CIK细胞对脾虚型人胃癌裸鼠腹膜移植模型抗肿瘤作用及其机制的实验研究

目的 :探讨CIK细胞对脾虚型人胃癌裸鼠腹膜移植模型的抗肿瘤作用及机制。方法 :在成功制备CIK细胞、建立脾虚型人胃癌裸鼠腹膜移植模型的基础上 ,观察CIK细胞对脾虚型人胃癌裸鼠腹膜移植模型的体内抗肿瘤作用。用放射免疫方法 (RIA )、酶联免疫方法(ELISA)检测CIK细胞在体内抗肿瘤过程中血清和腹水中CEA以及血清IL 2、TNF α、IFN γ、GM CSF含量的变化。结果 :NS对照组裸鼠腹水继续生长 ,与其相比 ,CD3AK组体质量、腹围、腹水量均明显减少 ,P <0 0 1。CIK组较CD3AK组上述指标有进一步显著减少 ,腹水均全部消失 ,其腹水抑制率达 10 0 % ,P <0 0 1;NS对照组裸鼠血清、腹水中CEA含量均保持较高水平 ,与其相比 ,CD3AK组明显减少 ,CIK组较CD3AK组血清中CEA含量进一步显著减低 ,P <0 0 1;另外 ,与NS对照组相比 ,CIK组裸鼠血清中IL 2、TNF α、INF γ、GM CSF含量均显著增加 ,P <0 0 1。结论 :CIK细胞对脾虚型人胃癌腹膜移植裸小鼠模型有更强的体内抗肿瘤活性 ;并可显著减少胃癌细胞CEA的分泌 ,继续分泌IL 2、TNF α、INF γ、GM CSF等细胞因子而发挥直接或间接的抗肿瘤作用。     

人胃癌细胞腹膜粘附影响因素的实验研究

目的 探讨影响人胃癌细胞在腹膜粘附的因素,为临床上采取有效措施,减少腹膜转移的发生提供依据。方法 用人胃癌细胞株在小鼠腹膜上培养,以ＭＴＴ法检测粘附细胞数的体外实验模型,观察腹膜损伤,血液成分和癌胚抗原（ＣＥＡ）对胃癌细胞在腹膜粘附的影响。结果 腹膜损伤组的粘附细胞数（ＡＤ）较对照组明显增高（Ｐ〈０．０１）,血液中的白细胞,血小板组ＡＤ值较对照组明显增高（Ｐ〈０．０１）,血浆组ＡＤ值亦较对照组增高     

人γδT细胞、CD3AK细胞、CIK和DCs对荷胃癌裸鼠的疗效

Rosenberg等将LAK细胞应用于临床以来,人们对肿瘤的细胞免疫治疗进行了深入的研究.由于肿瘤细胞分泌的免疫抑制因子和肿瘤微环境,以及荷瘤机体抗肿瘤免疫效应细胞不同程度地存在数量和质量上的异常,因此,在肿瘤细胞免疫治疗上必须用固有免疫细胞联合适应性免疫细胞进行治疗,才能有效地清除肿瘤细胞或抑制肿瘤生长.本研究应用术后2年末复发胃癌患者的树突状细胞(dendritics cells,DCs)、CIK细胞、CD3AK细胞和γδT细胞对已建立的人胃癌(SGC-7901细胞株)模型裸鼠进行单独或联合治疗,以观察这些细胞单用和联用的治疗效果.     

CIK细胞对 MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CYtokine-induced kill cells,CIK)对MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其作用机制.方法应用(TdT-mediated dUTP nick end labeling)TUNEL法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫细胞化学法测定Bcl-2、Bax的阳性表达率,深入研究CIK细胞对MGC-803胃癌细胞株凋亡相关基因蛋白表达的影响.结果TUNEL法检测对照组成不染或均匀淡蓝色,实验组凋亡细胞缩小,核或核周成深蓝色.CIK实验组5～14小时凋亡率上调,14～24小时凋亡率下降.CIK实验组凋亡率与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).免疫细胞化学结果表明:Bcl-2蛋白随作用时间延长表达均下降,Bax蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论CIK细胞对MGC-803胃癌细胞早期诱导凋亡,晚期诱导肿瘤细胞坏死.其作用机制之一可能是通过上调Bax,下调Bcl-2的蛋白表达实现的.     

p27KIP1过表达对人胃癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的研究p27KIP1基因对胃癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的潜在作用. 方法采用脂质体转染法将p27KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SCG7901中,通过Western Blot以及RNA斑点杂交检测p27KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达;细胞活力实验和软琼脂集落形成实验显示转染p27KIP1基因对细胞增殖的作用;DNA电泳、流式细胞仪、TUNEL染色及透射电镜等方法观察目的基因对该细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响. 结果转染p27KIP1的SCG7901细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p27KIP1的表达.细胞活力检测显示在外加Zn离子48h后细胞生长被抑制42%;软琼脂集落形成率明显少于亲代细胞(P<0.01);p27KIP1的过表达能够显著地增加G1期的细胞数,由33.68%增加到69.29%,P<0.01;在G1期前出现1个亚二倍体的凋亡峰,占14.68%,并且凋亡指数也显著增加(P<0.01).结论 p27KIP1基因能够诱导SCG7901细胞凋亡和细胞周期在G1期延长.因此,p27KIP1基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因.     

紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

 目的　探讨紫杉醇对胃癌细胞的诱导凋亡作用及其诱导的胃癌细胞凋亡的周期时相性。方法　用Sub-G1法检测紫杉醇诱导胃癌细胞MKN-28的凋亡,API法检测紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的周期时相性,并分选后激光共聚焦显微镜技术（PSC）观察形态学,MTT法检测紫杉醇对临床胃癌组织细胞的敏感性。结果　Sub-G1法结果显示紫杉醇能诱导胃癌细胞的凋亡,紫杉醇（浓度10 mg／L）诱导胃癌细胞凋亡在10 h后达到高峰;API法检测结果显示紫杉醇诱导胃癌细胞发生凋亡的时相在G2／M期,PSC形态学观察到G2／M期凋亡特征;MTT法结果显示紫杉醇诱导的20例临床胃癌组织标本中,有16例抑制率大于50 %。结论　紫杉醇能诱导胃癌细胞发生凋亡,相对较敏感,其诱导的胃癌细胞凋亡具有周期时相性。     

CIK细胞对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的 探讨细胞因子激活的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 体外分离健康人外周血单个核细胞,干扰素-γ、白细胞介素-2、CD3单抗诱导培养14 d,流式细胞仪测细胞表型,LDH法测定不同效靶比时CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性.12只BALB/c裸鼠分为两组,每组6只.每只裸鼠皮下接种1×106个EC9706细胞,治疗组裸鼠同时每只经尾静脉注入3×107个CIK细胞,每周1次,连续3周,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积变化.成瘤后3周,眼眶取血,流式细胞仪检测人CIK细胞;处死裸鼠,取瘤块称重,计算抑瘤率,观察肿瘤病理特点.结果 CIK细胞中CD3+CD56+细胞占42.50%,CIK细胞表面NKG2D表达率为67.10%.效靶比10:1、20:1、30:1时CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性分别为(28.81±0.47)%、(37.78±0.22)%、(44.31±1.06)%,差异有统计学意义(P<0.01).对照组和CIK细胞治疗组成瘤时间分别为(9.00±1.26)d、(15.67±4.37)d,差异有统计学意义(P<0.01);瘤重分别为(3.24±0.11)g、(2.10±0.10)g,差异有统计学意义(P<0.01),CIK治疗组的抑瘤率为35.19%.HE染色显示CIK细胞治疗组有较多的淋巴细胞浸润和坏死区.结论 CIK细胞对EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,可能成为治疗食管癌的免疫效应细胞.     

胃癌术后的腹膜转移

近年来,由于早期胃癌检出率的增加,胃癌术后生存率逐渐提高;但进展期胃癌,预后仍很差,根治术后5年生存率仍然在20～30％,因此,提高进展期胃癌的疗效显得更加迫切。胃癌术后最主要的威胁是腹膜转移,为最常见的复发形式。占复发病例的50％左右;如何避免腹膜转移的发生,是提高进展期胃癌疗效的关键。     

青蒿琥酯对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究青蒿琥酯对胃癌细胞增殖和凋亡的作用,探讨其对胃癌作用机制,为进一步的临床研究及应用提供依据。方法:采用MTT噻唑蓝法观察青蒿琥酯对胃癌细胞MGC-803生长增殖的影响,流式细胞仪和透射电镜检测药物作用前后细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应测定药物作用前后凋亡抑制基因survivin表达的变化。结果:青蒿琥酯在3.125~50μg/ml浓度范围内呈剂量依赖性方式抑制胃癌细胞MGC-803的生长增殖,并能显著抑制胃癌细胞survivin基因的表达。流式细胞仪检测出凋亡峰,透射电镜下可见部分MGC-803细胞呈典型的凋亡形态学改变。结论:青蒿琥酯能显著抑制胃癌细胞生长,并诱导胃癌细胞凋亡。     

奥曲肽对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡影响的研究

目的：研究生长抑素类似物奥曲肽（octreotide,OCT）对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及其可能的作用机制。方法：不同浓度的OCT作用于体外培养的人胃癌BGC-823细胞,以5～FU作为阳性对照,应用M1Tr法分析细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率,AO—EB染色观察细胞形态变化。结果：OCT对BGC-823细胞的生长、增殖产生抑制作用,该抑制作用具有量效、时效关系和饱和性;OCT作用后细胞呈典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测的细胞凋亡率和AO—EB染色测得细胞凋亡率与对照组相比较差异有显著性（P〈0．05）;BGC-823细胞经OCT作用后,G1期细胞数明显增加,S细胞数明显减少,细胞被阻滞于G1／S期。结论：10^-5-10^-3g/L浓度的OCT能够抑制胃癌BGC-823细胞增殖,机制可能与其诱导肿瘤细胞的凋亡和出现G1／S期阻滞有关。     

奥曲肽对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡影响的研究

目的:研究生长抑素类似物奥曲肽(octreotide,OCT)对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡、细胞周期的影响及其可能的作用机制.方法:不同浓度的OCT作用于体外培养的人胃癌BGC-823细胞,以5-FU作为阳性对照,应用MTT法分析细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期分布和凋亡率,AO-EB染色观察细胞形态变化.结果:OCT对BGC-823细胞的生长、增殖产生抑制作用,该抑制作用具有量效、时效关系和饱和性;OCT作用后细胞呈典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测的细胞凋亡率和AO-EB染色测得细胞凋亡率与对照组相比较差异有显著性(P<0.05);BGC-823细胞经OCT作用后,G1期细胞数明显增加,S细胞数明显减少,细胞被阻滞于G1/S 期.结论:10-5-10-3g/L 浓度的OCT能够抑制胃癌BGC-823细胞增殖,机制可能与其诱导肿瘤细胞的凋亡和出现G1/S期阻滞有关.     

盐酸小檗碱对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究盐酸小檗碱对人胃癌细胞及永生化胃上皮细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其中可能的分子机制。方法：利用不同浓度的小檗碱处理胃癌细胞系MKN-45和SGC-7901细胞,以及永生化胃上皮细胞系GES细胞,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡（PI标记）,Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果：MTT结果显示与空白对照组相比,小檗碱处理后,细胞增殖速度明显受到抑制（P〈0.05）,并呈浓度依赖性,其中50μg/ml处理组最大抑制率为81.3%,这种抑制作用对胃癌细胞更为明显。流式细胞仪检测表明,小檗碱在较低浓度（10μg/ml）时即可诱导胃癌细胞出现G0/G1阻滞,S期细胞百分比减少和细胞凋亡（P〈0.05）,这种作用呈时间和浓度依赖性。Western blot结果提示小檗碱处理后,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax及p53蛋白表达水平明显上调。结论：小檗碱可抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其机制与阻滞细胞周期进展以及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53密切相关。     

盐酸罗哌卡因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨盐酸罗哌卡因对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞计数试剂盒（CCK-8）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞增殖能力的影响,并确定盐酸罗哌卡因的用药浓度,流式细胞术检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI法检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果:随着盐酸罗哌卡因用药浓度的升高,MGC-803细胞增殖能力逐渐降低,根据CCK-8实验结果分别筛选出浓度为10、50 μg/ml和100 μg/ml的盐酸罗哌卡因用于后续实验。盐酸罗哌卡因能够明显阻滞细胞周期于G2期,诱导细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:盐酸罗哌卡因能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖,阻碍MGC-803细胞周期进程,诱导细胞凋亡,该过程可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

胃癌腹膜转移的外科诊治观

随着诊断性腹腔镜的普及、晚期胃癌转化治疗概念的兴起,以及腹腔化疗港、腹腔热灌注化疗等技术的应用,胃癌腹膜转移的诊断与治疗取得新的进展。然而,胃癌腹膜转移预后差,治疗依旧缺乏高级别证据,在实践过程中应注意规范化诊断与评效,在患者筛选、手术指征、术后化疗等重要问题上进行多学科讨论决策。药物治疗的进展仍是未来提高胃癌腹膜转移预后的关键。     

胃癌转移相关分子标志物的研究进展

淋巴结转移、腹膜转移是胃癌转移最常见形式.是影响胃癌预后及治疗策略的重要因素.本综述阐述目前与胃癌转移相关的分子标志物的研究进展.为胃癌的早期诊断与治疗提供新思路.     

盐酸小檗碱对人胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究盐酸小檗碱对人胃癌细胞及永生化胃上皮细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨其中可能的分子机制。方法:利用不同浓度的小檗碱处理胃癌细胞系MKN-45和SGC-7901细胞,以及永生化胃上皮细胞系GES细胞,采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡(PI标记),Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白的表达。结果:MTT结果显示与空白对照组相比,小檗碱处理后,细胞增殖速度明显受到抑制(P<0.05),并呈浓度依赖性,其中50μg/ml处理组最大抑制率为81.3%,这种抑制作用对胃癌细胞更为明显。流式细胞仪检测表明,小檗碱在较低浓度(10μg/ml)时即可诱导胃癌细胞出现G0/G1阻滞,S期细胞百分比减少和细胞凋亡(P<0.05),这种作用呈时间和浓度依赖性。Western blot结果提示小檗碱处理后,胃癌细胞Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax及p53蛋白表达水平明显上调。结论:小檗碱可抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,其机制与阻滞细胞周期进展以及调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53密切相关。     

人类胃癌裸鼠淋巴结转移模型的建立

 目的　研究胃癌淋巴结转移动物模型的建立方法。方法　人类胃癌低分化细胞系SGC-7901体外培养、传代并扩增后，收集细胞行皮下种植成瘤，鼠间传代至第6代，以皮下肿瘤组织块原位种植于裸鼠胃壁建立动物模型。种植后第9周处死裸鼠，观察原位种植瘤生长、淋巴结转移及其他脏器转移情况，测定荷瘤裸鼠血清癌胚抗原（CEA）值。结果　原位移植瘤种植成功率100 ％，胃周淋巴结转移率93.3 ％，移植瘤可发生局部浸润及远处脏器转移，荷瘤裸鼠CEA值明显高于正常裸鼠（P＜0.01）。结论　应用SGC-7901细胞系可成功建立胃癌的淋巴结转移动物模型。