生物素—链毒亲和素免疫学测定地高辛间接包被方法的研究

笔得曾经成功地应用德国Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素小管建立了生物素－链霉亲和素测定地高辛的反应模型，本文用国产的甸霉亲和素自行包被，采用的是一种间接包被方法。首先人工合成ＢＮＨＳ－ＢＳＡ，将其先行包被于板上，然后加入６．２５μｇ／Ｌ的链霉亲和素溶液，室温（２０－２５℃）３ｈ，并应用到地高辛的临床检测中。     

生物素—链霉亲和素系统在检测HBe系统中的应用

应用链霉亲和素(SA)和生物素系统发展成ELISA 的改良法,用于检测HBeAg 和抗-HBe,取得较为满意的效果。标记SA—HRP 时,两者的重量比以0.5～0.8/1为佳,浓度以7μg/ml 时最为理想;SA-HRP 的反应时间以30 min 为适宜。本法和BA 法、普通法进行检测抗-HBe 的灵敏度比较,其相对灵敏度高于后二者。用Abbott 试剂作为标准。检测HBeAg 100人份、抗-HBe 87人份,其阳性、阴性及总符合率均高于BA 法和普通ELISA,BSA 法提高了方法的特异性及灵敏度,在应用上有着广阔的前景。     

生物素—链霉亲和素系统试剂在检测HBsAg中的应用

从ELISA用于检测抗原抗体以来,衍生的各种改良方法不断涌现,使乙型肝炎诊断技术逐步改进和完善。ELISA与生物素一亲和素系统的结合,增高了检测的敏感性,但由于亲和素(AV)对聚苯乙烯有较高的阴性显色,近几年,链霉亲和素(SA)的问世,     

链霉亲和素—生物素—ELISA方法的建立及其在HBsAg测定中的应用

根据链霉亲和素（ＳＡ）与生物素（Ｂ）之间有很强亲和力的原理，建立了ＥＬＩＳＡ板先用ＳＡ包被再与生物素化抗体结合的间接包被方法。通过试验，选择了生物素化白蛋白（Ｂ－ＢＳＡ）预包被，再连接ＳＡ以制备ＳＡ酶标板。应用生物素化的ＨＢｓ单抗及酶标记的抗ＨＢｓ单抗，建立了检测ＨＢｓＡｇ的ＳＡＢ－ＥＬＩＳＡ方法，得到良好的效果。     

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学发光法(CLIA)进行比较.方法根据EP9-A文件要求采集数据,并以相应软件分析这两种方法的相关性;同时对BSA-ELISA 的测定范围,变异系数(CV),最小检测限进行测定.结果两种方法测定的结果具有较好的相关性,回归方程y=0.985X-0.131,相关系数(r)=0.997.PSA的批内平均CV为2.21%,批间平均CV为3.08%.测定范围为1.50～85.μg/L.最小检测限为0.30μg/L.结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好,结果稳定,偏差小,可以在临床上常规应用.     

酶联反应板包被链霉亲合素的优化方法

目的对链霉亲合素(streptavidin,SA)预包被酶联反应板的优化方法进行研究,比较干法、湿法包被的优越性。方法通过对包被缓冲液、SA浓度、17种市售反应板的比较试验,得出SA包被的较优条件。结果选择洁特高亲和力板,采用碳酸缓冲液干法包被,37℃温育16 h至全干,达最佳包被效果,此时SA浓度为2μg/ml。干法包被的孔间差2.95%,批间差7.37%,37℃保存7 d结合生物素的效果无显著改变。生物素结合量为每孔1 ng,是国产SA预包被反应板的5倍。结论用干法预包被SA优于传统的湿法包被,效果等同甚至超过现有进口SA预包被板。     

生物素-链霉亲和素酶免疫法PSA测定的评价

目的 评价生物素-链霉亲和素酶免疫分析法(BSA-ELISA)测定前列腺特异性抗原(PSA)并与化学，发光法(CLIA)进行比较。方法根据EP9-A文件要求采集数据，并以相应软件分析这两种方法的相关性；同时对BSA-ELISA的测定范围，变异系数(CV)，最小检测限进行测定。结果两种方法测定的结果具有较好的相关性。回归方程Y=0．985X-0．131，相关系数(r)=0．997。PSA的批内平均CV为2．21％，批间平均CV为3．08％。测定范围为1．50～85．00μg／L。最小检测限为0．30μg／L。结论采用全自动酶免疫分析仪的BSA-ELISA与CLIA自动分析仪测定PSA的相关性好，结果稳定，偏差小，可以在临床上常规应用。     

降钙素原生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法的建立

目的建立生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析（biotin．streptavidinamplifiedELISA,BA．ELISA）法半定量检测人血清中降钙素原含量。方法通过双抗体夹心法,结合生物素一链霉亲和素系统的放大作用,建立降钙素原的半定量检测方法。并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的最低检测限为0．12mg／mE,线性范围为0．12～20ng／mL,回收率为98．59％。分析内和分析间变异系数分别为4．9％～16．8％和7．1％～14．9％。与降钙素原结构类似物及血清中常见的干扰物质特异性良好。通过对73例血清样本进行检测分析,当阈值为0．5ng／mL时,敏感性和特异性分别为100％和96．0％。结论本研究建立的降钙素原生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附分析法具有灵敏、简便、准确等特点,具有良好的应用前景。     

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用.方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(bio-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认McAb、bio-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法.用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率.结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100 μg/L和2.0 μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1∶ 20和1∶ 40,bio-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10～15 μg/ml和15 μg/ml.20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2+CD4+/IL-4+CD4+比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26.结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态.妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关.     

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法(BSA-ICC)并作临床初步应用。方法从健康人外周血单个核细胞(PBMC)中富集CD4细胞,加入莫能霉素,用不同浓度的佛波醇酯(PMA)和钙离子载体(A23817)诱导CD4细胞不同时间,比较其胞内表达白细胞介素-2(IL-2)/白细胞介素-4(IL-4)的细胞百分率,确定最适诱生条件;用不同稀释度的IL-2M cAb、IL-4M cAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG(b io-SAM IgG)和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素(HRP-SA)作棋盘配比试验,确认M cAb、b io-SAM IgG和HRP-SA的最适浓度,根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA-ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2/IL-4细胞的百分率。结果诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2.0μmol/L,诱导高峰时间分别为5和7 h,BSA-ICC法中所用IL-2M cAb、IL-4M cAb最适稀释度分别为1∶20和1∶40,b io-SAM IgG和HRP-SA浓度分别为10~15μg/m l和15μg/m l。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为(45.90±4.39)%、(37.28±2.67)%和(25.19±3.49)%,分泌IL-4的细胞百分率分别为(10.5±1.50)%、(9.94±1.06)%和(16.13±2.50)%,IL-2 CD4 /IL-4 CD4 比值分别为3.65±0.94、3.55±0.76和1.27±0.26。结论所建方法可用于T辅助(Th)细胞亚型的测定,从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化,呈Th2反应,可能与恶性肿瘤的发生有关。     

生物素对生物素-链霉亲合素免疫分析系统干扰的研究进展

外源性生物素对生物素-链霉亲合素免疫分析系统的干扰现象,近几年广受关注。使用该系统方法进行检测的常规项目,如激素、心肌标志物和肿瘤标志物,可受到生物素不同程度的干扰,导致结果异常,甚至造成疾病的误诊或误治。该文对生物素的应用及其干扰生物素-链霉亲合素免疫分析系统的情况进行概述,并分析消除干扰的对策。     

外源性生物素对基于生物素 - 链霉亲和素化学发光技术干扰的研究进展

基于生物素 - 链霉亲和素系统的化学发光技术被广泛应用,但外源性生物素会对其产生干扰,这种干扰与多种因素相关,如反应模式、检测平台、检测项目和反应体系中的相关要素等。这些因素任何一种发生改变都将对干扰产生不同程度的影响。及时准确的识别干扰有助于减少临床误诊和漏诊。该文对国内外所报道的影响干扰的因素进行综述,为临床实验室人员提供借鉴。     

生物素—亲和素系统检测华支睾吸虫特异性抗体的研究

用ABC-ELISA检测华支睾吸虫粪检阳性病人130例,粪检阴性受试者201例及其他疾病82例、并和粪检及另外两种血清学方法(SPA ERASA、常规ELISA)比较:和粪检阳性符合率93.08％,阴性符合率63.37％;ABC-ELISA的阳性反应强度是常规ELISA的1.31倍(p<0.05),其平均几何滴度是SPA-ELISA的1.77倍(p<0.05),特别在轻度感染病人,ABC-ELISA的平均几何滴度明显高于后两种血清学方法;而且非特异性反应较低。     

结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用

目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.     

核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

目的 克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因.方法 人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的 蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性.结果 人工合成的354bp DNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因.将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物.SDS-PAGE显示目的 蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符.在非变性条件下纯化目的 蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果 表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当.结论 成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因.     

生物素对生物素-链酶亲合素免疫分析系统干扰的研究进展

外源性生物素对生物素-链酶亲合素免疫分析系统的干扰,近几年引起了关注。对使用该系统方法进行检测的常规项目,如激素、心肌标志物和肿瘤标志物检测结果受到生物素不同程度的干扰,导致结果异常,甚至造成疾病的误诊或误治。本文对生物素的应用及其干扰生物素-链酶亲合素免疫分析系统的情况及其对策进行概述。     

应用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统检测抗环瓜氨酸肽抗体

目的用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统建立一种敏感、特异、经济简便的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的测定法。方法用链霉亲合素(SA)预包被,使生物素化的CCP(bio-CCP)固相化,摸索检测抗CCP抗体的最优实验条件,并进行方法学考核和临床应用评价。结果本法对类风湿关节炎(RA)的诊断敏感性为69.4%,特异性为96.8%,阳性预测值为89.1%,阴性预测值为94.1%,阳性似然比为19.28,阴性似然比为0.317,Youden指数为0.658。与欧蒙试剂比对,两法所测抗CCP抗体吸光度/cutoff比值显著相关(n=61,r=0.9253,P<0.001)。在所统计的168例血清样本中,两法同时阳性者60例,同时阴性者105例,一致性百分率达98.2%,结果具有高度一致性(Kappa=0.961,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示本法所测抗CCP抗体对RA诊断准确性达到了一个较高水平(AUCROC值=0.901)。在13例诊断为早期RA者中,有10例抗CCP抗体阳性(阳性率76.9%),未发现抗CCP抗体与RA患者临床症状、疾病活动指标(ESR)及RF水平有关。结论成功将生物素-链霉亲合素ELIS...     

检测烟曲霉菌GM抗原生物素-亲和素-夹心酶联免疫吸附试验法的建立

本研究用重组烟曲霉半乳糖甘露聚糖 (ＡＦＭＰ1) ,制备免疫血清 ,建立一种以生物素 亲和素 (ＢＡ)系统为基础的夹心酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)法 ,快速检测烟曲霉ＧＭ抗原[1] 。一、材料与方法1.动物和菌株来源 :家兔和豚鼠购自第一军医大学动物所 ,表达ＧＳＴ ＡＦＭＰ1融合蛋白ＢＬ2 1菌种及全部真菌标准株均由香港大学微生物系提供。2 .主要试剂 :ＧＳＴ融合蛋白纯化试剂盒、ＰｒｏｔｅｉｎＧＳｅｐｈａｒｏｓｅ 4Ｂ和ＥＣＬ底物显色剂 (ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａ公司 ) ,弗氏佐剂 (Ｓｉｇｍａ产品 ) ,活化Ｓｕｌｆｏ ＮＨ…     

CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测方法的建立

目的:建立CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法,进行方法学评价.方法:纯化卵巢癌患者腹水得到CA125抗原,制备生物素化CA125抗体,酶标板包被生物素化BSA,建立BA-ELISA反应系统.观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定性等指标.测定卵巢癌患者以及卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,与化学发光免疫检测结果对比.结果:BA-ELISA方法灵敏度为3.18 U/L,与CEA、PSA等交叉反应率低;高低浓度样品平均回收率分别为107.11%、99.96%,批内和批间变异分别为7.97%、8.04%,稳定性好.本研究与化学发光免疫检测检出结果差异无统计学意义,检测卵巢癌患者血清CA125水平,回归方程为y＝-6.830 + 1.014x,r＝0.993.检测卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,回归方程为y＝1.936 + 0.937x,r＝0.986.结论:BA-ELISA检测方法的建立在诊断卵巢癌等方面灵敏度高、特异性强,操作简便,无需昂贵仪器,适合广泛应用.