脾阳虚大鼠肽转运载体蛋白表达及转运功能的改变

目的 观察脾阳虚模型大鼠小肠黏膜肽转运载体1(PepT1)的表达及其转运功能的变化.方法 采用劳倦泄下合利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,RP-HPLC法测定cefalexin血药浓度以评价小肠黏膜PepT1的转运吸收功能,免疫组化方法观察脾阳虚大鼠肠上皮PepT1蛋白表达情况.结果 十二指肠给药120 min后,RP-HPLC法测定模型大鼠血清cefalexin浓度为(5.23±2.10) μg/ml,高于正常对照组的(2.52±0.47) μg/ml(P<0.01);模型大鼠小肠黏膜上PepT1蛋白表达较正常对照大鼠表达升高.结论 脾阳虚证模型大鼠小肠黏膜肽转运载体PepT1表达及对cefalexin的转运能力增强.     

理中汤对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

目的:观察理中汤对Caco-2细胞肽转运载体(PepT1)转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予理中汤处理,并设立空白及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,用Western blot法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:理中汤处理组Caco-2细胞15,30,60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(4.52±0.57),(6.34±0.57),(7.29±0.64),(8.23±0.67)μmol/孔,高于空白对照组(P<0.05),后者分别为(2.42±0.68),(3.15±0.76),(5.62±0.20),(6.54±0.54)μmol/孔;理中汤与Rp-8-Br-cAMP合用组15,30,120 min时点分别为(2.68±0.46),(4.13±0.46),(6.73±0.43)μmol/孔,明显低于相应时点单用理中汤组(P<0.05);理中汤处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值理中汤组为(0.326±0.031),高于空白对照组(0.220±0.019)(P<0.01);理中汤对Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达未见明显作用,但与cAMP抑制剂合用,理中汤能逆转Rp-8-Br-cAMP下调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达的作用。结论:理中汤具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与其促进胞浆中PepT1蛋白嵌入胞膜中发挥转运二肽的功能有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。     

理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚对Caco-2细胞PepT1转运功能影响的比较

目的:观察比较理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28d后分别给予理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚处理,并设立正常对照组及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,采用westernblot方法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR方法测定PepT1mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:理中汤、人参皂苷Rg1及6-姜酚均在不同程度上表现为促进Caco-2细胞转运Glycyl-Sarcosine的作用;Caco-2细胞经理中汤/人参皂苷Rg1/6-姜酚处理24h后,细胞膜PepT1蛋白表达水平均明显增高。6-姜酚能明显上调Caco-2细胞SLC15A1表达,人参皂苷对Caco-2细胞SLC15A1表达的作用表现为下调,理中汤对Caco-2细胞SLC15A1表达作用不明显。且理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚三者作用各有特点。结论:理中汤及其成分人参皂苷Rg1、6-姜酚具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。     

电针“足三里”穴对脾气虚大鼠小肽转运体表达的影响

目的:探讨电针"足三里"穴对脾气虚模型大鼠小肠黏膜组织内的小肽转运体(PepT1)的蛋白及基因表达的影响。方法:将40只SD雄性大鼠按照随机数字表法随机分为正常组、脾气虚组、足三里组、非经非穴组,每组10只。大鼠均统一饲养于SPF级动物实验中心。正常组给予正常饮食,其余3组均采用不规则饮食和劳倦过度复合法建立脾气虚证大鼠模型。造模成功之后,对足三里组进行电针"足三里"穴、非经非穴组大鼠电针非经非穴点干预处理7 d。观察各组大鼠免疫器官胸腺指数及脾脏指数的变化;观测各组大鼠小肠推进率;采用HE染色法观察各组大鼠小肠黏膜组织形态的变化;采用蛋白质免疫印迹法检测大鼠小肠黏膜组织内的PepT1的蛋白含量变化;采用荧光定量PCR法检测大鼠小肠黏膜组织的PepT1的mRNA表达水平。结果:脾虚组大鼠的胸腺和脾脏质量以及小肠推进率都明显低于正常组,足三里组相比于脾虚组有所升高;HE染色结果示:与正常组相比,脾气虚组大鼠小肠黏膜组织有萎缩、糜烂等改变,足三里组的组织形态较脾气虚组大鼠相比有所恢复;WB及PCR结果示:与正常组相比,脾气虚组大鼠小肠黏膜组织内的PepT1蛋白和基因表达水平均明显低于正常组(P0.05);与脾气虚组相比,足三里组大鼠小肠黏膜组织内的PepT1蛋白和基因表达水平有所升高(P0.05),非经非穴组未见显著性差异(P0.05)。结论:电针"足三里"穴可以调控脾气虚大鼠小肠黏膜组织内的PepT1蛋白及基因的异常表达,参与小肠对蛋白质的吸收作用,进而改善脾气虚证。     

脾阳虚大鼠小肠黏膜病理学改变及理中汤治疗作用观察

目的:观察脾阳虚大鼠小肠黏膜上皮细胞形态学变化,探讨脾阳虚证胃肠功能改变的组织病理学基础,并观察温阳健脾代表方理中汤的治疗作用。方法:复合因素合利血平注射法建立脾阳虚大鼠模型;通过小肠黏膜组织石蜡切片HE染色光镜检查、透射电镜观察等方法,对造模及治疗后大鼠小肠黏膜进行组织病理学观察。结果:光镜观察未见脾阳虚大鼠小肠黏膜上皮细胞有明显病理学改变;但透射电镜下小肠黏膜上皮细胞超微结构可见明显改变:上皮细胞间隙紧密连接变宽;粗面内质网间隙增宽;线粒体肿胀,嵴断裂、减少或结构模糊,甚至空泡化。理中汤治疗后上述病变有明显改善。结论:观察到脾阳虚大鼠小肠上皮细胞内细胞器的形态改变,从一个侧面反映脾阳虚证组织病理学基础;理中汤对脾阳虚证的治疗作用机制可能与改善上述表现有关。     

6-姜酚对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

目的:观察6-姜酚对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予6-姜酚处理,并设立正常对照组及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,采用Western blot方法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR方法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:6-姜酚处理组Caco-2细胞60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(6.84±0.46),(8.61±0.54)μmol/孔,高于正常对照组(P<0.05),后者分别为(5.62±0.20)、(6.54±0.54)μmol/孔;6-姜酚与Rp-8-Br-cAMP合用组120 min时点为(6.92±0.67)μmol/孔,明显低于相应时点单用6-姜酚组(P<0.05);6-姜酚处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值6-姜酚组为(0.317±0.022),高于空白对照组(0.220±0.019)(P<0.01);荧光定量PCR结果,6-姜酚能上调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达,但与cAMP抑制剂合用后该抑制作用被阻断。结论:6-姜酚具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与上调PepT1蛋白及mRNA表达有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。     

附子理中汤对脾阳虚大鼠AQP4的影响及其止泻机制

目的:观察附子理中汤对脾阳虚大鼠水通道蛋白4(AQP4)的影响,探讨附子理中汤止泻作用的机制.方法:Wistar大鼠100只随机分为对照组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组5组,每组20只.在模型组基础上,低剂量组按10g·kg-1ig,中剂量组按20 g·kg-1 ig,高剂量组按40 g·kg-1 ig,每天1次,连续4周.取结肠标本,酶联免疫法(ELISA)法检测AQP4含量,RT-PCR法检测AQP4 mRNA表达.结果:和对照组比较,模型组的AQP4含量(13.25 ±4.22) ng·L-1.AQP4mRNA相对表达量(0.38±0.11)均降低(P＜0.01或P＜0.05).和模型组比较,附子理中汤中剂量组的AQP4含量(23.84±5.68) ng·L-1,AQP4 mRNA相对表达量(0.54±0.26)均升高(P＜0.05).和模型组比较,高剂量组的AQP4含量(28.98±6.12) ng·L-1,AQP4 mRNA相对表达量(0.62±0.32)均显著升高(P＜0.01).结论:附子理中汤能恢复脾阳虚大鼠AQP4含量和AQP4 mRNA正常表达,以高剂量的恢复作用较明显,附子理中汤可能通过上调AQP4表达,促进胃肠道黏膜对水液的重吸收而起到止泻的作用.     

电针对绝经后骨质疏松症模型大鼠肠黏膜钙结合蛋白-D9kmRNA和蛋白表达的影响

目的 观察电针对去卵巢大鼠模型肠黏膜钙结合蛋白-D9k（CaBP-D9K）mRNA和蛋白表达的影响,探讨针灸治疗绝经后骨质疏松症可能机制。方法 将60只3月龄SD健康雌性大鼠随机分为手术组和假手术组,3个月造模成功后将手术组随机分为模型组、假电针组、电针组、药物组。干预治疗12星期后,测定腰椎及股骨骨密度（BMD）,然后处死大鼠,提取小肠黏膜,采用荧光实时定量PCR和Western blotting检测CaBP-D9K mRNA和蛋白表达。结果 成功复制绝经后骨质疏松症模型,经电针组和药物组干预治疗12星期后,其大鼠骨密度与模型组相比均有明显提高,荧光实时定量PCR和Western blotting检测结果显示电针组和药物组大鼠小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达上调,但电针组上调CaBP-D9K mRNA的水平不及药物组。结论 针灸治疗绝经后骨质疏松症机制之一可能与上调小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达量,从而增强肠钙吸收有关。     

脾阳虚证失眠大鼠模型的建立和附子理中汤的干预效应

目的:探讨附子理中汤对脾阳虚证失眠大鼠下丘脑增食素(orexin) mRNA表达及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA axis)的影响及机制.方法:100只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、附子理中汤低剂量组,中剂量组和高剂量组5组,每组20只.模型组按400 mg· kg-1 ip对氯苯丙氨酸(PCPA)每天1次,连续2d,建立脾阳虚证失眠模型.低剂量组、中剂量组、高剂量组分别以附子理中汤10,20,40 g·kg-1 ig,每日1次,连续7d.疗程结束后对各组大鼠用ELISA法检测下丘脑5-羟色胺(5-HT)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)及血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,RT-PCR法检测下丘脑orexin mRNA表达.结果:与正常组相比,模型组orexin mRNA表达量显著升高(P＜0.01),5-HT含量显著降低(P＜0.01);CRH,ACTH含量显著升高(P ＜0.05,P＜0.01).与模型组相比,附子理中汤高剂量组orexin mRNA表达量显著降低(P＜0.01),附子理中汤高、中剂量组5-HT含量显著升高(P＜0.01,P＜0.05);高剂量组CRH,ACTH含量显著降低(P ＜0.05,P＜0.01).结论:附子理中汤下调orexin mRNA表达,抑制HPA轴激活,降低应激反应性,可能是其治疗失眠的机制之一.     

黄芪对脾虚模型大鼠肠道粘膜经由SGLT1/GLUT2的葡萄糖吸收的影响

摘要 目的：探讨黄芪对脾虚证模型大鼠小肠粘膜葡萄糖吸收的影响，并研究其可能通过调控SGLT1/GLUT2的作用机制。方法：采用注射利血平方法建立脾虚症模型大鼠，用在体灌流技术观察黄芪对大鼠小肠粘膜的葡萄糖吸收影响并收集小肠粘膜，检测钠依赖葡萄糖转运蛋白（SGLT1）和2型葡萄糖转运蛋白（GLUT2）转运蛋白和mRNA的表达变化。结果：与正常组对比，模型组大鼠体重及尿D-木糖排泄率明显降低（P<0.01），同时葡萄糖吸收量、SGLT1和GLUT2的蛋白及mRNA表达均下降（P<0.01），与模型组相比，通过黄芪水煎液的干预治疗，各指标有得到明显的改善。结论：黄芪能够改善利血平致气虚的模型大鼠小肠对葡萄糖吸收的功能。     

高血压阴虚证大鼠主动脉铁死亡相关基因表达研究

目的探究高血压阴虚证大鼠主动脉铁死亡的潜在机制。方法 10只SPF级WKY大鼠作为对照组。将20只SPF级SHR大鼠随机分为两组,每组10只,分别为高血压组、高血压阴虚证组。高血压阴虚证组采用温燥伤阴法复制阴虚证模型,造模药物由淡附片、肉桂、吴茱萸组成,3种药物按照1∶1∶1比例混合,煎煮浓缩,每毫升药液含生药1 g,按照1 mL/100 g灌胃,灌胃30 d。实验结束后,HE染色观察大鼠主动脉组织形态,RT-qPCR法观察主动脉组织铁死亡相关因子p53、GPX4及xCT/SLC7A11 mRNA水平,WB法观察主动脉组织铁死亡相关因子p53、GPX4及xCT/SLC7A11蛋白表达情况。结果 HE染色显示高血压组和高血压阴虚证组血管内皮细胞肿胀,高血压阴虚证组损伤更显著。与对照组相比,高血压组和高血压阴虚证组主动脉组织p53 mRNA和蛋白表达水平显著上升,GPX4、xCT/SLC7A11 mRNA和蛋白表达水平显著下降。与高血压组相比,高血压阴虚证组主动脉组织p53 mRNA和蛋白表达水平显著上升,GPX4、xCT/SLC7A11 mRNA和蛋白表达水平显著下降。结论高血压阴虚证大鼠主动脉铁死亡程度更显著,血管内皮损伤更严重。     

补中益气汤对脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达的影响

目的:观察脾虚大鼠胃粘膜TFF1mRNA与蛋白表达变化及补中益气汤对其表达的影响,并探讨相关作用机制。方法:SD大鼠随机分为空白对照、脾虚损伤、补中益气汤、非脾虚损伤组。脾虚损伤组、补中益气汤组大鼠给予100%大黄水煎剂灌胃,一天2次,连续10天。第11天补中益气汤组给予补中益气汤灌胃治疗7天。第18天,除空白对照组外,另三组灌服消炎痛溶液造成胃粘膜损伤,采用逆转录PCR(RT-PCR)检测TFF1mRNA,采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测TFF1蛋白表达的变化。结果:与非脾虚损伤组比较,脾虚损伤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、TFF1蛋白表达明显降低;与脾虚损伤组比较,补中益气汤组大鼠胃粘膜TFF1mRNA、蛋白明显上调。结论:脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA、蛋白表达显著下调,提示脾虚大鼠胃粘膜防御能力减弱,补中益气汤可提高脾虚大鼠消炎痛攻击后胃粘膜TFF1mRNA与蛋白的表达,这可能是补中益气汤保护胃粘膜,降低脾虚大鼠胃粘膜易损性的机理之一。     

气虚证大鼠垂体高表达且上调的基因

目的：通过筛选正常气虚、高血压气虚、糖尿病气虚等气虚大鼠垂体高表达且上调的基因,探索气虚证在垂体基因表达层面的物质基础。方法：采用16 周龄Wistar 大鼠、自发性高血压大鼠（SHR大鼠）、自发性糖尿病大鼠（GK大鼠）,综合应用标准化大鼠诊法,及GeneChip Rat Gene 1.0 ST Array 等技术,检测正常Wistar 大鼠、正常气虚Wistar 大鼠、SHR 气盛大鼠、SHR 气虚大鼠、GK 气盛大鼠、GK 气虚大鼠等垂体基因的表达,重点关注3 个气虚证中垂体基因表达大于1000 且较正常一致上调的基因。结果：共筛选得到34 个基因：Arhgdia、Arfgap1、Rab 21、Arf5、Arf3、Cdipt、Cds2、Pld3、Ppp3ca、Ppp3cb、Trim35、Itm2b、Itm2c、Tob1、Oaz1、Maged1、Gpc4、Glg1、wdr6、Scarb2、Grn、Hnrpd、Hnrnpab、Snrpb、Gtf2i、As原cl1、Pnrc1、Eef2 、Eno2、Gls、Ucp2、Atp6v0c、Pomc、Syp。结论：鉴于以上基因中参与基因转录和翻译有关的基因,以及参与能量代谢相关基因表达活跃,一些调控有关靶器官的功能性基因,如POMC 亦表达活跃,且大多与细胞活动有关的基因表达增加,提示气虚证大鼠垂体处于一种积极的代偿状态,这可能是气虚证在垂体层面的物质基础。     

滋补脾阴方药对脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质内质网应激的影响

目的观察脾阴虚糖尿病大鼠大脑皮质磷酸化(p)RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、真核起始因子2α-亚单位(eIF2α)、p-eIF2α、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的变化,探讨脾阴虚糖尿病相关认知下降发病机制及滋补脾阴方药的作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、糖尿病组、脾阴虚组、脾阴虚糖尿病组(病证组)、脾阴虚糖尿病+滋补脾阴方药组(治疗组)。采用高脂喂养4周联合小剂量链脲佐菌素注射方法建立2型糖尿病模型。在此基础上采用饮食不节、劳倦过度及灌服伤阴药方法建立脾阴虚糖尿病模型。治疗组给予滋补脾阴方药灌胃,其余各组给予等体积生理盐水灌胃,连续15 d,取大脑皮质。采用Western Blot、RT-PCR方法观察PERK、eIF2α、p-eIF2α、GRP78表达变化。结果糖尿病组、脾阴虚组、病证组PERK、p-eIF2α蛋白表达及GRP78 mRNA表达较对照组增强(P0.05),糖尿病组、病证组GRP78蛋白表达较对照组增强(P0.05),治疗组上述分子表达较糖尿病组、病证组均减弱(P0.05)。结论内质网应激参与脾阴虚糖尿病相关认知下降的发病,滋补脾阴方药通过减轻内质网应激改善学习记忆障碍。     

肺气虚大鼠肺、肾组织AQP1表达及血浆ET水平变化

目的观察肺气虚模型大鼠肺、肾组织水通道蛋白1(AQP1)表达及血浆中内皮素(ET)水平的变化,为中医学肺肾相关理论提供实验依据。方法20只大鼠随机分为模型组和对照组,应用放射免疫方法测定血中ET含量;应用Western blot方法测定AQP1蛋白含量的变化。结果肺气虚模型组肾组织AQP1表达高于对照组,而肺组织AQP1表达低于对照组;模型组血浆ET明显升高,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论肺气虚模型大鼠肾组织AQP1表达增强,而肺组织AQP1表达降低,ET可能促进肾组织AQP1表达、抑制肺组织AQP1表达。     

二精丸有效部位对肾阴虚模型大鼠学习记忆障碍的影响及其分子机制

目的探讨二精丸有效部位对肾阴虚模型大鼠学习记忆障碍的影响及其分子机制。方法采用大鼠ig甲状腺素加im利血平方法制备肾阴虚模型,二精丸总黄酮和总多糖ig给药结束后Morris水迷宫法测定各组的学习记忆能力;采用酶联免疫法测定血清激素水平;采用免疫组织化学法测定海马部位Bcl-2和Bax表达及Tau蛋白异常磷酸化水平。结果二精丸总黄酮和总多糖能显著提高模型大鼠的学习记忆能力;能显著恢复激素水平及海马区Bcl-2和Bax表达;能显著抑制海马区Tau蛋白Ser199/202、Ser396、Thr231三个磷酸化位点异常磷酸化。结论二精丸总黄酮和总多糖能提高肾阴虚模型大鼠的学习记忆能力。     

基于细胞自噬探讨左归丸对肾虚仔鼠皮肤发育的影响

目的:研究左归丸对先天肾虚仔鼠发育过程中皮肤内细胞自噬的影响及其机制,探索补肾填精法在生长发育异常中的应用价值.方法:36只雌雄比例为2∶1的大鼠进行配对,复合应激法刺激孕鼠构建先天肾虚仔鼠模型,根据将孕鼠处理方式不同,分为正常组,肾虚组,左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg-1).正常组不造模给予生理盐水灌胃,肾虚组...