用双单克隆抗体ELISA定量测定人血清载脂蛋白B100

Kane等发现,载脂蛋白B100由肝脏合成,是血浆低密度脂蛋白(LDL)及极低密度脂蛋白(VLDL)的主要组成成份,占LDL蛋白质98%以上,在转运脂质及识     

用双单克隆抗体ELISA定量测定人血清载脂蛋白B100

Kane等发现,载脂蛋白B100由肝脏合成,是血浆低密度脂蛋白(LDL)及极低密度脂蛋白(VLDL)的主要组成成份,占LDL蛋白质98％以上,在转运脂质及识别脂蛋白受体上具有重要作用。大量资料证明,血浆LDL与动脉粥样硬化的发生关系密切。目前国内已报道用火箭电泳法及单向免疫扩散法检测血清apo B100。我们建立的人血清apoB100酶联免疫测定法灵敏可靠,简便易行。     

内源性高甘油三酯血症患者血浆VLDL、LDL及HDL对血凝的影响

目的：研究内源性高甘油三酯血症(HTG)患血浆极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)是否发生了氧化修饰及其对血凝的影响。方法：对2l例内源性高甘油三酯血症患与2l例年龄性别相近的正常人的血脂、脂质过氧化物进行了分析。用一次性密度梯度超速离心法分离血浆VLDL、LDL及HDL，测定这三种脂蛋白的234nm光吸收、相对电泳迁移率(REM)和硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)，分别将这三种脂蛋白加入由正常人新鲜混合血浆构成的反应系统中，按试剂盒分别测定凝血酶原时间(PT)及活化部分凝血酶原时间(APIT)。结果：内源性HTG患血浆TG含量平均升高2．73倍，HDLC下降l.7l倍，同时LPO升高1．22倍;HTG组VLDL、LDL及HDL的REM、234nm光吸收值、TBARS含量均较对照组显增加(P＜0．01)，表明内源性HTG患血浆VLDL、LDL及LDL均发生了氧化修饰生成Ox—VLDL、Ox-LDL.PT及APTT在分别加入HTG组的VLDL、LDL及HDL后均比加入相应正常组脂蛋白明显缩短(P均＜0．05)。相关分析表明，HTG组血浆VLDL及HDL相对电泳迁移率(REM)与PT呈负相关(P＜0．01)。结论：HTG患血浆VLDL、LDL及HDL发生了氧化修饰，并使PT及APTT明显缩短。     

脂质转运和脂酶水解对低密度脂蛋白的修饰作用

采用胆固醇脂转运蛋白（CETP）介导极低密度脂蛋白（VLDL）中甘油三酯（TG）与低密度脂蛋白（LDL）中胆固醇（CH）交换：再行脂蛋白脂酶（LPL）水解LDL中TG，对LDL进行修饰，引起LDL颗粒组成和大小的变化，探讨体内小而致密的LDL形成的可能途径，及易于致动脉粥样硬化（As）作用的机制。结果示CETP介导的脂质转运使LDL中TG含量增加，CH降低，颗粒直径轻微变大；再经LPL水解的共同作用，LDL中TG含量降低，颗粒变小。同时LDL中载脂蛋白B（apoB）免疫反应性也发生相应的变化，LDL中TG含量同apoB免疫反应性高度负相关。认为大而轻的A型LDL经修饰作用可转变为小而致密的B型LDL，富含TG的LDL不易于通过apoB受体途径清除，史易于氧化。     

Apo A-对LDL受体的表达作用

Brown等证明细胞LDL受体的表达是受细胞内外环境LDL胆固醇浓度的调控,当细胞在缺乏脂蛋白血清(LDS)中培养,LDL受体表达加强。因此,体外观察脂蛋白受体一直沿用LDS方法。作者曾报导国产人清蛋白(HSA)代替LDS,观察到LDL受体作用,并进一步比较了HSA、LDS、BSA(牛清蛋白)的作用,发现HSA>LDS>BSA,经鉴定发现HSA试剂中无脂质而含Apo A-I,BSA有脂质而无Apo A-I。提示在缺脂前提下,Apo A-I可能加强LDL受体表达作用,这种作用是否由于Apo A-I有接纳细胞内胆固醇外流的功能,为此,作者同时观察了不同量的Apo A-I对细胞内胆固醇外流及LDL受体表达作用。     

脂质体(Apo A-Ⅰ:PC)的制备、鉴定及其功能研究

Apo A-I是血清HDL的主要载脂蛋白成分,它对脂蛋白胆固醇代谢起重要作用。它可激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶,体外细胞培养可以观察到Apo A-I能接纳细胞内胆固醇外流,临床流行病学调查Apo A-I/Apo B比值高的人群少见冠心病,并认为Apo A-I可作为预测冠心病指标之一。我们曾观察到Apo A-I可使LDL受体表达加强,以上促使我们有兴趣制备脂质体(Apo A-I:PC),并观察它对细胞内胆固醇外流及LDL受体表达作用。     

载脂蛋白B基因位点遗传多态性对家族性高胆固醇血症病人血清LDL胆固醇水平的影响

载脂蛋白B(apoB)是一种由4 539个氨基酸组成的多肽,它在维持体内胆固醇平衡方面起着重要作用。apoB是乳糜微粒和极低密度脂蛋白(VLDL)的合成和分泌所必需的并在低密度脂蛋白(LDL)与LDL受体相互作用中起着配体的作用。血清中apoB水平升高,早发动脉粥样硬化风险就增加。apoB基因位于人的第2号染色体上,它的3’端     

载脂蛋白B100单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和应用

利用顺序超速离心法从正常人血浆中分离低密度脂蛋白,密度为1.030～1.05g/ml,免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合试验,成功地建立了3株持续稳定地分泌载脂蛋白B100单克隆抗体(Apo B100)的杂交瘤细胞系,并进行了鉴定分析。用纯化的ApoB100抗原进行ELISA实验,显示具有特异性;特异性阻断试验表明该抗体只能被Apo B100吸收及阻断;聚丙烯酰胺盘状电泳分析,杂交瘤腹水有一特异的明显区带;此外,进行了免疫球蛋白类型鉴定及柒色体检查。经临床应用,84例正常人血清Apo B100含量为78.64±34.75mg％;50例高胸血症患者为197.8±42.8mg％,两组平均值比较,差异非常显著(P<0.01)。Apo B100McAb可作为检测血清ApoB100的诊断试剂。     

人血浆载脂蛋白B——100抗原决定簇的研究

应用本室建立的8株抗人血浆载脂蛋白B单克隆抗体及竞争性液相放免测定法,发现在天然脂蛋白—VLDL、IDL及LDL的亲水性表面,至少存在3种不同的抗原决定簇,这对载脂蛋白B抗原结构的研究及其含量测定可能其育一定意义。     

负荷内源性高甘油三酯血症患者血清VLDL和LDL对HepG2细胞apoCIII受体功能的影响

目的和方法 :apoCIII在富含TG脂蛋白 (triglyceride-richlipoprotein ,TRL)的代谢中起重要作用 ,其过量表达往往导致血浆VLDL和TG浓度升高 ,并可能是引起内源性高甘油三酯血症 (hyperglyceridemia ,HTG)的重要原因。为了解apoCIII受体在HTG发病中的作用 ,本研究以 [12 5I]标记的apoCIII为配体 ,采用放射性配体饱和分析法 ,分别测定负荷HTG患者血清VLDL和LDL后HepG2细胞apoCIII受体的Kd 值及Bmax值 ,以探讨HTG患者血清VLDL和LDL对HepG2细胞apoCIII受体功能的影响。结果 :(1)与负荷血脂正常者血清VLDL组相比 ,负…     

血浆脂蛋白研究的某些进展

1929年,Macheboeuf首先从马血清中分离出一种含有脂类和蛋白质的物质,命名为“酸沉淀性Coenapse。其后,这种物质被称为脂蛋白。但直到1948年,脂蛋白的分类未超出α与β两类。进入50年代后,将超速离心法和电泳法用于脂蛋白的分离获得成功,脂蛋白被分为CM(原点)、VLDL(前β脂蛋白)、LDL(β脂蛋白)及HDL(α脂蛋白)等四类。尤其在发现冠心病(CHD)人血浆LDL升高、HDL降低后,血浆脂蛋白的研究引起人们极大的关注和兴趣。开始,人们的注意力集中在LDL与CHD的关系,对     

低密度脂蛋白诱导Raw264.7巨噬细胞后脂质筏中脂类物质组分的变化

目的研究Raw264.7细胞经低密度脂蛋白(LDL)诱导后脂质筏中脂类物质组分是否发生变化。方法蔗糖梯度超速离心得到对照组和实验组细胞中的脂质筏,气相色谱质谱(GC-MS)分析脂质筏中脂肪酸的变化;化学衍生脂质筏标志物-单唾液酸四己糖神经节苷脂(Ganglioside 1,GM1),高效液相色谱(HPLC)分析GM1的变化;胆固醇试剂盒检测脂质筏中胆固醇含量的变化。结果与对照组相比,经LDL诱导的Raw264.7细胞脂质筏中的单不饱和脂肪酸(MUFAs)组分中十六烯酸、油酸、二十四烯酸显著升高;多不饱和脂肪酸(PUFAs)组分中亚油酸、花生四烯酸和二十碳三烯酸显著降低;饱和脂肪酸组分中棕榈酸和硬脂酸显著升高,十四烷酸和二十烷酸含量无变化;GM1含量和胆固醇含量均显著增高,有统计学意义。说明LDL改变了细胞脂质筏的脂质微环境。结论 Raw264.7细胞脂质筏中的脂类物质可能与LDL氧化有关,有利于我们进一步研究LDL氧化过程中脂类物质的作用及其与蛋白质的相互作用。     

茶多酚对高脂环境中THP-1细胞核因子-κB、转化生长因子-β1 mRNA表达的影响

目的 :观察茶多酚 (TP)对单核细胞源性泡沫细胞核因子 -κB(NF -κB)、转化生长因子 - β1(TGF -β1)mRNA表达的影响。方法 :分别用极低密度脂蛋白 (VLDL)、低密度脂蛋白 (LDL)、氧化低密度脂蛋白 (ox -LDL)诱导人髓系白血病单核细胞株THP - 1细胞向泡沫细胞转化 ,加入TP干预后检测细胞NF -κB的核移位率、TGF - β1mRNA阳性指数、细胞内胆固醇含量等。结果 :茶多酚浓度为 0 4 - 4 0 μg/L时细胞NF -κB的核移位率、TGF - β1mR NA阳性指数、细胞内胆固醇含量等均低于未用TP干预的细胞 (P <0 0 5 )。结论 :一定浓度的TP对高脂环境中单核-巨噬细胞NF -κB活化、TGF - β1mRNA表达有抑制作用 ,并阻止泡沫细胞形成。     

基因芯片在宫颈癌、卵巢癌和乳腺癌相关基因表达研究中的运用

目的 应用基因微矩阵芯片筛查妇科恶性肿瘤相关基因表达。方法 分别提取癌组织和正常对照组织mRNA，分别用Cv3—dCTP和Cy5—dCTP经反转录荧光标记cDNA，获得两组探针，将探针混合后与基因芯片H40s(基因点数为4096点，上海联合基因公司提供)杂交，经严格洗片后用GenePix4000B扫描仪进行扫描，获得荧光信号图像，GenePixPro3．0图像处理软件对图像进行处理，获得两种组织中差异表达的基因信息。结果 在子宫颈癌组织中差异表达的基因24．61％(1008／4096)，其中表达降低(下调趋势)占11．28％(462／4096)；表达增高(上调趋势)占13．32％(546／4096)。在卵巢癌组织中差异表达的基因24．02％(984／4096)，其中表达降低(下调趋势)占12．67％(519／4096)，表达增高(上调趋势)占11．35％(465／4096)；在乳腺癌组织中差异表达的基因占9．67％(396／4096)，其中表达降低(下调趋势)占4．59％(188／4096)，表达增高(上调趋势)的5．08％(208／4096)。在3种癌组织中同时出现表达差异的基因有1．37％。结论 子宫颈癌、卵巢癌和乳腺癌有多种基因表达失衡。     

非酒精性脂肪肝CT表现及与血脂水平的相关性分析

目的探讨非酒精性脂肪肝患者肝脏CT值与血脂之间的关系。方法选取非酒精性脂肪肝患者43例及对照组30例,分别测量肝脏的CT值及血脂水平,然后进行统计分析。结果对照组及非酒精性脂肪肝组血中TG,HDL,LDL,VLDL之间差异有统计学意义(P<0.05),但血中的CHOL差别没有统计学意义,肝脏CT值与TG、CHOL、LDL、VLDL负相关,而与HDL正相关,即CT值越低,则TG,CHOL,LDL,VLDL越高,脂肪肝程度越重。TG、HDL、LDL在非酒精性脂肪肝轻、中、重组间有差距。结论非酒精性脂肪肝患者肝脏CT值与血脂水平密切相关,血脂水平的变化会导致肝脏CT值的变化。     

血浆脂蛋白对血小板功能的影响

脂蛋白和血小板同时与许多疾病的病理过程密切相关,包括动脉粥样硬化(冠心病)、血栓形成等。一般认为,高水的低密度脂蛋白(LDL)和低水平的高密度脂蛋白(HDL)以及血小板的高反应性是这些疾病发生发展的共同危险因素。对于以高水平LDL为特征的家族性Ⅱa型高脂血症患者的研究,更加明显地提示脂蛋白与血小板之间存在直接关系的可能性。来源于Ⅱa型高脂血症患者的血小板对许多生理刺激剂(包括肾上腺素、ADP、凝血酶、胶原等)诱导的聚集、释放以及花生四烯酸代谢的反应性均增高。能够降低血浆脂蛋白(LDL或极低密度脂蛋白VLDL)水平的烟酸和安妥明,同时也能降低Ⅱa型高脂蛋白血症患者的血小板高反应性。这些线索引起了人们对于LDL、HDL与血小板之间的直接关系进行深入探讨的兴趣。     

食管癌、胃癌组织低密度脂蛋白受体分析

低密度脂蛋白(LDL)与动脉粥样硬化的关系已熟为人知,但它与癌瘤的关系却研究较少,30年代就有人发现某些癌瘤患者伴有低胆固醇血症。现知血浆中的胆固醇主要存在于LDL中,而LDL主要是通过受体介导进入细胞降解的。采用密度梯度离心法分离LDL,用Iodogen法~(125)I二标记LDL,测定食管癌、胃癌的癌组织及相应的同体正常组织LDL受体水平。结果如下:(1)癌瘤组织蛋白质、DNA含量均明显高于正常组织;(2)     

编码脱辅基脂蛋白的CⅠ、CⅡ和E基因定位于人类19号染色体p13→cen区域

人体循环的脂蛋白按其水合物密度分为五类:乳糜微粒、极低密度脂蛋白(VLDL)、中密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)、和高密度脂蛋白(HDL).脂蛋白十分重要,因为它与甘油三脂、磷脂和胆固醇的转运和代谢有关.目前已分离出了八种脱辅基脂蛋白(apo),它们是:apoAⅠ、AⅡ、AⅣ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E.除apoB外,所有脱辅基脂蛋白的顺序都已清楚,它们都含有与水和脂环境相互作用的同源的两性α-螺旋区域.因此,有人主张apo蛋白质是由同一祖先重复而成的.apoAⅠ、     

糖尿病脂蛋白代谢的异常

高脂蛋白血症是动脉硬化发病的首要因素。糖尿病人动脉硬化发病率远较非糖尿病人高,约1/3的糖尿病人有高脂蛋白血症。糖尿病人血浆极低密度脂蛋白(VLDL),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及有时乳糜微粒(CM)升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)降低。载脂蛋白(Apolipoprotein简称Apo)是血浆脂蛋白的结构成分,是脂蛋白代     

低密度脂蛋白,高脂血清对内皮细胞膜脂流动性的影响

实验用DPH荧光偏振技术测定经人低密度脂蛋白(LDL)及兔高脂血清(HRS)孵育的牛主动脉内皮细胞(EC)的膜脂微粘度。结果表明LDL孵育EC12小时导致细胞膜脂流动性下降,过氧化脂质(Lpo)含量增高;EC经HRS作用36小时后也发生相似的变化。形态观察证明EC胞浆中有大量脂滴样结构。结果提示高胆固醇含量的LDL和HRS可能通过增加膜的胆固醇含量而降低膜的流动性,高浓度Lpo可能也起重要作用。