表达幽门螺杆菌UreA和KatA双价抗原的鼠伤寒菌疫苗株的初步构建

目的　构建表达幽门螺杆菌 (Hp)尿素酶A亚单位 (UreA)和过氧化氢酶 (KatA)的减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株 ,对研制抗Hp感染重组疫苗的可行性进行探讨。方法　PCR方法从Hp基因组中扩增出ureA和katA片段 ,将其插入pGSTag表达载体中 ,重组质粒再转入减毒鼠伤寒沙门氏菌。结果　对重组质粒进行限制酶切分析和PCR检测 ,证实两种基因已被克隆入pGSTag ,并转入减毒鼠伤寒沙门氏菌。结论　本研究成功地将表达HpureA和katA融合基因的重组质粒转入减毒鼠伤寒沙门氏菌中 ,构建了UreA/KatA双价口服活疫苗 ,为进一步研究其在预防Hp感染中的作用奠定了基础     

幽门螺杆菌过氧化氢酶脂质体疫苗免疫预防研究

目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(Kat)口服疫苗的方法,并用Hp感染的小鼠模型评价其在预防Hp感染中的作用。方法将PET-22(+)/Kat在BL21(DE3)大肠杆菌表达,表达Kat的包涵体经洗涤、变性、复性,采用Q Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤层析分离纯化Kat重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Kat重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。BALB/c小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Kat重组蛋白+CT、脂质体包裹Kat重组蛋白、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活Hp攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、Hp的定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分。结果以包涵体为主的表达产物占全菌总蛋白的24.4%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为0.7±0.4μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Kat重组蛋白+CT组、脂质体包裹Kat重组蛋白组、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃粘膜Hp感染数目明显减少,炎症反应减轻。结论口服脂质体部能分代替免疫佐剂的作用,将其作为Hp疫苗的免疫佐剂,具有广泛的应用前景。     

幽门螺杆菌核酸疫苗的研究

幽门螺杆菌(H.pylori)与多种胃肠道疾病密切相关，在人群中的感染率较高，目前的“三联”或“四联”抗H.pylori治疗由于治疗费用、抗生素耐药等受到一定限制，为了有效控制H.pylori感染，疫苗尤其是核酸疫苗的研制逐渐成为该研究领域的热点，被认为是防治H.pylori最有前景的方法。     

表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的减毒鼠伤寒杆菌口服疫苗的制备

目的制备抗幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)减毒鼠伤寒杆菌活菌疫苗,观察其免疫效果.方法构建表达UreB的原核表达载体PTc01-UreB并转化减毒鼠伤寒杆菌SL3261,得到重组菌SL3261/PTc01-UreB.应用抗Hp菌体蛋白兔血清行Western-blot检测UreB在SL3261中的表达.将SL3261/PTc01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后应用ELISA检测肠液和血清中的特异性抗体反应.SL3261/PTc01-UreB在Luria-Bertani培养液中连续传代60代以确定其稳定性.结果成功构建PTc01-UreB原核表达载体.Western-blot显示,其转化减毒鼠伤寒杆菌SL3261后能表达相对分子质量约61×103的蛋白,与HpUreB亚单位相符,具有抗原性.口服免疫小鼠后,在肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性IgA和IgG抗体.体外连续培养60代未见PTc01-UreB质粒丢失及对宿主细胞毒性.结论表达HpUreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/PTc01-UreB可用作抗Hp感染口服疫苗.     

幽门螺杆菌疫苗抗原的研究进展

幽门螺杆菌疫苗可能是防治幽门螺杆菌感染所致上消化道疾病的有效途径,而有效疫苗抗原的研制是关键和基础,本文综述了幽门螺杆菌疫苗尤其是各种保护性疫苗抗原的研究进展。     

幽门螺杆菌疫苗的研究

自从1982年Warren和Marshall^[1]首次从人胃黏膜标本分离培养出幽门螺杆菌(Hdicobacter pylofi，H．pylofi，以下仍按中国习惯称Hp)以来，人们对其与胃十二指肠疾病的关系认识越来越深入，寻找有效的Hp疫苗以预防及治疗相关疾病的研究也随之展开。本文对大量相关文献进行纵览，就此问题综述如下。     

重组幽门螺杆菌过氧化氢酶脂质体疫苗免疫预防研究

目的探讨制备脂质体包裹重组幽门螺杆菌过氧化氢酶(Kat)口服疫苗的方法,并用Helicobacterpylori感染的小鼠模型评价其在预防H·pylori感染中的作用。方法将PET_22( )/Kat在BL21(DE3)大肠杆菌表达,表达Kat的包涵体经洗涤、变性、复性,采用QSepharoseFastFlow阴离子交换层析和SephacrylS_200凝胶过滤层析分离纯化Kat重组蛋白,用薄膜分散法制备以卵磷脂和胆固醇为膜组分包裹的Kat重组蛋白口服疫苗,并用透射电镜测定其粒径。BALB/c小鼠分为5组,分别通过灌胃方法给予PBS、空白脂质体、Kat重组蛋白 霍乱毒素(CT)、脂质体包裹Kat重组蛋白、脂质体包裹Kat重组蛋白和CT,每周1次共4次,末次攻击2周再用活H·pylori攻击3次,3周后处死小鼠,行胃组织快速尿素酶试验、H·pylori的定植半定量,取脾组织行淋巴细胞增殖试验。结果以包涵体为主的表达产物占全菌总蛋白的24.4%,经纯化获得纯度为95%的重组蛋白,制备的脂质体粒径为0.7±0.4μm。PBS组和空白脂质体组保护率均为0,而Kat重组蛋白 CT组、脂质体包裹Kat重组蛋白组、脂质体包裹Kat重组蛋白 CT组的保护率分别为73.3%、66.7%和86.7%,且均能使免疫小鼠胃黏膜H·pylori感染数目明显减少,三个疫苗组淋巴细胞增殖试验均为阳性。结论口服脂质体能部分代替免疫佐剂的作用,将其作为H·pylori疫苗的免疫佐剂,具有广泛的应用前景。     

幽门螺杆菌疫苗保护性抗原的研究进展

自Ｗａｒｒｅｎ和Ｍａｒｓｈａｌｌ于 1983年首次发现幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)以来 ,经过近 2 0年全球性的研究 ,世界卫生组织已将其列为一类致癌因子〔1〕。目前全球近 5 0 %的人口感染了Ｈｐ ,在发展中国家 ,其感染率可高达 70 %以上。然而 ,对于Ｈｐ的抗感染治疗尚存在较大问题。使用单剂药物根除率低 ,使用多联药物又造成费用太高 ,有效率也不太高 ,而且不能有效阻止Ｈｐ的再次感染和复发。此外 ,耐药菌株的增加也使抗Ｈｐ治疗面临越来越复杂的难题。因而 ,Ｈｐ疫苗已成为防治Ｈｐ感染最有效的途径。美…     

幽门螺杆菌尿素酶临床应用和疫苗研制进展

尿素酶为幽门螺杆菌在胃内定植和生存所必需,是幽门螺杆菌的主要毒力因子。近年来,对幽门螺杆菌尿素酶分子生物学特性、致病机理的深入研究使人们在幽门螺杆菌的诊断、治疗和疫苗研制方面有了一些新的认识和进展。     

尿素酶疫苗在防治幽门螺杆菌感染的动物实验研究

目的利用人类幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的小鼠模型研究Ｈｐ粗抗原及纯化尿素酶在预防与治疗Ｈｐ感染的作用。方法超声粉碎制备Ｈｐ全菌抗原,化学提纯制备Ｈｐ尿素酶,霍乱毒素（ＣＴ）为免疫佐剂。实验分为预防与治疗两部分。预防部分把实验动物无特定致病菌（Ｓ．Ｐ．Ｆ．）ＢＡＬＢ／ｃ小白鼠分成５组,分别通过灌胃方法给予尿素酶（２５０μｇ）加ＣＴ（２μｇ）、Ｈｐ粗抗原（１ｍｇ）加ＣＴ（２μｇ）、生理盐水、单纯尿素酶（２５０μｇ）、单纯ＣＴ（２μｇ）,每周１次,共４次。２周后再用活Ｈｐ灌胃,再４周后处死动物。治疗部分把已感染Ｈｐ的小白鼠分成５组,分组与治疗方法同预防部分,治疗结束后４周处死动物,取胃粘膜行尿素酶试验与改良Ｇｉｅｍｓａ染色检查Ｈｐ情况。结果预防实验的保护率分别为,尿素酶加ＣＴ７０％（７／１０）,Ｈｐ粗抗原＋ＣＴ８０％（８／１０）,生理盐水、单纯尿素酶、单纯ＣＴ保护率均为０。治疗实验各组Ｈｐ根除率分别为：尿素酶加ＣＴ６３．６％（７／１１）,Ｈｐ粗抗原加ＣＴ４４．４％（４／９）,生理盐水组、单纯尿素酶、单纯ＣＴ组均无治疗作用。结论由尿素酶加免疫佐剂组成的口服疫苗,不仅有预防Ｈｐ感染的作用,同时也有根除已感染的Ｈｐ的作用。     

重组减毒沙门菌尿素酶B亚单位和过氧化氢酶疫苗治疗幽门螺杆菌感染的实验研究

目的　利用人类幽门螺杆菌 (Hp)感染的小鼠模型研究重组减毒沙门菌尿素酶B亚单位和过氧化氢酶疫苗在治疗Hp感染中的作用。 方法　将 30只二级C5 7BL/ 6小鼠随机分成 3组 ,通过灌胃方法每只小鼠均用活力良好的Hp菌株隔日攻击 2次。在第二次Hp攻击后 4周 ,分别给予重组减毒沙门菌尿素酶B亚单位疫苗 (A组 )、过氧化氢酶疫苗 (B组 )和生理盐水 (C组 )灌胃 1次 ,4周后处死动物 ,取胃组织分别行尿素酶试验、改良Giemsa染色及定量细菌培养 ,观察Hp定植情况。行HE染色观察胃黏膜组织炎症情况。取脾组织行淋巴细胞增殖试验。结果　C组小鼠Hp定植密度为 1.92× 10 6CFU/g胃组织 ,A组和B组小鼠分别为 1.5 8× 10 5CFU/g和 4 .88× 10 5CFU/g胃组织 ,两个治疗组的定植密度明显降低 (P <0 .0 5 )。治疗组与对照组胃黏膜均无明显炎症反应。治疗组脾淋巴细胞增殖试验阳性。结论　重组减毒沙门菌尿素酶B亚单位疫苗和过氧化氢酶疫苗对Hp感染有治疗作用。     

表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建和鉴定

目的构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter     

幽门螺杆菌疫苗的研究进展

现今的幽门螺杆菌 (Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,Ｈｐ)治疗方案是以抗生素联合应用质子泵抑制剂 (ＰＰＩ)或 (和 )铋剂的“三联”或“四联”疗法 ,但由于患者依从性、药物副作用、停药后复发和再感染 ,特别是耐药菌株迅速增加等问题的存在使其应用前景受限。免疫防治为解决这一棘手问题提供了新手段。现已普遍认为Ｈｐ疫苗是在全球范围内控制Ｈｐ感染的最有效方法[1] 。在 1990年Ｈｐ疫苗的构想提出时 ,还有许多人对发展Ｈｐ疫苗持怀疑态度 ,而如今Ｈｐ疫苗的研制已成为世界Ｈｐ研究领域的热点 ,并取得了令人瞩目的进展。一、Ｈｐ…     

幽门螺杆菌疫苗研究的进展

幽门螺杆菌疫苗研究的进展潘其英多数幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染者血液中有大量的抗Ｈｐ抗体存在。虽然有这种抗体存在，但细菌仍可在胃上皮定居，并持续存在，除非使用治疗手段将其去除［１］。天然引起的免疫反应并不能够清除Ｈｐ感染，人工引起的保护性免疫会有什么作用呢...     

幽门螺杆菌感染诊断方法的评价

幽门螺杆菌感染诊断方法的评价张玲霞张沥ＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ；ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ／ｄｉａｇｎｏｓｉｓ；ｕｒｅａｓｅ／ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｕｓｅ主题词螺杆菌，幽门；螺杆菌感染／诊...     

幽门螺杆菌疫苗的研究进展

摘要幽门螺杆菌（H.pylori）是人类上消化道疾病的重要致病菌，为慢性胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡的主要病因。目前临床治疗尚存在诸多不足，研制疫苗对预防和控制H.pylori感染具有十分重要的意义。经过20余年的发展，H.pylori疫苗在动物模型建立、候选抗原的选择、佐剂和投递方式的优化等方面均已取得了较大突破。本文主要就全菌疫苗、亚单位疫苗（基因工程疫苗）、活载体疫苗和DNA疫苗四种类型的H．pylori疫苗的研究现状作一概述。     

携带幽门螺杆菌hpaA基因减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建

构建携带幽门螺杆菌（H.pylori)hpaA基因的重组活减毒鼠伤沙门疫苗菌。方法：用分子生物学方法将hpaA基因克隆入原核表达质粒pTrc99A,并进行核苷酸测序,重组质粒经再导入活减毒鼠伤寒沙门菌SL3261,提取重组菌苗质粒,聚合酶链反应（PCR）和酶切鉴定,筛选目的克隆。结果：经PCR和酶切证实,构建了携带hpaA基因（560bp)的重组核表达质粒pTrc99A-hpaA,并将后者成功转化活减毒鼠伤寒沙门菌SL3261。结论：S我建并鉴定了携带H.pylorihpaA基因的重组活减毒鼠伤寒沙门疫苗菌,为探索制备H.ylori口服份活疫苗奠定了基础。