外周血淋巴细胞穿孔素和颗粒酶B检测在诊断移植肾急性排斥反应中的价值

目的探讨外周血淋巴细胞(PBL)穿孔素和颗粒酶B表达水平在肾移植诊断急性排斥反应(AR)和抗排斥疗效中的关系。方法采用定量逆转录PCR(RT-PCR)方法动态测定AR(n=7)、肾功延迟恢复(n=8)、近期肾功正常(n=27)、长期肾功稳定(n=25)组67例肾移植患者移植前后PBL穿孔素和颗粒酶B表达水平和AR的关系。结果肾移植术后患者PBL穿孔素和颗粒酶B表达强度依次为AR组、肾功延迟恢复组、近期肾功正常组、长期肾功稳定组,AR组与其它3组差异有统计学意义(P<0.01);其升高时间比临床上出现AR的症状早约3d,随着AR的逆转,其表达也逐渐降至原有基础水平。结论定量RT-PCR测定PBL穿孔素和颗粒酶B的表达可以是一种无创的、较敏感的早期诊断肾移植AR的方法,并可预测抗排斥反应治疗效果。     

外周血淋巴细胞穿孔素和颗粒酶B在诊断移植肾急性排斥反应中的应用

目的 探讨外周血淋巴细胞（PBL）穿孔素和颗粒酶B表达水平在肾移植诊断急性排斥反应（AR）和抗排斥疗效中的临床价值。方法 采用定量逆转录PCR（RT—PCR）方法动态测定AR（7例）、肾功延迟恢复（8例）、近期肾功正常（27例）、长期肾功稳定（25例）的肾移植患者移植前后PBL穿孔索和颗粒酶B表达水平和AR的关系。结果 肾移植术后患者PBL穿孔素和颗粒酶B表达强度依次为AR组、肾功延迟恢复组、近期肾功正常组、长期肾功稳定组，AR组与其他三组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；其升高时间比临床上出现AR的症状早3d左右，随着AR的逆转，其表达也逐渐降至基线水平。结论 定量RT—PCR测定PBL穿孔棠和颗粒酶B的表达是一种无创、较敏感的早期诊断肾移植AR的方法，可以预测抗排斥反应的治疗效果。     

n-3多不饱和脂肪酸对大鼠小肠移植慢性排斥肠黏膜细胞凋亡的抑制作用

目的: 探讨大鼠小肠移植后移植肠发生慢性排斥时,口服n-3多不饱和脂肪酸对移植肠黏膜细胞凋亡、颗粒酶B和穿孔素表达的调控作用. 方法: 将大鼠分为三组:①Lewis- Lewis组,口服玉米油;②F344-Lewis组,口服玉米油;③F344-Lewis组,口服鱼油.所有受鼠在移植术后16周取材检测.用流式细胞法检测肠黏膜细胞凋亡,RT-PCR法检测穿孔素和颗粒酶的表达. 结果: 慢性排斥发生后,移植肠黏膜细胞凋亡率、颗粒酶B和穿孔素的表达明显增加.口服鱼油可抑制移植肠黏膜细胞的凋亡、颗粒酶B和穿孔素的表达. 讨论: 口服n-3多不饱和脂肪酸能抑制慢性排斥期移植肠的排斥反应,提高受鼠和移植物的存活率,延缓移植物的慢性失功.     

落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响

目的用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响。方法分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105m l-1)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106m l-1),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分2组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇甙组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/m l)。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR法检测T细胞穿孔素和颗粒酶B表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.01),穿孔素和颗粒酶B表达明显低于对照组(P<0.01)。结论落新妇甙诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡的同时也抑制了穿孔素和颗粒酶B的释放,从而有效拮抗心脏移植排斥反应。     

亲属活体肾移植75例报告

目的通过对75例活体亲属肾移植的实施、观察及随访结果,探讨活体亲属肾移植供体选择指征和治疗经验。方法分析总结1999年3月～2009年7月我院实施的75例亲属活体肾移植的供受者临床资料、风险评估、配型、手术方法及免疫抑制剂方案。结果4例供者术中轻度胸膜损伤,经及时处理无不良后果,1例供者术后发生乳糜淋巴瘘,引流2w后痊愈,其余供者术后未出现并发症,术后肾功能正常。75例受者中有不同程度的排斥反应、移植肾功能延迟恢复、感染等并发症。结论亲属活体肾移植急性排斥反应明显低于尸体肾移植,具有近期移植肾功能恢复好、经济代价小的优势,移植肾长期存活效果还有待随访观察,活体供肾也存在一些伦理学的争议。     

肾移植群体反应性抗体水平与排斥反应的观察

目的探讨群体反应性抗体(PCR)对肾移植效果的影响.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)对182例肾移植受者的血清PRA进行检测.同时对120份血清分成四组包括首次移植术前及术后1个月,半年至1年肾功能稳定期病人,第一次尸肾移植失功恢复血透病人进行PRA检测.结果PRA阴性组受者移植术后排斥发生率为11.7%,阳性组受者平均PRA高达40.3%,两组比较差异显著(P<0.001).首次移植术前A组阳性率15.4%,术后B组阳性率25.0%,肾功能稳定组(C组)PRA阳性率11.1%.而移植失功恢复血透者(D组)PRA阳性率达73.3%.结论PRA的检测是肾脏移植术前筛选致敏受者的重要指标,与肾脏移植后排斥反应关系密切.     

外周血淋巴细胞穿孔素mRNA的表达水平与小儿病毒性心肌炎的关系

目的:探讨病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞穿孔素mRNA的表达水平。方法:用半定量RT-PCR方法,测定病例组与对照组外周血淋巴细胞穿孔素mRNA的表达水平。结果:30例病毒性心肌炎的外周血淋巴细胞穿孔素mRNA相对含量为1.31±0.06,与对照组相比有显著差异(P<0.05)。结论:淋巴细胞穿孔素mRNA水平的增高可能是病毒性心肌炎发生的一个重要原因。     

13例活体供肾肾移植临床分析

目的探讨活体供肾肾移植手术的临床效果及可行性、安全性。方法回顾分析13例活体供肾肾移植临床资料。结果13对供受者全部存活。所有移植肾肾功能均在术后2~4 d恢复正常,无肾功能延迟恢复,1例受体术后10 d发生急性排斥,抗排斥治疗逆转。人/肾1年存活率100%;13例供体术后无严重并发症,10 d内出院。结论活体供肾肾移植安全可行,效果优于同期尸体供肾移植,且能缓解肾源短缺的状况。     

乙型肝炎病毒感染者外周血T细胞亚群和穿孔素-颗粒酶变化

目的探讨HBV感染者外周血单个核细胞(PBMC)中T淋巴细胞亚群分布频率及穿孔素和颗粒酶B表达的变化。方法通过细胞表面标记和细胞内细胞因子染色技术,采用流式细胞术分析HBV感染者PBMC中CD4+、CD8+T细胞的分布以及穿孔素和颗粒酶B的表达。结果与正常对照相比,急性和慢性乙肝患者CD4+T细胞百分率无明显改变,CD8+T细胞以及穿孔素和颗粒酶B表达均显著增高(前者P<0.01,后者P<0.05)。HBV携带者CD4+T细胞显著降低(P<0.05),CD8+T无明显改变。三组CD4+/CD8+T比例均显著降低(P<0.05)。结论与HBV携带者不同,急性和慢性乙肝患者CD8+T细胞频数及穿孔素和颗粒酶B表达均明显增高,提示细胞毒T细胞的数量及细胞毒颗粒表达与病毒清除和肝损害相关;急性和慢性患者在增高程度上的差异提示慢性乙肝的细胞免疫和细胞毒反应的不完全。     

肾移植受者血清可溶性白介素-2受体和超敏C反应蛋白变化研究

目的 探讨肾移植患者血清中可溶性白介素_2受体(sIL-2R)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)表达水平的变化,了解其在移植排斥反应中的临床意义.方法 测定91例肾移植患者血清及1130名正常体检人员的血清中slL-2R和hs-CRP浓度.使用乳胶增强免疫透射比浊检测hs-CRP,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测可溶性白介素-2受体(sIL-2R)的表达水平.结果 急性排斥组sIL-2R和超敏C反应蛋白表达水平均显著高于肾功能稳定组及正常对照组,慢排组超敏C反应蛋白表达水平高于肾功能稳定组及正常对照组,肾功能稳定组可溶性白介素-2受体、hs-CRP的表达水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 监测sIL-2R和超敏C反应蛋白的表达水平有助于肾移植排斥反应的诊断.     

EV71手足口病患儿CD8~+T、NK细胞穿孔素和颗粒酶B的变化

目的探讨肠道病毒7l型(EV71)手足口病患儿CD8~+T、NK细胞穿孔素(PRF)和颗粒酶B(Grz B)的变化。方法选取某儿童医院2017年5—7月普通型、重型手足口病患儿(普通型组、重型组),健康儿童志愿者(正常对照组)各30例,采用流式细胞术测定外周血CD8~+T、NK细胞PRF和Grz B的表达水平,比较各组差异。结果与正常对照组相比,普通型组和重型组EV71手足口病患儿急性期两种细胞中PRF和Grz B的表达水平均升高,差异有统计学意义(均P 0. 05)。普通型组和重型组EV71手足口病恢复期患儿CD8~+T细胞PRF、Grz B的表达水平较急性期明显下降,但仍高于正常对照组(均P 0. 05)。NK细胞PRF、Grz B的表达水平:普通型组和重型组急性期比较,差异均无统计学意义(均P 0. 05);普通型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期虽稍升高,但差异仍无统计学意义(均P 0. 05);重型组EV71手足口病恢复期患儿较急性期明显升高(均P 0. 05)。结论 CD8~+T、NK细胞PRF和Crz B在EV71手足口病发病中起着一定作用。     

免疫吸附联合赛尼哌预防高致敏人群肾移植急性排斥反应研究

目的探讨免疫吸附联合赛尼哌（zenapax）对高致敏人群肾移植排斥反应的预防作用。方法对10例群体反应抗体（PRA）大于40％的肾移植患者，术前行免疫吸附，并使用两次剂量Zenapax，观察急性排斥发生情况及不良反应。结果10例高致敏患者仅有2例术后发生急性排斥反应，通过免疫吸附及调整免疫抑制剂得到逆转，无其他不良反应。结论免疫吸附联合Zenapax可以安全、有效的预防高致敏人群肾移植术后急性排斥反应。     

肾小管泌氢功能在肾移植术后应用价值的探讨

目的对肾移植患者术后连续10周肾小管泌氢功能进行监测。方法检测26例肾移植患者术前及术后连续10周中段尿pH、HCO3-、NH4 、TA(可滴定酸),计算NAC(净酸)量。结果移植早期肾小管功能恢复快而不平稳,6周后趋于平稳,15例次急性排斥期TA、NH4 、NAC值均显著降低,排斥轻、对激素冲击治疗效果好者各值回升迅速;排斥重、须加用抗胸腺淋巴细胞球蛋白(ATG)或延长激素冲击治疗者恢复较慢。结论肾小管泌氢功能可弥补血清肌酐不能良好反映肾小管功能的不足,能在连续观察中对移植肾急性排斥反应的诊断,特别是对抗排斥治疗的效果判断和预后评估中作为有价值的指标。     

苯作业工人淋巴细胞p53相关基因mRNA表达水平分析

目的 了解苯环境作业工人外周血淋巴细胞中,经p53介导的DNA损伤修复路径相关基因表达水平.方法 选择某喷涂厂直接接苯工人46人(直接接苯组)、间接接苯工人26人(间接接苯组)和无苯及其他毒物接触工人29人(对照组),应用SYBR GreenI嵌合荧光法实时RT-PCR分析技术,检测外周血淋巴细胞p53及相关基因mRNA表达水平,比较对照组与作业组问P53及相关基因mRNA表达倍数差异.结果 直接接苯组和间接接苯组p53、Ku80、Ape1和Mdm-2 mRNA表达水平与对照组比较磋异无统计学意义(P＞0.05);p21有增高趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).直接接苯组的Rad51、Bcl-2、Bax、Xpa和Xpc mRNA表达水平下调、间接接苯组Rad51 mRNA表达下调,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).直接接苯组的白细胞、血红蛋白和血小板分别为(4.93±1.27)×10- /L、(123.97+11.80)g/L和(124.02±41.22)×109 /L,间接接苯组血小板为(135.80±39.44)×109 /L,均低于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 长期慢性的低浓度苯接触可使工人淋巴细胞中p53介导的部分DNA损伤修复相关基因mRNA表达水平发生改变,直接接苯工人的外周血白细胞、血红蛋白、血小板减低以及Bcl-2、Bax、Xpa和Xpc mRNA表达水平改变明显.     

Healthy lifestyles are associated with higher levels of perforin, granulysin and granzymes A/B-expressing cells in peripheral blood lymphocytes

OBJECTIVE: It is well documented that natural killer (NK) cells provide host defense against tumors and viruses. We previously showed that lifestyle affects human NK and LAK activities. In order to explore the underlying mechanism, we investigated the effect of lifestyle on intracellular perforin, granulysin, and granzymes A/B in peripheral blood lymphocytes (PBL). METHODS: 114 healthy male subjects, aged 20-59 years, from a large company in Osaka, Japan were selected with informed consent. The subjects were divided into groups reporting good, moderate, and poor lifestyles according to their responses on a questionnaire regarding eight health practices (cigarette smoking, alcohol consumption, sleeping hours, working hours, physical exercise, eating breakfast, balanced nutrition, and mental stress). Peripheral blood was taken, and numbers of NK, T, perforin, granulysin, and granzymes A/B-expressing cells in PBL were measured by flow cytometry. RESULTS: Subjects with good or moderate lifestyle showed significantly higher numbers of NK, and perforin, granulysin, and granzymes A/B-expressing cells and a significantly lower number of T cells in PBL than subjects with poor lifestyle. Among the eight health practices, cigarette smoking, physical exercise, eating breakfast, and balanced nutrition significantly affect the numbers of NK, T cells, perforin, granulysin, and/or granzymes A/B-expressing cells, and alcohol consumption significantly affects the number of granzyme A-expressing cells. On the other hand, mental stress, sleeping, and working hours had no effect on those parameters. CONCLUSIONS: Taken together, these findings indicate that poor lifestyle significantly decreases the numbers of NK, perforin, granulysin, and granzymes A/B-expressing cells in PBL.