生物素—链霉亲和素免疫学法测定地高辛直接包被方法的研究

笔者曾经成功地应用德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｈｅｉｍ公司生产的现成的链霉亲和素包被管建立了生物素－链霉亲和素免疫学潮测定地高辛的反应模型。本文用国产的链霉亲和素自行包被，采用的是一种直接包被方法，即将链霉亲和素溶于去离子水，冰箱过液包被２４ｈ，并应用到地高辛的临床检测中，其灵敏度为０．０７８１μｇ／Ｌ，最低检测限为０．１９５２μｇ／Ｌ，测定三份低、中、高浓度血清标本，批内变异系数分别为８．７％     

链霉亲和素—生物素—ELISA方法的建立及其在HBsAg测定中的应用

根据链霉亲和素（ＳＡ）与生物素（Ｂ）之间有很强亲和力的原理，建立了ＥＬＩＳＡ板先用ＳＡ包被再与生物素化抗体结合的间接包被方法。通过试验，选择了生物素化白蛋白（Ｂ－ＢＳＡ）预包被，再连接ＳＡ以制备ＳＡ酶标板。应用生物素化的ＨＢｓ单抗及酶标记的抗ＨＢｓ单抗，建立了检测ＨＢｓＡｇ的ＳＡＢ－ＥＬＩＳＡ方法，得到良好的效果。     

用BSA系统免疫细胞化学法检测人外周血T和B淋巴细胞群

本文报道用自制生物素－链霉亲和素（ＢＳＡ）系统试剂检测人外周血中Ｔ和Ｂ淋巴细胞群，并与常用的ＡＰＡＡＰ桥联法对比，结果基本接近，但ＢＳＡ法显色较佳。在此基础上选择健康人８０例，测得外周血中Ｔ和Ｂ淋巴细胞的百分率和绝对数，以供临床参考。     

PCR—ELISA检测HBV DNA方法学建立及初步临床应用

建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ检测ＨＢＶ ＤＮＡ的方法学，探讨其最佳实验条件并初步评价其临床应用价值。常规ＰＣＲ引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成份，再通过亲合素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚苯乙烯小孔中，通过固相探针与ＨＢＶＤＮＡ扩增产物进行杂交，与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经ＮＰＰ显色，根据其Ａ４０５ｎｍ值大小，推算样品中ＨＢＶ ＤＮＡ模板含量。建立ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ的最     

藜草花粉特异性IgE检测的方法学比较

自制藜草花粉抗原用生物素－链霉亲合素，ＥＬＩＳＡ，捕获法ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ及生物素－亲合素ＥＬＩＳＡ等三种不同改良的ＥＬＩＳＡ法平行检测藜草花粉特异性ＩｇＥ抗体，发现敏感性依次为ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ捕获法ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ，ＢＡ－ＥＬＩＳＡ。特异性依次为捕获法ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ，ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ，ＢＡ－ＥＬＩＳＡ。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞mIL—2R的检测

用生物素－链霉亲和素免疫细胞化学法检测慢性乙型肝炎（ＣＨ－Ｂ）患者外周血单个细胞（ＰＢＭＣ）静息状态及ＰＨＡ诱导后膜白介素－２受体表达水平，结果显示ＣＨ－Ｂ患者Ｔ淋巴细胞处于部分激活状态，其对ＰＨＡ的应答能力未见明显低下。ＣＨ－Ｂ患者ＰＨ诱导后ｍＩＬ－２Ｒ的表达水平可作为评价病情和考核疗效的指标之一。     

链霉亲合素酶法检测T淋巴细胞亚群

用生物素－链霉亲合素－过氧化物酶（Ｂｉｏｔｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔａ－ｖｉｄｉｎ－Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）法检测Ｔ淋巴细胞亚群，结果如下。１材料与方法１．１试剂鼠抗人ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８单克隆抗体，生物素偶联兔抗鼠ＩｇＧ，过氧化物酶标记链霉亲合素以及ＡＥＣ...     

聚合酶链反应微孔板杂交法检测解脲脲原体及药敏分析

目的 建立敏感、特异的聚合酶链反应－微孔板杂交法（ＰＣＲ－ＭＰＨ）检测解脲脲原体（Ｕｕ）的感染,并分析药敏情况。方法 将带有生物素标记的Ｕｕ的聚合酶链反应产物结合在链霉亲和素包被的微孔板上,与标记地高辛的探针进行杂交后,通过标记碱性磷酸酶的抗地高辛抗体（ａｎｔｉ－ＤＩＧ－ＡＰ）与杂交分子进行反应,最终经底物显色后读数;同时应用生物梅里埃公司支原体培养试剂盒（ＩＳＴ）进行了Ｕｕ的培养及药敏试验。结果 通过优化多种试验条件建立了ＰＣＲ－ＭＰＨ法检测Ｕｕ,并分析了不同人群１５８份标本,其中微孔板杂交法阳性６５份,培养法阳性５６份;药敏结果显示,敏感率原始霉素１００％、交沙霉素９６．６％、强力霉素８９．７％、四环素７９．３％、氧氟沙星３４．５％、红霉素６．９％。结论 ＰＣＲ－ＭＰＨ法采用非放射性标记,具有无污染、经济、     

平行板流动腔法评价生物素化脂质微泡制备效果

目的 制备生物素化脂质微泡,并应用平行板流动腔检测流体切应力对生物素化脂质微泡与链亲和素结合稳定性的影响,为进一步开展超声分子成像研究奠定基础.方法 采用声振法制备出表面携有生物素分子的脂质微泡,与普通脂质微泡对照,应用平行板流动腔模型,设置不同流体剪切应力,观察与链亲和素靶向结合的生物素化微泡的黏附效果.结果 在不同浓度链亲和素包被的平行板流动腔中均见生物素化微泡结合;随着链亲和素包被浓度的提高,靶向结合的生物素化脂质微泡抗流体剪切应力能力明显提高.结论 应用平行板流动腔模型能成功检测生物素化微泡的靶向黏附效果,该模型可推广应用于其他靶向微泡制备成功后靶向黏附能力的体外检测.     

光敏生物素标记质粒DNA检测双链DNA抗体ELISA的建立及初步应用

建立一种既可定性也可定量检测血清抗双链ＤＮＡ抗体的ＥＬＩＳＡ，进一步提高对系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）诊断和监测的水平。以链霉亲合素处理微孔板，包被光敏生物素标记的质粒ＤＮＡ，用ＨＲＰ－羊抗人ＩｇＧ测定血不表双链ＤＮＡ抗体。分别以自制ＥＬＩＳＡ和Ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ公司ＥＬＩＳＡ抗ｄｓＤＮＡ定量试剂盒和胶体金斑点免疫渗滤法定性检测了３２例活动期ＳＬＥ，６例类风湿关节炎（ＲＡ），３０例健康人血清，阳     

人糖链抗原242电化学发光免疫分析检测法的建立

目的 建立一种快速、特异、灵敏的检测人糖链抗原242(CA242)的电化学发光免疫分析法(ECLIA).方法 以链霉亲和素包被的磁性微粒、生物素标记的抗CA242单克隆抗体、钌复合物标记配对的抗CA242单克隆抗体组成CA242 ECLIA检测试剂,在ECLIA分析仪上对其特异性、精密度、灵敏度等效能进行方法学评价;用...     

结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用

目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.     

核心链霉亲和素基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达

目的 克隆、表达核心链霉亲和素(core-strepavidin,core-SA)基因.方法 人工合成核心链霉亲和素基因;克隆到pET22b原核表达载体中,转化大肠埃希氏菌BL21,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析;目的 蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化,采用改良过碘酸钠法标记HRP,ELISA法检测比较HRP-SA与商品化HRP-SA的活性.结果 人工合成的354bp DNA片段经测序确证为核心链霉亲和素基因.将构建的重组表达质粒pET 22b-core SA转化大肠埃希氏菌BL21,经IPTG诱导后得到可溶性的表达产物.SDS-PAGE显示目的 蛋白相对分子质量为14 000,与理论值相符.在非变性条件下纯化目的 蛋白,经HRP标记后用ELISA法检测,结果 表明自制的HRP-SA与商品化HRP-SA的活性相当.结论 成功克隆和表达了核心链霉亲和素基因.     

MPOmRNA、IgHmRNA和CD_3εmRNA表达对急性白血病分型的意义

目的：比较基因分型和免疫分型在急性白血病诊断分型中的意义。方法：采用链亲和素－胶体金细胞原位杂交技术（ＩＳＨ－ＳＡＧ），研究了６９例急性白血病的髓过氧化物酶（ＭＰＯ）ｍＲＮＡ、免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）ｍＲＮＡ和ＣＤ３εｍＲＮＡ的基因表达并同时分析了白血病的免疫表型。结果和结论：ＭＰＯｍＲＮＡ和ＣＤ３εｍＲＮＡ敏感性高、特异性强，对确诊早期ＡＭＬ和Ｔ－ＡＬＬ有重要意义，ＩｇＨｍＲＮＡ则对识别更早期Ｂ细胞白血病有一定作用。用ＩＳＨ－ＳＡＧ进行基因分型是个新的更加敏感、特异的白血病诊断分型手段，将基因分型和免疫分型结合分析，对白血病更精确的诊断分型有重要意义。     

生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF方法的建立及其初步应用

目的 建立生物素-链霉亲和素ELISA检测血清CTGF的方法(简称“系统ELISA血清CTGF法”),初步评估CTGF在诊断慢性肝炎(CHB)患者肝纤维化的临床价值.方法 用生物素化抗CTGF单克隆抗体和多克隆抗体建立生物素-链霉亲和素ELISA方法,测定CHB患者血清CTGF水平.264例CHB患者根据肝穿刺病理诊断...     

微孔板杂交检测乙肝病毒X基因及其对肝细胞癌诊断价值的研究

目的建立微孔板杂交技术检测乙肝病毒X基因的方法，研究其在肝细胞癌诊断中的应用价值。方法在微孔板上包被HBVX基因片段的捕获探针；应用Bio-11-dUTP修饰的HBV X基因扩增引物，对待测标本进行PCR扩增，在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色。结果成功建立了微孔板杂交技术检测HBVX基因的方法；乙肝病毒感染后肝细胞癌患者X基因阳性检出率明显高于慢性乙肝患者和肝纤维化患者（P〈0．01）。结论检测HBVX基因对肝细胞癌具有辅助诊断价值。     

唾液中HSV－1抗体检测新法

唾液中ＨＳＶ－１抗体检测新法（ＺｈａｎｇＺＱ．Ｍｉ－ｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌ，１９９３；３７：７７３）近来，许多技术（包括抗体捕获法）检测某些病毒感染时唾液中的抗体已获成功。然而，大部分方法的费用高昂且难以推广。作者用亲和素－生物素复合物（ＡＢＣ...     

酶标红桂木凝集素检测初乳中SIgA

制备红桂木凝集素－辣根过氧化物酶（ＡＬＬ－ＨＲＰ）并经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００纯化作为酶结合物，ＡＬＬ为包被物，确定最适包被浓度及ＡＬＬ－ＨＲＰ工作然释度，夹以酶联检测ＳＩｇＡ进行抑制性，检出限，精密度，重现性等实验并制备标准曲线，初步测定４２例产妇乳ＳＩｇＡ。结果表明，夹心法检测血清中ＩｇＡ可被外加的ＡＬＬ竞争性抑制，以血清或初乳中凝集素结合蛋白（Ｓ－ＬＢＰ或Ｃ－ＬＢＰ）作标准制备的标准曲线线     

制备结合链酶亲和素超声造影剂的实验研究

目的：探索制备一种结合链酶亲和素的脂膜超声微泡，以适用于亲和素－生物素法制备靶向超声造影剂，并评价其理化性质。方法：分4组于机械或超声振荡之前或之后，加入链酶亲和素完成超声造影剂的制备，采用浮选法洗涤。观察并检测洗涤前后各组微泡大小、形态、浓度、荧光亮度、微泡与链酶亲和素的结合情况。结果：机械或超声振荡制备的各组结合链酶亲和素的超声造影剂其浓度、形态与普通微泡比较无明显差异，但易静置分层。超声振荡法制备的微泡粒径稍大、浓度偏低。荧光显微镜观察：洗涤前各种不同方法所制备的微泡均能激发出明亮的红色荧光；洗涤后微泡浓度由1010左右降到107左右，微泡荧光亮度仍为“3级”。微泡与链酶亲和素的结合率，各种制备方法间比较差异无显著性意义（P>0.05），其结合率高达98%以上。结论：机械和超声振荡均可制备结合链酶亲和素的负电荷超声造影剂，微泡与其结合率高，为完成亲和素－生物素法制备靶向超声造影剂提供了重要基础。     

BSA系统ELISA检测前列腺特异抗原方法的建立

前列腺特异抗原(PSA)作为肿瘤标志物,可用于前列腺癌的早期诊断,病理分析及疗效监测等[1]。国外大多利用放射免疫法检测,其灵敏度高,但需要特殊设备。我们利用生物素-链霉亲和素(BSA)系统建立了检测PSA的方法,特予介绍。一、材料和方法1.材料　PSA及兔抗PSA血清见文献[2];活化生物素及链霉亲和素(SA),章谷生教授惠赠。2.方法(1)活化生物素标记兔抗PSA及最佳条件选择　活化生物素用二甲基酰胺法标记兔抗PSA。经多次棋盘滴定确定,每mg抗体标记150μg活化生物素最好,抗体最佳包被浓度为2.5μg/ml,Bio-Ab最适工作滴度为1∶300。(2)SA…