脐血单个核细胞体外扩增的实验研究

目的 :采用集落刺激因子体外扩增脐血单个核细胞 (CBMC) ,研究集落刺激因子对CBMC增殖活性的影响。方法 :用RPMI1 640培养液加入集落刺激因子IL - 3、SCF、GM -CSF及其组合 ,体外扩增CBMC ,健康成人外周血单个核细胞 (PBMC)作为对照组。结果 :加入不同集落刺激因子体外培养CBMC与PBMC后 ,增殖活性均有不同程度的升高 ,以加入IL - 3、SCF、GM -CSF组最为显著 ;CBMC的增殖活性与PBMC比较有显著性差异 (P<0 .0 5)。结论 :集落刺激因子可在体外扩增CBMC ,IL - 3、SCF、GM -CSF之间有明显的协同作用 ;与PBMC相比 ,CBMC有更高的增殖潜能     

筛选抗HBV药物的外周血单个核细胞体外培养系统的建立

由于乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)宿主范围狭小 ,主要对人类和黑猩猩易感 ,因而为抗ＨＢＶ药物筛选的研究带来了很大的困难。本文探索建立了一种利用乙型肝炎病人外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)进行体外培养来筛选抗ＨＢＶ药物的新系统 ,取得了一定的效果。1　资料和方法病例 :选自 1996年本科收治住院的慢性乙型肝炎病人 ,共 2 0例。ＰＢＭＣ分离与培养 :无菌抽取病人外周静脉血 10ｍｌ,常规法分离并培养ＰＢＭＣ ,连续培养 3天 ,分别收集培养上清及细胞 ,- 2 0℃保存备检。药物 :试验药物为磷甲酸钠 (ＰＦＡ)、阿昔洛韦、肝炎灵注射液、注射用蜂毒…     

急性肾炎患儿外周血单个核细胞NF-KB的表达

目的:探讨NF-KB在肾炎发生和发展中的作用。方法:采用MMLV-步法RT-PCR法,检测急性肾炎患儿疾病期外周血单个核细胞NF-KB的表达。结果:急性肾炎患儿外周血单个核细胞NF-KB表达高于正常对照组。结论:外周血单个核细胞NF-KB可作为肾炎发生时炎症反应指标。     

外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的体外培养

目的 探讨外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的培养方法. 方法 分离人外周血单个核细胞,接种于加有牛垂体提取物的M-199培养基中,第8 天予以血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)刺激促进细胞分化,刺激15 d后运用RT-PCR、免疫荧光法和Western blot检测平滑肌细胞特异性α-辅肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SM MHC)、调宁蛋白(Calponin)、CD34、Tie-2 和Flk-1的表达, 并以流式细胞技术检测培养细胞α-SMA阳性表达率,对培养细胞进行鉴定. 结果 在PDGF-BB刺激培养15 d后细胞表达平滑肌细胞的标记α-SMA、SM MHC和Calponin,同时表达干细胞的标记CD34,并发现其Flk-1阳性表达,Tie-2阴性表达.PDGF-BB刺激后细胞α-SMA阳性表达率为 (90.57±5.63)%,与阴性对照细胞之间有统计学差异(P＜0.05). 结论 外周血单个核细胞分离后第8天,使用PDGF-BB刺激可使其向平滑肌前体细胞分化,提出了一种新的外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化的培养方法.     

外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的体外培养

目的探讨外周血单个核细胞向平滑肌祖细胞分化的培养方法。方法分离人外周血单个核细胞,接种于加有牛垂体提取物的M-199培养基中,第8天予以血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)刺激促进细胞分化,刺激15 d后运用RT-PCR、免疫荧光法和Western blot检测平滑肌细胞特异性α-辅肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)、调宁蛋白(Calponin)、CD34、Tie-2和Flk-1的表达,并以流式细胞技术检测培养细胞α-SMA阳性表达率,对培养细胞进行鉴定。结果在PDGF-BB刺激培养15 d后细胞表达平滑肌细胞的标记α-SMA、SM MHC和Calponin,同时表达干细胞的标记CD34,并发现其Flk-1阳性表达,Tie-2阴性表达。PDGF-BB刺激后细胞α-SMA阳性表达率为(90.57±5.63)%,与阴性对照细胞之间有统计学差异(P<0.05)。结论外周血单个核细胞分离后第8天,使用PDGF-BB刺激可使其向平滑肌前体细胞分化,提出了一种新的外周血单个核细胞向平滑肌细胞分化的培养方法。     

基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用

目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（BMMNC）体外液体培养和各种造血相细胞集落培养技术,进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究,并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后细胞层存在的条件下,同时含有细胞因子组合的培养体系,对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。     

慢性粒细胞白血病患者外周血单个核细胞诱生树突细胞的体外研究

目的 :体外诱生慢性粒细胞白血病 ( CML)患者外周血单个核细胞 ( PBMNCs)为树突细胞( DCs)。方法 :CML患者 PBMNCs在含 GM- CSF、IL- 4、TNF- α的培养液中培养 1 4d,倒置显微镜、电镜下观察细胞形态 ,流式细胞仪检测细胞的表面标志 ,免疫磁珠 ( MACS)富集所诱生的 DCs,用D- FISH、RT- PCR方法检测 DCs的白血病源性。利用 MTT法检测所诱生 DCs刺激 T细胞增殖能力。结果 :所诱生的细胞高表达 CD80 、CD86、CD1a、HLA- DR,电镜下细胞表面有丰富突起 ,细胞浆内有丰富线粒体 ,D- FISH、RT- PCR检测所诱生的 DCs具有 bcr/abl融合基因。CML DCs具有刺激 T细胞增殖能力。结论 :体外利用 CML患者 PBMNCs成功诱导生成了来源于 CML细胞的 DCs( CML DCs)。     

催乳素对体外单独培养的Graves病外周血单个核细胞活化及增殖影响的研究

目的 :研究催乳素 (PRL)对体外单独培养的Graves病 (GD)外周血单个核细胞的活化及增殖有无直接影响。方法 :提取 12例GD患者和 8例正常健康对照的外周血单个核细胞 ,单用含不同浓度羊催乳素或植物血凝素的培养液进行体外培养。并利用流式细胞技术等测定其表面CD2 5的表达 (反映活化状态 )或细胞内DNA含量以计算增殖指数 (反映增殖状态 )。结果 :GD患者和正常人的外周血单个核细胞经 12 .5 10 0 0ng/ml羊催乳素作用后 ,其CD4+ CD2 5 + 细胞百分率、CD8+ CD2 5 + 细胞百分率及增殖指数均无明显变化 (P均 >0 .0 5 )。所设阳性对照植物血凝素 (5 μg/ml)能直接刺激这两种来源的单个核细胞发生活化、增殖 ,使上述各项指标均显著增高 (P均<0 .0 1)。结论 :催乳素不能刺激体外单独培养的GD外周血单个核细胞发生活化及增殖     

SLE患者外周血单个核细胞凋亡的研究

目的 探讨ＳＬＥ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）凋亡率异常是否与其自身抗体产生高低有关。方法 采用碘化丙锭（ＰＩ）染色法,在流式细胞仪下宣检测２０例ＳＬＥ患者及１０名正常人ＰＢＭＣ体外凋亡情况,同时观察了ＳＬＥ患者自身抗体的表达及与凋亡率的关系。结果 ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ体外培养０、２４、４８、７２ｈ后凋亡率较正常人明显增高（Ｐ〈０．０５）,且活动期ＳＬＥ高于非活动期（Ｐ〈０．０５）。ＳＬＥ患者自身     

健康人外周血单个核细胞体外诱导分化内皮祖细胞

[目的]将外周血单个核细胞诱导分化为内皮祖细胞,为冠心病缺血心肌血管新生提供理想的种子细胞来源.[方法]收集健康成人外周血,通过Ficoll离心法获得外周血单个核细胞,置于纤维连接蛋白预衬的EGM-2培养基中加以诱导,并通过相差显微镜和免疫荧光标记等方法对诱导分化后的细胞进行形态学观察和鉴定.[结果]在上述诱导分化条件下,外周血单个核细胞分化成为内皮祖细胞,倒置荧光微镜下呈典形的"纺锤样"梭形细胞,ac-LDL吞噬及lectin抗体荧光标记双阳性,FLK-1和VWF免疫荧光抗体染色均为阳性.[结论]成人外周血单个核细胞在特定培养条件下可诱导分化成为内皮祖细胞,内皮祖细胞可作为冠心病缺血心肌血管新生的种子细胞.     

过敏性哮喘患者外周血单个核细胞CD23表达水平改变

探讨ＩｇＥ低亲和力受体（ＣＤ２３）的过敏性哮喘发病中的作用，以及与ＩＬ－２受体（ＣＤ２５）和ＨＬＡ－ＤＲ的关系。ＣＤ２３可能介导过敏性哮喘的慢性气管炎症，活化ＣＤ４＾＋Ｔ细胞对其表达有上调作用。     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞对丙型肝炎的影响

为了研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）对丙型肝炎的影响,运用非同位素原位杂交法（ＮＩＳＨ）和链酶亲和素－生物素（ＳＡＢＣ）法分别检测２０例慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ及其Ｔ淋巴细胞亚群,同时检测这些患者的肝功能指标。结果显示８例（４０．０％）ＨＣＶ患者的ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ－ＲＮＡ呈阳性结果。ＨＣＶ－ＲＮＡ呈散在颗粒状或弥漫分布,主要位于胞浆中。ＨＣＶ－ＲＮＡ阳     

内皮—单个核细胞体外粘附的实验研究

采用体外细胞培养法，建立了内皮－单个核细胞联合培养模型，观察了模型中单个核细胞形态和数量的变化。所见３种形态的单个核细胞，分别称为Ｉ型，Ⅱ型和Ⅲ型细胞。对３型细胞进行了形态的描述和定量的观察，认为 内皮细胞对单核细胞向巨噬细胞分化有诱导作用，该方法简便，安全、可靠，是研究内皮一单个核细胞粘附的理想模型。     

外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系的研究

目的 建立外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系,探讨不同培养基及效靶比对共培养体系的影响.方法 分离正常人外周血单个核细胞,加人植物血凝素(PHA),置于不同的培养基(DMEM,RPMI1640)中进行培养,采用不同效靶比((5:1、10:1、20:1、40:1)构建PBMCs与HepG2.215细胞共培...     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞mIL—2R表达

探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中膜白介素－２受体在静息状态和诱导状态的表达水平及其与ＨＢｅＡｇ的关系。方法用生物素－链霉亲和素系统检测１０８例慢性乙肝患者ＰＢＭＣ的ｍＩＬ－２Ｒ,并平行测定患者血清中ＨＢｅＡｇ。结论慢性乙肝患者ｍＩＬ－２Ｒ表达水平低下,且与ＨＢｅＡｇ存在有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞TNIP1基因表达

目的 探讨TNIP1 基因在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中的表达情况,以及与SLE疾病活动指数(SLEDAI)、单核苷酸多态性(SNP)位点rs10036748的相关性.方法 收集61例SLE患者和66例正常对照的临床资料及血样,采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞中TNIP1 mRNA表达量;应用Sequenom MassArray技术对所有病例对照SNP rs10036748位点进行基因分型.结果 SLE患者TNIP1基因 mRNA表达低于正常对照组(P=0.000 4);TNIP1基因 mRNA表达水平与SLEDAI和SNP rs10036748基因型之间无相关性.结论 TNIP1基因在SLE发生中可能起着某种作用.     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞HCV和Fas抗原检测

目的：探讨丙型肝炎（丙型）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）内丙型肝炎病毒抗原（ＨＣＶＡｇ）及Ｆａｓ抗原（ＦａｓＡｇ）表达状况及意义。方法：采用ＨＣＶ核心区及ＮＳ３区单克隆抗体,对２８例慢性丙肝患者ＰＢＭＣｓ进行免疫组化检测,并同步检测ＦａｓＡｇ。结果：ＨＣＶＡｇ及ＦａｓＡｇ阳性率分别为８５．７％（２４／２８）和８２．２（２３／２８）,经相关分析显示。两者表达呈显著正相关（ｒ＝０．５４６,Ｐ〈０．     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV-DNA检测的临床意义

目的 研究HBV感染者血清及外周血单个核细胞(PBMC)中HBV-DNA的感染情况.方法 采用荧光定量PCR技术对112例乙肝患者PBMC及血清中HBV-DNA的感染情况进行检测.结果 PBMC内HBVDNA阳性60例,阴性52例;PBMC内HBV-DNA阳性患者HBeAg阳性率68.3%,较PBMC内HBV-DNA阴性患者显著增高(P＜0.05);血清和PBMC检测结果一致的患者占总检出率的79.5%.肝硬化组PBMC内HBV-DNA阳性率高于急性乙型肝炎组和慢性肝炎组(P＜0.05).结论 血清与PBMC内HBV-DNA阳性率以及HBeAg阳性率存在明显的相关性.PBMC中HBV-DNA的持续存在可能与乙肝易慢性化有关.