氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞及促血管平滑肌细胞增殖的机制

目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤及损伤条件培养基作用于血管平滑肌细胞(VSMC)的影响.方法 采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞内Ca2+、线粒体膜电位(MMP)、凋亡率及VSMC细胞周期各时相DNA含量、增殖指数.结果 ox-LDL致ECV304细胞活力降低,细胞内Ca2+浓度升高,MMP下降,细胞凋亡率明显增高；损伤条件培养基有明显促进VSMC增殖,与正常对照组比较有显著差异(P＜0.01,P＜0.001).结论 ox-LDL导致血管内皮细胞损伤,引起ECV304细胞内Ca2超载,致线粒体功能障碍,促进细胞凋亡；促进VSMC增殖.     

氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞与平滑肌细胞增殖相关性研究

氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low-densitylipoprotein,ox-LDL)损伤血管内皮细胞(VEC)是动脉粥样硬化(AS)形成的重要因素之一。VEC结构和功能的损伤及血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移是AS形成及发展过程中重要的病理生理改变。流行病学资料表明,血脂水平高于正常与AS的发生及冠心病(CHD)的发病率有密切的相关性,从而明确高脂血症是AS及CHD的危险因素。许多学者认为,VEC结构和功能损伤是AS发生的始动环节,VSMC增殖和迁移是AS发生及发展的关键病理环节。人们在预防和治疗AS过程中,不仅要着眼于改善低密度脂蛋白(LDL)的氧…     

血管内皮细胞与动脉粥样硬化的关系

血管内皮细胞 (VEC)是介于血液与血管壁之间的屏障 ,其损伤被认为是动脉粥样硬化 (AS)发病的早期关键性环节。Ross指出 ,AS的发生是由于VEC和平滑肌细胞受各种危险因子如病毒、机械损伤、免疫复合物 ,特别是氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)的损伤 ,而使血管局部产生的一种过度的慢     

紫杉醇对大鼠血管平滑肌细胞G_1-S检查点作用的研究

目的:探讨紫杉醇对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)和血管内皮细胞(VEC)G1-S检查点的作用。方法:将大鼠VSMC与VEC进行原代培养,50 nmol/L紫杉醇干预72 h后进行免疫荧光染色和蛋白印迹法检测。结果:同VEC相比,紫杉醇干预的VSMC中BrdU表达明显增加(均P0.05)。紫杉醇干预的VSMC中cyclin D1、P27表达高于VEC,P21表达较低(均P0.05)。结论:紫杉醇干预的VSMC同VEC相比,在增殖率与细胞周期调节因子表达方面具有明显差异,紫杉醇对VSMC G1-S检查点有特异性调节作用。     

内皮细胞脂质过氧化损伤增强主动脉平滑肌细胞表达细胞周期素D

为探讨细胞周期素D在主动脉平滑肌细胞中的表述规律，揭示动脉粥样硬化中平滑肌细胞的增殖机制，在培养的免主动脉平滑肌细胞中分别加入不同程度的内皮细胞损伤后的条件培养基，24h后分别收集各组的平滑肌细胞，进行免疫组织化学染色和细胞核的增殖试验。结果发现，主动脉平滑肌细胞可表达细胞周期素D，其免疫反应产物主要位于细胞核内。内皮细胞损伤后的条件培养基能明显促进平滑肌细胞表达细胞周期素D，同时细胞核增殖实验显示，该条件培养基亦能促进平滑肌细胞的增殖．以上结果提示主动脉平滑肌细胞的增殖与细胞周期素D的表达密切相关，损伤后的内皮细胞可通过促进血管平滑肌细胞表达细胞周期素D而诱导平滑肌细胞增殖。     

川崎病血清对血管内皮细胞表达血小板源生长因子及对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察川崎病血清对血管内皮细胞表达血小板源生长因子Ｂ链蛋白（ＰＤＧＦ－Ｂ）的影响，以及川崎病血清作用后的内皮细胞条件培养基对血管平滑肌细胞表达ＰＤＧＦ受体信使核糖核酸（ｍＲＮＡ）和对细胞周期的影响。方法：采用免疫细胞化学、核酸杂交和流式细胞分析方法。结果：川崎病血清能够强烈诱导内皮细胞表达ＰＤＧＦ－Ｂ；川崎病血清作用后的内皮细胞条件培养基能够显著促进平滑肌细胞表达ＰＤＧＦ受体ｍＲＮＡ，并强烈诱导平滑肌细胞增殖。结论：ＰＤＧＦ—ＰＤＧＦ受体途径的激活可能参与了川崎病冠状动脉并发症的形成。     

内皮细胞生长状态与血管平滑肌细胞增殖迁移能力的关系

目的 :探讨内皮细胞生长状态与血管平滑肌细胞增殖迁移能力的关系。方法 :通过建立细胞共培养体系 ,检测不同内皮生长状态对血管平滑肌细胞3 H TdR掺入、增殖细胞核抗原 （PCNA）蛋白表达、细胞迁移计数和α SM actinmRNA表达的影响。结果 :融合生长内皮使平滑肌细胞3 H TdR掺入量和PCNA蛋白表达明显降低 ,上调平滑肌细胞α SM actinmRNA表达 ;而对数生长内皮细胞使平滑肌细胞3 H TdR掺入量和PCNA蛋白表达明显升高 ,下调平滑肌细胞α SM actinmRNA表达。对照组平滑肌细胞在基础状态下存在少量迁移 ,对数增殖内皮细胞组平滑肌迁移数比对照组增高约 4倍 （P <0 .0 5 ） ,而融合生长内皮细胞组平滑肌迁移数仅为对照组的 0 .5倍 （P <0 .0 5 ）。结论 :内皮细胞生长状态不同 ,对平滑肌细胞生物学特性的影响也不同 ,增殖期内皮明显促进平滑肌细胞增殖迁移、下调平滑肌细胞α SM actinmRNA表达。     

瓜蒌皮提取物对人脐带静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究瓜蒌皮提取物（EPT）对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法在培养的人脐带静脉内皮细胞中加入OX-LDL（100mg／L）诱导内皮细胞损伤。检测细胞培养液中非对称性二甲基精氨酸（ADMA）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果体外给予OX-LDL（100mg／L）显著诱导内皮细胞损伤,提高培养液中ADMA、MDA、LDH、和TNF-α水平,降低NO和DDAH水平。两种洗脱（水和70％乙醇洗脱）瓜蒌皮提取物均能显著抑制OX—LDL所致的ADMA、MDA、LDH和TNF-α浓度升高和NO、DDAH降低。结论瓜蒌皮提取物对OX—LDL诱导的人脐带静脉血管内皮细胞损伤有保护作用,其保护作用与降低ADMA和TNF-α浓度有关。     

血脂异常导致血管内皮细胞的氧化损伤

在正常生理情况下，血管内皮结构完整、功能正常，一方面通过屏障作用阻止低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）等大分子物质和单核细胞等血液细胞成分进入动脉内膜，另一方面又通过产生前列腺素（PCI2）等活性因子发挥抗凝、抑制平滑肌细胞增殖等多种功能。血液中大量LDL在内皮下的沉积导致内皮细胞损伤、单核细胞浸润、血小板粘附聚集、刺激血管平滑肌细胞向血管内膜迁移与增殖，巨噬细胞吞噬脂质而形成泡沫细胞，逐渐发展成动脉粥样硬化斑块。因此，保护内皮细胞免受损伤是防治动脉粥样硬化发生发展的关键。     

阿托伐他汀对ox—LDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞妊娠相关血浆蛋白-A的影响

目的观察阿托伐他汀对氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）妊娠相关血浆蛋白-A（PAPP—A）的影响,探讨阿托伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）的机制。方法SD大鼠VSMCs体外原代培养,用不同浓度ox-LDL（75、150、300μg／ml）处理不同时问（2,12 and 24h）构建VSMC损伤模型。使用RT—PCR及Western Blotting测定VSMCs PAPP-A mRNA和蛋白的表达。观察阿托伐他汀干预后,VSMC PAPP—A mRNA和蛋白表达的变化。结果ox—LDL干预后,VSMCs PAPP—A mRNA和蛋向的表达呈剂量和时间依赖性升高;300μg／ml ox—LDL处理12h和24h后,PAPP—A mRNA和蛋白表达水平较对照组明显升高（P〈0．01）;而阿托伐他汀干预后,PAPP—A mRNA和蛋白表达明显下降（P〈0．01）。结论阿托伐他汀可以调控ox—LDL诱导的PAPP-A mRNA和蛋白表达,提示其抗AS的机制与PAPP—A有关。     

泽泻汤对氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察泽泻汤对血管平滑肌细胞(VSMC)周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E、增殖细胞核抗原(PCNA)和p27表达的影响,探讨泽泻汤在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的VSMC增殖中的作用和机制。方法通过体外50 mg/L ox-LDL诱导VSMC,建立VSMC增殖的动脉粥样硬化细胞模型;应用空白血清及20%泽泻汤含药血清干预。MTS法检测泽泻汤含药血清对VSMC增殖的影响;Western blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E、PCNA和p27表达水平。结果 50 mg/L ox-LDL可明显诱导VSMC增殖。与ox-LDL组比较,泽泻汤含药血清可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,下调细胞Cyclin D1、Cyclin E和PCNA的表达,同时促进p27蛋白表达。结论泽泻汤具有抗VSMC增殖的作用,机制可能与上调p27蛋白和抑制Cyclin D1、Cyclin E、PCNA表达有关。     

TLR4/MAPK信号途径在氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞表达白细胞介素6中的作用

目的 观察氧化型低密度脂蛋白对大鼠血管平滑肌细胞表达白细胞介素6的影响,探讨Toll样受体4/丝裂原活化蛋白激酶信号途径在这一过程中的作用.方法 氧化型低密度脂蛋白干预血管平滑肌细胞,然后分别经P38抑制剂sB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、JNK抑制剂SP600125、Toll样受体4阻断剂抗Toll样受体4抗体预处理.采用逆转录聚合酶链反应检测Toll样受体4和白细胞介素6的mRNA表达,用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中白细胞介素6的分泌水平,免疫蛋白印迹法检测ERK1/2、P38和JNK的蛋白表达.结果 不同浓度的氧化型低密度脂蛋白干预血管平滑肌细胞后,Toll样受体4mRNA及白细胞介素6的表述水平随氧化型低密度脂蛋白的浓度升高而升高(P<0.05).抗Toll样受体4抗体可以显著抑制氧化型低密度脂蛋白对ERK1/2、P38、JNK磷酸化水平的上调(P<0.01);预先经阻断剂SB203580、PD98059、抗Toll样受体4抗体处理后,白细胞介素6的表达水平明显下降,与未阻断荆组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),而SP600125对其表达没有影响.结论 氧化型低密度脂蛋白能够上调血管平滑肌细胞中白细胞介素6的表达水平,并可以通过启动Toll样受体4信号通路激活下游的ERK1/2,P38部分调节白细胞介素6的表达.     

芦丁抑制氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖

目的:探讨芦丁在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法:制备ox-LDL,采用贴壁法分离培养C57BL/6J小鼠的VSMC,将细胞分为对照组、芦丁组、ox-LDL组和芦丁+ox-LDL组,MTT法检测各组VSMC细胞增殖活性,Western blot检测VSMC中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)的表达情况。结果:芦丁组与对照组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均无明显差异(P均0.05);ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均显著高于对照组(P均0.05);与ox-LDL组相比,芦丁+ox-LDL组细胞增殖活性及p-ERK蛋白表达水平均明显降低(P均0.05)。结论:芦丁可能通过抑制ERK信号通路,抑制ox-LDL诱导的VSMC的增殖。     

Angiotensin II regulates the cell cycle of vascular smooth muscle cells from SHR

We have demonstrated that spontaneously hypertensive rats (SHR)-derived vascular smooth muscle cells (VSMC) show the exaggerated growth and produce angiotensin II (Ang II). In the current study, we investigated the role of endogenous Ang II in the regulation of the cell cycle in VSMC from SHR. Levels of Ang II in conditioned medium from SHR-derived VSMC cultured without serum were significantly higher than levels in conditioned medium from Wistar-Kyoto (WKY) rat-derived VSMC. Basal DNA synthesis was higher in quiescent VSMC from SHR than that in cells from WKY rats. An Ang II type 1 receptor antagonist, CV11974, significantly inhibited the elevation in DNA synthesis in quiescent VSMC from SHR but did not affect it in cells from WKY rats. Cellular DNA content analysis by flow cytometry revealed that the proportion of cells in S phase was higher, whereas the proportion of cells in G1+G0 phase was lower in VSMC from SHR than those in cells from WKY rats. CV11974 significantly decreased the proportion of cells in S phase and correspondingly increased the proportion of cells in G1+G0 phase in VSMC from SHR, but it did not affect the proportion in cells from WKY rats. Cyclin-dependent kinase 2 (CDK2) activity, which is known to induce the progression from G1 to S phase, was higher in VSMC from SHR than in cells from WKY rats. Expression of CDK2 inhibitor p27(kip1) mRNA was markedly higher in VSMC from SHR than in cells from WKY rats. CV11974 decreased expression of p27(kip1) mRNA in VSMC from SHR, whereas CV11974 increased it in cells from WKY rats. These findings indicate that enhanced production of endogenous Ang II regulates the cell cycle especially in the progression from G1 to S phase, and increases CDK2 activity, which is independent of p27(kip1) in VSMC from SHR.     

氨氯地平对平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达和胆固醇蓄积的影响

目的 观察氨氯地平预处理对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达的影响及其对胆固醇蓄积的作用,从新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用.方法 实验分为6组:对照组、氧化型低密度脂蛋白组、氨氯地平(0.1、1.0和10.0 μmol/L)处理细胞1 h后加入80 mg/L氧化型低密度脂蛋白共同孵育72 h组及10.0 μmol/L氨氯地平单独处理组,Western-blot和RT-PCR分别检测亲环素A mRNA和蛋白质的表达改变;油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量变化.结果 氧化型低密度脂蛋白处理组的细胞内亲环素A的表达明显减少;经氨氯地平处理后,随着氨氯地平浓度的增加,细胞内亲环素A的表达逐渐增加,10.0μmoL/L氨氯地平预处理细胞组效果最明显,较氧化型低密度脂蛋白组差异有显著性(P<0.05).油红O染色显示,氧化型低密度脂蛋白组细胞内大量脂滴形成,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值为57.9%,符合泡沫细胞特征;预先予氨氯地平处理后,随着药物浓度的增加,细胞内脂滴逐渐减少,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值逐渐降低,10.0μmol/L氨氯地平预处理细胞组效果最明显,为37.8%;结论 氨氯地平预处理,可上调氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A的表达,减轻细胞内的胆固醇蓄积.     

碱性纤维母细胞生长因子对血管平滑肌细胞增殖的影响

应用＾３Ｈ－ＲｄＲ掺入实验，ＲＮＡ印迹分析和反转录－多降酶链反应等方法观察碱性纤维母细胞生长因子对大鼠血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成及细胞增殖相关基因表达的影响，结果发现，碱性纤维母细胞增殖相关基因表达的影响，结果发现，碱性纤维母细胞生长因子作用于血管平滑肌细胞６ｈ后，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入开始增加，２４ｈ达到高峰，在一定浓度范围内，碱性纤维母细胞生长因子以血管平滑肌细胞的促增殖效应与浓度呈正相关。碱性纤维     

Angiotensin II increases the expression of lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1 in human vascular smooth muscle cells via a lipoxygenase-dependent pathway

BACKGROUND: Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1 (LOX-1) is a membrane protein that can act as a surface endocytosis receptor for oxidized LDL (ox-LDL). As increased cellular uptake of ox-LDL by macrophages and activated smooth muscle cells may transform these cells into foam cells, potential interactions among LDL oxidation, ox-LDL uptake, and regulators of vascular smooth muscle cell function are of obvious interest. The objective of this study was to examine the effect of angiotensin II (AII) on the expression of LOX-1 and ox-LDL degradation in human vascular smooth muscle cells (VSMC) METHODS: We performed in vitro experiments in a human VSMC line (T/G HA-VSMC) derived from normal aortic VSMC, using standards methods. RESULTS: We found that AII (10(-7) mol/L) increased the expression of LOX-1 (approximately 2.5-fold, P < .0001) in association with higher degradation of ox-LDL by HA-SMC (from 4019 +/- 529 ng/mg cell protein to 6207 +/- 287 ng/mg cell protein; P = .0033). AII also increased the expression of 12-lipoxygenase (12-LO) and 15-lipoxygenase (15-LO) by approximately 2.2-fold (P = .03) and approximately 3-fold (P = .006), respectively. In addition, AII (10(-7) mol/L) increased the release of 12- and 15-hydroxyeicosatetraenoic acid from VSMC within 10 min approximately 3-fold (P = .03) and 50% (P < .05), respectively. CONCLUSIONS: Our study findings provide evidence that angiotensin II upregulates LOX-1 and 12-LO and 15-LO expression in human VSMC, thereby potentially providing mechanisms for both accelerated LDL oxidation within the cell and the internalization of exogenous ox-LDL, two processes that could increase the susceptibility of human VSMC to further transformation into foam cells.     

联胺诱导内皮细胞的条件培养基对内皮细胞脂质过氧化物和诱导型一氧化氮合酶的影响

为了探讨内皮细胞的自分泌和旁分泌对受损内皮细胞的影响 ,以及下丘脑—垂体参与后对其的作用 ,将正常内皮细胞条件培养基、联胺诱导内皮细胞的条件培养基及下丘脑垂体细胞培养基加联胺诱导内皮细胞的条件培养基分别作用正常内皮细胞和受损内皮细胞 ,并检测其脂质过氧化物丙二醛和诱导型一氧化氮合酶表达的变化。结果发现 ,联胺诱导的内皮细胞条件培养基对受损内皮细胞丙二醛代谢有明显下调作用 (P <0 .0 1) ;而下丘脑垂体细胞培养基加联胺诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞和受损内皮细胞丙二醛代谢均有下调作用 (P<0 .0 1) ,其中对受损内皮细胞下调更明显。联胺诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞诱导型一氧化氮合酶的表达无明显调节作用 ,而对受损内皮细胞诱导型一氧化氮合酶的表达有上调作用 ;下丘脑垂体细胞培养基加联胺诱导的内皮细胞条件培养基对正常内皮细胞和受损内皮细胞诱导型一氧化氮合酶均有上调作用 (P <0 .0 5 ) ,其中对受损内皮细胞上调更明显 (P <0 .0 1)。结果提示 ,内皮细胞受到联胺脂质过氧化损伤时 ,其自分泌和旁分泌作用能下调其丙二醛的代谢和上调诱导型一氧化氮合酶的表达 ,这种调节作用可能是内皮细胞自身抗外来伤害的调节机制之一     

腹部脂肪组织分泌抵抗素样分子α促进清道夫受体表达

目的探讨腹部脂肪组织抵抗素样分子α(RELMα)mRNA及蛋白表达情况,研究其对与动脉粥样硬化密切相关的巨噬细胞清道夫受体B(CD36)及平滑肌细胞清道夫受体A(SR-A)表达的影响。方法取C57BL/6J小鼠腹部脂肪组织,体外培养巨噬细胞及平滑肌细胞,用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL,ox-LDC组)以及终浓度为3×10~(-6)mmol/L(A组)、9×10~(-6)mmol/L(B组)、2.7×10~(-5)mmol/L(C组)的RELMα刺激培养细胞,对照组加等量生理盐水刺激细胞。采用RT-PCR及免疫组织化学检测脂肪细胞内RELMα表达,采用流式细胞仪检测CD36及SR-A表达。结果小鼠腹部脂肪组织可见RELMαmRNA蛋白阳性表达。与对照组比较,ox-LDL组CD36荧光强度明显增强,SR-A表达阳性率明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,A、B、C组SR-A表达阳性率明显升高(P<0.05)。结论小鼠腹部脂肪组织能分泌RELMα,其不影响巨噬细胞CD36的表达,但能促进ox-LDL诱导的平滑肌细胞SR-A表达,提示腹部脂肪组织可能通过RELMα,影响SR-A表达从而促进动脉粥样硬化进展。