US3基因检测在新生儿晚期黄疸巨细胞病毒感染诊断中的应用

目的探讨US3基因检测在新生儿晚期黄疸巨细胞病毒(human cytomegalovirus ,HCMV)感染诊断中的应用。方法应用巢式PCR法检测2012年1月-2012年12月在新生儿科就诊的新生儿晚期黄疸标本US3基因,并通过与HCMV-IgM、HCMV-DNA荧光定量PCR、HCMV-pp65抗原检测结果做比较,分析US3基因检测在诊断新生儿晚期黄疸HCMV感染的符合程度。结果① 145例新生儿晚期黄疸血清HCMV-IgM检测阳性1例,HCMV荧光定量PCR检测阳性24例,HCMV-pp65抗原阳性25例,US3基因扩增阳性24例;② US3基因检测与HCMV-DNA荧光定量PCR两种检测方法结果差异无统计学意义（P = 1.000）,一致率为97.2%,κ值为0.900;US3基因检测与与HCMV-pp65抗原检测两种检测方法结果差异无统计学意义(P =1.000）,一致率为95.2%,κ值为0.828;③ US3基因检测用于诊断新生儿晚期黄疸HCMV感染的灵敏度为85.2%,特异度为99.2%,Youden指数为84.4;阳性预测值和阴性预测值分别为0.958和0.967;④ US3基因检测用于诊断新生儿晚期黄疸HCMV活动性感染的灵敏度为84.0%,特异度为97.5%,Youden指数为81.5;阳性预测值和阴性预测值分别为0.875和0.967。结论US3基因检测适用于临床新生儿晚期黄疸HCMV感染的诊断。     

两种实验室检测方法在小儿巨细胞病毒感染诊断中的比较

目的探讨胶体金法与实时荧光定量PCR法在临床小儿巨细胞病毒(HCMV)感染中的诊断效果。方法收集浙江衢化医院2011年6月-2016年6月收治的疑似HCMV感染患儿100例。采集患儿血清及尿液,采用实时荧光定量PCR法(A组)及胶体金法(B组)检测患儿血清中HCMV的感染情况;采用实时荧光定量PCR法检测患儿尿液中HCMV的感染情况。比较两组血清中HCMV阳性率。参考HCMV感染诊断方案及临床诊断标准,统计HCMV感染阳性例数,并以此为金标准,统计两组对血清中HCMV感染的诊断效能(计算准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。比较实时荧光定量PCR法对血液中、尿液中HCMV感染的检测阳性率及诊断效能。结果 A组HCMV检测阳性率为19.0%,明显高于B组的9.0%(P0.05)。在对血中HCMV诊断效能方面,A组准确度、敏感度、阴性预测值均明显高于B组(P0.05)。通过比较实时荧光定量PCR法对血液及尿液中HCMV的诊断效能,发现尿液中HCMV诊断的准确度明显高于血液(P0.05)。结论实时荧光定量PCR法在检测HCMV感染方面较胶体金法更准确、敏感;在选择检测标本方面应优先选择尿液。     

脐带血血浆在人巨细胞病毒垂直传播中的作用

目的了解合肥地区正常顺产新生儿先天性人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染情况,并探讨脐带血血浆在HCMV垂直传播中的意义。方法自合肥市妇幼保健院采集5l份新生儿脐带血标本,将处理后得到的脐带血白细胞及血浆分别提取DNA后,进行HCMVUL55基因的巢式PCR俭测,并随机抽取其中18份脐带血白细胞进行HCMVp065抗原血症检测。结果51份新生儿脐带血白细胞HCMVUL55DNA阳性数为16份,阳性率为31．4％;同时进行检测的51份脐带血血浆HCMVUL55DNA阳性数为17份,阳性率为33．3％,新生儿脐带血白细胞与血浆的标本阳性率差异无统计学意义（χ2=0．00,P=1．000）。以新生儿脐带血白细胞HCMVUL55DNA巢式PCR结果为标准,利用血浆巢式PCR检测的灵敏度为75．0％（12／16）,特异度为85．7％（30／35）,阳性预测值为70．6％（12／17）,阴性预测值为88．2％（30／34）。随机抽取其中18份新生儿脐带血白细胞进行pp65抗原血症检测,阳性标本数为6份,阳性率为33．3％;与此18份血浆DNA巢式PCR结果相比较,两者差异无统计学意义（χ2=0．00,P=1．000）。结论脐带血血浆在HCMV垂直传播中起携带并传播病毒的作用。     

不同方法检测梅毒螺旋体抗体的价值

目的:探讨不同方法检测梅毒螺旋体抗体的价值.方法:收集我院实验室确诊为梅毒的血清标本,共计2000份,其中男性1002例,女性998例,年龄17~62岁,平均年龄43.56±16.12岁.将上述2000份梅毒标本接受ELISA、RPR、Trust、TPPA检测.分析(1)ELISA、RPR及PCR对检测梅毒的阳性率.(2)以TPPA为最终结果,检测ELISA、RPR及PCR结果灵敏度、特异度、假阳性、假阴性.结果:(1)ELISA、RPR及PCR对检测梅毒的阳性率分别为98.4%、99.1%、99.0%,比较有差异(P<0.05).(2)以TPPA检测为金标准,RPR、ELISA、PCR的灵敏度、特异度、假阳性、假阴性比较有差异(P<0.05),以ELISA法检测方法最佳,灵敏度、特异度高,假阳性、假阴性低.结论:本文认为ELISA法可作为临床检查梅毒的常规方法.     

HIV快速检测技术法与ELISA法在艾滋筛查中应用价值

目的 探究艾滋筛查中HIV快速检测技术法（RT）与ELISA法的应用价值。方法 开展回顾性分析法,遴选时段2019年6月—2020年6月内1 500例HIV体抗筛查者,均接受快速检测技术法、ELISA法检测,以免疫印迹法（WB）结果为对照,分析检测结果,评估诊断价值。结果 1 500例筛查者,快速法阳性检出率1.47%(22/1 500);ELISA法阳性检出率1.20%(18/1 500);经免疫印迹法证实,阳性检出率为1.00%(15/1 500);快速法敏感度为100.00%、特异度为99.53%、阳性预测值为68.18%、阴性预测值为100.00%;ELISA法敏感度为100.00%、特异度为99.80%、阳性预测值为83.33%、阴性预测值为100.00%。结论 在HIV抗体检测中快速检测技术法、ELISA法均具有显著应用价值,两种检测方式敏感度、特异度无明显差异,故快速检测法均可用于艾滋筛查、诊断、检测咨询中。     

γ-干扰素释放试验与酶联免疫吸附试验在痰菌阴性肺结核诊断中的临床价值

目的 分析研讨γ-干扰素释放试验(IGRA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)在痰菌阴性肺结核诊断中的临床价值。方法 随机从我院2016年3月—2018年12月期间收治的痰菌阴性肺结核患者中抽取48例进行讨论(研究组),另抽取同时期体检健康者40例(对照组),均接受γ-干扰素释放试验与酶联免疫吸附试验检测,将细菌学检测作为此次检测金标准,分析比较检测结果。结果 IGRA检测准确率89.13%,灵敏度为97.62%,特异度为75.00%,阳性预测值97.62%,阴性预测值75.00%高于TBAb检测准确率58.70%,灵敏度为69.23%,特异度为14.29%,阳性预测值81.82%,阴性预测值7.69%,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组红细胞沉降率高于对照组(P<0.05),两组淋巴细胞计数、腺苷脱氢酶比较(P>0.05)。结论 建议临床诊断痰菌阴性肺结核疾病可首选IGRA法,此方式比ELISA检测阳性预测能力、特异度、灵敏度均更强。     

痰的质量对PCR诊断肺结核的影响

目的评估痰的质量对PCR检查诊断肺结核的影响。方法随机收集2009年3-9月湖南省结核病医院105例确诊为肺结核和22例确诊为非肺结核病人的痰标本,对标本行PCR检测。而这些痰标本中如果有超过40%的活细胞且少于25%的上皮细胞则为高质量标本。结果总痰标本其灵敏度为56.2%,特异度为54.5%,阳性预测值为85.5%,阴性预测值为20.7%,准确度为56.0%。高质量标本的灵敏度74.0%,特异度为60.0%,阳性预测值为94.9%,阴性预测值为18.8%,准确度为72.7%,而低质量标本的灵敏度为40.0%,特异度为52.9%,阳性预测值为73.3%,阴性预测值为22.0%,准确度为43.1%。结论使用高质量的痰标本可以显著提升PCR检测肺结核的表现,特别是灵敏度和阳性预测值。     

ELISA和荧光定量PCR诊断婴幼儿巨细胞病毒感染的临床价值

目的探讨ELISA法检测血清特异性抗体Ig M、荧光定量PCR检测尿液巨细胞病毒(HCMV)-DNA和血清HCMV-DNA对婴幼儿HCMV感染的诊断价值。方法回顾性分析广东省人民医院2013年1月-2017年1月410例住院治疗的3岁以内婴幼儿的临床资料。计算并比较尿液HCMV-DNA、血清HCMV-DNA及HCMV Ig M阳性率及检测灵敏度、特异度等指标。结果婴幼儿HCMV感染的主要临床表现包括支气管肺炎(37. 3%)、肝功能损害(31. 0%)、胆汁淤积综合征(17. 6%)、贫血(12. 4%)、神经系统损害(11. 5%)等。尿液HCMV-DNA、血清HCMV-DNA、HCMV Ig M阳性分别率为53. 9%、29. 2%、34. 1%;检测灵敏度分别为96. 9%、50. 4%和57. 5%;特异度分别为99. 5%、97. 8%和95. 1%。结论荧光定量PCR检测尿液HCMV-DNA诊断HCMV感染的价值较高,可作为婴幼儿HCMV感染的早期筛查指标。     

全自动酶免方法检测登革病毒抗原抗体的有效性评价

目的评价全自动酶联免疫吸附(ELISA)实验方法在献血人群中检测登革病毒NS1抗原和Ig M、Ig G抗体的有效性。方法以疾病预防控制中心常规使用的登革病毒NS1抗原和Ig M、Ig G抗体的实验诊断方法作为参照,对全自动ELISA方法的检测结果进行评价。结果全自动ELISA方法检测NS1的灵敏度、特异度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Kappa值分别为96.11%、94.81%、0.91、92.51%、97.34%、95.33%和0.903,检测Ig M的灵敏度、特异度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Kappa值分别为97.04%、91.11%、0.88、91.61%、96.85%、94.07%和0.881,检测Ig G的灵敏度、特异度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Kappa值分别为92.96%、90.00%、0.83、90.29%、92.75%、91.48%和0.830。结论全自动ELISA检测方法检测结果可靠,适用于大规模献血人群的登革病毒感染筛查。     

ELISA法检测血清IgM抗体诊断急性期手足口病患儿CV-A16感染效能的Meta分析

目的 定量评价酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清CV-A16 免疫球蛋白M(IgM)抗体的诊断效能。方法 制定相应的研究目标和检索策略,系统地检索中、外文数据库,以HFMD患儿急性期呼吸道/或肠道标本CV-A16核酸检测为“参考标准”,采用Meta分析及Meta回归的方法,定量地评价ELISA法检测血清CV-A16 IgM抗体诊断HFMD患儿CV-A16感染的效能。结果 基于随机效应评估9篇原始研究,ELISA法诊断HFMD患儿CV-A16感染效能的合并灵敏度为65%(95%CI:47%～81%),合并特异度为92%(95%CI:88%～95%),合并阳性预测值为61%(95%CI:33%～85%),合并阴性预测值为93%(95%CI: 90%～96%),合并曲线下面积为0.92±0.04; Meta回归发现研究样本量大小、CV-A16病例占比是导致不同研究结果灵敏度及阳性预测值异质性的主要因素。结论 目前的ELISA试剂盒检测血清CV-A16 IgM的诊断效能相对较差,临床应用需谨慎,仍需要进一步加强ELISA法试剂盒的研发。     

Development of a quantitative-competitive PCR for quantification of human cytomegalovirus load and comparison with antigenaemia, viraemia and pp67 RNA detection by nucleic acid sequence-based amplification

AIM: The human cytomegalovirus (HCMV) is an important pathogen in immunocompromised patients, such as transplant recipients. The use of sensitive and rapid diagnostic assays can have a great impact on antiviral prophylaxis and therapy monitoring and diagnosing active disease. Quantification of HCMV DNA may additionally have prognostic value and guide routine management. The aim of this study was to develop a reliable internally-controlled quantitative-competitive PCR (QC-PCR) for the detection and quantification of HCMV DNA viral load in peripheral blood and compare it with other methods: the HCMV pp65 antigenaemia assay in leukocyte fraction, the HCMV viraemia, both routinely employed in our laboratory, and the nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) for detection of HCMV pp67-mRNA. METHODS: Quantitative-competitive PCR is a procedure for nucleic acid quantification based on co-amplification of competitive templates, the target DNA and a competitor functioning as internal standard. In particular, a standard curve is generated by amplifying 10(2) to 10(5) copies of target pCMV-435 plasmid with 10(4) copies of competitor pCMV-C plasmid. Clinical samples derived from 40 kidney transplant patients were tested by spiking 10(4) copies of pCMV-C into the PCR mix as internal control, and comparing results with the standard curve. RESULTS: Of the 40 patients studied, 39 (97.5%) were positive for HCMV DNA by QC-PCR. While the correlation between the number of pp65-positive cells and the number of HCMV DNA genome copies/mL and the former and the pp67mRNA-positivity were statistically significant, there was no significant correlation between HCMV DNA viral load assayed by QC-PCR and HCMV viraemia. CONCLUSIONS: The QC-PCR assay could detect from 10(2) to over 10(7) copies of HCMV DNA with a range of linearity between 10(2) and 10(5) genomes.     

巨细胞病毒gp52蛋白原核可溶性表达与应用

目的 生物工程方法在原核系统内可溶性表达巨细胞病毒gp52蛋白并进行纯化,获得可以用于检测巨细胞病毒特异性抗体的重组抗原. 方法 利用PCR扩增获得巨细胞病毒gp52核酸序列,然后克隆至pET-DsbC核融合表达载体中,在原核系统进行诱导表达并纯化,用Western blot和ELISA检测其抗原性及实用性. 结果 表达纯化的Ds-bC-gp52融合蛋白分别经酶标记建立IgM捕获ELISA方法,检测60份抗巨细胞病毒IgM阳性血清和60份阴性血清.其中用酶标记DsbC-gp52蛋白建立的捕获ELISA法阳性检出率达96.6％,阴性检出率100％. 结论 融合蛋白DsbC-gp52在大肠杆菌中主要以可溶性表达形式存在,获得的高纯度融合蛋白抗原性和特异性强,利用其建立的IgM捕获ELISA方法,可用于临床检测风疹病毒的早期感染.     

不孕女性中人巨细胞病毒包膜糖蛋白B基因的分型

目的:探讨不孕女性中人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株的包膜糖蛋白B(gB)基因型分布及其与不孕的相关性。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测300例女性不孕患者血清中HCMV-IgM抗体,ELISA阳性的患者采集晨尿接种于人胚肺成纤维细胞(HELF),提取细胞病变(CPE)阳性培养液中的病毒DNA,以巢式PCR(nest PCR)法扩增HCMVgB基因,利用限制性核酸内切酶HinfΙ、RsaΙ对HCMV gB基因进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析判断基因型别;随机抽取11例送检测序,测序结果使用Clustal X软件与GenBank标准病毒株进行序列比对,用MEGA4.1构建核苷酸序列的基因树。结果:300例女性不孕患者中HCMV-IgM抗体阳性45例,阳性率为15.0%。45例患者晨尿接种HELF细胞,观察1月后检测到的病毒阳性37例,阳性率为12.3%。37例病毒阳性患者中最常见的基因型为gB 1型25例(67.6%),其次为gB 3型7例(18.9%)和gB 2型5例(13.5%),没有检测到gB4基因型。测序结果与GenBank标准病毒株HCMVADl69和Towne进行序列比对后,用MEGA4.1成功构建基因树。结论:女性不孕症的发生与HCMV感染有明显相关性,HCMV感染导致的不孕中最常见的gB基因型为gB 1型,其次是gB 3、gB 2型,未检测到gB 4型。     

应用Taq Man探针法与高分辨熔解曲线法检测HLA-B27基因诊断强直性脊柱炎的价值

目的运用Taq Man探针法与高分辨熔解曲线法检测疑似强直性脊柱炎患者的人类白细胞抗原HLA-B27,并探讨其方法的有效性和应用价值。方法分别将疑似强直性脊柱炎患者的血样DNA进行HLA-B27的Taq Man探针法和高分辨熔解曲线法检测,并以DNA直接测序法所得阳性结果作为金标准,来确定Taq Man探针法和高分辨熔解曲线法的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果 55例样本中,Taq Man探针法和高分辨熔解曲线法与DNA测序法的符合率分别为98.2%和92.7%。Taq Man探针法检测HLA-B27的敏感度为0.970,特异度为1.000,阳性预测值为1.000,阴性预测值为0.956;高分辨熔解曲线法检测HLA-B27的敏感度为0.879,特异度为1.000,阳性预测值为1.000,阴性预测值为0.846。结论 Taq Man探针法与高分辨熔解曲线法均具有准确性好、灵敏度高、检测快速等优点,适合于临床HLA-B27的检测。     

2型糖尿病与活动性巨细胞病毒感染关系的探讨

目的：探讨2型糖尿病与活动性巨细胞病毒（CMV）感染的关系。方法：应用PCR技术和ELISA法分别检测47例2型糖尿病病人的血清中CMV DNA和CMV－IgM。以MCVDNA（或）CMV－IgM阳性为活动性CMV感染诊断指标。结果：PCR技术和ELISA法检测结果具有高度一致性（P＜0．001）。2型糖尿病病人活动性CMV感染率（53．19％）显著高于对照组（21．88％）（P＜0．01）,且活动性感染的病人中病程长于6个月者占72％。血糖水平较高的病人活动性CMV感染率与血糖水平较低者比较差异有显著性意义（P＜0．05）。结论：2型糖尿病病人中存在较高的再发感染,这可能与2型糖尿病发病有关。     

逆转录-聚合酶链反应在HIV-1感染诊断中的应用

[目的]评价逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)在HIV—l感染诊断中的应用；[方法]采用RNA一步法试剂盒提取RNA。用3套分别来自于LTRgag、pol、env不同区域的序列引物进行嵌套式PCR扩增。[结果]对24例血清标本进行检测，其中15例为HIV感染者ll例为免疫印迹试验可疑待确定，但经过1年的随访可排除；另外8例为正常者。经过巢式扩增，15份阳性标本中有14份扩增出两条或两条以上核酸片段，l份未扩增出任何一条片段，其敏感性达93．3％(14／15)。其中6份肝素抗凝标本env区域均未扩增出片段。阴性标本无片段，其特异性为100％(8／8)。[结论]RT-PCR具有高敏感性和特异性，可用于窗口期HIV感染的诊断及HIV—l阳性母亲所生婴儿的HIV检测，可作为免疫印迹试验的补充和辅助诊断。     

医院口腔诊疗器械和环境乙型肝炎病毒污染状况调查

目的调查不同级别医院口腔诊疗器械和环境的HBV污染状况,探讨敏感监测方法。方法用无菌棉拭子沾采样液反复涂抹采集的样品进行高速(6000r/min)和超速(45000r/min)两次离心,分别取其上清液和底部下层液体;用ELISA法检测HBsAg,巢式PCR法检测HBV DNA。结果一级医疗机构口腔诊疗器械、诊疗环境样品167份,HBsAg阳性率为3.59%;HBsAg阳性样品中HBV DNA全部阳性,并且在31份HBsAg阴性样品中HBV DNA检测阳性率为6.45%;二、三级医疗机构口腔诊疗器械、诊疗环境样品52份样品均阴性。结论口腔诊疗器械和环境的HBV污染应引起重视,巢式PCR法检测HBVDNA较ELISA法检测HBsAg敏感,可试行推广应用。     

聚合酶链反应限制酶切分析及病毒分离检测巨细胞病毒感染

在人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）直接早期蛋白Ｅｃｏ ＲＩＪ ＤＮＡ片段内,自行设计两对引物,建立套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ ＤＮＡ,同时结合病毒分离检测临床标本。结果发现２３例新生儿肝炎综合征患儿中,１０例病毒分离及套式ＰＣＲ均阳性;１例病毒分离阴性,但套式ＰＣＲ阳性。对５８例妊娠早期孕妇血标本进行检测,套式ＰＣＲ阳性率９％,病毒分离阳性率则为７％。