DNA环介导恒温扩增技术在乙型肝炎病毒表面抗原基因检测中的应用

目的建立一种适合基层医疗机构开展的快速检测乙肝病毒的环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术。方法根据美国国立卫生研究院(NIH)基因序列数据库(genbank)公布的乙型肝炎病毒表面抗原基因序列(登录号:V00867),针对病毒表面抗原pre-S基因设计两对特异性的LAMP内外引物,提取DNA作为扩增模板,优化LAMP反应体系,恒温65℃反应1h,反应结果采用目测或琼脂糖凝胶电泳法判断;同时设计一对特异性的引物采用聚合酶链式反应(PCR)对35例乙肝感染者血清进行扩增,比较两种方法在检测中的特异性和敏感性。结果35例乙肝病毒患者血清LAMP反应检测阳性20例,普通PCR法检测阳性20例;对同一病毒模板做系列倍比稀释,LAMP能检测出的极限为10-8,而普通PCR的检测极限为10-6。结论LAMP能快速、敏感、特异地检测乙肝病毒表面抗原基因,实验仪器简单,不需要特殊的检测设备,适合基层各种检测机构的使用。     

恒温扩增-核酸试纸在副溶血性弧菌快速检测中的应用

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恒温扩增芯片法在下呼吸道感染常见病原体检测中的临床应用

目的:研究在下呼吸道感染中恒温扩增芯片法对痰液样本中病原体检测的临床应用价值.方法:选取本院2019年11月至2020年1月间收集的143例下呼吸道感染患者,采用恒温扩增芯片法检测患者的痰液样本,同时以传统病原学检测方法(培养法)与之进行比较,判断其在临床应用中的价值.结果:采用恒温扩增芯片法和培养法共检测了143例下...     

交叉引物恒温扩增技术结合核酸试纸条检测沙门菌方法的建立

目的 建立一种快速检测沙门菌的交叉引物恒温扩增技术(CPA)-核酸试纸条法。方法 收集不同来源的15株沙门菌和非沙门菌,作为实验用菌株,使用加热煮沸法提取细菌DNA核酸;对CPA方法进行敏感性和特异性研究,并与沙门菌荧光定量PCR法进行比较与评价。结果 特异性试验结果显示,本研究建立的CPA-核酸试纸条法对15种沙门菌的检测阳性率达100%,对15株非沙门菌检测结果全部为阴性。灵敏性试验结果显示,对沙门菌的纯菌液灵敏度检测极限为1.6 cfu/ml,模拟样本的检测限达到160 cfu/g,与荧光定量PCR法一致。结论 该方法检测沙门菌具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度高、特异性强、操作简便等特点,可应用于沙门菌快速检测。     

恒温扩增技术在乙型肝炎基因分型检测中的应用

目的:建立恒温扩增技术检测乙肝基因分型,分析乙型肝炎B、C基因与肝脏炎症程度的关系。方法:根据乙肝病毒序列设计B型基因、C型基因引物进行恒温检测,同时分析肝功能、HBVDNA之间的差异。结果:恒温扩增技术检出HBV基因B、C型占94.00%,C型基因患者HBVDNA定量略高于B基因患者,但无统计学差异(P0.05),肝脏炎症指标ALT异常程度C型重于B型,二者比较有统计学差异(P0.05)。结论:恒温扩增技术能够应用于乙肝基因型的检测,目前乙肝基因型多以B、C型为主,C型基因患者肝损伤程度重于B型基因。     

乙型肝炎病毒基因分型检测的临床应用

近年开展的乙型肝炎病毒(HBV)基因分型检测对于研究HBV的致病性、临床特征等有重要意义。本文着重从HBV各基因型的地理分布、临床特征、对抗病毒治疗的反应及其与病毒基因变异的关系等方面作一阐述。     

乙型肝炎病毒基因分型检测的临床应用

近年开展的乙型肝炎病毒（HBV）基因分型检测对于研究HBV的致病性、临床特征等有重要意义.本文着重从HBV各基因型的地理分布、临床特征、对抗病毒治疗的反应及其与病毒基因变异的关系等方面作一阐述.     

胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原的比较

目的对胶体金试纸法与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)做比较,了解胶体金试纸法的灵敏度和特异度。方法采用两种方法检测0~65岁人群血清标本3 578份。结果胶体金试纸法检测出HBsAg阳性标本189份,阳性率5.28%;ELISA法检测出阳性标本200份,阳性率5.59%;两种方法阳性检出率差异无显著统计学意义。胶体金试纸法与ELISA法检测标本符合率为97.74%。胶体金试纸法的灵敏度为77.00%,特异度为98.96%。结论胶体金试纸法操作简便、快速,检测的特异度较好,但其灵敏度有待提高。     

实时荧光核酸恒温扩增技术在淋球菌检测中的应用评价

目的评价实时核酸恒温扩增检测技术(SAT)在淋球菌检测中的应用价值。方法对204例疑似淋球菌感染患者的生殖道拭子分别进行SAT、PCR法及培养法检测,同时对其尿液标本进行SAT检测。分别对生殖道拭子和尿液标本SAT检测结果与生殖道拭子PCR法和培养法检测结果进行比较分析。结果 204例疑似患者拭子标本中,SAT法检出阳性90例,高于培养法而略低于PCR法,但阳性率差异均无统计学意义(P0.05)。其中有3例患者拭子标本SAT检测阳性而尿液标本检测为阴性,符合率为98.53%,两者阳性率差异无统计学意义(P0.05)。以淋球菌培养为金标准,SAT检测拭子标本的敏感度为100%,特异度为91.94%;SAT检测尿液的敏感度为98.77%,特异度为94.31%。结论SAT技术检测拭子及尿液标本中的淋球菌与生殖道拭子PCR法和培养法效果相当,且尿液标本SAT检测作为一种非侵入性采样方法有望替代生殖道拭子标本检测。     

HBsAg快速检测试纸条在无偿献血现场中的应用分析

ＨＢｓＡｇ快速检测试纸条 (金标法 )在无偿献血现场得到了迅速的推广使用 ,使血液的不合格率大为降低。现将ＨＢｓＡｇ快速检测试纸条在非固定采血点部分无偿献血者中的使用情况进行分析 ,并与ＥＬＩＳＡ方法比较 ,报道如下。1　材料与方法1.1　标本来源　一般体格检查合格的非固定采血点无偿献血者 5 12人 ,采集末梢全血 ,用金标试纸条检测 ,阴性者直接献血 ,阳性者另采集静脉血 1ｍｌ。1.2　试剂和方法　ＨＢｓＡｇ快速检测试纸条由北京万泰生物药业公司提供 ,批号 990 6 15 0 5。使用时直接将 3～ 4滴全血滴在试纸条箭头的玻璃纤维膜上 …     

环介导核酸恒温扩增结合试纸条技术快速筛查沙门菌的方法

[目的]探讨环介导核酸恒温扩增(LAMP)结合试纸条技术(LFD)快速筛查沙门菌的可行性.[方法]从GenBank上下载沙门菌invA基因序列,用DNAMAN软件同源性比对后,在其保守区设计LAMP扩增引物,建立LAMP-LFD恒温扩增快速检测技术,优化反应条件,用荧光聚合酶链反应(PCR)法平行检测加以验证.[结果]...     

乙肝表面抗原快速检测试纸条的临床应用评价

为了避免乙肝交叉感染,减少医源性乙肝的发生,手术前、进行侵入性检查和治疗前,必须进行乙肝表面抗原(HBsAg)的筛查。ELISA法作为实验室常规使用的检测方法,一般要成批检测,不方便单个样本的快速检测。胶体金免疫层析法(GICA)用于HB—sAg检测,操作简单,可方便地进行单个样本的快速检测,因此,临床需求不断增加。为此,我们对其进行     

乙型肝炎病毒表面大蛋白检测的临床应用研究

目的探讨乙型肝炎病毒表面大蛋白（LHBs）用于临床乙型肝炎诊断的实验价值及与乙型肝炎病毒DNA定量的相关性。方法应用基因工程表达的乙型肝炎病毒表面大蛋白,采用ELISA技术共检测了510份HBsAg阳性血清标本中的LHBs,同时检测前S1抗原（PreS1Ag）及HBeAg,并应用荧光定量PCR技术平行检测HBVDNA。结果380份HBV DNA阳性血清标本中,361份（95.00%）LHBs检测阳性,PreS1Ag192份（50.50%）检测阳性;LHBs阳性率明显高于乙型肝炎前S1阳性率,两者差异有统计学意义（P〈0.01）;239份HBeAg阴性血清标本中,HBV DNA129份（53.93%）阳性,LHBs132份（55.23%）阳性,PreS1Ag77份（32.22%）阳性,LHBs阳性率与HBV DNA阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）,均显著高于PreS1Ag;LHBs含量与HBV DNA拷贝数呈正相关性,相关系数r=0.946。结论LHBs是一个操作简便的可用于反映乙型肝炎病毒复制水平的敏感指标。     

实时荧光PCR法检测乙型肝炎病毒基因型

目的:建立实时荧光PCR法检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型。方法:根据乙肝病毒基因序列选取保守区域设计引物,结合不同基因型的差异设计各型的特异荧光探针检测乙型肝炎基因B、C型。结果:200例HBV感染者中基因B型70例占35%,基因C型120例占60%,基因B,C混合型10例占5%,未捡出基因型A、D、E、F,分别取B、C型基因标本10例进行测序结果一致。结论:实时荧光PCR检测乙型肝炎基因型操作简单、快速、适合临床常规检测。     

酶联法检测人乳中乙型肝炎病毒

我国乙型肝炎病毒携带者高达 10 %左右 ,其中产妇能否哺乳 ,经过系统免疫后能否防止母婴间 HBV的传播等问题 ,一直是有争议的问题。关键是确定乳汁中是否有 HBV,其感染致病能力如何。为此 ,福州市第二医院对 6 0例血清中乙型肝炎病毒标志物阳性的产妇乳汁进行 HBV检测 ,现将结果报告如下。1　资料与方法1.1　检测对象　 1996年 9月至 2 0 0 0年 2月在我院分娩 ,经血清学酶联免疫法检测为 HBV感染者 6 0例。其中乙肝表面抗原 (HBs Ag)阳性、合并乙肝 e抗原 (HBe Ag)阳性、核心抗体 (HBc Ab)阳性 5 4例 ;乙肝表面抗体 (HBs Ab)阳性 …     

RNA恒温扩增技术在非淋球菌性尿道炎病原体检测中的临床评估

目的探讨不同核酸检测方法在非淋球菌性尿道炎病原体检测中的临床价值。方法对173例疑似非淋球菌性尿道炎感染患者尿液以及尿道分泌物样本运用RNA恒温扩增技术(RNA-SAT)和实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR)分别进行解脲支原体(Uu)和沙眼衣原体(Ct)检测,并对结果统计分析。结果 2种方法检测,尿道分泌物样本的Uu阳性率均高于尿液样本,差异有统计学意义(χ~2=4.011,P0.05),而Ct阳性率经χ~2检验比较差异无统计学意义(χ~2=0.25,P0.05)。Uu-尿液检测的敏感度(100.0%)高于Uu-尿道拭子(88.0%),差异有统计学意义(χ~2=9.049,P0.01)。Ct-尿液和Ct-尿道拭子,二者敏感度差异无统计学意义(χ~2=0.642,P0.05)。结论 RNA-SAT法既具备了FQ-PCR的高敏感度和特异度,又能很好地判断预后效果,同时可采用尿液作为待检样本,具有取样方便、耗时短、污染小及结果准确等优点,可用于临床实验室检测与疗效监测。     

逆转录-环介导等温扩增技术结合横向流动试纸条法快速检测肠道病毒

目的建立一种快速特异敏感的肠道病毒检测方法。方法针对肠道病毒保守区基因序列,设计6条逆转录-环介导等温扩增技术(RT-LAMP)特异性引物,经过优化,用毛细管电泳及横向流动试纸条(LFD)检测扩增产物,建立RT-LAMPLFD检测方法,并与荧光定量PCR法进行比较。结果 LFD与毛细管电泳法检测特异的RT-LAMP扩增产物具有同样的敏感度,RT-LAMP-LFD法检测肠道病毒与其他病毒无交叉反应,最低检出限为10拷贝RNA分子,与荧光定量PCR法检测结果一致性为99.2%。结论建立的RT-LAMP-LFD方法,具有较高的特异性及灵敏度,操作简单、快速且不需要昂贵的仪器设备,适合应用于基层实验室肠道病毒的快速检测。     

环介导恒温扩增法快速检测寨卡病毒

目的建立环介导恒温扩增(LAMP)方法快速检测寨卡病毒。方法针对寨卡病毒NS5基因设计并筛选LAMP引物,优化反应条件,验证方法的特异性和灵敏度,通过实时浊度仪和钙黄绿素显色法判定结果。结果针对寨卡病毒NS5基因的LAMP方法可在64℃50 min特异性扩增NS5基因,与基孔肯雅病毒、登革病毒、黄热病毒、甲型H1N1流感病毒均无交叉反应。检测灵敏度达到10拷贝/μl,是PCR方法的100倍。结论 LAMP方法快速检测寨卡病毒操作简便,适用于口岸现场快速检测。     

血清学、核酸检测在乙型肝炎病毒血液筛查中的应用评估

目的对温州地区无偿献血者血液标本进行乙型肝炎病毒血清学、核酸联合检测,全面评估两者在降低输血相关传染性疾病中的作用。方法采集无偿献血者血液标本60 758份,用2种不同厂家ELISA试剂检测乙肝表面抗原,2种试剂均阳性采用单人份NAT检测HBV-DNA,2种试剂均阴性或单试剂阳性进行6人份混样检测,混样阳性再进行单人份拆分检测,比较2种检测方法检出率的符合性。结果 60 758份无偿献血者血液标本中,血清学和核酸检测均阴性为60 505份,血清学与核酸检测均阳性为103份,血清学阳性核酸阴性为70份,血清学阴性核酸阳性为80份。HBs Ag双试剂阳性、单试剂阳性与核酸阳性符合率分别为79.3%、19.3%。结论血清学、核酸检测在输血相关传染病检测中是一种互补关系,任何一种方法减少均带来了血液漏检风险的增加。