荧光定量聚合酶链反应检测丙型肝炎病毒的临床应用

目的：用荧光定量聚合酶链反应(FQ—PCR)测定丙型肝炎病毒在临床的应用。方法：用FQ—PCR检测378例怀疑HCV感染的临床标本，并同时采用ELISA检测抗HCV，用生化仪测定ALT水平．了解样本中HCQ-RNA含量与抗HCV及ALT的相关性。结果：378份标本中216份HCV—RNA含量高于10^3拷贝／ml，348份抗HCV阳性，156份ALT异常，经统计分析每两者间其有明显相关性。结论：FQ—PCR技术检测HCV—RNA特异性强。灵敏度高。具有良好的应用价值。     

庚型肝炎病毒对慢性乙型肝炎患者的影响

目的：探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）对慢性乙型肝炎患者的影响,方法：采用逆转录巢式聚保酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ）对１５０例经血清免疫学检查确诊为慢性乙型肝炎患者进行ＨＧＶ－ＲＮＡ检测,其中７０例接受赛若金治疗。将他们分为单独ＨＢＶ感染组及ＨＢＶ,ＨＧＶ重叠感染组进行临床特征,ＡＬＴ值,ＨＢＶ－ＤＮＡ含量及ＨＢＶ对赛若金疗效反应的对照研究,结果：１５０例慢性乙型肝为中ＨＧＶ－ＲＮＡ阳性１６例（１０．６     

丙型肝炎病毒血症与临床关系的研究

丙型肝炎抗体(抗-HCV)及丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)是目前丙型肝炎(HC)诊断的病原学指标，前者在血清中出现较晚且常出现非特异性反应，是间接反映丙型肝炎病毒(HCV)感染或既往感染，而后者可以直接反映患者血清中有无HCV，判断患者是否存在病毒血症．且与患者临床有一定关系。我们运用逆转录套式聚合酶链反应(PCR)检测抗-HCV阳性的慢性丙型肝炎(CHC)患者血清HCV-RNA．目的是探讨病毒血症与患者临床的关系。     

探针杂交捕获法检测丙型肝炎病毒核糖核酸

探针杂交捕获法检测丙型肝炎病毒核糖核酸李向阳金嵘李东（温州医学院检验系，浙江温州３２５００３）王升启（军事医学科学院二所）关键词聚合酶链反应丙型肝炎病毒探针丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是ＲＮＡ病毒，引起人类的丙型病毒性肝炎。由于感染后的抗－ＨＣＶ产生缓慢，...     

血液透析患者丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型

目的 建立一种丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型方法。方法 对47份血液透析患者HCV RNA阳性的标本,用5’非编码区(5'-NCR)1、2、3、1b型特异性引物,进行逆转录巢式PCR扩增分型。结果 47份HCV RNA样本43例可以分型;优势株为1b亚型,1b及1b相关型占总样本数的87．23％(41／47);7例为混合感染,占可分型数的16．27％(7／43)。结论 本组血液透析患者感染的HCV基因型的分布可能与地区流行及医源性传播有关,其同源性有待核苷酸序列分析加以印证。     

几种改良的多聚酶链反应在丙型肝炎病毒检测中的应用

本文综述了近年来几种改良的多聚酶链反应在检测丙型肝炎病毒中的应用。包括巢式ＰＣＲ、半巢式ＰＣＲ、一步法ＰＣＲ、定量ＰＣＲ、链特异性ＰＣＲ、ＲＮＡ捕获法ＰＣＲ及原位ＰＣＲ。     

丙型肝炎患者精液中丙型肝炎病毒检出报告

目的通过研究慢性丙型肝炎患者精液中丙型肝炎病毒感染,探讨丙型肝炎病毒是否经夫妻性生活途径传播。方法用酶联免疫吸附法和荧光定量PCR法,检测56例男性慢性丙型肝炎患者血清、精液及其54例配偶血清抗-HCV、HCVRNA,健康对照组为23对体检健康者夫妇。结果男性慢性丙型肝炎患者血清中抗-HCV、HCVRNA的阳性率分别为91.07%(51/56)、85.71%(48/56),精液中抗-HCV、HCVRNA的阳性率分别为39.28%(22/56)、62.50%(35/56),结果与健康对照组比较均有统计学意义,P<0.05;男性慢性丙型肝炎患者配偶的血清抗-HCV及HCVRNA的阳性率为22.22%(12/54)、24.07%(13/54),与健康对照组相比较,经χ2检验有统计学意义,P<0.05。结论慢性丙型肝炎患者精液可感染HCV;HCV可经夫妻性生活途径传播。     

聚合酶链反应检测献血者血清中的丙型肝炎病毒

聚合酶链反应检测献血者血清中的丙型肝炎病毒３６２０００福建省泉州市中心血站陈惠民泉州市皮肤病性病防治院吴丽惠目前主要用ＥＬＩＳＡ法检测献血者的抗－ＨＣＶ，作为其是否感染上丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的指标，但这不能完全反映献血者的ＨＣＶ感染情况。笔者选用Ｈ...     

PCR和ELISA检测乙型肝炎病毒标志物的比较

肝病是我国多发病，据最近的全国流行病学调查，HBsAg携带率为9．7％，预计在30年内乙、丙型肝炎病毒慢性感染及其相关疾病还会是医学领域的最大困扰之一[1]。因此，建立一种既能在人群中开展普查以检测HBV携带状态，又能指导临床协助诊断的血清检测方法，具有重要的现实意义。本文就111例乙肝病人血清标本分别采用PCR和ELISA检测HBV标志，现将结果报告如下。1材料与方法1．1血清标本：111份标本取自1995年10月～1996年6月在本科住院确诊的乙肝病人血清。1．2试剂：ELISA检测HBsAg、抗－HBs、HBeAg、抗－HBe、抗－HBc，试剂购…     

固相法分离RAN用于丙型肝炎病毒聚合酶链反应检测

寻找一种简便，稳定，敏感性高，特异性强，且易于推广的ＲＮＡ分离纯化方法，用于丙型肝炎的逆转录０聚合酶链反应检测。应用双功能交联剂在乳胶颗粒上交联１段与ＨＣＶ核酸５‘端非结构区序列互补的探针，制备对ＨＣＶ特异的活化乳胶颗粒。将这种活化微粒混悬在６ｍｏｌ／Ｌ硫氰酸胍中，当待测血清与之混合后，病毒ＲＮＡ释放并与微粒上的探针杂交，极易被分离出来。     

丙型肝炎病毒血症与临床关系的研究

对慢性丙型肝炎(CHC)患者临床资料进行总结分析,并用逆转录套式聚合酶链反应(PCR)检测血清中丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV—RNA)。结果:①本地区CHC患者黄疸发生率为28％,②60％CHC患者血清中可检出HCV—RNA,⑧黄疸组病人HCV—RNA检出率(85.7％)明显高于无黄疸组病人(50％)(P<0.05),④不同范围血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)内HCV—RNA检出率不等。     

固相法分离RAN用于丙型肝炎病毒聚合酶链反应检测

目的寻找一种简便、稳定、敏感性高、特异性强，且易于推广的ＲＮＡ分离纯化方法，用于丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测。方法应用双功能交联剂在乳胶颗粒上交联１段与ＨＣＶ核酸５′端非结构区（５′ＮＣ）序列互补的探针，制备对ＨＣＶ特异的活化乳胶颗粒。将这种活化微粒混悬在６ｍｏｌ／Ｌ硫氰酸胍中，当待测血清与之混合后，病毒ＲＮＡ释放并与微粒上的探针杂交，极易被分离出来。检测临床５０例血清样本，并与经典法、蛋白酶Ｋ法、血清直接扩增法进行比较。结果固相法检出率为４４％，蛋白酶Ｋ法、经典法和直接血清扩增法检出率分别为３６％，３８％和３０％。结论固相法分离核酸用于ＨＣＶ的ＲＴ－ＰＣＲ检测，简便、敏感性高、重复性好，是一种较理想的ＲＮＡ分离技术。     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＨＡＡ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两者比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８），两者比较Ｐ＜０．０１。丙型肝炎相关再生障碍性贫血的预后较差。提示：ＨＣＶ感染与ＨＡＡ关系密切。     

两种核酸提取方法检测血清丙型肝炎病毒核糖核酸的比较

目的比较两种不同核酸提取方法检测血清丙型肝炎病毒核糖核酸（HcuRNA）对临床诊断的应用价值。方法对128份HcV抗体阳性的患者血清,同时用两种实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测HCV—RNA并检测丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平,这两种方法分别是用二氧化硅微粒法提取RNA和纯化柱法提取RNA。结果128份HCV抗体阳性的血清中二氧化硅微粒法HCV—RNA阳性率41．41％,纯化柱法HcV—RNA阳性率59．38％,纯化枉法优于二氧化硅微粒法,差异有统计学意义（x2=8．27,P〈0．05）。49份HCV抗体阳性的血清中ALT异常,且ALT浓度变化与纯化柱法HCV—RNA水平呈正相关性（r=0．95,P〈0．05）。结论血清HCV—RNA检测对丙型肝炎诊断和病情监测均有重要的临床意义,采用纯化柱法提取RNA具有更优的临床价值。     

实时荧光定量PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型

目的建立一种快速准确的实时荧光PCR方法检测乙型肝炎病毒基因型。用此方法对安徽地区乙肝患者进行检测,了解该地区HBV基因型分布情况。方法首先用实时荧光定量PCR方法对150例安徽地区乙肝患者进行HBVDNA定量检测和分型检测,然后对其中载毒量大于5000IU/mL的113例标本和1例1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL进行测序分型检测,验证所建立方法的准确性,了解安徽地区HBV基因型分布情况。结果150例HBV样本中HBVDNA含量<1000IU/mL30例,分型检测结果均为阴性,对载毒量≥5000IU/mL的样本检出率为97.35%(110/113);对1000IU/mL≤载毒量<5000IU/mL的样本检出率为14.29%(1/7);对全部DNA阳性样本的检出率为92.5%(111/120)。HBV分型检测与HBVDNA测序检测的114例样本中,只要是HBVB基因型、C基因型或B/C混合型,乙型肝炎病毒基因分型检测都能检出来(共111例),其中部分样本经分型检测属于B/C混合基因型,测序结果都是混合基因型中占优势的基因型结果,总体符合率为100%。未能被本法检出的样本共3例,3例样本经测序分型均为D型。120例病毒载毒量≥1000IU/mL乙肝患者中B型病例占51.67%(62/120);C型占29.17%(35/120);B/C混合型占11.67%(14/120)。PCR测序检出为D型3例,占2.5%(3/120)。结论应用TaqMan探针的实时荧光定量PCR方法能快速对我国HBV主要基因型B基因型、C基因型进行检测,结果准确可靠,特异性高。安徽地区的HBV基因型以B型为主,C型次之,亦存在着D型的少数感染病例和B/C的混合感染。     

冻融对丙型肝炎病毒核糖核酸检测结果的影响

血液中丙型肝炎病毒核糖核酸（HCVRNA）的含量一般很低,标本处理或保存不当易使HCVRNA的含量进一步降低而导致假阴性结果。本文通过对HCV阳性标本进行冻融检测,观察冻融对HCV阳性标本的影响。     

FQ—PCR检测乙型肝炎患者血清HBVDNA

目的评价荧光定量聚合酶链反应 (FQ- PCR)检测 HBV DNA的临床应用价值。方法用 FQ- PCR和酶联免疫吸附试验 (EL ISA)分别检测乙型肝炎患者血清 2 5 1份和健康体检者血清 116份的 HBV DNA和 HBV血清标志物。结果 HBs Ag、HBe Ag和抗 - HBc3项阳性、HBs Ag、抗 - HBe和抗 - HBc3项阳性以及抗 - HBs、抗 - HBe、抗- HBc同时或分别阳性的样品 ,HBV DNA阳性率分别为 96 .5 %、5 6 .6 %和 12 .3% ,HBV DNA拷贝数分别为 1.12× 10 8/ ml、1.45× 10 6/ m l和 6 .6 1× 10 4/ m l。用 EL ISA检测 HBe Ag阳性率仅为 FQ- PCR检测 HBV DNA阳性率的5 5 .4%。结论 FQ- PCR对乙型肝炎早期诊断 ,传染性的判断及疗效考核有临床实用意义     

乙型肝炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立一种采用Lightcycler系统进行HBVDNA实时荧光定量PCR的方法,并探讨其临床应用价值。方法针对HBV基因组S区设计一对扩增引物,并通过预实验严格优化反应体系的组成和条件;将T载体与HBVRT区扩增后纯化的产物进行连接反应,然后转染大肠杆菌（DH5a）,经蓝、白斑筛选后挑取阳性菌落,提取质粒,制备外标准品。结果用于制成外标准品的质粒经1：10的缓冲液倍比稀释,制作标准曲线,线性方程为：Y=-3．344X＋37（r2=0．9999）;通过检测已知浓度并经倍比稀释的HBVDNA,表明其最低检测限为5×10^2 IU／mL;拷贝数介于5×10^2～5×10^8 IU／mI。之间的HBVDNA浓度与ct值具有良好的线性关系。结论外标法实时荧光定量PCR是一种定量相对准确、灵敏度高、特异性强、操作相对简便的方法;该方法可用于乙型肝炎患者病情监测,有效指导临床用药;联合该法与血清标志物检测,可更准确评价HBV感染者病情。     

丙型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

探讨提高聚合酶链反应对丙型肝炎病毒病毒血症的检出率和对变异较大区域的扩增效率的方法。方法 分别以ＨＣＶ基因组５‘端非编码区，非结构基因４区及ＮＳ５ｂ区的引物检测ＨＣＶ，并比较双退火温度与单一退火温度对ＨＣＶ基因扩增效率的影响。     

PCR技术在乙型肝炎病毒检测中的应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是新近建立的一种体外扩增特异性DNA的技术,具有快速、简便、敏感度高、特异性强等优点。近年来,国外应用PCR技术对乙型肝炎病毒(HBV)感染进行了大量的研究,并显示广泛的应用前景,国内处于开始研究阶段。现就PCR技术在HBV检测中的应用作一概述。一、发展诊断HBV感染的新方法现已证实,每毫升污染10~2个Dane颗粒的血清即能使黑猩猩发生HBV感染。过去采用的分子杂交法仅可检出0.1Pg/ml的HBVDNA,相当于10~5～10~6Dane颗粒,限制了对HBV感染的诊断。PCR技术可检出低至0.4f g/ml(130 Dane颗粒/ml)水平的