体外诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的研究

骨髓间充质干细胞(MSCs)主要存在于骨髓中,在脐血、外周血、脂肪、皮肤等多种组织中也相继分离出MSCs。MSCs具有多向分化的能力,在一定条件下可分化为各种不同来源的细胞。目前,MSCs的分离培养、诱导分化及鉴定体系已趋成熟,其在临床应用的前景广阔。血管内皮细胞(VECs)来源于中胚层,因此MSCs具有分化为VECs的可能性。     

骨髓间充质干细胞的生物学特性及在骨软骨组织工程中的作用

骨髓间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells MSCs)是一类具有自我更新与多向分化能力的成体干细胞，存在于骨髓基质系统中，因其能分化为骨、软骨、脂肪、纤维组织祖细胞和骨髓支持基质等多种间充质组织而得名。MSCs在正常情况下大多处于休眠状态，在病理状态或外因诱导下可以表现出不同程度的再生和更新能力。正常情况下，MSCs可以分化为与其组织来源一致的细胞，但有时也不遵守该规律，表现出横向分化能力。MSCs在体外培养亦表现出多向分化潜能，在不同的诱导条件下可以向成骨、成软骨、成肌肉、成脂肪、分化及中胚层以外的细胞，如神经元等。     

交感神经及其神经递质调控间充质干细胞的研究进展

间充质干细胞(MSCs)属于成体干细胞，主要存在于结缔组织和器官间质中，是组织损伤修复、衰老改变等的关键。近来研究发现交感神经及其神经递质对MSCs的动员、归巢、增殖、分化，以及干细胞巢、微环境等存在多位点、多阶段的影响和调控。本文拟总结交感神经及其神经递质介导、调控MSCs的相关研究，为MSCs的进一步研究、应用等提供参考和思路。     

去分化间充质干细胞成骨再分化潜能的实验研究

目的:研究去分化间充质干细胞(de－differentiated mesenchymal stem cells,De－MSCs)成骨再分化能力?方法:以MSCs为对照,分别采用Cell Count Kit(CCK8)法?实时定量PCR(qPCR)?碱性磷酸酶(ALP)活性和茜素红染色法检测De－MSCs增殖能力?成骨相关基因?成骨再分化能力等?结果:De－MSCs可表达干细胞表面标志,在成骨培养基中增殖能力高于MSCs(P < 0.05),成骨相关基因(Runx2?Osterix?Bmp2)表达明显增加(P < 0.05),ALP活性检测发现De－MSCs明显高于MSCs组(P < 0.05),28 d后茜素红染色可见红色结节?结论:De－MSCs具备某些MSCs特征,但是体外再次成骨效率明显提高,De－MSCs可作为更优质种子细胞,为再生医学开拓新的思路?     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导向神经细胞样细胞分化

目的：研究大鼠骨髓问充质干细胞(MSCs)离体分离和培养方法,诱导MSCs向神经细胞样细胞分化。方法：通过梯度离心从大鼠骨髓中分离有核细胞,进行培养,去除不贴壁的细胞,分离纯化MSCs,对其生长特性进行分析。分别用硫代甘油和β-巯基乙醇对MSCs诱导分化,观察细胞形态变化,免疫组化检测分化细胞中nestin,神经元特异性烯醇化酶(NSE),胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,进行鉴定。结果：用含15％胎牛血清(FCS)的L—DMEM培养MSCs,原代细胞贴壁生长,细胞形态均一,为纺锤形,有克隆形成。传代培养时,形态变为成纤维细胞样,生长特征呈“S”形,有较强的增殖能力,于第10代以后开始出现衰老征象。MSCs经硫代甘油和巯基乙醇诱导分化后,细胞形态发生改变,nsetin,NSE和GFAP阳性,分化为神经元或胶质细胞样细胞。结论：大鼠MSCs可以离体分离,培养,并能诱导向神经细胞样细胞分化。     

脐血间充质干细胞多向分化能力的研究进展

间充质干细胞(MSCs)是来源于中胚层的具有自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞,广泛存在于结缔组织或器官间质当中。1867年[1],德国病理学家Cohnhe in推测骨髓和血液中存在能向非造血系统分化的干细胞,1968年,Fried-edste in首次提供了较为直接的证据,证明在骨髓中具有多向分化潜能的细胞,由于它能分化成骨髓基质等多种间充质组织,故将其命名为MSCs。人们发现骨髓中MSCs的数量丰富,近年来,也有从骨膜、肌腱和胎儿脐带血等组织中分离出MSCs的报道。随着细胞移植的发展,MSCs因其具有多向分化能力,逐渐成为细胞移植的一种可行性供体…     

间充质干细胞临床应用的研究进展

 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)属多能干细胞的一种,其具有高度的自我更新能力、多向分化潜能、低免疫原性和免疫调节能力,且来源方便,易于分离、培养、扩增和纯化,经多次传代培养后仍具有多向分化潜能,因此在临床上有重大的研究与应用价值。本文结合MSCs的生物学特性对其应用在肺及呼吸系统疾病、心血管疾病、神经系统疾病、自身免疫性疾病以及再生医学与组织工程等方面的国内外最新研究进展及目前所存在的问题进行综述。     

DMOG对间充质干细胞生物学特性影响的研究

[目的]探讨二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxaloylglycine,DMOG)对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)生物学特性的影响。[方法]以DMOG作用于P4代MSCs,分为DMOG 0、20、40和80μmol·L~(-1)组,以CCK-8法、流式细胞术、Transwell迁移法和Real-time q PCR依次检测不同浓度的DMOG对MSCs增殖能力、细胞周期、迁移能力以及成骨、成脂、成软骨和成神经分化能力的影响。[结果]DMOG各浓度组细胞生长曲线均接近S型,与DMOG 0μmol·L~(-1)组比较,20μmol·L~(-1)对MSCs增殖能力具有促进作用,40μmol·L~(-1)促进作用最明显,差异具有统计学意义(P0.05)。与DMOG0μmol·L~(-1)组比较,DMOG处理可提高处于S期+G2/M期的MSCs细胞比例,差异具有统计学意义(P0.05)。与DMOG 0μmol·L~(-1)组比较,DMOG20μmol·L~(-1)时促迁移作用显著(P0.05)。DMOG处理后,MSCs仍保留了原有的成骨、成脂、成软骨、成神经分化能力,DMOG 20μmol·L~(-1)可显著促进MSCs成骨和成软骨分化能力,抑制MSCs成脂分化能力,差异具有统计学意义(P0.05),对MSCs成神经分化能力无显著影响(P0.05)。[结论]不同浓度DMOG处理后,MSCs仍保留了原有的多向分化能力,其中20μmol·L~(-1)DMOG可促进MSCs成骨和成软骨分化能力,抑制其成脂分化能力,对其成神经分化能力无显著影响,同时可显著提高MSCs增殖、迁移能力。     

间充质干细胞治疗肺部疾病的研究进展

间充质干细胞(MSCs)是一种具有多项分化潜能的干细胞,可分化为多种组织细胞,并通过分化和旁分泌效应发挥组织修复、免疫调节、抗菌和抗凋亡等作用。目前,许多肺部疾病发病机制复杂且缺乏有效的治疗方法,而MSCs可对诸多肺部疾病产生治疗作用。因此,研究MSCs对肺部疾病的影响,从细胞和分子层面揭示其作用机制,将为肺部疾病的预防和治疗奠定临床前基础。     

间充质干细胞的免疫特性与临床应用新进展

间充质干细胞(MSCs)是一种重要的多潜能干细胞,具有多向分化的潜能、支持造血、免疫调节等功能。其特殊的免疫学特性越来越引起学者们的关注。最近的研究显示,MSCs本身免疫原性低,同时具有免疫调节作用,体外可以影响淋巴细胞和其他免疫细胞的功能,在体内MSCs也表现出了类似免疫抑制剂的作用。现就近年来MSCs的免疫调节作用的研究进展和在临床疾病治疗中的应用予以综述。     

内皮祖细胞条件培养基对间充质干细胞增殖和成骨分化的影响及其机制

目的:探讨小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)条件培养基(CM) 对同源间充质干细胞(MSCs)增殖和成骨分化功能的影响,并阐明其作用机制。方法:小鼠骨髓细胞经差速贴壁法结合专用培养基分别培养扩增MSCs和EPCs,采用流式细胞术(FCM)检测MSCs和EPCs表面标记物,以成骨、成脂和成软骨诱导分化对MSCs进行功能鉴定,以成血管对EPCs进行功能鉴定。将MSCs分为0% EPCs-CM组(对照组,采用LG-DMEM培养)、50% EPCs-CM组(采用50% EPCs-CM+50% LG-DMEM培养)和100% EPCs-CM 组(采用100% EPCs-CM培养)。采用MTT比色法检测各组MSCs的增殖活性;采用茜素红染色检测各组MSCs的成骨分化能力。结果:FCM法检测,第3代MSCs高表达Sca-1、CD29, 低表达CD45、CD11b;经诱导可向成骨、成软骨和成脂方向分化。第3代EPCs 高表达CD34、CD133和VEGFR2;在铺有基质胶的96孔培养板中可形成血管样结构。与对照组比较,50% EPCs-CM组和100% EPCs-CM组MSCs增殖活性明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。茜草色素红染色法检测,培养21 d后50%和100% EPCs-CM组MSCs的钙结节数量和钙盐沉积均高于对照组(P<0.05)。结论:利用差速贴壁法可同时分离MSCs和EPCs,EPCs-CM能促进MSCs 的增殖和成骨分化。     

Relation Between Cellular Senescence and Liver Diseases

Cellular senescence refers to a process that cellular proliferation and differentiation modulated by the multiple stimulating factors gradually decline.Aging cells present the irreversible stop of proliferation and differentiation and change in secretory function because the cell cycle of aging cells is steadily blocked at some point. It has have been shown that cellular senescence plays an important role in the occurrence and development of liver diseases. In this paper, we review the advances in relations between cellular senescence and liver diseases.     

犬骨髓间充质干细胞体外培养及诱导成软骨特性初步研究

目的：观察月龄、来源部位对犬骨髓MSCs体外增殖能力及成软骨细胞分化能力的影响，对软骨组织工程种子细胞的选择提供参考。方法：体外分离、培养4月龄、12月龄Beagle犬髂骨和胫骨骨髓中的MSCs，向软骨细胞诱导分化。依靠形态学观察、原代集落生成率、MTT法测生长曲线等方法观察各组MSCs的增殖能力，通过GAG含量、Ⅱ型胶原免疫组化比较诱导成软骨细胞效果。结果：4月龄犬髂骨与胫骨来源MSCs体外增殖特性及诱导成软骨细胞特性比较差异无统计学意义；12月龄犬髂骨组MSCs较胫骨组原代融合时间短、集落生成率高、生长曲线左移，但成软骨细胞特性无差异。相同部位比较，4月龄来源MSCs均较12月龄表现出较高的增殖能力和成软骨细胞分化能力，差异具有统计学意义。结论：成年犬不同部位来源MSCs增殖能力不同，分化能力相同；幼龄犬MSCs增殖、分化能力均高于成年犬。     

氧化还原HMGB1介导间充质干细胞血管修复对动脉粥样硬化的影响

摘要：目的 观察氧化还原状态高迁移率族1蛋白（High mobility group box 1 protein, HMGB1）对间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）增殖、迁移及向血管细胞（内皮细胞及平滑肌细胞）分化的影响,初步探讨氧化还原状态HMGB1介导MSC血管修复对动脉粥样硬化的影响。方法 二硫苏糖醇(dithiothreitol, DTT)及过氧化氢（H2O2）处理 HMGB1,使其处于不同氧化还原状态,使用上述氧化还原状态HMGB1处理体外培养MSC,不做处理为空白组。CCK-8检测细胞增殖力;Transwell 试验检测细胞迁移力;免疫荧光实验及流式细胞仪技术检测细胞分化情况。结果 DTT还原的HMGB1促进MSC增殖,增强其对MSC迁移及向血管内皮细胞分化的促进作用,并且增强其对MSC向血管平滑肌细胞分化的抑制作用; H2O2氧化的HMGB1使其对MSC增殖、迁移及向血管细胞（内皮细胞及平滑肌细胞）分化的影响减弱甚至消失。结论 还原状态HMGB1能够通过促进MSC增殖,增强其对MSC迁移及向血管内皮细胞分化的促进作用,并且增强其对MSC向血管平滑肌细胞分化的抑制作用,进而抑制动脉粥样硬化;氧化状态HMGB1通过使其对MSC增殖、迁移及向上述血管细胞分化的影响减弱甚至消失,进而促进动脉粥样硬化。     

VEGF与Notch信号通路对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞的调控机制研究

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)通过Notch信号通路对再生障碍性贫血（AA）患者骨髓造血微环境的影响,探讨VEGF与Notch信号通路对骨髓间充质干细胞（MSC）的调控机制。方法选取AA患者与健康志愿者的骨髓MSC,VEGF干预后分别采用CCK-8法、流式细胞仪检测MSC细胞增殖、分化情况,分别采用Westernblot、qRT-PCR法检测MSCVEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因表达情况,采用免疫荧光法检测MSC内皮分化能力。结果CCK-8法检测显示,VEGF的干预可明显上调AA患者MSC的增殖能力。流式细胞仪检测显示,VEGF通过阻断S期细胞促进AA患者MSC的增殖,抑制其凋亡。Westernblot、qRT-PCR法检测显示,AA患者MSCVEGF与Notch信号通路相关蛋白、基因表达受抑制,VEGF的干预可促进MSC的Notch信号通路传导。免疫荧光法检测提示,AA患者MSC内皮分化能力弱于正常MSC。结论VEGF或可通过Notch信号通路调控AA患者MSC,从而改善骨髓造血微环境。     

不同低氧分压对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

目的研究体外不同低氧分压对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖分化的影响。方法将体外培养的MSCs,分组置于常氧(21%)和低氧(2%、4%、6%、8%)培养箱中培养,用MTT法分别于1、3、5、7、9d检测细胞的增殖活性;用酶联免疫检测法分别于1、3、5、7、9d检测细胞碱性磷酸酶(ALP)和Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)的表达。结果不同低氧分压对MSCs细胞增殖活性有明显促进作用(P<0.05);低氧分压抑制MSCs细胞的ALP和COLⅠ表达(P<0.05)。结论低氧微环境可促进MSCs的增殖活性,但对细胞的成骨向分化起到抑制作用。     

Effect of Electromagnetic Fields on Proliferation and Differentiation of Cultured Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells

Previous clinical observations and animal ex periments showed that EMFs could stimulate newbone formation of the fractures and increase thebone mineral density[1], but the manner in whichEMFs influence the behavior of bone remains poor ly understood. Recent studies[2] found that signaltransduction system plays an important role in thebiological effect of EMFs. Intracellular cAMP wasan important second messenger in signal transduc tion pathway. The cellular proliferation …     

间充质干细胞移植治疗免疫性疾病的研究进展

间充质干细胞（MSCs）是一类具有多向分化潜能和低免疫原性的成体干细胞,具有促进血管形成、保护神经和细胞替代治疗作用,此外,MSCs还具有免疫调节功能,如抑制T细胞增殖和B细胞增殖分化、调节自然杀伤性细胞活性和树突状细胞成熟及功能等。最新研究表明,移植MSCs能有效治疗免疫性疾病如移植物抗宿主病、类风湿性关节炎、糖尿病和多发性硬化症等,文章就MSCs移植治疗免疫相关性疾病的研究进展进行综述。     

鹿茸多肽纳米复合材料诱导兔骨髓间质细胞向成骨细胞的分化效应

目的：探讨鹿茸多肽纳米复合材料诱导兔骨髓间质细胞（MSCs）向成骨细胞分化的效应,阐明复合材料作用机制。方法：将含5 mg/g鹿茸多肽、20%纳米β-磷酸三钙（β-TCP）和明胶的复合材料（以下简称复合材料）与第3代MSCs共培养 48 h,用MTT法和流式细胞术检测复合材料对MSCs增殖及细胞周期的影响;AO/EB荧光染色观察MSCs凋亡形态的变化;将MSCs与复合材料共培养,扫描电镜下观察细胞黏附、生长情况;复合材料连续作用于MSCs 21 d,全自动生化分析仪检测细胞中碱性磷酸酶（ALP）活性,茜素红染色法观察复合材料对MSCs矿化结节形成的作用。结果：复合材料作用于MSCs 48 h,可明显促进MSCs增殖,相对增殖率为126.45%,此时的MSCs主要处于S期,占细胞总数45.84%（对照组为7.96%）,凋亡率为2.08%（对照组为13.68%）;MSCs在复合材料上黏附、生长良好,呈多角或梭形。复合材料连续作用MSCs 21 d,显著增加了矿化结节形成;随着作用时间的延长,细胞的ALP活性也逐渐增强,21  d 复合材料组与对照组比较明显升高（P<0.001）。结论：复合材料在体外可促进MSCs增殖,并可诱导MSCs向成骨细胞分化,具有良好的成骨效能。