用亲和层析法分离纯化降纤酶

目的用亲和层析法从尖吻蝮蛇蛇毒中分离纯化降纤酶。方法用离子交换色谱、单克隆抗体亲和色谱技术进行分离纯化。结果得到电泳纯的降纤酶，其分子量为36000。结论用单克隆抗体亲和色谱法纯化降纤酶是切实可行的。     

亲和层析法分离纯化链激酶

采用自制的酰基化－Ｐｌｇ－Ｓｐｅｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析分离纯化链激酶,ＮＰＧＢ作为酰化剂,８ｍｏｌ／Ｌ尿素进行洗脱,纯化约９倍,收率９０％以上,经活为７４００Ｕ／ｍｇ蛋白质,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示链激酶分子量为４７０００,未发生降解。ＮＰＧＢ酰化稳定,一次酰化后可反复使用２０余次。     

单克隆抗体亲和层析法纯化Namalva细胞干扰素

采用自行研制的α干扰素单克隆抗体亲和层析胶3D9进行了Namalva细胞干扰素纯化的初步研究.结果表明α干扰素纯化活性回收率达96%,比活性达1×108IU/mg,一次亲和层析纯化倍数4.4×104.电泳及Westem blot结果显示相对分子质量在2.1×103.     

RP-HPLC法测定注射用降纤酶中降纤酶的含量

目的:建立测定注射用降纤酶中降纤酶的高效液相色谱分析方法。方法:色谱柱为Vydac 214TP54-C4(5μm,250 mm×4.6 mm),流动相A为0.1%三氟乙酸,B为乙腈-水(90:10,含0.1%三氟乙酸),流速为0.8 mL.min-1,采用梯度洗脱,柱温45℃,检测波长为280 nm。结果:降纤酶在0.5～32μg.mL-1(r=0.9999)范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)为98.5%。结论:该法快速、灵敏、准确,可以为注射用降纤酶的质量控制提供依据。     

免疫吸附亲和层析法分离纯化甲胎蛋白生产工艺研究

采用3～5个月胎龄的胚胎组织,通过盐析、凝胶层析和亲和层析法分离纯化甲胎蛋白(AFP).结果表明,通过盐析沉淀血红蛋白和Sephadex G-25柱层析脱盐,延长了亲和层析柱的使用寿命,亲和柱使用6次以上层析效果仍保持稳定.每个胚胎平均可分离得到AFP 0.7mg,回收率为45.71%.紫外吸收法测定抗体偶联率为95.38%.SDS-PAGE显示AFP在Mr 66000处一条带十分明显,纯度较高.该方法起始材料易得,适合规模化生产AFP.     

降纤酶肽图分析

目的采用反相高效液相色谱法测定尖吻蝮蛇降纤酶和白眉蝮蛇降纤酶肽图。方法将降纤酶样品用胰蛋白酶水解,酶解所得的肽段通过反相高效液相色谱法进行分析,采用C18色谱柱,以0.1%三氟乙酸为A相,乙腈-水-三氟乙酸(90∶10∶0.1)为B相进行梯度洗脱得到降纤酶肽图。结果降纤酶各个肽段都能得到很好的分离,白眉蝮蛇降纤酶和尖吻蝮蛇降纤酶肽图存在显著差异。结论本法简便、快速,可应用于不同蛇种来源降纤酶的鉴别,以减少临床不良反应的发生。     

蛋白A亲和层析法纯化抗乙肝核心抗原单克隆抗体

建立从小鼠腹水中纯化抗乙肝核心抗原(HBcAg)单克隆抗体的一步层析法。将含抗HBcAg单克隆抗体的腹水经离心、过滤和缓冲溶液变换预处理后,采用HiTrap rProtein A FF亲和层析柱纯化,并探讨了上样缓冲液的pH值和NaCl浓度,洗脱液的种类、pH值以及体积流量对抗体纯度及回收率的影响,纯化后的单克隆抗体的生物学活性用间接ELISA法测定。结果显示,以pH7.0,20mmol/LPB+3.0mol/LNaCl为上样缓冲液,0.1mol/LGly-HCl为洗脱液,体积流量为5.0ml/min时,抗HBcAg单抗的纯度大于95%,回收率达75%,纯化后的单克隆抗体的生物学活性没有下降。本研究建立了蛋白A亲和层析法纯化抗HBcAg单克隆抗体的方法,其操作简便、快速而且效果良好。     

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定降纤酶纯度的研究

采用快速凝胶电泳方法同时完成腹蛇抗栓酶,精制蝮蛇抗栓酶和降纤酶定性的鉴定,同时采用高效液相色谱方法进一步鉴定其纯度的相对百分含量为９０％以上,色谱峰为一对称性单峰,分子量３６０００,为降纤酶生产过程中控制产品质量节一种简便,快速特异性的分析方法。     

茯苓素的反相HPLC分析法

茯苓隶属于真菌门(Eumycophyta)、担子菌纲(Baridiomycetes)、多孔菌目(P-olyperales)、多孔菌科(Polyporaceae)、茯苓属(Poria)。茯苓是一种驰名中外的传统药用真菌,它具有渗湿利水、益脾和胃、宁心安神的作用。茯苓素是我所从中药茯苓中提取的一组具有生理活性的小分子化合物。在体外对大鼠白血病L1210细胞的DNA和RNA合成的补偿途径有显著的、不可逆抑制作用。对小鼠肝癌H-22细胞亦有明显的抑制作用。茯苓素又是免疫调节剂,它的双重生物活性有可能在临床上得到广泛应用。目前已进入临床试验阶段。本文建立了茯苓素的反相HPLC分析法。     

高效液相色谱法与凝胶层析法检测人血白蛋白制剂中多聚体的…

对１２批人血白蛋白制剂分别以ＨＰＬＣ法重复测定５次及用凝胶层析法重复测定４次。结果表明：ＨＰＬＣ法（ＲＳＤ０．２３％－２．８６％）较凝胶层析法（ＲＳＤ１．４１％－５．７０％）结果准确；ＨＰＬＣ法样品不稀释，直接进样，每样仅需３０ｍｉｎ，操作简便易行，可作为白蛋白制剂中多聚体的含量测定方法。     

注射用降纤酶生产的质量控制

通过对原料、中间体、原料药、成品制剂及生产全过程的质量控制,生产符合部颁标准的注射用降纤酶。     

柱层析法提取门冬酰胺酶

目的　改良门冬酰胺酶提取工艺。方法　菌体经破壁处理后 ,经离子交换层析和亲和层析 ,将目的蛋白层析出来。结果　其效率远远高于传统的有机溶剂沉淀法。结论　操作方法简便 ,易于放大 ,是生产厂家提高效率、降低生产成本、提高竞争力的有效途径     

注射用降纤酶生产的质量控制

通过对原料、中间体、原料药、成品制剂及生产全过程的质量控制，生产符合部颁标准的注射用降纤酶。     

注射用降纤酶生产的质量控制

通过对原料、中间体、原料药、成品制剂及生产全过程的质量控制，生产符合部颁标准的注射用降纤酶。     

降纤酶生产过程中测活方法探讨

降纤酶是从尖吻蝮蛇毒纯化的蛋白水解酶。酶的活力是衡量酶制剂水平的一个重要指标,它所处环境的酸碱性、离子强度、温度、金属离子等对其活性有很大的影响。部颁标准的降纤酶测活方法是针对原料药及制剂的,它们纯度高,一般为冻干品且含盐分少,可用合适pH及离子浓度的缓冲液溶解,因而能在降纤酶最适测活环境中进行测定。然而,在从尖吻蝮蛇毒纯化降纤酶的过程中,由于工艺的需要[1],所用的各种层析缓冲液中含有不同浓度的盐,酸碱度也与测活系统不一样。高浓度的盐与偏酸、偏碱都影响降纤酶的活性测定,甚至出现与客观事实相反的结果,给纯化工…     

乙酰螺旋霉素生产中间体质量控制的探讨

用ＨＰＬＣ检测并探明了乙酰螺旋霉素合成中各步中间体组份的变化情况，从而建立了质量控制。     

应用免疫亲和层析法纯化乙型肝炎疫苗

用人肝癌细胞系分泌的HBsAg和重组酵母表达的HBsAg为原料的第二代乙型肝炎疫苗,为疫苗的制备提供了充足的抗原来源。但其浓度低、纯度差,故需采甩新的纯化工艺。作者介绍美国Merck药厂应用免疫亲和层析法纯化上述两种抗原,制备第二代乙型肝炎疫苗。该法用纯化的人血浆HBsAg免疫山羊,从其抗血清中分离特异性抗-HBs,再将此特     

监测金霉素生产和质量控制的高压液相色谱法

某些四环素类化合物,尤其是金霉素,在不同的反相高压液相色谱法(HPLC)中或多或少会有拖尾峰出现。反相柱的性能取决于所使用的硅胶的性质及键合技术,所以必需精心选择反相填充物。对于分离某种化合物很理想的固定相,对另一种化合物则未必适宜。在试验中,分离性能亦随层析条件和溶质的变化而不同。     

毛细管电泳及液相色谱法研究黄连黄芩配伍过程化学成分的变化

对黄连与黄芩的不同比例配伍进行定量研究。黄连与黄芩按6∶1、6∶4、6∶7、6∶10、6∶13比例配伍，采用高效毛细管电泳法测定了黄连单煎液、黄连黄芩共煎液中生物碱的含量；采用高效液相色谱法测定了黄芩单煎液、黄连黄芩共煎液中黄酮的含量。结果显示，黄连黄芩共煎产生沉淀，使有效成分的含量降低。     

血浆,血细胞和尿中阿霉素,吡柔比星,表柔比星及其代谢产物的HPLC分析法

现在,已有几种蒽环类抗肿瘤抗生素,作为药物进入了临床应用。有关用于这些药品体内动态研究测定方法,已经报道了阿霉素(adriamycin,ADM)、表柔比星(epirubicin,EPI)及其代谢产物的测定方法。 但是,目前还未见报道过同时测定含吡柔比星(pirarubicin,PIR)的蒽环类代谢产