化合物:苄氧羰基-亮氨酰基-精氨酸;苄氧羰基-苯丙氨酰基-亮氨酰基-精氨酸;苄氧羰基-甘氨酰基-苯丙氨酰基-精氨酸;苄氧羰基-D-丙氨酰基-甘氨酰基-苯丙氨酰基-亮氨酰基-精氨酸;苄氧羰基-O-苯基-酪氨酰基-D-丙氨酰基-甘氨酰基-苯丙氨酰基-亮     

胞壁酰二肽及其相似物和衍生物的结构与生物学活性

人工合成佐剂 N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺简称胞壁酰二肽(MDP)。1974年 Ellouz 等采用环丝氨酸抑制细胞壁的生物合成,使核苷酸前体积聚,从而得到 N-乙酰胞壁酰三肽,证明具有佐剂活性;他们进一步证明,Merser 等合成的结构更简单的 MDP 为细菌成分中表现佐剂活性所     

Tween-80并温热对人膀胱癌EJ/ADM的耐药逆转及作用机制

目的观察Tween-80合并温热对人膀胱癌阿霉素耐药细胞株的逆转作用及其机制。方法采用MTT法进行体外药物逆转实验,免疫细胞化学染色显示处理前后耐药细胞P-糖蛋白表达情况。结果①Tween-80合并41℃温热作用前后,EJ/ADM对抗癌药物阿霉素、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶等药物的敏感性显著增加(P<0.01);②Tween-80合并41℃温热能够协同抑制p-gp蛋白的表达。结论Tween-80合并41℃温热对人膀胱癌阿霉素耐药细胞的耐药性有逆转作用,逆转机制与其抑制p-gp蛋白的表达有关。     

Apoptosis-inducing effects of curcumin derivatives in human bladder cancer cells

Our aim was to prepare curcumin derivatives and study their apoptosis-inducing effects on bladder cancer cells in order to establish a basis for targeted chemotherapy of cancer. n-Maleoyl-L-valine-curcumin (NVC) and n-maleoyl-glycine-curcumin (NGC) were chemically synthesized. Intracellular esterase activity of the human bladder cancer EJ cell line and renal tubular epithelial (HKC) cells was examined by 6-carboxyfluorescein diacetate fluorometry. After incubation with NVC or NGC for 6-24 h, cell viability was detected by MTT colorimetry. Cell apoptosis and apoptotic rates were measured by acridine orange/ethidium bromide staining, TUNEL labeling and flow cytometry. Intracellular caspase-3 activities were determined by spectrophotometry. The esterase activity within EJ cells was 10.2-fold higher than that of HKC cells, which was abolished by bis-p-nitrophenylphosphate, an esterase inhibitor, resulting in decreases in NVC- and NGC-mediated cell viability arrest. For EJ cells, the IC50 values of NVC (20.1 micromol/l) and NGC (18.7 micromol/l) were close to curcumin (16.5 micromol/l). Meanwhile, their IC50 values on HKC cells were, respectively, 4.06- and 3.23-fold higher than curcumin. Moreover, NVC and NGC induced apoptosis of EJ cells by 10.13-23.36 and 12.42-28.56%, respectively. Administration of these two derivatives resulted in decreased apoptosis of HKC cells compared with curcumin. The caspase-3 activities of EJ cells, but not of HKC cells, were 5.21- and 5.63-fold enhanced by NVC and NGC, respectively. Thus, novel esterase-sensitive curcumin derivatives were synthesized, which induced extensive apoptosis of bladder cancer EJ cells, but not normal cells.     

姜黄素衍生物在体外的抗肿瘤实验

目的研究姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞株生长的影响。方法利用体外细胞培养模型,应用MTT法分析姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞生长的影响。结果姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞生长有一定的抑制作用,且具有剂量依赖性,但较姜黄素的抑制效应弱。结论姜黄素衍生物对不同肿瘤细胞生长具有抑制作用。     

5-氟尿嘧啶衍生物的合成及其体外抗肿瘤活性研究

目的设计合成5-氟尿嘧啶衍生物,并对其抗肿瘤活性进行评价。方法以5-氟尿嘧啶(5-FU)结构为基础,化学合成2-苄氧基-5-氟-4(3H)-嘧啶酮(2-BF),采用质谱(MS)、核磁共振氢谱(1H-NMR)及碳谱(13C-NMR)对其结构进行表征;MTT比色分析法比较2-BF与5-FU作用于人结肠癌细胞(SW620)及正常人肠上皮细胞(HIEC)后对细胞生长抑制率的影响及差异。结果 MS、1H-NMR和13C-NMR的结果确证合成化合物为目标产物;体外实验结果表明,2-BF(0.01～100μmol·L-1)作用于SW620细胞24h和48h后,其对细胞的生长抑制率分别为29.20%～64.96%、32.85%～72.26%,呈浓度、时间依赖性。在HIEC细胞中,高浓度2-BF(1、10、100μmol·L-1)的细胞生长抑制作用明显低于5-FU(P<0.01)。结论本实验成功合成了5-氟尿嘧啶衍生物——2-苄氧基-5-氟-4(3H)-嘧啶酮,不仅具有较好的抗肿瘤活性,且细胞毒性明显低于5-FU,具有潜在的临床应用价值。     

6′-羟基爵床定A对肿瘤细胞的抑制活性及其对肿瘤细胞氧化还原系统的影响

目的筛选对6′-羟基爵床定A(JR6)敏感的肿瘤细胞株并探讨其对细胞氧化还原功能的影响。方法将人膀胱癌细胞株EJ、肝癌细胞Bel、肺癌细胞A549、结肠癌细胞HCT-8和HT-29、胃癌细胞BGC、大肠癌细胞LS180、宫颈癌细胞HeLa、肝癌细胞HepG2以及乳腺癌细胞MCF-7分为正常对照组、阳性药对照顺铂、多柔比星、替尼泊苷、依托泊苷和5-氟尿嘧啶组及JR6组,细胞加入相应的药物培养48h后,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率并计算IC50值。选用对JR6与多柔比星作用敏感的人膀胱癌细胞EJ,加入相应的药物培养48h后,分别检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量。EJ细胞分为外源性SOD+多柔比星9.19μmol.L-1组和外源性SOD+JR63.02,9.07,27.2,81.7和245μmol.L-1处理组,其中SOD分别为0,1.9,5.6,16.7,50和150kU.L-1,MTT法检测细胞存活率。多柔比星9.19μmo.lL-1,JR612.3,49.0和196μmo.lL-1加入EJ细胞,24h后用激光共聚焦显微镜检测EJ细胞内活性氧类的含量。结果 EJ细胞对JR6较为敏感,IC50为57.1μmol.L-1,多柔比星对EJ细胞的IC50为4.08μmol.L-1。其余9种肿瘤细胞对JR6的IC50值为71.3～123μmol.L-1。与正常对照组比较,多柔比星9.19μmo.lL-1能明显降低EJ细胞内SOD,GSH-Px和CAT活性,分别降低了(64.3±2.1)%,(66.5±3.5)%和(49.6±1.9)%,而MDA的含量明显升高了(432.0±5.4)%(P<0.01);JR63.02,9.07,27.2,81.7和245μmo.lL-1使EJ细胞内SOD的活性分别降低了(7.28±0.3)%,(57.1±3.2)%,(66.5±4.7)%,(72.1±5.5)%和(77.8±2.4)%;GSH-Px活性分别降低了(20.3±1.6)%,(32.8±2.3)%,(45.3±3.6)%,(59.3±4.5)%和(71.9±4.2)%,CAT活性分别降低了(10.1±0.6)%,(15.9±0.7)%,(25.9±2.3)%,(38.8±3.5)%和(52.4±3.9)%;同时MDA含量分别升高了(24.4±1.3)%,(90.2±8.70)%,(217.0±19.0)%,(356.0±24.0)%和(539.0±32.0)%(P<0.05,P<0.01)。与无外源性SOD组比较,在外源性SOD存在时,多柔比星与JR6对EJ细胞的生长抑制率明显下降(P<0.05)。与正常对照组相比,多柔比星9.19μmol.L-1使EJ细胞活性氧类水平升高了(43.0±2.1)%,JR612.3,49.0和196μmol.L-1使EJ细胞ROS水平分别升高了(40.7±0.7)%,(84.1±6.3)%和(151.0±2.9)%(P<0.01)。结论人膀胱癌细胞株EJ对JR6最敏感;JR6通过干预细胞内氧化还原系统平衡抑制细胞的增殖,外源性SOD可以拮抗JR6对敏感细胞增殖的抑制作用。     

Effects of different carboxylic ester spacers on chemical stability, release characteristics, and anticancer activity of mono-PEGylated curcumin conjugates

We investigated the effects of different carboxylic ester spacers of mono-PEGylated curcumin conjugates on chemical stability, release characteristics, and anticancer activity. Three novel conjugates were synthesized with succinic acid, glutaric acid, and methylcarboxylic acid as the respective spacers between curcumin and monomethoxy polyethylene glycol of molecular weight 2000 (mPEG(2000) ): mPEG(2000) -succinyl-curcumin (PSC), mPEG(2000) -glutaryl-curcumin (PGC), and mPEG(2000) -methylcarboxyl-curcumin (PMC), respectively. Hydrolysis of all conjugates in buffer and human plasma followed pseudo first-order kinetics. In phosphate buffer, the overall degradation rate constant and half-life values indicated an order of stability of PGC > PSC > PMC > curcumin. In human plasma, more than 90% of curcumin was released from the esters after incubation for 0.25, 1.5, and 2 h, respectively. All conjugates exhibited cytotoxicity against four human cancer cell lines: Caco-2 (colon), KB (oral cavity), MCF7 (breast), and NCI-H187 (lung) with half maximal inhibitory concentration (IC(50) ) values in the range of 1-6 μM, similar to that observed for curcumin itself. Our results suggest that mono-PEGylation of curcumin produces prodrugs that are stable in buffer at physiological pH, release curcumin readily in human plasma, and show anticancer activity.     

姜黄素与甘草次酸联合用药的体外抗肿瘤作用

目的：研究姜黄素与甘草次酸联合用药的体外抗肿瘤作用。方法：采用MTT法,研究姜黄素、甘草次酸以及姜黄素和甘草次酸联合用药分别对人肝癌细胞株HepG-2、人乳腺癌细胞株MCF-7、人肺癌细胞株A549的细胞增殖抑制率,并计算出相应的IC50值。结果：得到姜黄素、甘草次酸以及姜黄素和甘草次酸联合用药对三种肿瘤细胞株的抑制率IC50值分别为：姜黄素（16.3～19.3μg.mL-1）;甘草次酸（11.6～36.1μg.mL-1）;姜黄素和甘草次酸联合用药（10.5～16.2μg.mL-1）。结论：甘草次酸可以显著加强姜黄素对HepG-2、MCF-7、A549癌细胞增殖的抑制作用,而且两者在癌细胞的增殖抑制方面表现出协同作用。     

蜂胶对小鼠移植瘤细胞株生长的抑制作用的形态学观察

目的 :探讨蜂胶对小鼠移植瘤 (S180)生长的抑制作用。方法 :用不同浓度的蜂胶饲料分组喂养小鼠2月后 ,在其腋下接种肿瘤细胞株 (S180) ,8天后 ,手术取出肿瘤组织称重 ,石蜡切片 ,HE染色 ,显微镜下观察形态学变化并在高倍镜下计数肿瘤细胞核分裂像。结果 :蜂胶实验组小鼠移植瘤重量较对照组显著减轻 (P<0 01) ,肿瘤生长抑制率B组为45 7% ,C组为66 0% ,D组为64 4 %。实验组肿瘤组织内核分裂像较对照组显著减少 (P<0 01) ,肿瘤组织周围淋巴细胞呈反应性增生。结论 :适量蜂胶饲养小鼠 ,对其移植瘤细胞株的生长有抑制作用。     

姜黄素与5-氟尿嘧啶联用对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响

目的　体外观察 5 氟尿嘧啶与姜黄素联用对人结肠癌HT 2 9细胞增殖的相互作用。方法　采用MTT法观察不同浓度姜黄素、5 氟尿嘧啶单独或联合应用对HT 2 9细胞生长的抑制作用 ,并利用中效原理判定两药合用的效果。结果　两种药物单独应用时 ,对HT 2 9细胞的抑制作用呈明显的剂量效应关系 ;对于HT 2 9细胞 ,姜黄素的中位抑制浓度为(32± 11) μmol·L- 1,5 氟尿嘧啶的中位抑制浓度为(10 4 0± 4 5 6 ) μmol·L- 1。应用中效原理分析显示 ,两药在联合应用时为协同效应 ,并且在不同的药物浓度配比下呈相同的趋势。增大姜黄素的用量可在更宽的效应范围内获得两种药物的协同效应。结论姜黄素与 5 氟尿嘧啶在联合应用时的相互作用为协同效应 ,本结果对于结肠癌的治疗具有一定的临床意义。