CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在儿科临床的实用价值

CD4+CD25+Treg细胞可分为天然性Treg细胞和获得性/诱导性Treg细胞。在病毒感染过程中,CD4+CD2+5Treg细胞维持机体对病毒的免疫耐受状态,促进病毒感染并导致其慢性化。CD4+CD2+5Treg细胞在幼年特发性关节炎的发病过程中发挥重要作用。哮喘患儿血CD4+T淋巴细胞表面的烟碱样乙酰胆碱受体(nAChRα7)表达增加,CD4+CD2+5FoxP3+Treg细胞明显减少。特发性血小板减少性紫癜患儿体内存在自身反应性T细胞的活动及细胞因子的紊乱,CD4+CD25highFoxP3+Treg细胞数量减少。体内外有效诱导、扩增和控制CD4+CD2+5Treg细胞的技术将会为相关儿科疾病的治疗提供崭新思路和有效方法。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞与支气管哮喘

人体内存在多种调节性T细胞,其中CD4+CD2+5调节性T细胞(CD4+CD2+5Treg)具有独特的作用方式和功能特征。CD4+CD2+5Treg在移植耐受、肿瘤免疫、过敏性疾病及微生物感染方面起着重要作用。支气管哮喘作为一种常见的慢性呼吸道疾病,其发病机制极为复杂,与免疫等多种因素有关。本文就CD4+CD2+5Treg的特性及在哮喘的发病和治疗方面研究进展作一综述。     

TGF-β_1和COX-2对CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞的调控作用

作为一种抑制性T细胞功能亚群,CD4+CD2+5调节性T细胞(CD4+CD2+5Treg)在维持机体的免疫自稳和免疫耐受方面发挥了关键作用。近年来研究表明,CD4+CD2+5Treg能通过相同的机制削弱机体的抗肿瘤效应。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多种实体肿瘤和血液恶性肿瘤患者外周血和肿瘤局部微环境中,CD4+CD25+Treg比例增高,且数目与患者肿瘤进展程度和预后、生存率呈负相关,是免疫治疗的新的有效靶点。现就转化生长因子β1和环氧合酶2对CD4+CD2+5Treg参与肿瘤免疫逃逸的调控及作用方式予以综述。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞在心脏疾病中的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)是体内具有免疫调节功能的一类特殊T细胞亚群。近年来,国内外的大量研究表明Treg与很多种心血管疾病的发生和进展密切相关。因此,认识Treg及其在心脏疾病中免疫抑制的机制,有助于提高心脏疾病的免疫治疗效果。现就CD4+CD25+Treg的产生、特征、作用机制及其与心脏疾病的联系予以综述。     

CD_4~+CD_(25)~+Foxp3Treg细胞在再生障碍性贫血诊断中的应用

CD4+CD25+Foxp3Treg调节性T细胞(Treg)具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其功能紊乱或数目下降是导致自身免疫性疾病的重要原因之一。许多研究证实,Foxp3在调控CD4+CD25+Foxp3Treg细胞的发育和功能上起着重要作用。近年来发现,CD4+CD25+Foxp3Treg在再生障碍性贫血疾病的发病过程中,存在着数量和功能的异常,是否能将CD4+CD25+Foxp3Treg在再生障碍性贫血中数量和功能的异常作为再生障碍性贫血与其他临床症状与再生障碍性贫血相似,目前实验手段难以鉴别的疾病区分开来,本文就对此作一综述。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在HBV宫内感染的表达及意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)在HBV宫内感染者血液中的表达及意义。方法:流式细胞技术检测157例乙肝大三阳但肝功能正常孕产妇外周血、其分娩新生儿脐血、HBV宫内感染婴幼儿外周血中CD4+CD25+Treg表达水平。结果:HBV宫内感染产妇外周血及新生儿脐血中CD4+CD25+Treg的百分数较未感染组高(P<0.05);HBV持续感染者CD4+CD25+Treg比例较感染转阴组高(P<0.05)。结论:CD4+CD25+Treg抑制体内HBV清除,宫内感染与其表达上调有关。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在肿瘤免疫中的研究进展

调节性T细胞(regulatory T cells,Treg细胞)是一类控制体内自身免疫反应的具有免疫抑制功能的T细胞亚群,与自身免疫性疾病的发生、移植耐受、肿瘤的免疫抑制等关系密切。近年来,Treg细胞在肿瘤中的作用研究逐渐成为热点,受到广泛关注。研究发现Treg细胞在肿瘤的发生、发展和转移的过程中发挥重要作用,可通过细胞-细胞接触、分泌抑制性细胞因子、干扰细胞代谢等方式直接或间接影响CD4~+CD8~+效应T细胞的功能,从而抑制机体的抗肿瘤免疫。因此,针对Treg的免疫疗法对于治疗肿瘤具有广阔前景。本文就调节性T细胞的作用机制特点及其与肿瘤免疫的关系做一简要综述。     

不同因素刺激DC对CD4~+CD25~+调节性T细胞的作用

目的观察不同因素刺激下的DC分化及数量变化,对CD4+CD25+调节性T细胞的抑制作用。方法制备六味地黄丸含药血清,刺激树突状细胞;反复冻融法制备细胞抗原负载树突状细胞;将实验分为:DC与空白血清组、DC与胃癌细胞组、DC与含药血清组、DC与胃癌细胞和六味地黄丸含药血清联合作用组,将各组分别与淋巴细胞共培养,MTT法检测各组DC数量的变化,流式细胞仪检测DC对CD4+CD25+调节性T细胞的作用。结果在药物作用48 h含药血清浓度为15%时与空白血清组分别作用24、72 h相比,DC的吸光光度值能显著升高(P<0.05)。胃癌细胞与六味地黄丸共同作用组DC吸光光度值显著升高,DC吸光光度值升高对CD4+T细胞的增殖能力有明显调节作用,可降低CD4+T细胞中CD4+CD25+调节性T细胞的数量。结论胃癌细胞作为抗原负载DC,具有促进DC细胞增殖及分化的作用,并可增强CD4+T细胞的增殖能力和降低CD4+T细胞中Treg的数量,六味地黄丸具有辅助调节作用。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞对哮喘大鼠免疫功能影响

目的:观察CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对CD4+CD25-T细胞增殖和Th1/Th2细胞因子分泌的影响,探讨其在哮喘气道炎症中的作用机制。方法:将哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞分别与卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞和哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞联合培养,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法测量细胞增殖情况,ELISA检测细胞IL-4、IL-5和IFN-γ含量。结果:OVA耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞能抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2细胞因子分泌(P<0.05);哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞可明显抑制IFN-γ的分泌(P<0.05)。结论:OVA免疫耐受大鼠CD4+CD25+Treg细胞可能通过抑制哮喘大鼠CD4+CD25-T细胞增殖和影响Th1/Th2平衡发挥作用,哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞存在功能异常,可能与哮喘的发病有关。     

CD4~+CD25~+T细胞在实验性重症肌无力中的作用研究

目的:探讨实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型小鼠外周免疫耐受机制异常在疾病发生、发展中的作用。方法:检测成模组小鼠CD4+脾细胞中CD4+CD25+T细胞(Treg)水平,脾细胞Foxp3mRNA的表达情况,并与未成模组、弗氏佐剂组及正常对照组进行比较。结果:与未成模组、弗氏佐剂组及正常对照组相比,成模组小鼠CD4+脾细胞内Treg的水平明显下降(P<0.01),脾细胞Foxp3mRNA的表达降低(P<0.01)。结论:EAMG模型小鼠存在外周免疫耐受缺陷,FoxP3基因可能通过影响Treg的数量和功能在EAMG的发病中起作用。     

FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞细胞增殖及功能的影响

目的探讨FOLFOX方案化疗对胃癌术后患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)比例及功能的影响。方法选择43例胃癌术后化疗患者,于化疗前1天、化疗结束后第5天采集外周血。采用流式细胞法检测外周血Treg细胞的比例;RT-PCR法检测外周血Treg细胞FoxP-3 mRNA表达水平;将分选的Treg细胞和CD4+CD25-T细胞按单纯Treg细胞组、1∶1混合细胞组,单纯CD4+CD25-T细胞组培养,3H-TdR掺入法检测Treg细胞体外抑制CD4+CD25-T细胞增殖的能力。结果 43例胃癌患者化疗前1天外周血Treg细胞占CD4+T细胞的比例为17.63%±6.31%,化疗后降至13.79%±4.82%(P<0.01);化疗后FoxP-3表达水平较化疗前显著下降(P<0.01);化疗后Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的增殖抑制率由化疗前的54.64%±5.15%下降至24.63%±2.34%(P<0.01)。结论 FOLFOX化疗方案可减少胃癌患者外周血Treg细胞数量,下调其表面标志物FoxP3基因的表达水平,减弱Treg细胞的免疫抑制功能,有利于诱生抗肿瘤免疫效应。     

CD4~+ D25~+调节性T细胞在晚期食管癌中的表达及临床意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)在食管癌中的表达及其临床意义。方法:应用流式细胞术分析60例食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达水平,与20例健康对照组比较。结果:食管癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数量增加(15.9±4.1)%,表达高于正常人(5.91±3.7)%(P<0.001)。食管癌患者外周血中Treg细胞数量与患者的病理类型无关(P>0.05),但与淋巴结转移和组织学分化程度有关(P<0.01)。结论:Treg细胞在食管癌患者中比率明显升高,是患者免疫功能紊乱的一个证据。     

CD_4~+ CD_(25)~+调节性T细胞与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是一种慢性炎症性疾病,而且炎性反应的起始与持续都有先天性和获得性免疫应答的参与。CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg)是一个具有独特免疫调节功能的T细胞亚群,能够抑制效应T细胞的活性。过去许多研究已证实,CD4+ CD25+ Treg在动脉粥样硬化中起着重要作用,本文综述了CD4+ CD25+ Treg与动脉粥样硬化的关系。     

磁激活分选法双重分离大鼠外周血单个核细胞CD4~+CD25~+调节性T细胞

目的:应用磁激活细胞分选(MASC)技术从卵白蛋白(OVA)免疫耐受大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)中分选出大量高纯度CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg),以研究其在支气管哮喘中的作用。方法:从OVA免疫耐受大鼠外周血中分离出PBMCs,应用MASC技术阴性分选CD4+T细胞,再阳性分选出CD4+CD25+Treg;流式细胞仪检测。结果:分选前的CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的11.07%,CD4+T细胞占总数的21.88%;CD4阴性分选后,CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞数的10.95%,CD4+T细胞占总数的89.28%;CD25阳性分选后,CD4+T细胞超过总数的95%,而CD4+CD25+Treg细胞占总数的90.92%,CD4+CD25+Treg细胞纯度大于90%。结论:应用MASC技术成功从OVA免疫耐受大鼠的PBMCs中分选出了高纯度的CD4+CD25+Treg细胞。     

人CD4+CD25+调节性T细胞的体外培养扩增

目的 建立人CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的分离和体外扩增方法,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能。方法 免疫磁性分离(MACS)方法分离人CD4⁺CD25⁺Treg细胞,加入刺激因子与之共培养扩增,用台盼蓝染色法和流式细胞法检测细胞的活性和纯度,流式细胞法检测细胞主要表型标记,实时定量PCR检测Treg核心标记Foxp3的表达,混合淋巴细胞反应试验分析其免疫抑制功能,ELISPOT方法检测产生细胞因子的细胞数目。结果 扩增2～3周的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞数目达到新鲜细胞的3500倍,活性> 97 %,纯度>96 %;扩增的细胞与新鲜的细胞保持了相似的表型、Foxp3表达,其抑制功能略强于新鲜的CD4⁺CD25⁺ Treg细胞,其差异具有统计学意义（71% vs 51%, P<0.05）,可能与其产生抑制性细胞因子的细胞数目增加有关。结论 本试验室创建的分离和体外扩增人CD4⁺CD25⁺ Treg细胞的方法,可以大量扩增出高纯度、有活力且不影响其抑制功能的Treg细胞,解决了CD4⁺CD25⁺ Treg细胞数目少的问题。     

CD4+CD25+Treg细胞调节T细胞作用机制的实验研究

目的 :通过检测Treg细胞表达介导抑制性共刺激分子CTLA4和分泌抑制性细胞因子 ,并设置Treg细胞与效应性T细胞共培养和分隔培养实验模型 ,分析Treg细胞对效应性T细胞形成抑制作用的可能机制及各机制的主次要关系。方法 :对比分析Treg细胞与效应性T细胞膜分子CTLA4、CD2 8表达和细胞因子IL 10、TGF β1 分泌水平 ;以TransWellMillicell PCF分隔培养槽分隔培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系 ,采用向共培养及分隔培养体系加入与不加入IL 10、TGF β1 抗体的阻断方法 ,检测Treg细胞对不同组混合淋巴细胞反应的抑制效率。结果 :Treg细胞分泌IL 10和TGF β1 的浓度水平明显高于效应性T细胞 ,Treg细胞培养上清中IL 10和TGF β1 水平分别达到(380 0± 36 3)pg ml和 (790 0± 5 6 8)pg ml,Treg细胞分泌IL 10和TGF β1 的浓度水平与效应性T细胞比较 ,均有显著性差异 (P <0 0 1)。共刺激分子CTLA4、CD2 8在Treg细胞和效应性T细胞膜表面的表达水平存在明显差异 ,Treg细胞以表达CTLA4为主。Treg细胞对共培养体系混合淋巴细胞反应的抑制效率明显高于分隔培养 ,通过分泌IL 10对效应性T细胞的抑制作用亦明显强于通过TGF β1 。结论 :细胞接触机制是Treg细胞抑制效应性T细胞的主要作用机制 ,而细胞因子机制中     

脓毒症患者CD4~+CD25~+调节性T细胞检测的临床意义

目的探讨脓毒症患者CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的水平与机体细胞免疫状态的关系及其检测的临床意义。方法将脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为3组:脓毒症组14例,严重脓毒症组15例,脓毒症休克组11例。所有入选的40例脓毒症患者在入选当天行流式细胞术检测血中CD4+CD25+调节性T细胞的比例和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平。比较脓毒症组、严重脓毒症组和脓毒症休克组血中CD4+CD25+调节性T细胞比例变化和CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+水平变化。同时选取20例健康人为对照组。结果健康对照组CD4+CD25+调节性T细胞表达率脓毒症休克组最高,严重脓毒症组次之,脓毒症组最低,三组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症组CD3+、CD4+和CD4+/CD8+较正常对照组明显升高(P<0.05),CD8+较正常对照组差异不明显(P>0.05)。严重脓毒症组和脓毒症休克患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+较正常对照组明显降低(P<0.05),CD8+较正常对照组改变不明显(P>0.05)。结论脓毒症患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达增加,可能导致CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平降低,免疫抑制加强。提示CD4+CD25+调节性T细胞在脓毒症的免疫发病机制中可能起着重要作用,对评估患者预后有临床价值。     

人天然CD4+CD25+调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定

目的：建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩 增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础。方法：免疫磁珠分离(MACS)方法从 人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选 的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应 (mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的 CD4+CD25–T细胞增殖的抑制作用。结果：扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增 至1.02×109±0.20×109),活性>97%。扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征：CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺三阳细 胞约占(94.22±2.12)%,与新鲜分选细胞相似。扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25–T细胞的增殖均有明显的抑 制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P<0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4⁺CD25^–T细胞的抑制率 无明显差异(P>0.05)。结论：创建的分离和体外扩增人CD4⁺CD25⁺Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫 抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗。     

CD4+Foxp3+ regulatory T cells converted by rapamycin from peripheral CD4+CD25− naive T cells display more potent regulatory ability in vitro

Background Rapamycin （RAPA） is a relatively new immunosuppressant drug that functions as a serine/threonine kinase inhibitor to prevent rejection in organ transplantation. RAPA blocks activation of T-effector （Teff） cells by inhibiting the response to interleukin-2. Recently, RAPA was also shown to selectively expand the T-regulator （Treg） cell population. To date, no studies have examined the mechanism by which RAPA converts Teff cells to Treg cells. Methods Peripheral CD4＋CD25- naive T cells were cultivated with RAPA and B cells as antigen-presenting cells （APCs） in vitro. CD4＋CD25- T cells were harvested after 6 days and analyzed for expression of forkhead box protein 3 （Foxp3） using flow cytometry. CD4＋CD25＋CD127- subsets as the converted Tregs were isolated from the mixed lymphocyte reactions （MLR） with CD127 negative selection, followed by CD4 and CD25 positive selection using microbeads and magnetic separation column （MSC）. Moreover, mRNA was extracted from converted Tregs and C57BL/6 naive CD4＋CD25＋ T cells and Foxp3 levels were examined by quantitative real-time polymerase chain reaction （rt-PCR）. A total of 1×105 carboxyfluorescein succinimidyl ester （CFSE）-labeled naive CD4＋CD25- T cells/well from C57BL/6 mice were cocultured with DBA/2 or C3H maturation of dendritic cells （mDCs） （0.25×105/well） in 96-well round-bottom plates for 6 days. Then 1×105 or 0.25×105 converted Treg cells were added to every well as regulatory cells. Cells were harvested after 6 days of culture and analyzed for proliferation of CFSE-labeled naive CD4＋CD25- T cells using flow cytometry. Data were analyzed using CellQuest software.Results We found that RAPA can convert peripheral CD4＋CD25- naive T Cells to CD4＋Foxp3＋ Treg cells using B cells as APCs, and this subtype of Treg can potently suppress Teff proliferation and maintain antigenic specificity. Conclusion Our findings provide evidence that RAPA induces Treg cell conversion from Teff cells and uncovers an additional mechanism for tolerance induction by RAPA.     

S180腹水癌小鼠肿瘤浸润淋巴细胞中CD4+CD25+Treg细胞在肿瘤逃逸中的作用

目的：研究肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）中CD4⁺CD25⁺Treg细胞及免疫监视功能的变化,探讨CD4⁺CD25⁺Treg 细胞在肿瘤免疫逃逸中的作用。方法：建立小鼠S180腹水癌模型,采集S180腹水癌小鼠TIL、脾脏细胞及对照组小鼠脾脏细胞,采用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Treg细胞、CD8⁺T细胞、NK细胞的数量及NKG2D的表达水平,采用RT-PCR方法检测Foxp3 mRNA的表达水平,采用乳酸脱氢酶(LDH) 释放法检测CD8⁺T细胞的杀伤功能。结果：与对照组小鼠比较,S180腹水癌小鼠脾脏、TIL中CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达均明显增高(P<0.05),并且肿瘤组小鼠TIL中CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量和Foxp3 mRNA表达较肿瘤组小鼠脾脏均明显增高(P<0.05);TIL中CD8⁺T细胞数量明显增高(P<0.05),其杀伤功能却有所下降;TIL中NK细胞数量及NKG2D表达均明显增高 (P<0.05)。结论：肿瘤局部CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量增加、功能增强,可能是肿瘤逃避免疫监视的机制之一。