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相似文献
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1.
目的模拟HIV性传播感染特点进行中国恒河猴阴道黏膜小剂量多次感染研究,为我国艾滋病疫苗有效性评价提供新的模型构建思路。方法选用20-30TCID50剂量的SHIVSF162p3病毒阴道黏膜途径感染六只成年雌性中国恒河猴,共感染13次,每次攻毒间隔4~7 d。采取测定血浆病毒载量和外周血CD4+∶CD8+。结果 6只中国恒河猴经13次病毒攻击后,经检测均建立系统性感染,血浆病毒载量呈阳性;CD4+∶CD8+均有下降。结论成功建立了中国恒河猴阴道黏膜小剂量多次感染模型,为艾滋病研究提供了新的更接近于自然感染状态的模型建立模式。  相似文献   

2.
目的观察水凝胶型防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT经黏膜途径免疫兔的免疫效果及其目的蛋白在免疫部位的表达。方法 20只新西兰大白兔随机分为5组,每组4只。A组:pVAX1-gtfB/CAT口服组,B组:pVAX1-gtfB/CAT鼻腔黏膜滴注组,C组:空载体pVAX1质粒口服组,D组:空载体pVAX1+水凝胶口服组,E组:生理盐水鼻腔黏膜滴注组。每间隔1周免疫1次,共免疫3次。每次免疫剂量为200μg/只。于免疫前和免疫后第1、2、3、4、6、8、10、12、14、16周采集血液及唾液标本,ELISA法检测血清及唾液中特异性抗体水平。第3次免疫后每组处死1只动物,取免疫部位组织,免疫组织化学检测目的蛋白表达。结果 1水凝胶型防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT免疫兔后,诱导了特异性IgG和SIgA抗体产生,在第6和第8周口服免疫诱导的特异性IgG抗体水平高于鼻腔黏膜滴注,其余时间点两种黏膜途径诱导的SIgA和IgG抗体水平差异无统计学意义;2在小肠黏膜和鼻黏膜均检查到了目的蛋白的表达。结论水凝胶型防龋基因疫苗pVAX1-gtfB/CAT经黏膜途径免疫后,目的蛋白能够在免疫部位表达,均能有效诱导兔的系统免疫和黏膜免疫应答。  相似文献   

3.
1材料和方法收集潜伏期病人粪便,st0.01mol/LPBS液制成20o粪提取液,静脉(10mU只)和灌胃(20mU,qW种恒河猴,再以阳性报粪便经0传优.以一只猴淮阴性粪便法并行检测对照.每日收集粪便和隔日血液标本1周,继每周粪便,每月血液一次6个月.2只灌胃的猴在第48手术,第78杀死,另2,R$4t种后6个月时手术,收集胆汁、肝脏和上中下3处空伍组织.rtPCR检测猴血液和粪便,原位杂交检测活俭或杀死税的空助和肝内的病毒.2结果与讨论静脉接种猴4-7d后血液检出病毒,几乎同时粪便也检出病毒。口服接种猴当B粪便检出病毒,可能是排出的接种…  相似文献   

4.
1材料和方法收集潜伏期病人粪便,以0.01mol/LPBS液制成20%粪提取液,静脉(10ml/只)和灌胃(20ml/只)接种恒河猴,再以阳性猴粪便经口传代。以一只猴灌阴性粪便液并行检测对照。每日收集粪便和隔日血液标本1周,继每周粪便,每月血清一次6个月。2只灌胃的猴在第4日手术,第7日杀死,另2只猴接种6个月时手术,收集胆汁、肝脏和上中下3处空历组织,以优R检测猴血液和粪便,原位杂交检测活俭或杀死猴的空肠和肝内的病毒。2结果与讨论静脉接种猴4~7日后血液检出病毒,几乎同时粪便也检出病毒。口服接种猴当日粪便检出病毒,可能是排…  相似文献   

5.
丛喆  蒋虹  王卫  陈霆  金光  陶真  姚南  熊竞  吴芳新  耿祥飞  魏强 《医学动物防制》2010,(10):883-884,888
目的确定SHIVSF162p3静脉途径感染中国恒河猴的有效病毒浓度,明确SHIVSF162p3感染实验猴体内病毒复制和免疫损伤情况。方法 10只正常中国恒河猴分别用10倍系列稀释的病毒液1mL静脉感染,测定血浆病毒载量,CD4+/CD8+,CD4+T细胞绝对数,分析感染后恒河猴体内病毒复制和免疫损伤情况。结果 5TCID50/ml以上的SHIVSF162p3能通过静脉途径成功感染中国恒河猴。结论本研究成功确定了SHIVSF162p3感染实验猴使用剂量,建立了SHIVSF162p3/中国恒河猴静脉感染模型各项指标,为今后使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了条件。  相似文献   

6.
目的观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的鼻相关淋巴组织(NALT)和肠相关淋巴组第(GALT)黏膜部位的免疫应答。探讨弓形虫黏膜疫苗能否在感染起始阶段有效诱导免疫应答。方法将BALB/小鼠随机分为免疫和对照组,免疫组小鼠以弓形虫复合黏膜疫苗20μl/只(20μg STAg+1μg CT)滴鼻免疫2移(间隔2周),对照组PBS滴鼻。于末次滴鼻后14d颈椎脱臼处死小鼠,ELISA测定粪便和鼻咽冲洗液IgA抗型水平;计数NALT、NC及PP、IEL淋巴细胞数,免疫细胞化学法检测CD4^+、CD8^+T细胞亚群水平。结果免疫匀小鼠粪便IgA和鼻咽冲洗液IgA抗体显著高于对照组(P〈0.05)。NALT内淋巴细胞明显增生(P〈0.05),其中CD4^+、CD8^+T细胞均有增生(P〈0.01),CD4^+/CD8^+比值降低(P〈0.05)。NC中淋巴细胞数明显升高(P〈0.01),以CD4^+T细胞水平为主(P〈0.01)。GALT部位PP淋巴细胞增生显著(P〈0.01),主要以CD4^+T细胞为主;而IEL以CD8^+T细胞增生为主(P〈0.01),CD4^+/CD8^+比值降低(P〈0.05)。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导NALT和GALT黏膜部位免疫应答。  相似文献   

7.
麻疹疫苗及加佐剂经滴鼻免疫小鼠的抗体应答   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的:观察麻疹减毒活疫苗和灭活疫苗经滴鼻免疫小鼠后的抗体应答。方法:用活的或灭活麻疹疫苗及分别加明胶、植物血凝素(PHA)的疫苗滴鼻免疫小鼠,于末次免疫后10d取血清、唾液、呼吸道分泌物,用间接ELISA法检测特异性IgG,IgA抗体水平,并与皮下注射组及对照组进行比较。结果:各滴鼻组小鼠血清及呼吸道分泌物中均产生一定水平的特异性IgG及In抗体,皮下注射组小鼠呼吸道分泌物中未产生特异性IgA抗体;加明胶后的免疫效果优于加PHA的。结论:麻疹疫苗滴鼻免疫小鼠后可诱导全身及局部抗体应答,明胶可增强其免疫效果,而麻疹疫苗皮下注射免疫小鼠未能诱导局部抗体应答。  相似文献   

8.
脊髓灰质炎又称小儿麻痹症,其病原体是肠道脊髓灰质炎病毒,主要经污染的食物、生活用品等通过粪—口途径传播。小儿麻痹症好发于1~5岁儿童,大多数为隐性感染,只有少数感染者因病毒损害脊髓前角运动神经元细胞导致肢体肌肉弛缓性麻痹。1954年脊髓灰质炎灭活疫苗(Inactivated Poliovirus Vaccine,IPV)首次出现,1960年脊髓灰质炎口服活疫苗(Poliomyelitis Attenuated Live Vaccine,OPV)研制成功,我国自1962年使用OPV减毒活疫苗以来,脊髓灰质炎在我国的传播及其发病率得到了有效的控制。但近些年仍有相关脊髓灰质炎野病毒传播的报道,河北省于2016年5月开始实行IPV+OPV的免疫策略,现将脊灰疫苗的相关内容进行简述。  相似文献   

9.
目的 确定SHIV1157ipd3N4静脉途径感染中国恒河猴的有效病毒浓度,明确SHIV1157ipd3N4感染实验猴体内病毒复制和免疫损伤情况.方法 10只正常中国恒河猴分成6组,分别用10倍系列稀释的病毒液1 mL静脉感染,测定血浆病毒载量,CD4+/CD8+,CD4+T淋巴细胞绝对数,分析感染后恒河猴体内病毒复制...  相似文献   

10.
目的 最近在输血后肝炎病人中发现了一种新型肝炎病毒 ,并命名为输血传播的病毒即TTV。我们在一次经肠道传播的非甲非戊型肝炎暴发流行的病人粪便和血清中也检测到了这一病毒。本文旨在于回顾这种新型病毒的流行病学特征和实验感染。方法 主要收集我们的资料 ,并参照世界各地有关论著。结果 在一次经肠道传播的非甲非戊型肝炎的暴发流行中 ,从 381名学生 (6 0 7% )的血清和粪便标本中检测到TTV病毒的片段 ,该职校中无症状携带者的血清阳性率为 32 1% ,而粪便阳性率为 2 4 6 % ,提示有潜在的传染源存在。来自中国北方与南方的两个偏远农村人群流行病学调查 ,其阳性率分别为 9 2 %和 10 6 % ,表明中国是TTV感染的地方性流行区。我们用TTV阳性肝炎病人的粪便滤过液分别经灌胃和静脉接种两种途径成功地使两组恒河猴 (每组 3只 )感染了TTV ,并对其中两只恒河猴进行了研究 ,分别在它们的肝、脾、小肠和结肠组织中检测到TTV ,而单链的复制中间体 ,仅仅在肝和小肠中检测到。结论 这种无包膜的DNA病毒可能经血液和肠道途径传播 ,根据其广泛分布和高的流行率 ,我们推测肠道传播是更为重要的  相似文献   

11.
目的通过对2例口服脊髓灰质炎疫苗相关病例(VAPP)的报告分析,了解VAPP的发生因素,探讨降低VAPP发生率的有效措施,并为疫苗预防接种异常反应的处置提供参考。方法采集患儿双份大便,由河北省疾病预防控制中心实验室检测,阳性标本送国家疾病预防控制中心脊灰实验室鉴定。结果 2例病例均为2月龄首次口服脊髓灰质炎减毒活疫苗(OPV)而发病,且均为男性;病例1为口服OPV后34d出现急性弛缓性麻痹,鉴定为Ⅲ型脊灰疫苗病毒;病例2为口服OPV后13d出现急性弛缓性麻痹,鉴定为Ⅰ型、Ⅲ型脊灰疫苗病毒;2例病例均属于预防接种异常反应。结论对首次服用OPV的儿童认真做好接种前禁忌症的筛查、询问告知工作,并做好记录;首剂接种建议使用WHO推荐的替代方法:IPV或IPV/OPV序贯免疫程序,减少VAPP发生率;加强AFP监测,及时发现和治疗,减少VAPP并发症。  相似文献   

12.
[目的]阐明SARS病毒感染后能否再次感染,疫苗产生的抗体中长期保护效果,被动免疫是否真正安全有效等,为防治SARS提供实验依据。[方法]实验分4组,分别为一组(SARS恒河猴恢复组):用感染SARS-CoV发病12月后的4只恒河猴,均有中和抗体产生。二组(SARS食蟹猴恢复组):用感染SARS-CoV发病12月后的3只食蟹猴,均有中和抗体产生。三组(SARS血清输入恒河猴组):3只恒河猴,病毒接种时中和抗体阴性。病毒接种两天后输入抗体阳性血清(恒河猴血清,感染获得,效价为:1:128),用量10ml/只,分别经肌肉和静脉输入,各5ml。四组(恒河猴SARS-CoV感染组):2只恒河猴,病毒接种时中和抗体阴性。SARSCo-V经鼻腔接种,在感染的第1天开始到7天安乐死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和中和抗体测定。[结果]一组(SARS恒河猴恢复组):接种SARS-CoV后未见发热等异常临床表现。血清生化无ALT、LDH、CK、总蛋白和血清白蛋白异常。3只猴在接种病毒后的咽拭子中,RT-PCR分别未检出、第1天检出、第1-3天中检出病毒。第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。2只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎。二组(SARS食蟹猴恢复组):接种3只未见任何不良临床表现,血清生化5项正常。3只猴在接种病毒后的咽拭子标本中,RT-PCR分别未检出SARS病毒、在第1-2天检出、在第1-3天中检出病毒。第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。3只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎等。三组(SARS血清输入恒河猴组):3只恒河猴在病毒接种的第2-5天时有一过性的体温升高,3940℃。血清生化5项正常。3只猴在接种病毒后的咽拭子标本中,RT-PCR分别在第1-3、第1-4天和第1-2天检出SARS病毒。2只猴第7天咽拭子中病毒分离阳性。另外1只在第2、5、7天咽拭子中、7天安乐死时血、肺、肝、脾和淋巴结等组织中病毒分离均为阴性。3只猴肺组织病理学检查见轻度肺炎等。四组(SARS恒河猴SARS-CoV感染组):2只猴病毒接种后,第2-4天时有一过性的体温升高,3940℃。2只进行接种病毒后1-7天安乐死时,RT-PCR在恒河猴的咽拭子标本中连续检出SARS病毒。在第2、5天咽拭子中、7天安乐死时肺组织中病毒分离阳性。2只猴肺等组织病理学检查发现肺组织表面局部有轻度发灰实变现象,可见到间质性肺炎病变,内皮细胞受损,出血和水肿。大多数肺泡没有完整的内衬细胞残留,肺泡间隔变宽并被以吞噬细胞为主的单核炎症细胞浸润,同SARS肺炎改变。实验表明,前期感染产生中和抗体的恒河猴、食蟹猴再次感染病毒,和模型对照猴比较,动物肺组织等只出现轻微或无病理变化,RT-PCR检出时间大大缩短,病毒培养未能分离出病毒,所有这些指标,均证实中和抗体有明显的保护作用,是有效的。被动免疫从结果来看,有一定的作用,但保护作用弱。  相似文献   

13.
流感病毒样颗粒疫苗研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3       下载免费PDF全文
 疫苗接种是预防各种类型流行性感冒的理想方式,但流感病毒血清亚型多,变异性强,给流感疫苗的研发带来一定的挑战。病毒样颗粒(VLP) 是含有某种病毒一个或多个结构蛋白的空心颗粒,形态结构上类似完整病毒,具有与完整病毒相似的免疫原性,并通过激活抗原提呈细胞,诱导免疫应答。VLP不含有病毒核酸,不能自主复制,因此无致病性,在疫苗研发中具有广泛的应用前景。现已有H1N1、H3N2、H5N1、H7N1、H5N3及H9N2型流感VLP合成的报道,动物实验证明这些VLP可诱导产生保护性免疫应答?数种二价(多价)混合流感VLP也被合成并证实在不同亚型流感病毒间具有交叉保护作用。佐剂的使用能够增强流感VLP疫苗的免疫原性。目前的研究表明流感VLP疫苗具有高免疫效价、能有效诱导交叉免疫应答和安全性高等特点,但现有研究大多是动物实验和临床前实验。流感VLP疫苗的安全性、效价及免疫途径等方面还有待进一步的研究及临床实验的验证。本文就近年来流感病毒样颗粒疫苗的研究进展,从流感VLP的合成和释放、免疫机制、已合成的流感VLP、佐剂的使用等方面进行综述。  相似文献   

14.
疫苗接种是预防传染病最为有效的措施。鉴于大多数病原主要通过黏膜途径感染机体,预先在黏膜表面建立有效的免疫应答是预防病原入侵的最佳方式。鼻腔免疫是一种高效、无痛的黏膜免疫途径,既可诱导系统免疫应答,又能诱导广泛的黏膜免疫应答。然而,大多数疫苗尤其是亚单位疫苗经鼻腔接种后难以诱导有效的黏膜免疫应答,需要借助佐剂的辅助作用。佐剂是一种非特异性免疫增强剂,通过激活天然免疫来增强适应性免疫应答从而达到提高疫苗保护效力的目的,是疫苗尤其是亚单位疫苗的重要组成部分。鞭毛蛋白作为鼻腔黏膜免疫佐剂的效应已被广泛证实:在增强系统免疫应答的同时,还能增强黏膜应答,尤其是分泌型IgA的产生。该文就鞭毛蛋白的分子结构、诱导的信号通路、作为疫苗佐剂的应用及机制方面的研究进展作一综述。  相似文献   

15.
目的研究表达幽门螺杆菌((H.pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的减毒鼠伤寒杆菌活菌重组疫苗口服免疫Balb/c小鼠后的黏膜免疫应答状况。方法将已构建成功的表达UreB的重组减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-UreB口服免疫Balb/c小鼠,12周后检测肠液和血清中的特异性抗体反应。结果疫苗组小鼠的肠液和血清中可分别检测到针对UreB的特异性抗体IgA和IgG,病理学检查显示疫苗组小鼠较对照组小鼠胃黏膜炎症程度的差异无统计学意义。结论表达H.pylori UreB的减毒鼠伤寒杆菌SL3261/pTC01-ureB能够诱导小鼠产生抗H.pylori的黏膜免疫,可用作抗H.pylori感染的口服疫苗。  相似文献   

16.
目的:观察注射用青蒿琥酯对猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)感染中国恒河猴模型免疫异常激活的改善情况,探讨青蒿琥酯对艾滋病的干预作用。方法:选用8只SIV感染平台期中国恒河猴模型,随机分为治疗组和对照组,每组各4只,治疗组按每天3 mg·kg~(-1)剂量肌肉注射青蒿琥酯注射液8周,对照组肌肉注射等剂量生理盐水。分别于给药前,给药后2周、4周、6周、8周,停药后4周、8周检测血浆病毒载量、全血细胞计数、淋巴细胞亚群及免疫活化相关标记物CD_(69)~+、CD_(25)~+、HLA-DR~+和CD_(38)~+表达情况。结果:青蒿琥酯可在4周内下调CD_8~+细胞CD_(69)~+、HLA-DR~+和CD_(38)~+表达水平(P0.05),对CD_4~+细胞影响较小。给药第4周出现一过性嗜中性粒细胞下降,后回升至正常水平。结论:青蒿琥酯可改善SIV感染中国恒河猴细胞毒性T细胞免疫异常激活,嗜中性粒细胞下降是可逆的。  相似文献   

17.
目的:通过RT-PCR及病毒分离等方法,鉴定SARS感染性动物模型是否成立,并对疫苗效果进行评估。方法:选用3周岁的健康SPF级恒河猴8只,分为SARS实验感染动物模型组及疫苗组(Sino 3 SARS灭活疫苗20030904批肌内注射,免疫2次)。经鼻吸入Sino 1 SARS毒株,病毒攻击后7d动物进行安乐死。自病毒攻击后的第一天起每日连续采集动物咽拭子标本,病毒攻击后的第二天、第五天、第七天采集血浆标本。将标本进行病毒分离及RT-PCR检测.结果:模型组动物病毒攻击后第一天至第七天咽拭子RT-PCR检测均为阳性。注射疫苗组动物仅在病毒攻击后第一天咽拭子RT-PCR检测呈阳性。模型组动物血浆RB-PCR检测呈现阳性,疫苗组动物血浆RT-PCR检测均为阴性。病毒分离结果显示仅在模型动物咽拭子标本中分离到病毒,未在疫苗组动物的咽拭子标本分离到病毒.血浆标本中均未分离到病毒.结论:RT-PCR及病毒分离可以及时有效地检测出病毒在体内的复制情况,可作为模型鉴定、疫苗评估及药物筛选的重要手段。  相似文献   

18.
目的探讨补益类复方中药作为佐剂增强流感病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)疫苗免疫原性的可行性。方法将42只BALB/C小鼠随机分为7组,每组6只,分别为VLPs组、VLPs+益气方组、VLPs+养血方组、VLPs+滋阴方组、VLPs+壮阳方组、VLPs+霍乱毒素组和PBS阴性对照组,分别于0和第14天通过鼻腔使用VLPs进行免疫,加用中药复方佐剂组在第1天至第13天连续灌服中药。VLPs疫苗按10μg/次接种,中药佐剂按200 mg/kg剂量接种,霍乱毒素按1μg/次鼻腔接种。在免疫前及免疫后第13天、第28天采集外周血,在第28天同时采集肺腔灌洗液,测定小鼠外周血清中Ig G水平和肺泡灌洗液中Ig A水平,并进一步对外周血清中和抗体效价进行测定。结果(1)补益类中药具有良好的增强外周血Ig G体液免疫应答的功能,其中益气方、滋阴方可以早期快速提高Ig G水平(P0.01),而益气方则可以进一步持续性提升Ig G水平(P0.01);(2)益气方、补血方和滋阴方均可以显著提高VLPs诱导肺腔Ig A水平(P0.01),其中以益气方组升高最为明显;(3)无论是在免疫应答早期还是后期,益气方、滋阴方均显著提高流感VLPs诱导小鼠外周血中和抗体效价(P0.01)。结论益气方、滋阴方可以显著增强流感VLPs诱导的外周体液免疫应答和肺脏局部黏膜免疫应答水平,益气联合滋阴方有望成为新型中药佐剂进而增加流感VLPs疫苗免疫原性。  相似文献   

19.
ELISPOT方法检测SIVmac239感染猴特异性细胞免疫水平   总被引:5,自引:1,他引:5  
目的为了完善现有的SIV/恒河猴模型,掌握恒河猴被SIV感染后体内细胞免疫应答状态,为评价HIV疫苗提供方法和数据上的参考,我们测定了SIV感染猴体内病毒特异性的细胞免疫水平。方法实验前选出4只无SIV、sTLV、SRV/D和B病毒感染的恒河猴,用SIVmac239病毒液静脉感染实验猴,使用RT-PCR、流氏细胞术和ELISPOT等方法,监测SIVmac239病毒在恒河猴体内复制情况、感染猴的外周免疫损伤情况和细胞免疫情况,持续测定一年。结果实验结果显示IFN-γ ELISPOT方法能有效的评估实验猴的细胞免疫情况,IFN—YELISPOT结果和CD4+T细胞数无相关性,与血浆病毒载量稍有相关。结论本实验明确了SIVmac239感染中国恒河猴体内CTL的基本趋势和范围,了解了外周血病毒载量、外周免疫损伤与细胞免疫状况之间的联系,完善了SIV/SAIDS模型评价指标,为使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了基础条件。  相似文献   

20.
Li Y  Jiang QF  Wang JW  Chen Y  Wang M  Li CH  Zhang CH  Dai CB  Yu XP  Dai JJ  Li QH  Hong T 《中华医学杂志》2004,84(23):2002-2006
目的 研究表达轮状病毒主要抗原VP7、VP6的非复制型重组腺病毒在恒河猴模型上的免疫反应性和安全性 ,为轮状病毒基因工程疫苗的进一步研究奠定基础。方法 将重组腺病毒通过滴鼻或灌胃途径免疫恒河猴 ,用酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测恒河猴血清中轮状病毒特异性抗体IgG ,并监测免疫前后各组恒河猴血、尿常规及一系列反映肝功能和肾功能的生化指标。在整个实验过程中 ,常规监测恒河猴的体温、体重及临床症状。结果 重组腺病毒通过滴鼻或灌胃途径免疫均能诱导恒河猴产生针对轮状病毒抗原的特异性血清IgG ;在重组腺病毒免疫整个过程中 ,各免疫组恒河猴无不良反应 ,体温基本正常 ,体重增长正常 ;和正常对照组相比 ,免疫后各免疫组恒河猴血、尿常规及肝功能、肾功能无显著性变化。结论 表达轮状病毒抗原的重组腺病毒免疫恒河猴能产生针对轮状病毒的特异性免疫反应 ,并且不影响其正常的生长发育及健康状况 ,初步证明我们制备的重组腺病毒用作疫苗的有效性和安全性  相似文献   

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