被孢霉高产γ-亚麻酸菌株的选育

目的：选育高产γ-亚麻酸被孢霉菌株。方法：以被孢霉（Mortierellasp．）为出发菌株经过UV诱变处理和甘草酸筛选,获得一株γ-亚麻酸（GLA）高产菌株A02变株。结果：变株摇瓶培养生物量达20．12g／L,较出发菌株提高25．50％,γ-亚麻酸的产量为0．96g／L,较出发菌株提高了81％。传代实验显示,变株A02具有良好的遗传稳定性。结论：甘草酸筛选法是多不饱和脂肪酸产生前育种工作的一个有效方法。     

微生物油脂PUFAs微囊粉胶囊剂的安全性评价

已报道生产微生物油脂菌株深黄被孢霉（Moritorella isabellina AS3．3410）突变株的毒力研究，未观察到受试小鼠有毒性反应或死亡，以该菌进行发酵生产微生物菌丝体经提萃油脂、皂化、精炼、提纯、均质喷雾干燥等一套工艺制取含PUFAs（polyunsaturated fatty acids，PUFAs，下同）的20％亚油酸和10％γ-亚麻酸的微囊粉剂再装填成胶囊。将该制剂进行急性毒性试验，遗传毒性试验和30d喂养试验，观察其安全性，现将结果报道于下．     

Avermectin产生菌异亮氨酸诱导变种的选育

用紫外线处理ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ（ＡＶＭ）产生菌ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓＸＣ１－２５，并在含有Ｌ－异亮氨酸（Ｌ－Ｉｌｅ）的平板培养基上筛选Ｌ－Ｉｌｅ诱导变种。结果表明：Ｉｌｅｉ变株发酵产生的ＡＶＭＢ１ａ效价高于自然分离株与紫外线诱变株，其中Ｉｌｅｉ变株ＸＣ２－２６的ＡＶＭＢ１ａ效价较亲株提高２２％。该变株经自然分离获得菌株ＸＣ３－８，其ＡＶＭＢ１ａ效价比出发菌株提高５０％以上，传代试验表明菌株ＸＣ３－８的形态和高产性能稳定，它在７ｍ３发酵罐生产试验，产生ＡＶＭＢ１ａ效价与发酵指数均比出发菌株提高５６％。     

L-赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌高产突变株 EB_(0.04-14)的选育

以赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｒｅｎａｔｕｍ）Ｅ０．８－２６（ＨＳ＋，ＡＥＣｒｒ，Ｍｅｔｒ，ＴＡｒ，ＥＳｒ）为出发菌种，对菌体进行氯化锂加紫外线、博来霉素三重复合处理，经初筛、复筛，获得一株高产菌株ＥＢ０．０４－１４，其发酵液中Ｌ－赖氨酸含量较出发菌株提高１７．７％．在发酵至２８ｈ时，加入０．２％的吐温８０或０．３％的二甲基亚砜，分别又使Ｌ－赖氨酸产量提高１６．５％和１６．３％．通过使用表面活性剂来改变细胞质膜透性，可使产酸量大幅度提高．     

L-赖氨酸高产菌株筛选

本实验以Ｌ－赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｃｒｅｎａｔｕｍ）ＯＭ－４（ＨＳ＋，ＡＥＳｒ，Ｍｅｔｒ）为出发菌株，经硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变处理，用ＡＥＣ（Ｓ－［２－氨乙基）－Ｌ－半胱氨酸）和苏氨酸定向筛选获得了高抗ＡＥＣ的突变株ＡＴ－５（ＨＳ＋，ＡＥＣｒ，Ｍｅｔｒ）菌株，再以ＡＴ－５为出发菌株经亚硝基胍诱变处理，获得一株产Ｌ－赖氨酸的ＴＡ（２－噻唑－ＤＬ－丙氨酸）抗性突变株（ＡＴＴ一６８号），菌株产酸量由原来ＯＭ一４菌株的４６．３ｍｇ／ｍＬ提高到７４．８ｍｇ／ｍＬ提高１６１．５％，在筛选结构类似物抗性突变株时采用小钢杯法，可大大节省结构类似物药品．     

头孢菌素C产生菌产黄顶孢霉高产变株419—6的选育研究

生产头孢菌素C的工业生产菌株产黄顶孢霉C_B经氯化锂加紫外线加博莱霉素三重复合处理后,结合筛选工艺的改进,选育得到一株高产变株419。对419菌株采用单孢子分离技术稳定其高产性状,最后得到稳产高产变株419-6。其摇瓶发酵水平较原种提高16.37％,头孢菌素C百分含量提高3％。本文报道了419-6高产变株的选育研究。     

牡畜链霉菌（Streptomycescattleya）thienamycin合成阻断变株的…

以ｔｈｉｅｎａｍｙｃｉｎ（ＴＮＭ）产生菌Ｓ．ｃａｔｔｌｅｙａ）为出发菌体，利用终浓度为１．５ｍｇ／ｍｌ强诱变剂亚硝基胍在ＰＨ９．０、３７℃条件下对其孢子悬液处理３０ｍｉｎ，得到稳定的ＴＮＭ生物合成阻断变株Ｙ３。     

紫杉醇产生菌美丽镰刀霉K178的诱变育种

采用紫外线与亚硝酸对美丽镰刀霉（Fusarium mairei）K178的孢子进行复合诱变，于含40μg／ml制霉菌素的平板上进行筛选，获得31株突变株，其中5株的紫杉醇摇瓶发酵产量高于出发菌株，突变株UH23的紫杉醇产量为259．8μg／L，进一步优化其发酵工艺条件，紫杉醇产量达286．4μg／L，较出发菌株提高了29．9％。     

牲畜链霉菌（Streptomyces cattleya）thienamycin合成阻断变株的筛选、阻断部位的确定及变株原生质体的研究

以ｔｈｉｅｎａｍｙｃｉｎ（ＴＮＭ）产生菌Ｓ．ｃａｔｔｌｅｙａ为出发菌株，利用终浓度为１．５ｍｇ／ｍｌ强诱变剂亚硝基胍在ｐＨ９．０、３７℃条件下对其孢子悬液处理３０ｍｉｎ，得到稳定的ＴＮＭ生物合成阻断变株Ｙ＿３。纸层析后进行茚三酮显迹和生物显迹表明Ｙ＿３变株积累一种无活性中间产物，其迁移率不同于ＴＮＭ。建立了Ｙ＿３变株中间产物的分离纯化方法。酸水解和氨基酸组分分析表明Ｙ＿３中间产物为谷氨酸和丙氨酸组成的二肽，可能是形成碳青霉烯双环母核的底物，提示丙氨酸可能也是ＴＮＭ的前体，Ｙ＿３变株阻断在形成碳青霉烯双环母核的环化步骤。Ｙ＿３变株具有较高的原生质体形成率和再生率。原生质体在４０℃进行处理可以在不影响再生率的前题下提高ＤＮＡ转化率。通过以上研究建立了以Ｙ＿３变株为宿主的ＴＮＭ环化酶基因克隆受体系统。     

紫外线诱变育种提高土霉素菌种的生产能力

以土霉素产生菌龟裂链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｒｉｍｏｓｕｓ）Ｌｆ－２为出发菌株，经紫外线处理后，再经摇瓶初筛、复筛获得高效价菌株Ｕｆ－３。又经Ｌ９（３４）的正交设计实验，确定了Ｕｆ－３的最佳培养基配比，使其摇瓶效价提高１５．２％。在２０ｍ３罐上放大试验，与出发菌株相比发酵效价提高１７．４％，发酵指数提高２３．９％     

从氯霉素抗性突变株筛选赤霉素高产菌株

应用氯霉素抗性筛选法，将经NTG诱变处理的赤霉素产生菌——水稻恶苗病菌6028菌株(Gibberella fujikuroi 6028)原生质体涂布在含有氯霉素2000μg／ml的致死再生培养基平板上，获得了大量氯霉索抗性突变株．其中赤霉索产量高于出发菌的阳性效率达20％，同时获得了在20和60吨罐上产素能力和发酵总亿比出发菌株分别提高7．58％和9．36％的7106高产菌株，且该菌株经连续5次传代试验，产索能力无明显变化。     

硫酸二乙酯诱变原生质体选育赖氨酸高产菌株的研究

本实验以Ｌ－赖氨酸产生菌钝齿棒杆菌（ｃｏｒｙｎｅ ｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｃｒｅｎａｔｕｍ）Ｅ２２６（ＨＳ＾＋、ＡＢＣ＾ｒ１Ｍｅｔ＾ｒ、ＴＡ、ＥＳ＾ｒ）为出发菌株，经甘氨酸、青霉素，溶菌酶作用形成原生质体，并对原生体进行硫酸二乙酯（ＤＥＳ）的诱变处理，然后对大量的再生突变株进行初筛、复筛、获得了高产稳定菌株Ｄ６０￣１０９，其发酵液中Ｌ－赖氨酸含量较出发菌株提高了１９．４％。并且又对发酵培养基通过菌株的     

螺旋霉素高产菌种的推理选育

根据螺旋霉素的生物合成途径对螺旋霉素产生菌产二素链霉菌进行推理选育，并获得了高产菌种。首先在紫外线诱变的基础上，筛选豆油耐性变株，得到菌株ＸＣ２－３７，其发酵效价较出发菌株ＸＣ１－２９提高９％。通过培养基优化，菌株ＸＣ２－３７的发酵效价提高６１．８％。再以紫外线处理菌株ＸＣ２－３７，并筛选缬氨酸诱导变株，得到菌株ＸＣ３－１１，其发酵效价较菌株ＸＣ２－３７提高２０％。菌株ＸＣ３－１１经自然分离得到菌株ＸＣ４－１８，发酵效价达到４５００ｕ／ｍｌ，为原始出发菌株ＸＣ１－２９的２．２５倍。传代试验表明菌株ＸＣ４－１８的高产遗传特性稳定。菌株ＸＣ４－１８应用于５０ｍ３发酵罐进行工业化生产，与原始出发菌株ＸＣ１－２９相比，发酵效价和发酵指数分别提高８４．９％和４３．６％。     

生米卡链霉菌的菌种选育和发酵的研究

以生米卡链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｍｙｃａｒｏｆａｃｉｅｎｓ）０２８１为出发菌株，采用紫外线处理和理性化筛选，选出了麦白霉素产量比出发菌株提高２５％的高产变株，并考察了种子培养基和发酵培养基对变株发酵的影响．     

氮离子注入土霉素产生菌诱变高产菌株的研究

以土霉索生产菌株48。为出发菌株，采用氮离子注入诱变处理，经摇瓶筛选，得到土霉素02—2-44^#菌株。该菌株特性优良，经57m^3发酵罐试验。150批平均发酵效价高于对照菌株（1158．6μg／ml），提高3．42％。发酵总亿及发酵指数分别提高3.17％和3．99％。     

万古霉素产生菌的选育

以东方拟无枝酸菌（Amycolatopsisoriental）05—12为出发菌株,经紫外线（15W。253．7nm,距离18cm,照射5m）诱变处理,在含庆大霉素1000μg·mL^-1的浓度梯度平板上筛选庆大霉素抗性变株,得到一株万古霉素高产交株（Amyeolatopsisoriental）06-4。其摇瓶效价较出发菌株提高23％．对万古霉素的抗性提高200％。传代试验表明该变株的高产性能遗传特性较稳定。用正交试验法对万古霉素发酵培养基进行了优化,与原发酵培养基相比,万古霉素的摇瓶发酵效价提高了13．4%。     

拉曼被孢霉γ-亚麻酸高产突变株的选育

目的诱变、筛选γ 亚麻酸 (GLA)高产菌株。方法采用 5 氟尿嘧啶、紫外线、氯化锂复合诱变及自然分离的方法 ,对拉曼被孢霉AS 3.34 13进行诱变筛选。结果获得一株GLA高产突变株F5。该菌株GLA产量较原始菌株提高了 30 0 %。传代实验证明该菌株遗传性质稳定。经对其发酵培养基及发酵条件的优化 ,该菌株GLA生产能力可达 115 3.6 3mg/L ,较原始菌株提高 335 .87%。结论拉曼被孢霉GLA高产突变株F5已达工业生产菌株要求。     

用庆大霉素抗性筛选法选育西罗莫司高产菌株

用紫外线对吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）NP03进行诱变，再采用庆大霉索抗性筛选法进行处理，剂量分别为0、0．01、0．03、0．05和0．08μg／ml，共获得113株抗性突变株，其中西罗莫司产量高于出发菌株的有51株，突变株NP03-74#的生产能力达到出发菌株的134％，且遗传特性稳定。     

rhIL-6大肠杆菌高效表达的影响因素及其产品中试的研究

研究自构建的重组人白细胞介素－ ６（ｒｈＩＬ－６）基因工程菌株高效表达的影响因素及其ｒｈＩＬ－６产品中试工艺。方法：①将ｒｈＬ－６－ＰＢＶ重组质粒转化至ＲＲＩ、ＪＭ１０３和 ＤＨ５ ａ不同宿主菌中,在Ｍ９ＣＡ和 ＬＢ培养基中,４２℃诱导培养不同时间（３～６ ｈ）,观测 ｒｈＩＬ－６不同表达效率。②采用 １０ Ｌ发酵罐诱导培养,经破菌－洗包－溶包初步纯化后,再经三步柱层析纯化,提取ｒｈＩＬ－６。结果：①ｒｈＩＬ－６在ＤＨ５ ａ大肠杆菌中（ＳＤＨ－９４５株）表达效率高;可达 ３９％,用 Ｍ９ＣＡ培基,４２℃诱导培养 ５ｈ可使表达效率提高到４１％,②ＳＤＨ－９４５菌株在５批 １０Ｌ Ｍ９ＣＡ发酵诱导培养 ５ ｈ,ｒｈＩＬ－６表达效率可达 ３５． ８７±２． ６５％。经初步纯化后,ｒｈＩＬ－６的纯度达 ７４． ８７±３． ６８％,再经三步柱层析后,纯度可达 ９５％以上,比活性达 ４ × １０８ Ｕ／ｍｇ,总得率稍低可达 ２３．１％．结论：①ＳＤＨ－９４５工程菌株在 Ｍ９ＣＡ培养基巾,４２℃诱导培养 ５ ｈ,ｒｈＩＬ－６表达效率最佳。②１０ Ｌ发酵和纯化工艺可获高效价、高比活性、高纯度的ｒｈＩＬ－６合格生物制品。     

吉他霉素高产菌株的选育

以吉他霉素产生菌Ｒ－０１－１０５菌株为出发菌株，经紫外线、Ｃｏ６０、色氨酸、异亮氨酸和２－ＤＯＧ复合处理，获得４株高产突变株，其中Ｔ－１１－１２０的摇瓶效价（１５３０２ｕ／ｍｌ）比出发菌株（８５００ｕ／ｍｌ）提高８０．１％，在１０吨发酵罐上连续８批验证，平均发酵效价１２３８８ｕ／ｍｌ，比原生产水平（７４００ｕ／ｍｌ）提高６７．４％，并且质检全部合格，对生产实际具有重要意义