白术和黄芪不同提取部位对小肠上皮细胞增殖的影响

目的观察白术和黄芪的不同提取部位对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖的影响。方法以系统溶剂分离法分别提取白术和黄芪的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、醇沉上清液和多糖部位;另将白术和黄芪以乙醇提取,D101大孔树脂吸附法得到40%和70%乙醇洗脱部位。MTT法检测白术和黄芪正丁醇部位、醇沉上清液、多糖部位、40%和70%醇洗脱液对IEC-6细胞增殖的作用。结果初步发现黄芪正丁醇部位、醇沉上清部位、糖复合物、40%和70%醇洗脱部位加药24h能促进细胞增殖;白术40%乙醇洗脱液部位加药24h能促进细胞增殖,白术正丁醇部位、糖复合物、40%和70%乙醇洗脱液部位加药48h能促进细胞增殖。结论白术和黄芪正丁醇部位、多糖部位、40%和70%醇洗脱液在加药后不同时间对IEC-6细胞有不同程度的促进增殖作用;采用系统溶剂分离法和大孔树脂吸附法提取白术和黄芪不同部位,可以用于细胞增殖实验,为进一步开展白术和黄芪在细胞水平上的药理研究提供参考。     

IEC-6细胞迁移药理实验模型建立的研究(英文)

建立适合肠上皮整复研究的IEC-6细胞迁移药理实验模型,并观察黄芪糖复合物对细胞迁移的影响。方法:设立不同的细胞接种密度、划痕后观察时间、辅助材料Matrigel浓度、血清饥饿处理法、细胞迁移抑制剂DF-MO(二氟甲基鸟氨酸)浓度等以考察模型的建立条件,并在已建立的模型上观察受试药的效果。结果:①细胞宜以4×105/mL接种6孔板;②宜划痕后24 h观察细胞迁移数;③5%Matrigel为适宜浓度;④血清饥饿可造成细胞迁移数明显减少,应使用含血清的培养液。⑤DFMO 2.5~5 mmol/L为抑制细胞迁移适宜浓度。⑥黄芪糖复合物及阳性药精脒能促进细胞迁移。结论:建立了适宜药理实验的IEC-6细胞迁移模型,在此模型上可反映受试药对细胞正常迁移及迁移抑制的药效作用。     

黄芪多糖调控多胺介导的Ca~(2+)-RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白Rho A表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖,运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖I、II、III、IV,黄芪多糖I以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖V。Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量,流式细胞仪检测[Ca2+]cyto水平,Western blotting法检测Rho A蛋白表达。考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)]和多胺耗竭IEC-6细胞(加入DFMO)迁移、多胺水平、[Ca2+]cyto的量及Rho A蛋白表达的影响。结果黄芪粗多糖、黄芪多糖I、黄芪多糖V(50、100、200 mg/L)均能促进IEC-6细胞迁移(P0.01),并且可逆转多胺合成抑制剂DFMO所致的细胞迁移抑制效果(P0.01);在正常(未加DFMO)或多胺耗竭情况(加DFMO),黄芪多糖V均可提高迁移过程细胞内多胺的量(P0.01);黄芪多糖V可提高细胞迁移过程[Ca2+]cyto水平(P0.01),并且可逆转DFMO所致的[Ca2+]cyto水平下降(P0.01);黄芪多糖V(100、200 mg/L)可明显提高Rho A蛋白表达,同时可逆转DFMO所导致的Rho A蛋白表达抑制作用。结论黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程,其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量,提升[Ca2+]cyto,从而提高Rho A蛋白表达,进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关。     

甘草糖提取物对小肠上皮细胞迁移及多胺含量影响的研究

目的:观察甘草糖提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及细胞内多胺(腐胺、精脒和精胺)含量的影响。方法:划痕法造细胞损伤后迁移模型,柱前衍生-高效液相色谱法测定细胞内多胺含量。观察甘草糖复合物对细胞迁移及细胞内多胺含量的影响;观察甘草糖复合物对二氟甲基鸟氨酸(DFMO)致细胞迁移抑制和多胺合成抑制的影响。结果:甘草糖提取物(50、100 mg/L)能促进细胞迁移;可逆转由DFMO所致的细胞迁移抑制;可提高细胞迁移过程中细胞内多胺含量;可逆转由DFMO所致的多胺含量降低。结论:甘草对胃肠黏膜损伤的修复作用可能与其提高细胞多胺含量、促进细胞迁移有关。     

黄芪总皂苷对IEC-6细胞增殖及相关蛋白表达的影响

目的观察黄芪总皂苷对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移和增殖的影响,并从多胺及其调控的细胞增殖相关蛋白(转录因子c-Myc、Rho-GTP酶RhoA和细胞周期依赖激酶Cdk2)表达角度研究其作用机制。方法从黄芪中提取黄芪总皂苷(皂苷含量88.8%)作为受试药,高效液相色谱仪蒸发光检测(HPLC-ELSD)获得受试药色谱图;移液器吸头划痕法检测细胞迁移率;MTT法检测细胞增殖;Western Blot法检测相关蛋白表达。结果黄芪总皂苷(25、50、100 mg·L~(-1))对细胞迁移无明显影响(与空白组比较,P0.05)。黄芪总皂苷(50 mg·L~(-1)或100 mg·L~(-1))有促进细胞增殖作用(与空白组比较,P 0.05),且能逆转二氟甲基鸟氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)所致的细胞增殖抑制;可提高c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达,逆转DFMO所致的c-Myc、RhoA和Cdk2蛋白表达抑制。结论黄芪总皂苷可促进IEC-6细胞增殖,其作用机制与影响多胺调控的增殖相关蛋白表达有关。     

白术甲醇提取物对小肠上皮细胞增殖、迁移及磷脂酶C-γ1表达的影响

目的观察白术甲醇提取物(以下简称白术提取物)对小肠上皮细胞(IEC-6)增殖、迁移及磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)表达的影响,旨在探讨益气健脾中药白术促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法细胞分为空白组,精脒(5μmol/L)组,白术提取物(50、100、200 mg/L)组;负荷实验设α-二氟甲基鸟氨酸[(α-difluoromethylornithine,DFMO)多胺合成抑制剂]组,精脒+DFMO组,白术提取物(50、100、200 mg/L)+DFMO组。细胞贴壁培养24 h,给予受试药培养相应时间后,采用实时细胞分析仪(Real-time Cell Analyzer,RTCA)观察白术提取物对IEC-6细胞增殖的影响;划痕法检测白术提取物对IEC-6细胞迁移数目的影响;采用荧光定量PCR法和Western blot法检测PLC-γ1 m RNA及其蛋白表达。结果与空白组比较,白术提取物对细胞增殖无明显影响(P0.05),精脒和白术提取物(100、200 mg/L)对细胞迁移均有促进作用(P0.01),并能增加细胞迁移过程PLC-γ1 m RNA和蛋白表达(P0.01)。与DFMO组比较,精脒、白术提取物(100、200mg/L)能逆转DFMO所致的细胞迁移抑制及PLC-γ1 m RNA及其蛋白表达的抑制作用(均P0.01)。结论白术提取物可通过促进多胺介导的上皮细胞迁移发挥修复胃肠黏膜损伤作用,细胞增殖不是其主要药效作用。     

白术、黄芪糖复合物对IEC-6细胞迁移钾通道影响的研究

目的:上皮细胞迁移是胃肠黏膜损伤修复的重要环节,观察白术、黄芪糖复合物对小肠上皮IEC-6细胞迁移多胺信号通路钾通道相关指标的影响,为探讨益气健脾中药白术、黄芪胃肠黏膜损伤修复机制提供参考。方法:划痕法复制细胞迁移模型;非损伤微测法检测细胞K~+外流;Western Blot法检测Kv1.1蛋白表达;HE染色观察细胞形态;透射电镜观察细胞超微结构。结果:白术、黄芪糖复合物具有以下作用:50μg/ml均可促进细胞迁移;100μg/ml均能增加细胞K+外流;白术(50μg/ml)、黄芪(100μg/ml)糖复合物能提高钾通道蛋白Kv1.1蛋白表达;200μg/ml剂量均能逆转钾通道抑制剂4-氨基比啶(4-AP)所致的细胞迁移抑制;100、200μg/ml剂量均能改善4-AP所致的Kv1.1蛋白表达抑制和细胞空泡化。结论:白术、黄芪促进胃肠黏膜损伤修复的作用与其影响小肠上皮细胞迁移多胺信号通路钾通道相关指标有关。     

党参、甘草皂苷和黄酮部位对IEC-6细胞迁移的影响

目的:观察党参、甘草的皂苷和黄酮提取部位对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移的影响。方法:以回流提取法分别提取党参和甘草的皂苷、黄酮部位,并用D101大孔吸附树脂对各部位进行分离纯化,以分光光度法检测含量。IEC-6细胞种植于6孔板并培养24小时,划痕法造细胞迁移模型,划痕后加入各种受试药,24小时后观察细胞迁移情况。结果:党参和甘草黄酮含量(以芦丁计)分别为41.73%和50.98%;党参皂苷含量(以人参皂苷Re计)为40.57%;甘草皂苷含量(以甘草酸计)为57.01%。50mg/L的党参黄酮部位和甘草黄酮部位能促进细胞迁移(P<0.05);党参和甘草的皂苷部位对细胞迁移无明显影响。结论:党参、甘草黄酮部位有促进IEC-6细胞迁移作用,党参、甘草皂苷部位对IEC-6细胞迁移无明显影响。     

白术多糖对IEC-6细胞迁移及细胞生长的影响

目的:观察3种白术多糖提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及生长的影响,为研究调节细胞迁移药效物质基础提供参考。方法:从白术药材提取得到白术水提醇沉部位("白术多糖1"),去蛋白并经DEAE-纤维素柱层析得到"白术多糖2",再以Sephadex LH-20凝胶柱层析得到"白术多糖6"。在细胞迁移模型观察此3种样品调节IEC-6细胞迁移的活性;在实时细胞分析仪观察3种样品对IEC-6细胞生长的影响。结果:3种白术多糖样品(50μg/ml或100μg/ml或200μg/ml)能逆转DFMO(二氟甲基鸟氨酸)所致细胞迁移抑制,药效以"白术多糖6"最优。3种白术多糖样品需要更高剂量(200μg/ml或300μg/ml或400μg/ml)才有促进IEC-6细胞生长的作用。结论:调节细胞迁移是白术多糖的主要药效作用,其促进细胞生长的作用则相对较弱,实验结果为后续选择"白术多糖6"研究其结构表征提供了参考。     

白术、黄芪、党参促进IEC-6细胞损伤后的快速修复

目的研究白术、黄芪、党参提取物对体外胃肠黏膜上皮细胞损伤的快速修复作用。方法采用Tips划痕法建立小肠上皮(IEC-6)细胞迁移模型,首先考察不同的IEC-6细胞接种密度、划痕后修复时间、不同的血清浓度以建立稳定的迁移模型;接着采用表皮生长因子(EGF)及其阻断剂AG1478对迁移模型进行评价;最后考察三味中药对IEC-6细胞迁移的作用效果。结果 (1)细胞的最佳接种密度为1×105个/m L;(2)宜在划痕后8 h计算细胞迁移率;(3)1%血清浓度为最适宜浓度;(4)EGF明显促进了IEC-6细胞迁移,AG1478明显抑制了细胞迁移;(5)白术、黄芪、党参提取物均可促进IEC-6细胞迁移。结论益气健脾中药可促进胃肠黏膜损伤后的快速修复过程,其机制是否与影响EGFR信号通路有关有待进一步研究。     

蔡淦应用药对治疗胃肠疾病经验拾萃

介绍名老中医蔡淦教授临床应用藤梨根合木馒头、延胡索合广郁金、半夏合黄芩、升麻合柴胡、白术合白芍药、黄芪合黄精、太子参合白术、桃仁合杏仁、紫苏梗合藿香梗、肉豆蔻合补骨脂等药对治疗胃肠疾病的经验。     

玉屏风口服液的质量标准研究

目的：建立玉屏风口服液(黄芪、防风、白术)的质量标准。方法：用薄层色谱法对黄芪、防风、白术进行了定性鉴别；用高效液相色谱—蒸发光散射检测器(HPLC—ELSD)法测定了口服液中黄芪甲苷的含量。结果：定性鉴别分离度好，专属性强：含量测定黄芪甲苷的平均加样回收率为97．75％，RSD为1．31％。结论：方法简便准确、灵敏度高，可用于玉屏风口服液的质量控制。     

甘草与白术配伍对IEC-6细胞p53,p21基因表达的影响

通过研究不同剂量甘草与白术配伍对DFMO模型小肠上皮细胞(IEC-6)增殖及p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,探讨甘草与白术配伍对细胞增殖影响的分子基础.采用流式细胞术分别检测药物对IEC-6细胞分裂速度及细胞周期的影响,qRT-PCR检测药物对IEC-6增殖相关基因p53,p21 mRNA的影响,Western blot检测药物对IEC-6细胞p53,p21蛋白表达的影响.白术颗粒可上调DFMO模型IEC-6细胞内p53,p21 mRNA和蛋白的表达水平;而甘草颗粒与白术颗粒不同比例配伍均能显著下调单独白术颗粒作用对DFMO模型IEC-6细胞p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,促进IEC-6细胞的增殖.对于DFMO模型IEC-6细胞,配伍用药甘草能调和白术对小肠上皮细胞的影响.     

李顺民治疗慢性肾衰处方用药分析

目的:应用数据挖掘技术,总结名老中医李顺民教授诊治慢性肾衰的临床用药经验与规律。方法:收集李顺民教授近5年在医院,临床诊治慢性肾衰(CRF)的处方,并对用药情况进行了整理与分析。结果:研究发现李顺民教授辨治慢性肾衰所使用中药品种多达249种,使用频率大于50%以上的有9种,依次为黄芪(97%)、大黄(94%)、甘草(91%)、山药(86%)、白术(71%)等。配伍用药分析提示,总计有3 946种药对,其中使用频率大于50%以上的27对,主要有黄芪、甘草(87%),黄芪、山药(85%),黄芪、大黄(83%)等。运用方剂词库表检测后,涉及用方总数为539首,其中使用最频繁的方剂为李顺民经验方--健脾益肾方,高达88%。中药性味归经方面,李顺民教授辨治慢性肾衰使用温药最多,其次为平性药和寒性药,热性药物少用。药味以甘味药最多,其次为苦味和辛味药。归经以归脾经药物比例最高,其次为归肺、肾、肝、大肠经。结论:李顺民教授辨治慢性肾衰竭,常用黄芪、大黄、甘草、山药、白术等补益脾肾、调和阴阳,兼攻下、活血、解表、固精的药物。数据挖掘技术是整理中医药名老中医经验的有效工具。     

近5年来肝纤维化中医证治用药规律的文献研究

目的:探索肝纤维化的用药规律,以期为该病的中医临床处方用药提供借鉴。方法:通过文献的整理研究,将符合纳入标准和排除标准的101篇肝纤维化证治文献中的药物进行分类,用统计软件进行描述性统计。结果:治疗肝纤维化使用频率较高的药物分别是丹参、黄芪、柴胡、白术,如果按归类则补虚药使用频率最高,其次为活血化瘀药。结论:肝纤维化的用药有着自身的规律和特点,治疗肝纤维化的过程中,在遵循中医辨证论治的前提下,应当重视对补虚药和活血化瘀药的使用。同时,一些已经被证实有抗肝纤维化作用的单味中药的加入,能更有效的治疗肝纤维化这一病症。     

"白术-白芍"药对不同提取工艺对药效作用的影响

目的比较不同提取工艺对“白术-白芍”药对药效作用的影响。方法通过小鼠肠推进实验、抗急性胃黏膜损伤实验、扭体法、热板法等,评价“白术-白芍”药对水提、醇提、超临界提取等工艺对药效的影响。结果超临界联合水提或醇提的工艺最有利于“白术-白芍”药对药效作用的发挥。结论该研究为优选“白术-白芍”的提取工艺提供了科学依据。     

张声生教授辨治溃疡性结肠炎中医临证经验

目的：深度挖掘并系统总结张声生教授治疗消化科疑难性疾病溃疡性结肠炎（UC）的临床经验,分析张教授的组方用药规律,临证策略与思路。方法：本研究收集张教授门诊治疗UC病例资料97例,总计289诊次,并运用我团队与中国中医科学院中医药信息研究所共同合作开发的“病案一体化数据挖掘系统”进行分析处理。结果：通过数据分析得到张教授治疗UC核心处方：炙黄芪、炒白术、薏苡仁、黄连、木香、白扁豆、三七粉、地榆炭。常用药对有：1）炒白术、炙黄芪、地榆炭;2）薏苡仁、白扁豆、山药;3）黄芩、黄连、木香、白芍;4）延胡索、仙鹤草、三七粉;5）当归、香附;6）防风、葛根。药物随证加减规律为:：1）腹胀伴有肠鸣时,多用槟榔、木香、焦神曲;2）腹痛伴大便脓血时,多用延胡索、地榆炭、仙鹤草;3)里急后重时多用黄连、儿茶、三七粉;4）畏寒时多用炮姜、肉桂;5）口苦时多用黄连、连翘。结论：运用“病案一体化数据挖掘系统”分析了UC的症状和证候规律,总结了张声生教授中医临证策略与思路。     

Influence of an anti-diabetic foot ulcer formula and its component herbs on tissue and systemic glucose homeostasis

Complications of diabetes impose major public health burdens worldwide. The positive effect of a Radix Astragali-based herbal preparation on healing diabetic foot ulcers in patients has been reported. Formula 1 is also referred as the 'Herbal drink to strengthen muscle and control swelling'. This formula contains six Chinese medical herbs, including Radix Astragali, Radix Rehmanniae, Rhizoma Smilacis Chinensis, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae, Radix Polygoni Multiflori Preparata, and Radix Stephania Tetrandrae. Three of these herbs (Radix Astragali, Radix Rehmanniae, Rhizoma Atractylodis Macrocephalae) are commonly used in different anti-diabetic formulae of Chinese medicine. The objective of the current study is to use an interdisciplinary approach to test the hypothesis that Formula 1 and its components influence tissue and systemic glucose homeostasis. In vitro and in vivo models have been established including: (1) glucose absorption into intestinal brush border membrane vesicles (BBMV); (2) gluconeogenesis by H4IIE hepatoma cells; (3) glucose uptake by 3T3-L1 adipocytes and Hs68 skin fibroblasts; (4) normalization of glycaemic control in a diabetic rat model. The results of in vitro studies indicated that all herbal extracts can modify cellular glucose homeostasis. Since Formula 1 and Rhizoma Smilacis Chinensis extracts demonstrated potent effects on modifying glucose homeostasis in multiple tissues in vitro, they were further studied for their anti-diabetic activities in vivo using a streptozotocin (STZ)-induced diabetic rat model. The results showed that Formula 1 and Rhizoma Smilacis Chinensis extracts did not significantly improve oral glucose tolerance or basal glycaemia in diabetic rats. In conclusion, the anti-diabetic foot ulcer Formula 1 contains ingredients active in modifying tissue glucose homeostasis in vitro but these biological activities could not be associated with improved glycaemic control of diabetes in vivo.     

基于数据挖掘总结李顺民治疗慢性肾衰竭经验

目的:基于数据挖掘技术探讨李顺民教授治疗慢性肾衰竭的中医辨治用药规律。方法:收集2012年5月至2017年3月间李顺民教授诊治的慢性肾衰竭门诊病例资料,通过一维及二维的数据分析和Cytoscape软件分层可视化网络图,总结出用药规律及特点。在中国知网数据库上检索和下载慢性肾衰竭相关文献,通过筛选出名医经验类型文献,然后清洗、降噪处理后,进行数据分析,总结出慢性肾衰竭病因、症状、证候、治法、中药规律,并用Cytoscape软件将结果可视化,比较并分析李顺民教授用药特点。结果:李顺民教授在慢性肾衰竭的治疗上,多选用黄芪、山药、炙甘草、大黄、酒苁蓉、丹参、紫苏叶、芡实、白术、地黄等,并喜用甘、苦、辛药及温、平、寒药为主。文本挖掘的结果则提示,病因当以湿浊、瘀血、湿热、水湿、正虚、饮食因素等为主,症状则以水肿、乏力、恶心呕吐最常见,证候以脾肾两虚为主,治法以活血化瘀、补益脾肾为最常见的治法,中药常用大黄、黄芪、当归、茯苓、地黄、丹参、白术、半夏、黄连、全蝎等。结论:本研究采用数据挖掘技术,对李顺民教授辨治慢性肾衰竭进行用药规律分析,并以文献收集慢性肾衰竭名医经验相关文献,进行分析比较,从而客观的反映出李顺民教授治疗慢性肾衰竭注重补脾、健脾、益气、补肾助阳,兼攻下、活血化瘀、解表、固精的特点。     

析因设计与中医补气生血方剂最佳药效配伍的研究

目的:采用析因设计分析补气生血方剂对失血性血虚小鼠的补血作用,寻求其发挥最佳药效的方剂配伍。方法:将因素A补气药的12个水平:人参、西洋参、党参、太子参、黄芪、白术、山药、白扁豆、甘草、大枣、刺五加、灵芝与因素B补血药的6个水平:当归、熟地黄、何首乌、白芍、阿胶、龙眼肉,按12×6析因设计法组成72个补气生血方剂。小鼠眼眶放血0.5 mL/每只复制失血性血虚模型,测定造模后第1,4,7,10天小鼠外周血细胞值。选用RBC,HGB,HCT为指标,根据析因设计重复测量统计方法对所得数据进行分析。结果:不同时间点各补气生血方剂对RBC的作用差异有统计学意义(P<0.01)。补气药与补血药之间不存在交互作用。补气药各水平对RBC,HGB,HCT的影响具有统计学意义(P<0.01),以黄芪效果最佳。补血药各水平都有升高RBC,HGB,HCT的作用,各水平之间的差异不具有统计学意义,以当归效果最佳。黄芪当归配伍补血作用与模型组有显著性差异。结论:补气药对补气生血方剂作用的影响大于补血药,黄芪当归为最佳药效配伍。