醋酸铅对大鼠脑细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的：探讨醋酸铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对bcl-2,bax基因表达的影响。方法：24只SD大鼠腹腔注射醋酸铅5d,剂量分别为25,50,100mg/kg体重,第6天取其大脑皮层,海马,小脑组织,用流式细胞仪分别测定其细胞凋亡率和bcl-2 bax基因的表达产物Bcl-2蛋白,Bax蛋白。结果：各染铅组大鼠皮层,海马,小脑细胞亡率明显升高,与对照组相比差异具有显著性,并具有良好的剂量－反应关系;bcl-2基因表达（FI指数）明显降低,而bax基因表达则明显增加,与对照组相比差异均具有显著性（P＜0．01）,并具有良好的剂量－反应关系,Bcl-2/Bax明显下降,与对照组相比差异具有显著性,并具有良好的剂量－反应关系,相关分析表明,大鼠大脑皮层,海马和小脑细胞凋亡率与Bcl-2含量呈负相关,而与Bax含量正相关,与Bcl-2/Bax呈负相关。结论：铅可以诱发大鼠脑细胞凋亡,其机制可能与脑组织内bcl-2基因表达下调,bax基因表达上调以及Bcl-2/Bax下降有关。     

薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及机制研究

目的 研究薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及其机制.方法 采用不同浓度薏苡仁油作用于卵巢癌SKOV3细胞,MTT法观察薏苡仁油对SKOV3细胞存活率的影响.采用Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色、DNA Ladder检测、流式细胞仪检测薏苡仁油对SKOV3细胞凋亡的影响.Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Capase 3、8、9的表达情况.结果 与对照组相比,400μg/mL和500μg/mL薏苡仁油浓度可在处理后24 h、48 h和72 h显著降低SKOV3细胞存活率(t值4.635～5.231,P<0.05),其作用随着时间的延长而增加.薏苡仁油低浓度50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L作用于卵巢癌SKOV3细胞48h诱导凋亡效果较好.薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色均可见典型的凋亡小体.不同浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,与对照组相比较,细胞凋亡均显著增多(t值分别为2.536、3.012、4.908,P<0.05),其中200μg/m L组细胞总凋亡率高达(27.10±5.42)％.与对照组相比较,薏苡仁油浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL作用于SKOV3细胞48h后,Bax、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达均显著增高(t值2.436～5.709,P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下降(t值2.357～4.304,P<0.05).结论 薏苡仁油可诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡,其机制可能与下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3、8、9的表达水平有关.薏苡仁油有可能抑制卵巢癌细胞的扩散、转移.     

枸杞多糖对慢性辐射小鼠细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的：探讨枸杞多糖(LBP)对辐射小鼠细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响。方法：以水提取-乙醇沉淀法制备枸杞多糖，并制成0．8％的饲料，给予受试小鼠(枸杞多糖组)。正常对照组、辐射对照组给予普通饲料。除正常对照组外，另两组均用^60Coγ射线对动物进行全身性照射，每天照射1次，每天照射剂量为0.084Gy，每周照射5d，连续照射6w，照射总剂量为2.52Gy。检测骨髓微核率、睾丸精母细胞染色体畸变、精子畸形率、肝细胞caspase-3 mRNA表达水平、细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达等指标。结果：LBP可使辐射引起的微核率、染色体畸变、及精子畸形率显降低，骨髓细胞增殖活性提高，凋亡率降低，使辐射小鼠bcl-2基因表达提高、caspase-3 mRNA表达水平降低。结论：枸杞多糖的抗辐射作用与其调控细胞bcl-2基因表达，影响细胞凋亡有关。     

AKT基因被RNA干扰抑制后对卵巢癌SKOV3细胞增殖及凋亡的影响

目的通过RNA干扰技术阻断卵巢癌SKOV3细胞中AKT基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,分为对照组、空白载体组与RNA干扰组三组,采用MTT法与流式细胞仪AnnexinV／PI法检测并评价AKT基因干扰后对卵巢癌细胞增殖、凋亡的影响。结果MTF结果显示RNA干扰组细胞增殖能力较对照组与空白载体组明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）,空白载体组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;流式细胞仪AnnexinV／PI法检测结果显示,RNA干扰组细胞凋亡率高达到（79．52±2．31）％,较对照组与空白载体组明显升高,约是空白载体组与对照组的3倍,差别具有统计学意义（P〈0．05）。结论靶向AKT基因的小干扰RNA（siRNA）可有效地抑制卵巢癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,是卵巢癌的治疗新方法。     

醋酸铅对大鼠脑细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的　探讨醋酸铅 (PbAc)对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对bcl 2基因表达的影响。方法　SD大鼠腹腔分别注射PbAc 2 5、5 0、10 0mg/kg 5d ,第 6天用流式细胞仪分别测定其大脑皮层、海马和小脑组织的细胞凋亡率和bcl 2基因的表达产物Bcl 2蛋白含量。结果　染铅大鼠大脑皮层、海马、小脑细胞凋亡率 (% ) :2 5mg/kgPbAc组为 5 .80± 0 .87、4.82± 0 .37、4.82± 1.2 3 ,5 0 mg/kg组值高于 2 5mg/kg组 ,10 0mg/kg组值高于 5 0mg/kg组 ,均比对照组 (1.40± 0 .70、2 .0 0± 0 .6 3、1.6 6±0 .49)高 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;并有剂量 -反应关系 (r值分别为 0 .998、0 .989、0 .997)。染铅大鼠大脑皮层、海马、小脑bcl 2基因表达 (FI指数 ) :2 5mg/kgPbAc组为 0 .6 8± 0 .0 3、0 .6 1± 0 .0 6、0 .6 9± 0 .0 5 ;5 0mg/kg、10 0mg/kg组值均与 2 5mg/kg组接近 ,但均比对照组 (1.0 0± 0 .13、1.0 0±0 .17、1.0 0± 0 .13)降低 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;并有剂量 -反应关系 (r值分别为 0 .886、0 .787、0 .832 )。大鼠大脑皮层、海马和小脑细胞凋亡率与Bcl 2含量呈负相关 (r值分别为 - 0 .75 0、- 0 .5 0 9、- 0 .6 6 7)。结论　铅可以诱发大鼠脑细胞凋亡 ,其机制可能与脑组织内bcl 2基因表达下调有关     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

薯蓣皂甙元诱导人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡及对Survivin基因表达的影响

目的观察薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910凋亡的诱导作用,并探讨其凋亡机制与survivin基因的关系。方法通过MTT法,流式细胞仪等方法研究薯蓣皂甙元对人卵巢癌细胞系HO-8910的诱导凋亡作用,运用RT-PCR分析薯蓣皂甙元对HO-8910细胞survivin表达的影响。结果薯蓣皂甙元在浓度为12.5μg/m l至100μg/m l,作用HO-8910细胞24、48、72 h可以明显抑制HO-8910细胞增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),且呈时间剂量依赖性。在浓度为25μg/m l及50μg/m l时,流式细胞仪可以检测到明显的凋亡峰,且HO-8910细胞表达Survivin基因较用药前明显下降。结论薯蓣皂甙元可以诱导HO-8910细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin表达有关。     

丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制和诱导凋亡作用及其可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞SKOV3,经TanⅡA作用后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测Survivin与Smac/DIABLO mRNA表达水平;免疫荧光细胞化学检测Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白的表达。结果:1.0～10.0μg/ml TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制作用,并具有时间-剂量依赖性。实验组较对照组G1/G2期细胞数量增多,而S期细胞数量减少(P<0.05)。随着TanⅡA干预浓度的增加和作用时间的延长,Survivin mRNA的表达受到明显抑制(P<0.05),而Smac/DIABLO mRNA的表达明显上调(P<0.05)。Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白均表达于SKOV3细胞,其表达多定位于细胞质中,偶见于细胞核。结论:TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过抑制人卵巢癌细胞SKOV3 Survivin和促进Smac/DIABLO的表达而实现的。     

醋酸铅对大鼠脑细胞凋亡及bax基因表达的影响

有文献报道,铅的神经毒性可能和脑细胞凋亡有关.近年来,许多研究发现,bax基因在细胞凋亡的调控过程中起着重要作用.本研究通过检测醋酸铅染毒大鼠脑细胞凋亡的发生情况及bax基因表达的变化,探讨铅的神经毒性与细胞凋亡及bax基因表达的关系.     

大蒜油和白藜芦醇联合应用诱导胃癌细胞凋亡及对Fas、bcl-2和bax基因表达的影响

目的观察大蒜油和白藜芦醇联合用药对人胃癌MGC-803细胞凋亡及对Fas抗原表达、bcl-2基因、bax基因mRNA表达的影响。方法实验设大蒜油和白藜芦醇联合用药组1（各25μg／ml）、联合用药组2（各50μg／ml）和空白对照组,应用DNA梯度电泳及流式细胞术检测药物作用24h后细胞凋亡情况及Fas抗原表达情况;应用RT-PCR方法检测用药24h和48h后胃癌细胞bcl-2、bax基因mRNA表达水平。结果DNA梯度电泳可见联合用药组出现明显的“Ladder”带;流式细胞术显示各用药组annexin v阳性细胞数比对照组明显增多;联合用药组1和联合用药组2细胞Fas抗原表达阳性率分别为10．59％和14．16％,比对照组（5．27％）明显增高并有显著的统计学意义;各联合用药组Bcl-2基因mRNA表达水平比对照组下降而Bax基因mRNA表达升高。结论大蒜油和白藜芦醇联合用药诱导胃癌细胞凋亡可能与其促进胃癌细胞Fas抗原Bax基因表达增加并抑制bcl-2基因的表达有关。     

抑制ClC-3表达促进顺铂诱导人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡的作用机制

目的:探讨抑制ClC-3基因表达对顺铂(DDP)复制的人卵巢癌SKOV3/DDP细胞损伤促进作用过程中的具体作用机制,为应用DDP治疗卵巢癌提供实验依据。方法:转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒到人卵巢癌SKOV3/DDP细胞,Western blotting方法观察热休克蛋白(HSP70)、溶酶体组织蛋白酶D(cathepsin D)蛋白表达。结果:与SKOV3细胞比较,SK-OV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达增加(P<0.05)。转染pSH1-siRNA-ClC-3重组质粒联合DDP作用后,SKOV3/DDP细胞中HSP70蛋白表达降低(P<0.05),cathepsin D蛋白表达增加(P<0.05)。结论:抑制ClC-3基因表达促进顺铂诱导SKOV3/DDP细胞凋亡的可能作用机制与溶酶体膜通透性(LMP)增加有关。     

TAM和MPA联合用药对卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV-3/DDP生长的影响

目的:探讨三苯氧胺(tamoxifen,TAM)和甲孕酮(medroxyprogesterone,MPA)联合用药对顺铂耐药的卵巢癌细胞株SKOV-3／DDP生长影响的机制。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、电子显微镜及流式细胞仪测定用药前后SKOV-3／DDP细胞生长、形态学、周期及凋亡率的变化。结果:低浓度的TAM和MPA联合用药组对SKOV-3／DDP细胞生长无影响。高浓度用药组可抑制卵巢癌细胞生长,电子显微镜可观察到细胞凋亡的形态学变化,1×10-6~1×10-4mol／L的TAM和MPA联合用药组在抑制细胞增殖的同时尚可诱导细胞凋亡,其细胞凋亡率分别为4.06％、11.77％、19.3％,两两比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论:TAM和MPA联合用药既对顺铂耐药的卵巢癌细胞有杀灭作用,又因其较小的副作用及肯定的临床意义有可能成为卵巢癌有效的化疗辅助用药。     

Wortmannin与ABT-737诱导卵巢癌细胞凋亡的协同作用研究

目的:探讨磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂wortmannin单用以及与Bcl-2蛋白抑制剂ABT-737联合应用对人卵巢癌细胞系存活率和凋亡率的影响。方法:①CCK-8法分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO-3生长的抑制率,并计算其IC50。②Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率以及对细胞周期的影响,Western blot法检测相关蛋白的表达水平,分别测定Wortmannin、ABT-737单独以及联合应用对人卵巢癌细胞ES-2和SKVO3凋亡的影响。结果:①Wortmannin和ABT-737单独作用对ES-2细胞株的IC50分别为14.12μM和31.31μM,两药联合应用的IC50为8.15μM;Wortmannin和ABT-737单独作用对SKVO-3细胞的IC50分别为16.72μM和37.56μM,联合用药的IC50为9.25μM。②0.2μM的Wortmannin作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞的凋亡率分别为9.9%和8.7%,5μM的ABT-737作用48 h后ES-2和SKVO-3细胞凋亡率分别为10.2%和9.1%,两者联合应用对两种细胞的凋亡率分别为45.0%和53.0%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。③Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的增加cleaved-caspase-3、细胞色素C以cleaved-PARP的表达量,Wortmannin和ABT-737联合应用可以明显的对人卵巢癌ES-2和SKVO-3细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:Wortmannin和ABT-737能够通过线粒体途径抑制卵巢癌细胞株的生长并诱导其凋亡,且Wortmannin和ABT-737联合应用具有协同作用。     

靶向H-ras基因的小干扰RNA对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的:探讨脂质体介导的靶向H-ras基因的小发夹状RNA重组质粒对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的抑制作用。方法:实验分4组:正常对照组(仅予脂质体处理)、转染psh RNA/H-ras处理24h组、48h组及72h组。分别于转染后不同时间进行MTT实验、软琼脂克隆形成实验、细胞周期检测和AO/EB双染实验,观察各组细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化。结果:FCM显示转染psh RNA/H-ras 24h及48h后的SKOV3细胞均出现细胞周期的抑制,48h后SKOV3细胞有显著的凋亡发生;转染psh RNA/H-ras1和pshRNA/H-ras2对SKOV3细胞克隆形成的抑制率分别为51.5%(P<0.05)和63.3%(P<0.01);MTT检测转染psh RNA/H-ras1和psh RNA/H-ras 272h后对SKOV3细胞增殖抑制率分别为62.5%和64.5%。AO/EB实验显示48h细胞的凋亡率为29.3%(P<0.05)。结论:重组质粒psh RNA/H-ras在人卵巢癌SKOV3细胞中有明显抑制细胞增殖的作用,并介导肿瘤细胞的凋亡。     

2-甲氧基雌二醇诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导卵巢癌细胞系OVCAR-3细胞和卵巢癌原代培养细胞凋亡的作用及其机制。方法以2-ME作用于卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞,采用MTT法检测细胞存活率、Annexin V—FITC／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,JC-1染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位（△ψm）,比色测定试剂盒检测caspase-3和caspase-8活性。结果与对照组相比,OVCAR-3细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs70．5％）,凋亡率明显增加（5．3％VS40．5％）;卵巢癌原代培养细胞2-ME组存活率显著下降（100％vs61．8％）,凋亡率明显增加（5．4％VS36．9％）;此外,2-ME明显降低卵巢癌OVCAR-3细胞和原代培养细胞的AtOm,提高caspase-3和caspase-8活性。而预先以Z—VAD阻断caspase能逆转2-ME的效应。结论2-ME通过凋亡信号通路的内源性和外源性途径,诱导卵巢癌细胞凋亡。     

卵巢癌相关成纤维细胞对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的:采用Transwell体外共培养体系,研究直接分离自卵巢癌的癌相关成纤维细胞CAFs对卵巢癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,探讨CAFs在上皮性卵巢癌进展中的作用。方法:采用0.4μm孔径的Tranwell小室进行CAFs或者NFs与卵巢癌细胞CAOV3体外共培养,用RT-PCR的方法检测共培养之后的卵巢癌细胞CAOV3中增殖细胞核抗原(PC-NA)表达的改变,以了解卵巢癌细胞增殖的变化。②用流式细胞仪检测共培养之后CAOV3细胞的细胞周期和Annexin-V/PI检测CAOV3细胞的凋亡情况。③用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CA-OV3细胞迁移特性的影响。④以Matrigel模拟重建基底膜,用8μm孔径的Transwell小室建立卵巢癌CAFs与CAOV3细胞的交互作用模型,观测CAFs对CAOV3细胞侵袭特性的影响。结果:与CAFs共培养之后卵巢癌细胞CAOV3的PCNA基因表达显著增高,并且随着CAFs细胞量的增加,CAOV3细胞增殖活性显著增强。同时CAFs细胞的PCNA基因表达下降,随着CAOV3细胞数量的增加,PCNA表达明显减少(P=0.011)。②采用流式细胞仪检测细胞周期的方法可以发现,与CAFs共培养之后CA-OV3细胞的凋亡显著减少(P=0.008),而在与NFs共培养之后的CAOV3细胞中未发现这一现象。③同时用Annexin-V/PI的方法,用流式细胞仪进行检测,也可以证实与CAFs共培养之后CAOV3细胞的凋亡显著减少(P=0.011),而与NFs共培养之后,CAOV3的凋亡没有明显变化。④与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用8h后,CAOV3迁移明显增加,但CAFs组的增加有极显著性(P<0.01)。⑤侵袭实验中发现,与对照组相比CAFs或者NFs对CAOV3作用24h后,CAOV3侵袭明显增强,但CAFs组的增强有极显著性(P<0.01)。结论:CAFs能促进卵巢癌CAOV3细胞的增殖,减少其凋亡,并且两种成纤维细胞对卵巢癌细胞均有促迁移和侵袭的作用,但是CAFs的作用更加显著。这些发现提示,在CAFs与卵巢癌CAOV3细胞的交互作用中,产生的信号因子能够促进卵巢癌的进展。     

过表达PTEN对SKOV3和SKOV3-ADM细胞增殖的影响

目的:研究过表达PTEN对卵巢癌细胞SKOV3和卵巢癌耐药细胞株SKOV3-ADM增殖能力的影响。方法:构建PTEN真核表达载体,采用脂质体转染技术转染入SKOV3及SKOV3-ADM细胞,采用RT-PCR和Western-blot检测PTEN基因及蛋白表达水平的变化,判断转染效果;MTT法检测细胞增殖速率变化。结果:转染PTEN表达载体至SKOV3及SKOV3-ADM细胞后,RT-PCR及Western-Blot实验证实SKOV3和SKOV3-ADM细胞中PTEN基因及蛋白表达水平明显上调。MTT结果显示,上调PTEN表达后的SKOV3和SKOV3-ADM细胞相对于空白和阴性对照组,细胞的体外增殖能力明显减弱(P<0.01)。结论:PTEN蛋白在卵巢癌的发生发展过程中起着抑制作用,可能成为一种新的肿瘤分子治疗手段。