荧光定量多重PCR检测13种高危型人乳头瘤病毒

目的:了解用荧光定量多重PCR检测13种高危型人乳头瘤病毒(HPV)的检测情况。方法:选取用基因芯片法检测的20份标本,再用荧光定量多重PCR法进行检测。结果:荧光定量多重PCR法包含的基因型检测结果与基因芯片法一致,没有包含的基因型检测结果显示阴性。结论:荧光定量多重PCR检测13种高危型HPV,方法简便准确,但也会漏检少量没有包含基因型的阳性结果。     

实时荧光PCR在高危型人乳头瘤病毒检验中的诊断价值分析

目的：探讨实时荧光PCR法（ RT－PCR）在高危型人乳头瘤病毒（ HPV）检验中的诊断价值。方法选取2013年4月至2014年5月我院收治的进行宫颈薄层液基细胞学检查出现异常,并且进行了阴道镜病理活检的248例患者。分别采用实时荧光PCR法（ RT－PCR）、导流杂交法（ HybrMax）、PCR－反向点杂交法、杂交捕获Ⅱ代法（ HC－Ⅱ）、酶切信号放大法（ In-vader Technology ）对其宫颈细胞高危型HPV进行检测。之后以病理学组织检测的结果作为标准,对以上5种方法的阳性检出率、以及灵敏度、特异度等方面进行比较分析。结果实时荧光PCR法（RT－PCR）、导流杂交法（HybrMax）、PCR－反向点杂交法、杂交捕获Ⅱ代法（HC－Ⅱ）、酶切信号放大法（Invader Technology）对248例患者的阳性检出率分别为74．60％（185）、73．39％（182）、71．77％（178）、72．98％（181）、72．58％（180）,彼此相比较差异无统计学意义（P＞0．05）;其阳性预测值、阴性预测值、特异度、灵敏度相比亦无明显差异,差异无统计学意义（P＞0．05）,实时荧光PCR法与倒流杂交法、PCR－反向点杂交法、杂交捕获Ⅱ代法、酶切信号放大法的阳性符合率分别为100．0％、97．1％、96．3％、98．4％。结论通过实时荧光PCR与目前常用的几种高危型人乳头瘤病毒检测方法相比较,发现其与其他检验方法结果相近,有较好的准确性、灵敏度及可靠性,在高危型人乳头瘤病毒检验中具有较好的临床诊断价值。     

荧光定量PCR检测尖锐湿疣皮损中的人类乳头瘤病毒

目的:用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术准确定量检测尖锐湿疣中的人类乳头瘤病毒含量并分析其类型,为临床治疗提供依据。方法:采用实时FQ-PCR技术,检测了临床送检标本48份。结果:检测出人类乳头瘤病毒6,11型42例,人类乳头瘤病毒16,18型2例。结论:人类乳头瘤病毒6,11型是尖锐湿疣主要感染源。     

实时荧光聚合酶链反应技术检测人乳头瘤病毒高危亚型的临床应用

目的：采用实时荧光聚合酶链反应技术（实时PCR）检测10种人乳头瘤病毒（HPV）高危亚型,比较不同病变程度标本的HPV高危亚型的检出率。方法：采用实时PCR法检测240例妇女宫颈脱落细胞标本中的10种HPV高危亚型,并对部分标本的检测结果应用测序法进行验证。结果：10种HPV高危亚型总的检出率为42．9％;高度鳞状上皮细胞内病变（HSIL）组的检出率均较低度鳞状上皮细胞内病变（LSIL）组要高,分别为81．7％与52．5％。15例HPV检测阳性的标本经测序验证均在10种亚型的范围内。结论：实时PCR法能同时检测10种HPV高危亚型,操作简便、结果准确,适合临床上用于HPV高危亚型的筛查检测。     

基因微阵列分型与实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒

目的评价基因微阵列分型方法与实时荧光定量PCR技术检测人乳头瘤病毒及其对宫颈癌患者诊断的意义。方法基因微阵列检测人乳头瘤病毒21种亚型;实时荧光定量PCR技术定量检测人乳头瘤病毒6/11型和16/18型。结果基因微阵列检测人乳头瘤病毒较实时荧光定量PCR技术阳性检出率更高(P<0.05),而在特异性上无显著差异(P>0.05)。两种方法联合检测可以提高检测特异性和敏感度。结论基因微阵列分型方法可用于宫颈癌筛查,而实时荧光定量PCR技术对宫颈癌患者疗效判断和预后更有意义。     

应用荧光定量聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒DNA

笔者采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ- PCR)对人乳头瘤病毒 (HPV) HPV6、HPV11DNA的含量进行检测 ,现将结果报告如下。1　资料与方法1.1　病例选择 :选择我院 1999年 9月至 2 0 0 0年 5月妇科、皮肤科及泌尿外科门诊病人 5 4例。将症状、体征典型 ,病理诊断为尖锐湿疣 (CA)的患者 16例作为 CA组 ,其中男 8例 ,女 8例 ,年龄最小 18岁 ,最大 4 7岁 ,平均 (2 9± 6 .3)岁 ;将症状体征不典型 ,拟诊为 CA的患者 38例作为 CA可疑组 ,其中男 17例 ,女 2 1例 ,年龄最小 2 1岁 ,最大 5 3岁 ,平均 (32± 7.0 )岁 ;将 34例健康体检者作为对照组…     

中原地区妇女宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)感染各亚型分布特点

目的探讨中原地区妇女宫颈癌患者人乳头瘤状病毒(human papillomav irus,HPV)感染分布情况及主要型别。方法采用人乳头瘤病毒核酸扩增分型检测试剂盒,对80例中原地区妇女经病理确诊宫颈癌患者的宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测。结果 80例宫颈癌患者中有76例HPV阳性,阳性率为95.0%,其中HPV16感染率最高为53.9%,其他高危型的感染率从高到低依次为HPV16、52、58、33、18、31、56、68、59、39、45、35、51。低危型中HPV11型感染率最高为10.5%,其他低危型的感染率从高到低依次为HPV6、44、42、43。多重感染率为25.0%。正常对照组65例中有15例HPV阳性(23.1%),HPV16感染率最高为26.7%。宫颈癌HPV阳性率明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论中原地区妇女宫颈癌患者中以HPV16、52、58、33感染为主要型别,可能是中原地区妇女宫颈癌较易感染的型别。     

荧光定量PCR技术检测生殖道人乳头瘤病毒6,11型结果分析

目的:了解人乳头瘤病毒6,11型(HPV6,11)的检出情况。方法:采用荧光定量PCR法对125例患者进行HPV6,11 DNA定量检测。结果:HPV6,11阳性率为32.00%(44/125);男性和女性阳性率分别为62.50%和6.56%;21～40岁年龄段患者占90.91%;2009年、2010年和2011年阳性检出率分别为55.56%、40.00%和27.78%,有下降趋势。结论:加强患者人乳头瘤病毒6,11型的检测,对其防治有重要意义。     

荧光定量PCR与全自动生物芯片法检测人乳头瘤病毒的一致性研究

背景 人乳头瘤病毒(human papillomaviruses,HPV)分型检测是宫颈癌筛查的重要手段之一,但技术人员短缺及实验室硬件设施不足对其应用造成了不利影响。目的 以荧光定量聚合酶链式反应(PCR)为参考,考察全自动生物芯片法在HPV分型检测中的诊断性能。方法 针对常规进行荧光定量PCR检测的临床样本,每一种型别均采用抽签法进行简单随机抽样,选中的样本使用全自动生物芯片法检测,采用Kappa检验比较两种方法的检测结果是否存在差异。针对不一致结果,通过E6/E7区的扩增产物测序进行确认。结果 从4 589例样本中选择124例,其中HPV阴性50例,HPV阳性74例,按照阳性型别计算共99个测试。按照样本阴性、阳性计算,两种方法的结果完全一致,Kappa值为1.000(P<0.000 1)。按照样本型别计算,全自动生物芯片法的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和总体符合率分别为98.0%、92.6%、96.0%、96.2%和96.1%,Kappa值为0.913(P<0.000 1),提示两种方法的结果一致性良好。两种方法不一致的结果集中在6例阳性样本之中,39型和...     

猴免疫缺陷病毒(SIV)实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立快速、敏感、特异的猴免疫缺陷病毒(SIV)TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,对SIV病毒核酸进行定量检测。方法 RT-PCR扩增SIVmac251保守gag基因序列796 bp片段,进行TA克隆,构建标准品质粒pMD-SIVgag。通过对SIV定量外标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。结果所建立的SIV QPCR检测方法,质粒DNA模板在107～102拷贝之间表现较好线性和相关性,标准曲线所得斜率为-3.26,相关系数为0.999。检测灵敏度达到200拷贝,方法重复性测试,检测25份临床样品CV%均小于1%。结论建立的SIV QPCR检测方法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)核酸拷贝量。     

实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价 

目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法,为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细
菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区,依据双歧杆菌的16SrRNA序列共设计3条引物,以常规PCR扩增出的16SrRNA部分基因片段制作标准品,应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料,对连续稀释的标准品及待测样本进行分析,建立绝对定量的标准曲线,同时计算出待测样本双歧杆菌浓度;根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度;分析PCR产物熔解曲线评价反应特异性;重复检测梯度稀释的标准品,用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp,测序结果正确,成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品;生成的标准曲线R2=0.999,最低检测限度为每个反应1.48×102个拷贝;实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量PCR检测,各组间每微升1.48×103~1.48×107个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94%、3.39%、3.54%、3.08%和3.34%。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数?g-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量PCR法敏感性高、特异性强,且重复性好,适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。     

CAR菌TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测方法的建立与应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测CAR菌的TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法。方法 针对CAR菌16S rRNA基因序列设计特异性引物和探针,建立MGB探针荧光定量PCR方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008~2012年期间采集的1344份临床标本中的CAR菌进行检测,同时进行普通PCR检测作为对照。结果 CAR菌TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有高度特异性,与肺炎支原体、侵肺巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希氏菌、肺炎链球菌间无交叉反应,检测灵敏度达2.7拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.22,TaqMan MGB探针荧光定量PCR效率为104.432%。对1344份标本进行检测,结果TaqMan MGB探针荧光定量PCR检出510份CAR菌阳性样本。TaqMan MGB探针荧光定量PCR能够直接从标本中检出CAR菌DNA,检测时间仅为40分钟。结论 TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于CAR菌的快速检测。