肝片吸虫抗原免疫小鼠后曼氏血吸虫成虫负荷的减少

曾报道肝片吸虫和血吸虫之间存在交叉反应抗原或是共同抗原,为了进一步了解用肝片吸虫免疫的小鼠对曼氏血吸虫尾蚴攻击感染所产生的保护作用,作者作了如下研究。从牛肝取肝片吸虫成虫,洗涤,匀化,冰冻干燥,然后将干虫粉与 pH7. 1,0. 01M 的磷酸缓冲盐水制成肝片吸虫成虫抗原(Fhw-     

肝片形吸虫:分子克隆、核苷酸序列以及编码与曼氏血吸虫脂肪酸结合蛋白类似的多肽基因的表达

已证明用肝片形吸虫成虫分子量12kDa的抗原性多肽(Fh12)免疫小鼠,再以曼氏血吸虫攻击感染,其虫负荷减少50%以上。而感染曼氏血吸虫的小鼠5至6周后产生抗Fh12的抗体,表明这种片吸虫来源的抗原是一种交叉反应性和交叉保护性的抗原。本文报告从牛的肝片形吸虫成虫在液氮     

可溶性曼氏血吸虫抗原和照射减弱疫苗对小鼠血吸虫病的免疫作用

本文比较了接种单剂肝片吸虫或曼氏血吸虫成虫可溶性提取物与照射减弱曼氏血吸虫尾蚴或童虫对小鼠曼氏血吸虫病的保护作用。并对吸虫抗原提取物与减弱尾蚴疫苗结合应用的免疫效果进行了评价。肝片吸虫成虫(Fhww)或曼氏血吸虫成虫(Smww)可溶性抗原提取物:肝片吸虫、曼氏血吸虫分别经生理盐水反复洗涤后制成匀浆,悬于Hank’s平衡盐溶液中。经超声处理后,在4℃、3000g离心30′,最后收集其可溶性部分。免疫时抗原提取物的蛋白浓度为     

用纯化成虫抗原免疫牛获得对肝片吸虫感染的抵抗力

作者从肝片吸虫成虫分离到肝片吸虫/曼氏血吸虫交叉免疫抗原(称为Fh_(smⅢ(M))),并研究了这一抗原免疫小牛后的免疫应答和对肝片吸虫攻击的抵抗力。从病牛胆道中收集肝片吸虫成虫,在冰冷0.01M磷酸缓冲液及蒸馏水中反复洗涤多次,在组织捣碎器中制成匀浆,50000×g离心1小时,收集上清液,通过亲和层析柱分离得到Fh_(smⅢ(M))。感染用的肝片吸虫囊蚴在显微镜下观察活力后计数,以滤纸裹成小丸,经口给予。实验用3～4月龄小牛,均经粪便检查未     

用肝片吸虫抗原使小鼠和仓鼠对曼氏血吸虫产生获得性免疫力

作者用肝片吸虫干粉浸出液(粗抗原)与佐剂按等体积比例制成乳剂,每周3次连续3周免疫接种小鼠和仓鼠。在末次免疫接种后1周用1%琼脂糖双向扩散试验测定小鼠血清中的沉淀抗体,证明全部接种的小鼠的血清中均有对同种抗原的沉淀素,而对照组则无。此外,用肝片吸虫成虫粗抗原接种的小鼠血清中,还存在着与曼氏血吸虫成虫抗原起反应的抗体,用间接血凝试验测定,其倒     

对流免疫电泳检查肝片吸虫感染

免疫扩散研究证实,感染肝片吸虫的人和啮齿动物的血清可出现沉淀抗体,成虫提取物与感染3～4周家兔血清用平板双向免疫扩散试验能产生沉淀带。Capron等(1964)指出,这类抗体的免疫电泳可作为肝片吸虫病免疫诊断的技术。作者采用同种成虫抗原和感染肝片吸虫4周家兔及人的血清,应用对流免疫电泳技     

埃及血吸虫感染的血清诊断和化学治疗对血清诊断试验的影响

作者以曼氏血吸虫、日本血吸虫、肝片吸虫和猪蛔虫的成虫以及曼氏血吸虫尾蚴作抗原进行间接红细胞凝集试验和补体结合试验,以曼氏血吸虫新鲜尾蚴作尾蚴膜反应,以感染曼氏血吸虫的小鼠肝冰冻切片为抗原作间接免疫荧光试验,以及用曼氏血吸虫成虫抗原进行琼脂双扩散试验,检查了取自利比里亚曼氏和埃及血吸虫病流行区某医院的埃及血吸虫病人血清。受检者按尿中有无埃及     

肝片吸虫谷胱甘肽转移酶对宿主的反应效应和无反应效应

谷胱甘肽转移酶(GST)在寄生虫实验疫苗研究中有重要意义。本研究旨在确定肝片吸虫(Fh)或曼氏血吸虫(Sm)免疫的不同种动物是否对肝片吸虫成虫GST(FhGST)产生抗体,并估价Fh的其它保护性抗原与FhGST间的关系。用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析法从Fh分离纯化FhGST,用SDS-PAGE,EITB及免疫扩散技术对FhGST进行生化及免疫学鉴定,并用ELISA及快速ELISA检测抗FhGST抗体和Fh排泄分泌抗原(FhES)     

肝片吸虫cDNA文库构建及诊断候选抗原基因筛选北大核心CSCD

目的构建肝片吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,筛选肝片吸虫病候选诊断抗原基因。方法构建肝片吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,利用感染肝片吸虫绵羊血清对该文库进行初筛和复筛。挑取阳性噬菌斑,PCR扩增后测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果成功构建了肝片吸虫成虫cDNA表达文库,初级文库库容约2×107pfu/800μl,插入片段长度为400bp～2 000bp,重组率约98%。共筛选和鉴定16个阳性噬菌斑,测序分析其中的2个为已报道的诊断抗原基因,4个为新发现的肝片吸虫病候选诊断抗原基因,10个为肝片吸虫未知抗原基因。结论成功构建了肝片吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,筛选获得4个肝片吸虫病候选诊断抗原基因,为肝片吸虫病早期诊断和检测试剂盒的研制奠定了基础。     

肝片吸虫cDNA文库构建及诊断候选抗原基因筛选

目的构建肝片吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,筛选肝片吸虫病候选诊断抗原基因。方法构建肝片吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,利用感染肝片吸虫绵羊血清对该文库进行初筛和复筛。挑取阳性噬菌斑,PCR扩增后测序,对测序结果进行生物信息学分析。结果成功构建了肝片吸虫成虫cDNA表达文库,初级文库库容约2×107pfu/800μl,插入片段长度为400bp～2 000bp,重组率约98%。共筛选和鉴定16个阳性噬菌斑,测序分析其中的2个为已报道的诊断抗原基因,4个为新发现的肝片吸虫病候选诊断抗原基因,10个为肝片吸虫未知抗原基因。结论成功构建了肝片吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库,筛选获得4个肝片吸虫病候选诊断抗原基因,为肝片吸虫病早期诊断和检测试剂盒的研制奠定了基础。     

肝片吸虫抗原免疫预防曼氏血吸虫感染的重新评价

以往,不少学者相继报告用不同的肝片吸虫抗原免疫,能使小鼠产生显著的抗曼氏血吸虫尾蚴攻击的抗力。作者用小鼠和大鼠进行了类似实验,同时,用血吸虫抗原进行同源免疫实验作对比,以期重现这一结论。各     

肝片吸虫成虫体外培养代谢抗原的研究

作者用肝片吸虫成虫体外培养法,制成代谢抗原,并用琼脂免疫扩散试验及酶联免疫吸附试验(ELISA)测定该抗原与实验感染的兔、大鼠、羊血清的血清反应;同时研究了抗原组分及其与不同宿主血清的各种反应。抗原制备:(1)全代谢抗原:从实验感染的羊胆管内移取肝片吸虫成虫约100条,在无菌条件下放入装有21199培养基的连     

肝片吸虫:Sp2/0(蠕虫:骨髓瘤)杂交瘤细胞分泌寄生虫抗原

寄生虫疫苗的制备和寄生虫免疫诊断,均需大量纯净的抗原。作者利用体细胞杂交瘤及体外培养技术,将肝片吸虫成虫细胞与BALB/C小鼠Sp2株骨髓瘤细胞融合,在HAT培养基中克隆、亚克隆,融合后分泌寄生虫抗原达1年。材料及方法:寄生虫和骨髓瘤细胞的融合、筛选和生长:肝片吸虫成虫用含抗生素的PBS洗涤数次,再剪成细小的碎片置于含     

盘电泳分析蠕虫蛋白质的初步观察Ⅱ.五种吸虫成虫蛋白组分的分析

本文选用常见寄生人体的5种吸虫——华支睾吸虫、卫氏并殖吸虫、日本血吸虫、姜片虫及肝片吸虫用盘电泳作虫体蛋白质组分的比较分析。日本血吸虫和卫氏并殖吸虫成虫取自实验动物,华支睾吸虫、姜片虫及肝片吸虫取自自然感染的动物。取虫后,分别制成粗制抗原。盘电泳用Davis(1964)法,采用6％     

两种片形吸虫成虫抗原组分分析及其免疫学鉴定

目的应用SDS-PAGE对肝片形吸虫和巨片形吸虫成虫蛋白组分进行比较分析,并Western blot检测其特异性蛋白分子。方法分别收集肝片形吸虫和巨片形吸虫成虫,冰上研磨匀浆,提取上清蛋白,采用SDS-PAGE分析肝片形吸虫和巨片形吸虫差异蛋白组分;应用Western blot检测特异蛋白组分。结果虫体蛋白经SDS-PAGE后采用Gel Doc XR+凝胶成像系统对电泳图像进行高灵敏度分析,巨片形吸虫和肝片形吸虫成虫均有37条带,低灵敏分析显示肝片形吸虫成虫蛋白主要7条带,巨片形吸虫成虫蛋白主要有6条带,相对分子质量集中在10×103~70×103。Western blot检测巨片形吸虫有6条反应带,分别在150×103、100×103、75×103、50×103、34×103、23×103等位置;肝片形吸虫5条反应带,分别在55×103、37×103、34×103、23×103、15×103等位置。与血吸虫、囊虫、广州管圆线虫、旋毛虫的交叉反应蛋白为75×103、100×103、75×103组分(巨片形吸虫)和60.34×103组分(肝片形吸虫)。结论肝片形吸虫成虫与巨片形吸虫成蛋白组成有差异不明显,抗原特异的蛋白在23×103、15×103等位置,且22×103~24×103组分占比较大(在在肝片形吸虫占48.4%,巨片形吸虫占77.3%)。其特异的蛋白酶类有待经质谱分析后用于诊断抗原及疫苗研究,而15×103组分可能是肝片形吸虫特有的可区别于巨片形吸虫的蛋白。     

肝片吸虫分泌抗原基因的克隆

本文报道从肝片吸虫成虫基因文库中筛选出 3个表达肝片吸虫分泌抗原的重组子,以及对 3个重组抗原基因初步表达的研究。平均长度 2.0 kb的肝片吸虫 DNA 的 San 3AI 部分酶切片段与 BamHI 酶切、脱磷的 pUC18载体连接并转化大肠杆菌 E.coli DH5α,构建肝片吸虫基因文库大小为 1.5×10~5 重组子。采用免疫印迹方法,用肝片吸虫分泌抗原制备的兔抗血清(1:50)和酶联 A蛋白(HRP-Protein A 1:40),经过初筛、复筛获得 3个反应较强的阳性克隆:pFH16,pFH23,pFH48。对这3个抗原基因表达产物的检测表明,重组子 pFH16 中抗原基因表达最强,pFH48 次之,pFH23 最弱。上述3个肝片吸虫分泌抗原基因的克隆为进一步研究抗原基因表达、重组抗原的免疫原性和动物保护试验打下了良好的基础。     

用放射变应原吸附试验研究曼氏血吸虫、日本血吸虫和肝片吸虫特异的血红蛋白酶的抗原性

许多学者已证实多种寄生蠕虫存在着特异的血红蛋白酶(HSP)。本文研究了曼氏血吸虫、日本血吸虫及肝片吸虫的特异的HSP抗原的性质。抗原三种成虫均用0.85%NaCl溶液洗3次后,在-20℃中保存待用。以Sauer和Senft(1972)的方法,分别提取3种虫体中     

四种吸虫成虫抗原的酶联免疫印迹分析

应用酶联免疫印迹分析姜片吸虫、肝片形吸虫、华支睾吸虫和日本血吸虫成虫抗原,结果显示,各种抗原的蛋白多肽均多达数十个成分,四种吸虫抗原与同源兔免疫血清产生颜色较深、数量较多(20～40条)的免疫反应区带,与其他三种异源免疫血清及日本血吸虫感染血清显示数量不等的交叉反应性区带。四种抗原共有10个特异的抗原性多肽。     

应用薄层免疫测定法作为血吸虫病血清诊断工具

本文介绍了最近发展的一种简单的血清学技术——薄层免疫测定(TIA),已初步应用于曼氏血吸虫病血清学诊断。抗原:曼氏血吸虫的粗制可溶性提取物,用活成虫加0.017M NaCl液磨碎,然后洗涤、冻干;虫体碎片配成悬液,离心后将上清波用蒸馏水透析、冻干。作特异性试验用的棘唇线虫、肝片吸虫、细粒棘球绦虫、鼠弓形     

肝片吸虫排泄-分泌型谷胱甘肽-S-转移酶的潜在作用

谷胱甘肽-S转移酶(GSTs)是与细胞解毒和许多生理及生物异源物质排泄有关的一多功能酶家族,已从如下蠕虫鉴定并纯化出GSTs,包括日本血吸虫、曼氏血吸虫、牛血吸虫、埃及血吸虫和肝片吸虫。肝片吸虫成虫