CD40在人腹膜间皮细胞的表达

目的:对人腹膜间皮细胞CD40的表达及其调节因素进行初步探讨。方法:从CAPD患者的透出液中分离、培养腹膜间皮细胞,用IFN-γ、TNF-α、IL-1、LPS刺激24h,通过流式细胞仪(FACS)检测分析腹膜间皮细胞CD40、CD40L及ICAM-1的表达。结果:腹膜间皮细胞结构性表达少量的CD40;IFN-γ可显著增加腹膜间皮细胞表面CD40蛋白的表达,而TNF-α、IL-1、LPS对腹膜间皮细胞表面CD40蛋白的表达无显著影响。未见间皮细胞表达CD40L。IFN-γ、TNF-α、IL-1、LPS对间皮细胞ICAM-1表达均有显著增强作用。IFN-γ增强ICAM-1表达作用显著高于TNF-α、IL-1、LPS,间皮细胞CD40表达强度与ICAM-1呈显著正相关。结论:人腹膜间皮细胞可功能性表达CD40。     

腹透液增强腹膜间皮细胞CD40表达及其意义

目的:研究腹膜透析液对大鼠腹膜间皮细胞CD40表达的影响及CD40活化后与细胞间粘附分子-1(ICAM-1)分泌的相关性, 以揭示腹膜透析时腹腔局部炎症的发生机制。方法: 分离、培养大鼠腹膜间皮细胞, 分别用IFN-γ、4.25%腹透液、4.25%腹透液+IFN-γ作为刺激因子, 通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)及流式细胞仪(FACS)检测间皮细胞CD40表达;并通过CD40单克隆抗体(CD40mAb)活化高表达的间皮细胞CD40, 用FACS检测间皮细胞ICAM-1的表达。结果:腹膜间皮细胞结构性表达低水平CD40mRNA及蛋白。用4.25%腹透液刺激后, 间皮细胞CD40mRNA及蛋白的表达显著高于对照组。用4.25%腹透液+IFN-γ刺激后, 间皮细胞表面CD40mRNA及蛋白的表达进一步增加, 且明显高于单纯腹透液刺激组。活化CD40受体可显著增强间皮细胞ICAM-1的表达。结论:腹膜间皮细胞可表达CD40, 4.25%透析液及IFN-γ均能显著增加腹膜间皮细胞CD40的表达。间皮细胞CD40的上调, 可能是腹透过程中腹腔局部炎症启动、放大的重要机制之一。     

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及 NF-κ B作用的实验研究

目的研究 LPS诱导的肺微血管内皮细胞( PWVEC) ICAM- 1的表达及调控机制.方法 100ng/ml LPS刺激 PMVEC 0h、2h、4h、6h、8h或 10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml LPS刺激 6h,免疫细胞化学检测 PMVEC ICAM- 1的表达.凝胶电泳迁移率变化分析检测 NF- κ B的活化.并通过加入活化阻断剂 PDTC观察对 PMVEC ICAM- 1表达的影响.结果 PMVEC ICAM- 1的表达与 LPS的刺激呈时相 - 剂量依赖方式.LPS的刺激迅速活化 NF- κ B,60min达到高峰,后逐渐下降.PDTC能显著降低 ICAM- 1的表达( P<0. 01).结论 LPS刺激诱导 NF- κ B的活化,启动 ICAM- 1的合成表达.     

LPS诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖并增加NF-κB p65蛋白的表达

目的： 研究LPS-NF-κB信号通路在骨形成过程中的作用。方法: MC3T3-E1成骨细胞常规培养,待细胞融合率为80%时,分别加入100 μg/L和500 μg/L LPS处理6 h。流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞DNA相对增殖指数;RT-PCR法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达;蛋白质印迹法（Western blotting）检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测LPS处理成骨细胞后NF-κB p65的核易位情况;电泳迁移率变动分析（EMSA）LPS处理MC3T3-E1细胞后NF-κB活力的变化情况。结果: 100 μg/L和500 μg/L LPS可诱导MC3T3-E1成骨细胞增殖;LPS处理成骨细胞后NF-κB mRNA的表达与正常组比较无显著变化（P>0.05）,而NF-κB p65蛋白的表达明显高于对照组（P<0.01）;LPS处理成骨细胞后免疫荧光法可明显观察到NF-κB p65从细胞质转移入细胞核,且EMSA结果显示LPS处理组细胞核内NF-κB结合活性增加。结论: 低浓度的LPS可促使成骨细胞增殖,此过程中并不影响NF-κB p65的基因表达水平,但能增加NF-κB p65蛋白的表达并提高细胞核内NF-κB的结合活性。     

β-胡萝卜素对脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制

目的:探讨β-胡萝卜素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬细胞24 h后用不同浓度的β-胡萝卜素(20、40、80、160μmol/L)处理细胞3 h,MTT法测细胞活性,荧光定量PCR测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量,ELISA测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量。5μg/ml的LPS和不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC(1、5、10μg/ml)共同处理巨噬细胞24 h,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量,荧光定量PCR、ELISA测炎症因子的表达和分泌。比较LPS+PDTC组和LPS+PDTC+β-胡萝卜素组炎症因子和NF-κB p65蛋白相对表达的变化。结果:与LPS组相比,不同浓度的β-胡萝卜素对LPS刺激的巨噬细胞的细胞活性有提升作用,对炎症因子和NF-κB p65蛋白的表达有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表达可以抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡萝卜素组对炎症因子的抑制作用比LPS+PDTC组明显,且差异显著(P0.05),但两组对NF-κB p65蛋白的表达不明显。结论:β-胡萝卜素可以通过抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表达抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相关的通路。     

LPS通过TLR4信号通路诱导人肾小管上皮细胞株(HK-2)表达hBD-2

目的研究LPS体外刺激人肾小管上皮细胞株(HK-2)是否诱导表达hBD-2,并进一步探讨该表达与TLR4/NF-κB信号传导通路的关系。方法给予不同质量浓度的LPS(0.01、0.1、1、10μg/ml)刺激HK-2细胞12 h,再应用TLR4及NF-κB阻断剂预处理HK-2细胞1 h后,给予质量浓度为1μg/ml的LPS作用12 h,采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞hBD-2 mRNA的表达,ELISA检测细胞上清中hBD-2的表达。结果 1)LPS能诱导HK-2细胞hBD-2 mRNA及蛋白的表达,且这种表达具有质量浓度依赖性;2)TLR4阻断剂能抑制LPS对HK-2细胞表达hBD-2的诱导作用,与未阻断之前相比差异具有统计学意义(P<0.01);3)NF-κB阻断剂能抑制LPS对HK-2细胞表达hBD-2的诱导作用,与未阻断之前相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 LPS可能通过TLR4/NF-κB信号传导通路诱导HK-2细胞表达hBD-2,将为泌尿系统感染防治提供新靶点。     

夏天无注射液参与脑缺血再灌注大鼠神经保护的NF-κB介导机制

目的:探讨夏天无注射液参与脑缺血再灌注大鼠神经保护的NF-κB介导机制。方法:随机将雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、夏天无注射液1.0 ml/kg的低剂量组、2.5 ml/kg的中剂量组、5 ml/kg的高剂量组及NF-κB抑制剂(BAY11-7082)组。脑缺血再灌注24 h后,2,3,5氯化三苯基四唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死重量百分比;免疫组织化学技术及Western blot技术检测各组的磷酸化NF-κB表达变化。结果:TTC发现:不同剂量的夏天无注射液及BAY可以减轻脑梗死的总量,其中,高剂量组、中剂量组及抑制剂组之间效果无差异,但三者效果均较低剂量组明显;免疫组化发现:主要在模型组中的海马CA1区细胞核中发现磷酸化NF-κB表达,而CA3区的表达量较少。Western blot检测发现:不同剂量的夏天无注射液可以模拟BAY11-7082的作用,降低磷酸化NF-κB蛋白的表达量。结论:夏天无注射液可能减轻大鼠脑缺血再灌注后梗死程度,其机制可能是通过抑制NF-κB的过度磷酸化。     

槐定碱抑制脂多糖诱导巨噬细胞系NF-κB表达

目的观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1 h,弃去LPS后加入槐定碱15.63 mg/L,作用5、30、60和120 min,分别获取细胞与培养液。RT-PCR与Western blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P<0.01),IκBαmRNA低于同时间点对照组(P<0.01或P<0.05);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P<0.01或P<0.05),而IκBαmRNA则显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF-α分泌是其抗内毒素作用机制之一。     

白细胞介素38过表达抑制氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞炎症的分子机制研究

目的探究白细胞介素(IL)-38在动脉粥样硬化患者血清中的水平及其对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的内皮细胞炎症的作用及分子机制。方法收集65例颅内外颈动脉粥样硬化患者和30例健康人的血液,ELISA检测血清中IL-38的表达。在人动脉内皮细胞(HAECs)中先转染pcDNA3.1-IL-38质粒过表达IL-38,然后用100μg/ml ox-LDL刺激。ELISA检测细胞上清液中IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1等炎性介质的表达;real-time PCR检测细胞中凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和CD36 mRNA水平的表达,Western blot检测细胞中LOX-1、CD36、磷酸化核内转录因子p65(p-NF-κB p65,p-p65)和IκB蛋白水平的表达。最后转染pcDNA3.1-IL-38质粒24 h后,用100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)预处理HAECs2 h,再加入100μg/ml ox-LDL刺激,检测细胞中LOX-1、IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1的表达。结果与健康人相比,脑动脉粥样硬化患者血清中IL-38的表达明显增加(P0.05),且与其动脉粥样硬化程度呈正相关性。IL-38能够降低ox-LDL诱导的IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1等炎性介质、LOX-1 mRNA和蛋白水平、p-p65的表达,增加IκB蛋白水平表达(P均0.05),但是对CD36 mRNA和蛋白表达无影响。PDTC能够减弱IL-38对LOX-1、IL-6、IL-8、IL-17、ICAM-1和MCP-1表达的影响。结论 IL-38的表达水平与动脉粥样硬化程度呈正相关,它能够抑制ox-LDL诱导的内皮细胞炎症,这可能与其抑制NF-κB信号通路相关。     

Fractalkine对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞中NF-κB活化及内源性fractalkine mRNA表达的影响

目的:观察Fractalkine(FKN)对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)核转录因子κB (NF-κB)活化以及内源性FKN mRNA表达的影响.方法:通过组织块法培养RA-FLS.在RA-FLS中加入100 μg/L FKN,分别作用0 h、1 h及2 h,用Western blotting检测RA-FLS胞浆及胞核中NF-κB p65蛋白表达量变化以明确NF-κB的活化情况;加入100 μg/L重组人FKN分别作用0 h、12 h、18 h后,用RT-PCR检测FKN mRNA表达的变化.结果:重组人FKN刺激1 h后,RA-FLS胞浆中NF-κB p65蛋白水平明显低于无FKN刺激的对照组(P<0.05);FKN刺激后2 h,细胞核中NF-κB p65蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05).100 μg/L重组人FKN刺激RA-FLS,呈时间依赖方式诱导内源性FKN mRNA表达.FKN刺激RA-FLS18 h,细胞中FKN mRNA的表达水平明显升高(P<0.05).结论:外源FKN可刺激RA-FLS内源性的FKN mRNA表达上升,提示RA-FLS中可能存在FKN的正反馈现象.FKN对NF-κB有活化作用,可能对RA患者关节中炎症的启动、血管生成和骨质破坏有重要作用.     

卡介苗经TLR4介导对膀胱癌细胞株T739 NF-κB p65活性影响

目的:探讨卡介苗(BCG)对膀胱癌细胞株T739 经Toll样受体介导的NF-κB p65活性影响.方法:采用SYBR Green嵌合荧光定量Real Time-PCR,观察BCG(0.25 g/L)刺激T739后不同时间点各个mRNA相对表达量(Ratio),设LPS和空白组作对照;采用转录因子结合DNA的ELISA方法检测NF-κB p65活性.结果:BCG刺激后T739细胞TLR2、 CD14和MD-2 mRNA表达均明显增加,Max.Ratio分别为5.3(2 h),2.6 (4 h),7.4(2 h),TLR4 mRNA增加不显著,Max.Ratio为1.6(6 h);BCG作用T739细胞后NF-κB p65活性显著增加,阻断TLR4后,NF-κB p65活性受到显著抑制(P<0.05);阻断TLR2后NF-κB p65活性却显著性增强(P<0.01).结论:BCG作用T739后TLR2、 CD14、 MD-2 和TLR4 mRNA表达均不同程度增加,BCG可经TLR4使T739细胞NF-κB p65活性增强,不是经TLR2使T739细胞NF-κB p65活化.     

008 抗氧化剂和NFκB对大鼠肺微血管内皮细胞iNOS表达的影响

目的: 探讨NFκB以及抗氧化剂在大鼠肺微血管内皮细胞中对TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达的作用及其机制. 方法: 通过免疫组化染色ABC法用抗内皮细胞抗体CD31对培养的大鼠肺微血管内皮细胞进行鉴定. Griess法测定细胞培养上清液中的亚硝酸盐浓度以反映NO的生成. Northernblot结合RT-PCR分析iNOS mRNA水平. EMSA法测定细胞核内NFκB的结合活性. 结果: TNFα(100 U/ml)加LPS(1 ug/ml)处理内皮细胞2 h后iNOS mRNA水平明显上升(P<0.05), 24 h后能明显增加NO的生成(P<0.01). 用放线菌酮(10 mg/ml)或抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC, 0.1 mmol/L)或氮乙酰基半胱氨酸(N-acetylcystenine, NAC, 20 mmol/L)处理内皮细胞能降低TNF-α和LPS诱导的亚硝酸盐(NO)生成和iNOS mRNA表达(P<0.05). 抗氧化剂PDTC和NAC对NO诱导生成的抑制作用呈现剂量-效应关系. TNF-α(100 U/ml)加LPS(1 μg/ml)能刺激内皮细胞中NFκB的激活和转位. 当内皮细胞培养体系中加入PDTC(0.1 mmol/L)或NAC(20 mmol/L)1.5 h后这种激活作用被阻滞. 结论: ① TNF-α加LPS能够在转录或转录后水平诱导iNOS基因表达. ② TNF-α加LPS诱导的iNOS基因表达依赖于NFκB的激活. ③抗氧化剂能够通过抑制NFκB的激活来抑制iNOS基因的诱导表达.     

脂多糖对肺微血管内皮细胞IL-8表达的影响及其调控机理

目的探讨脂多糖(LPS)的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)IL-8表达的影响及通过核因子κB(NF-κB)的调控机理。方法肺微血管内皮(PMVEC)细胞生长至80 %以上融合度时用于实验。加入LPS以100ng/ml浓度刺激细胞分别至0、0.5、1、2、4、6、8h ,或LPS分别以1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml刺激细胞至1h或6h为检测时相点 ,每组6个标本。至预定时相点离心收集培养液上清 ,行IL -8ELISA检。用原位杂交试验检测培养液上清中分泌的IL -8及PMVEC内IL-8mRNA的表达 ;凝胶电泳迁移率分析 (EMSA)检测NF-κB的活化 ,以积分灰度值表示NF-κB的活性变化。观察NF -κB活化抑制 (PDTC)对IL-8表达的影响。结果LPS能显著促进PMVEC表达IL -8,随刺激时间延长IL -8水平逐渐升高 ,与0h相组比 ,100ng/mlLPS刺激后从2小时开始即有明显上升 (P<0.05) ,8h达到峰值 ,为5.86±0.68ng/ml(P<0.01)。与对照组比 ,1ng/mlLPS刺激6h即能显著诱导IL-8的表达(P<0.05) ,10ng/ml、100ng/ml的诱导作用非常显著(P<0.01) ,随着LPS浓度的增加而增加。LPS刺激后能明显地诱导IL -8mRNA的表达。100ng/mlLPS刺激后从1h开始即在胞浆中显示IL-8mRNA的强阳性表达 ,随作用时间延长 ,IL-8mRNA表达增加。至6h达到高峰 ,8hIL -8mRNA表达略有下降。同时显示IL -8mRN     

脂多糖对人支气管上皮细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响

目的 观察脂多糖对人支气管上皮细胞16HBE STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响.方法 采用普通RT-PCR检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达;Western印迹检测16HBE细胞STAT1、STAT4、STAT6的蛋白表达.分别采用不同浓度的脂多糖在不同的时间点处理16HBE细胞,采用Real-time PCR的方法检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达.结果 1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞1 h组、0.25 μg/ml的LPS处理16HBE细胞4 h组、1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞4 h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组显著增高(P＜0.01);0.25 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组、1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组、10 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组有所增高(P＜0.05);1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞1 h组STAT6的mRNA表达较正常对照组显著增高(P＜0.01).所有LPS处理16HBE细胞组STAT3的mRNA表达均较正常对照组减低.结论 人支气管上皮细胞表达STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA和STAT1、STAT4、STAT6的蛋白,一定剂量的脂多糖在某些时间点分别刺激了人支气管上皮细胞STAT1、STAT4、STAT6的mRNA表达.     

NF-κB及ICAM-1在脑出血大鼠及过氧化氢损伤大鼠脑微血管内皮细胞中的表达

目的： 探讨脑出血后炎症反应机制及核因子-κB(NF-κB)与细胞间粘附分子-1(ICAM-1)间表达的关系。方法： 建立大鼠脑出血模型及过氧化氢损伤大鼠脑微血管内皮细胞的模型，分别采用免疫组化、原位杂交、免疫细胞化学及Western blotting方法观察NF-κB和ICAM-1的表达。结果： 大鼠脑出血后NF-κB 及ICAM-1表达均增强，ICAM-1的表达高峰（1 d）先于NF-κB（4 d），但在体外实验中，过氧化氢损伤后即刻大鼠脑微血管内皮细胞中NF-κB表达即增加，2 h后ICAM-1表达也上调，NF-κB的抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸（PDTC)可下调NF-κB及ICAM-1表达。结论: 在活性氧损伤中NF-κB作为ICAM-1的活化因子，可上调ICAM-1表达，但在脑出血这一复杂的病理生理变化中，尚有其它因素参与对NF-κB 及ICAM-1表达的调控。     

槐定碱抑制LPS诱导巨噬细胞株NF-κB表达

 摘 要：目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63mg/L,作用5、30、60、120min,分别获取细胞与培养液。RT - PCR与Western Blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P < 0.01);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P < 0.01)。结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF – α分泌是其抗内毒素作用机制之一。     

LPS激活TLR4抑制BMP9诱导iMEFs成骨分化

目的研究脂多糖(LPS)激活的Toll样受体4(TLR4)信号对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导永生化小鼠胚胎成纤维细胞(i MEFs)成骨分化的影响。方法细胞免疫荧光检测TLR4/NF-κB信号通路的激活;LPS,BAY11-7082和BMP9处理iMEFs,ALP染色和活性检测i MEFs早期成骨分化能力;茜素红S染色检测晚期成骨分化能力;半定量PCR和Western blot检测晚期成骨基因OCN和OPN表达;Western blot检测Smad1/5/8磷酸化水平;半定量PCR和Western blot检测成骨关键转录因子Runx2和Dlx5的表达。结果 LPS成功激活TLR4/NF-κB信号通路;LPS抑制BMP9诱导的ALP染色和活性(P0.01)、钙盐沉积、OCN的mRNA和蛋白质表达(P0.05)、OPN的mRNA(P0.01)和蛋白质(P0.05)表达、Smad1/5/8信号通路激活(P0.01)、Runx2的mRNA和蛋白质表达(P0.05)、Dlx5的mRNA(P0.01)和蛋白质(P0.05)表达,BAY11-7082可以部分逆转LPS的抑制作用(P0.05)。结论 LPS激活TLR4可以通过NF-κB信号通路抑制BMP9诱导的iMEFs成骨分化。     

微小RNA-155通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1/核因子κB信号通路加剧新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 探讨微小RNA-155（miRNA-155）是否通过调控核苷酸结合寡聚化结构域蛋白1（NOD1）/核因子κB（NF-κB）信号通路在新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤中发挥作用。方法 选择新生雄性大鼠40只,分4组,每组10只。分别是假手术组、缺氧缺血组（HI组）、阴性对照组（NC antagomir组）、miRNA-155抑制组（miRNA-155 antagomir组）。大鼠经10%水合氯醛（400 mg/kg）麻醉后取左脑测定脑组织含水量;采用HE染色,于光学显微镜下观察各组大鼠脑海马组织病理形态学改变;采用Western blotting法检测各组大鼠脑组织中NOD1、NF-κB p65、NF-κB p50、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）和p-NF-κB p50的蛋白表达水平;采用Real-time PCR法检测各组大鼠脑组织及血清中miRNA-155、NOD1、NF-κB p65和NF-κB p50的mRNA表达水平。结果 与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织含水量显著升高,miRNA-155 antagomir组显著降低（P＜0.05）;假手术组海马细胞排列整齐,细胞形态结构及层次清晰完整,无空泡,间质无水肿;HI组和NC antagomir组可见海马细胞排列紊乱,形成空泡,胶质细胞增生,细胞间隙增宽出现水肿,坏死细胞数增多;miRNA-155 antagomir组脑组织水肿明显减轻,海马细胞排列紊乱现象有所改善,坏死细胞数减少。与假手术组相比,HI组和NC antagomir组新生大鼠NOD1、p-NF-κB p65和p-NF-κB p50蛋白表达水平显著升高,而miRNA-155 antagomir组与HI组和NC antagomir组相比显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;HI组和NC antagomir组新生大鼠脑组织及血清NOD1 mRNA表达水平显著高于假手术组,miRNA-155 antagomir组NOD1 mRNA表达水平与HI组和NC antagomir组相比显著降低（P＜0.05）,但各组大鼠NF-κB p65及NF-κB p50的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 MiRNA-155可通过调控NOD1/NF-κB信号通路促进新生大鼠缺氧、缺血性脑损伤,其作用机制可能与miRNA-155激活NOD1信号通路,促进下游NF-κB发生磷酸化,加剧缺氧、缺血新生乳大鼠脑组织炎症。     

甘草酸对LPS 诱导的IEC-6 细胞NF-κB 通路及炎症因子表达的影响

目的:研究甘草酸(GA)对脂多糖(LPS)诱导肠上皮细胞IEC-6发生炎症应激的影响,并进一步探讨其炎症调控的作用机制。方法:以IEC-6细胞株为研究对象,实验分Control组、LPS模型组、LPS+GA组、GA组,Western blot法检测TLR4、CD14、MyD88、IκBα、p-IκBα、NF-κB p65表达变化; RT-qPCR和Western blot检测下游炎症基因的mRNA水平及蛋白表达。结果:与Control组相比,LPS诱导后IEC-6细胞中TLR4、CD14、MyD88的蛋白表达水平上调,IκBα的磷酸化水平显著升高及NF-κB p65的核转位增加(P0. 05),同时上调ICAM-1、COX-2、i NOS和IL-6炎症相关基因表达,并减少IL-10表达(P0. 05),甘草酸干预后可显著逆转上述改变,结果均具有统计学意义(P0. 05)。结论:甘草酸能抑制LPS活化的TLR4/NF-κB信号通路,进而下调LPS诱导的促炎基因表达,减轻肠上皮细胞的炎症性损伤。     

核因子-κB“诱饵性”寡核苷酸抑制LPS诱导的肠上皮细胞TLR4、IL-8的表达

目的： 研究NF-κB decoy寡核苷酸对LPS诱导结肠癌细胞SW480后，对TLR4、IL-8表达的影响。方法：体外培养SW480细胞，用LPS(10 μg/L)刺激3 h后，用脂质体lipofectin 2000介导NF-κB decoy ODNs转染6 h，收集细胞上清液，用ELISA法检测IL-8；提取细胞mRNA，经 RT-PCR法检测TLR4 mRNA、IL-8 mRNA的表达。并设对照组、Scrambled ODNs组、lipofectin 2000组进行比较。结果：LPS刺激后TLR4 mRNA、IL-8 mRNA和IL-8的表达明显强于对照组；用NF-κB decoy寡核苷酸干预，可以明显抑制TLR4 mRNA、IL-8 mRNA和IL-8的表达。而Scrambled ODNs组和转染剂lipofectin 2000组对其没有明显影响。结论：NF-κB decoy ODNs有望成为治疗IBD的一种新型基因药品。