益肾蠲痹丸干预相关通路介导细胞焦亡对膝骨性关节炎大鼠的影响

目的 探讨益肾蠲痹丸干预NLRP3/NF-κB/Caspase-1信号通路对膝骨性关节炎（knee osteoarthritis,KOA）大鼠的保护作用,并分析其对细胞焦亡相关蛋白的影响。方法 随机将90只SPF级SD大鼠分为空白组、模型组、阳性对照组和益肾蠲痹丸低、中、高剂量组,每组15只。空白组不做处理,其他组制备KOA大鼠模型后进行干预治疗。比较6组大鼠干预前后膝关节直径及足趾容积情况;ELISA法检测血清中IL-1β、IL-18及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）含量变化;HE染色观察关节软骨组织病理学改变情况;TUNEL法检测细胞凋亡情况;免疫组化法分析Caspase-1相关蛋白表达;Western blot及qRT-PCR法检测NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平。结果 KOA造模后,与空白组比较,模型组大鼠膝关节直径与足趾容积明显增大,血清中IL-1β、IL-18及VEGF含量明显升高,软骨组织细胞排列紊乱,出现炎性浸润,细胞凋亡程度增高,NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平明显升高（P均＜0.05）;与模型组比较,阳性对照组及益肾蠲痹丸治疗组大鼠膝关节直径与足趾容积明显减轻,血清中IL-1β、IL-18及VEGF含量下降,软骨组织细胞炎性浸润改善,细胞凋亡程度减轻,NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平明显下降（P均＜0.05）,其中益肾蠲痹丸高剂量组显著优于益肾蠲痹丸低剂量组（P＜0.01）。结论 益肾蠲痹丸能够改善KOA大鼠关节软骨组织损伤,降低炎症因子表达和细胞凋亡程度,其机制可能与调控NLRP3/NF-κB/Caspase-1信号通路减轻细胞焦亡有关。     

不同剂量维生素D2对膝关节骨性关节炎大鼠IL-1β 和MMP-13表达的影响

目的 观察使用不同剂量维生素 D2 干预后膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis，KOA） 大鼠关节液中IL-1β 的浓度和关节软骨组织中 MMP-13 的表达情况，探讨其对炎症反应及软骨降解的影响。方法 选择 2 ~ 3 月龄的雌性 SD 大鼠 50 只，采用关节腔内注射木瓜蛋白酶法制备 KOA 大鼠模型，随机将大鼠分成 A 组（模型组）、B 组（维生素 D2 剂量为4 × 105 U/kg）、C 组（维生素 D2 剂量为5 × 105 U/kg）、D 组（维生素 D2 剂量为6 × 105 U/kg）和E 组（维生素 D2 剂量为7 × 105 U/kg），每组 10 只。除 A 组外，其余四组均给予维生素 D2 干预， 1 次/周，连续 4 周。4周后取大鼠膝关节组织制备切片，进行 HE 染色、甲苯胺蓝染色、改良的番红 O-固绿染色和 Mankin’s 评分，检测大鼠关节液中 IL-1β 浓度和软骨组织中 MMP-13 的表达情况。结果 经过不同剂量维生素 D2干预后，各组均可见软骨细胞增多，基质染色加深，软骨层增厚，Mankin’s 评分、关节液中 IL-1β 的浓度和软骨组织中 MMP 13 的表达水平均较模型组降低（P＜0.05）。其中，维生素 D2 剂量为 6 × 105 U/kg 组的软骨层增厚较其他维生素 D2 剂量组明显，Mankin’s 评分、关节液中 IL-1β 浓度及软骨组织中 MMP-13 的表达水平均低于其他维生素 D2 剂量组。结论 维生素 D2 可通过抑制 IL-1β 和 MMP-13 的表达水平，减轻关节内的炎症反应、减少软骨基质降解，促进关节软骨修复。且剂量为6 × 105 U/kg的维生素D2干预效果较好。     

紫云英苷对膝关节骨性关节炎大鼠JNK/p38MAPK信号通路的影响

目的 探究紫云英苷对膝关节骨性关节炎（KOA）大鼠的保护作用以及对JNK/p38MAPK信号通路的影响。方法 90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、塞来昔布组（18 mg/kg）、紫云英苷低（25 mg/kg）、中（50 mg/kg）、高（100 mg/kg）剂量组,每组15只。改良Huith法建立KOA模型,术后灌胃6周。游标卡尺测量大鼠膝关节直径,足趾容积仪测量大鼠足趾容积;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平;HE染色观察膝关节软骨组织病理变化;ELISA法检测软骨组织TGF-β1、MMP-3水平;Western Blot法检测p-JNK、JNK、p-p38MAPK、p38MAPK蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织表面被破坏,组织层变薄,细胞数量减少且排列紊乱,潮线被大量破坏;膝关节直径与足趾容积明显变大（P＜0.05）;血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及软骨组织中TGF-β1、MMP-3水平,p-JNK/JNK、p-38MAPK/p38MAPK比值显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,塞来昔布组与紫云英苷各剂量组软骨组织病变明显减轻;膝关节直径与足趾容积明显缩小（P＜0.05）;血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及软骨组织中TGF-β1、MMP-3水平,p-JNK/JNK、p-38MAPK/p38MAPK比值显著降低（P＜0.05）,且紫云英苷各剂量组间具有剂量效应（P＜0.05）;紫云英苷高剂量组与塞来昔布组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 紫云英苷可能通过抑制JNK/p38MAPK信号通路激活,减轻炎症反应,改善KOA大鼠膝关节软骨组织损伤。     

腺苷酸活化蛋白激酶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及可能机制

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及可能机制。方法将48只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组,每组12只。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,AMPK抑制剂组大鼠建模前腹腔注射Compound C 20 mg/kg,生理盐水组建模前给予等量生理盐水。于建模后6、12、24和48 h用Basso、Beattie、Bresnahan(BBB)评分法评估大鼠神经运动功能,末次评估完成后处死大鼠并取脊髓组织标本,用HE染色法检测大鼠脊髓组织病理变化,TUNEL法检测大鼠脊髓组织细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测大鼠脊髓组织中AMPK、p-AMPK、NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白表达,ELISA法检测大鼠脊髓组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果建模后6、12、24和48 h,模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组BBB评分均低于假手术组,而AMPK抑制剂组BBB评分高于模型组和生理盐水组,差异均有统计学意义(P 0.05)。假手术组脊髓组织结构清晰完整,未见神经元凋亡;模型组和生理盐水组大鼠脊髓组织出现神经元变性和坏死、炎性细胞浸润,可见大量神经元凋亡;AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织病理改变减轻,神经元凋亡减少。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中p-AMPK、NF-κB和p-IκBα蛋白相对表达量均高于假手术组,AMPK和IκBα蛋白相对表达量均低于假手术组,差异均有统计学意义(P 0.05);AMPK抑制剂组p-AMPK、NF-κB和p-IκBα蛋白相对表达量与模型组和生理盐水组相比均降低,差异均有统计学意义(P 0.05),AMPK和IκBα蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6和TNF-α浓度均高于假手术组,AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6和TNF-α浓度与模型组和生理盐水组相比均降低,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论 AMPK可能参与大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与NF-κB通路介导的炎性反应有关;抑制AMPK活性可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤、保护神经元。     

蛋白酶体抑制剂对骨关节炎大鼠NF-κB信号通路的影响

目的 观察蛋白酶体抑制剂MG-132对骨关节炎软骨及滑膜组织NF-κB信号通路的影响.方法 SD大鼠144只,离断前十字韧带及内侧半月板建立膝关节骨关节炎模型,随机分为四组:MG-132组,造模术后24h于膝关节腔内注射100 μl质量浓度为0.007 g/L的MG-132溶液;DMSO(二甲基亚砜,Dimethyl sulfoxide)组,造模术后24h于膝关节腔内注射100μl体积分数为0.1％的DMSO溶液;假手术组,仅行关节囊切开;正常对照组,仅于膝关节腔内注射100μl质量浓度为0.007 g/L的MG-132溶液.术后2、4和12周处死动物,于膝关节软骨组织及滑膜组织取材,行病理形态学观察,根据Mankin评分标准进行半定量评估;应用RT-PCR法检测NF-κB p65、I-κB、TNF-α、IL-1β等基因mRNA的表达水平;荧光分光光度法检测20S蛋白酶体活性,并行相关性分析.结果 MG-132组各时相的Mankin评分均比DMSO组低,假手术组与正常对照组相近且较前两组低,差异有统计学意义.MG-132组各时相的软骨及滑膜组织中NF-κB p65、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平均低于DMSO组,除2周滑膜组织NF-κB p65和12周软骨组织IL-1β mRNA外差异均有统计学意义.MG-132组术后2周软骨组织及4周滑膜组织I-κB mRNA表达水平高于DMSO组,差异有统计学意义.结论 MG-132具有减轻滑膜炎症、保护关节软骨的作用,从而延缓骨关节炎进程.     

由IL-10/JAK2/STAT3通路探讨养血柔筋方对兔膝骨关节炎软骨损伤的研究

目的 由白细胞介素(IL)-10/Janus激酶(JAK2)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)通路探讨养血柔筋方对兔膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)软骨损伤的影响及机制。方法 将新西兰雄兔分为空白组、KOA模型组、养血柔筋方组(50 mg/kg)、塞来昔布组(24 mg/kg)、JAK2激活剂组(50 mg/kg养血柔筋方+0.11 mg/kg AG490),每组6只。通过木瓜蛋白酶诱导KOA兔模型，造模成功后给予相应治疗。运用HE染色观察软骨组织病理变化，Mankin评分进行定量评分；透射电镜观察软骨组织的超微结构；ELISA测量血清IL-1β、IL-6含量；免疫组织化学检测软骨组织基质金属蛋白酶13(MMP13)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)、Ⅱ型胶原蛋白(COl-Ⅱ)蛋白表达；Western Blot检测软骨组织IL-10/JAK2/STAT3通路蛋白表达。结果 与空白组比较，KOA模型组中软骨组织病变严重，Mankin评分、IL-1β和IL-6含量、MMP13、p-JAK2和p-STAT3蛋白...     

尼莫地平治疗早期膝关节骨性关节炎的实验研究

目的建立早期大鼠膝关节骨性关节炎(KOA)模型,观察尼莫地平对早期KOA的治疗效果。方法将造模成功后的21只早期KOA大鼠随机分为2组,对照组6只,观察组15只。对照组用生理盐水2 ml/kg灌胃,观察组用尼莫地平悬混液4 mg/kg灌胃。于KOA模型大鼠灌胃治疗前及治疗3周后检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、前列腺素E2(PGE2)的含量。治疗结束后采用改良Mankin’s评分标准评价膝关节软骨情况。结果治疗3周后观察组大鼠血清中IL-1β、TNF-α及PGE2含量均低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。观察组病理切片改良Mankin’s评分低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论钙离子通道阻滞剂尼莫地平可下调KOA大鼠血清中IL-1β、TNF-α及PGE2的浓度,阻断伤害性刺激的传导,对骨性关节炎的病程进展能起到延缓作用。     

右归丸通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对膝骨关节炎模型鼠软骨组织保护作用的研究

目的研究右归丸对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)信号通路的影响。方法采用改良Hulth法制备大鼠KOA模型,模型制备成功6周后用右归丸进行干预,灌胃2个月后取材。HE法观察各组大鼠软骨组织病理形态改变并进行Mankin评分,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠软骨组织白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)和基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)的表达变化,Western blot法检测各组大鼠软骨组织磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidyl inositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化的蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,pAkt)、磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,pmTOR)和Beclin1的蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠软骨组织Makin评分明显升高,软骨组织IL-1β、MMP-3和MMP-13的基因表达均明显升高,软骨组织PI3K、pAkt和pmTOR的蛋白表达均明显升高(P0. 01);而模型组大鼠软骨组织Beclin1的蛋白表达明显降低(P0. 01);模型组关节软骨边缘严重破坏,软骨细胞排列紊乱。与模型组相比,右归丸组大鼠软骨组织Makin评分明显降低,软骨组织IL-1β、MMP-3和MMP-13的基因表达均明显降低,软骨组织PI3K、pAkt和pmTOR的蛋白表达均明显降低,Beclin1的蛋白表达明显升高(P0. 05或P0. 01),其软骨结构趋于正常,软骨细胞分布偶见不均,关节软骨表面欠光滑。结论右归丸可能是通过抑制IL-1β、MMP-3、MMP-13、PI3K、p Akt、pmTOR的表达和增强Beclin1的表达来达到治疗KOA的目的。     

藏红花素调节Hippo-YAP信号通路抑制膝骨关节炎大鼠软骨细胞凋亡

目的 探讨藏红花素（crocin）调节Hippo/Yes相关蛋白（YAP）信号通路对膝骨关节炎（KOA）大鼠软骨细胞凋亡的影响。方法 SD大鼠分为CK组、Model组、低剂量crocin组（crocin-L组，10 mg/kg）、高剂量crocin组（crocin-H组，40 mg/kg）、塞来昔布组（CLCX组，10 mg/kg）、crocin-H+VTPF（YAP抑制剂）组（40 mg/kg+10 mg/kg)，每组12只。观察并记录大鼠热痛阈值、压痛阈值的变化；ELISA法检测大鼠血清中基质金属蛋白酶 (MMP）-3、MMP-13、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平；HE染色检测大鼠软骨组织病理变化并进行Mankin评分；TUNEL染色检测大鼠软骨细胞凋亡；免疫组化、Western blot检测Bcl2相关X蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、p-YAP、YAP蛋白表达。结果 与CK组比较，Model组大鼠热痛阈值、压痛阈值、p-YAP蛋白表达降低，软骨组织病理损伤严重，MMP-3、MMP-13、IL-1β、IL-6水平、Mankin评分、软骨细胞凋亡率、Bax、Caspase-3、YAP蛋白表达升高（P＜0.05）；与Model组比较，crocin-L组、crocin-H组、CLCX组对应指标变化趋势与上述相反（P< 0.05）；VTPF减弱了高剂量crocin对KOA大鼠软骨细胞凋亡的抑制作用。结论 crocin可能通过激活Hippo/YAP信号通路抑制KOA大鼠软骨细胞凋亡。     

β－catenin与NF－κB信号通路在膝骨关节炎滑膜炎症中的表达特点及意义

目的:探讨β-catenin与NF-κB信号通路在不同程度膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型大鼠滑膜组织中的表达情况。方法:选取SPF级雄性大鼠48只,体重(200±20) g,采用随机数字表法将大鼠分为造模组(32只)、假手术组(8只)和对照组(8只)。造模组采用Hulth法建立KOA模型大鼠,并分别于造模后第2、4、8、12周取材处死8只,模拟轻度、早期、中度、重度KOA模型大鼠;假手术组仅切开膝关节囊后缝合排除手术因素干扰;对照组不做任何处理。观察各组大鼠动物行为、滑膜增生与软骨退变情况,采用实时荧光PCR检测各组大鼠滑膜组织中NF-κB信号通路及β-catenin的表达。结果:成功建立KOA大鼠模型,取材过程中可见滑膜增生在轻度、早期KOA模型中表现明显,之后逐渐减少;而软骨退变在中度、重度KOA模型中表达明显,并随时间延长逐渐加重。PCR结果显示造模后4周组8.57±0.46、8周组4.23±0.09β-catenin水平高于对照组1.18±0.22 (P0.05);2周组12.04±4.02、4周组8.54±2.13 TLR-2水平高于对照组0.88±0.15 (P0.05);TLR-4则在2周组5.04±0.93、4周组3.29±0.58及8周组1.63±0.12中表达显著高于对照组1.12±0.11(P0.05),NF-κB在2周组10.15±2.04、4周组15.97±4.17、8周组7.69±1.48及12周组6.70±1.58中表达显著高于对照组1.26±0.27(P0.05);IL-1β在4周组2.79±0.25、8周组2.46±0.32中表达显著高于对照组1.00±0.00(P0.05)。结论:在RNA表达层面,β-catenin与NF-κB信号通路均参与了大鼠KOA模型的滑膜炎症反应,两者在其下游炎性因子IL-1β的表达及KOA退变中可能共同发挥调控作用。     

抗氧化剂对实验性重症急性胰腺炎大鼠核因子-κB和环氧合酶-2的影响

目的 探讨抗氧化剂NAC在SAP大鼠模型上对核因子-κB和环氧合酶-2的影响及可能机制.方法 雄性SD大鼠36只随机分成假手术组(A组),SAP组(B组),SAPNAC干预组(C组);每组各12只.胆胰管逆行穿刺注射5%牛磺胆酸(1.0 mL/kg)建立SAP模型.C组造模前1 h腹腔注射NAC 0.05 mg/kg.术后6 h检测各组血清淀粉酶活性,IL-1β浓度,胰腺组织COX-2和NF-κB的表达.光镜观察胰腺病理变化,对损伤程度进行评分.结果 B组和C组淀粉酶活性和IL-1β浓度显著高于A组(P＜0.01),B组和C组IL-1β浓度无差异(P＞O.05).COX-2与NF-κB在A组胰腺组织无表达,在B,C组均有阳性表达,B组阳性细胞比例较C组高(P＜O.05).病理评分提示B,C组水肿、炎症、坏死以及出血均有显著升高,C组水肿和坏死评分较B组降低(P＜O.05).结论 SAP时.胰腺组织可以出现COX-2与NF-κB的高表达,抗氧化剂NAC能够抑制NF-κB和COX-2在胰腺组织的表达,减轻胰腺炎的严重程度.     

小檗碱激活AMPK/NF-κB/TNF-α信号通路对肾病综合征大鼠肾损伤的影响

目的:从5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/核转录因子-κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路，探究小檗碱改善肾病综合征(NS)大鼠肾损伤的可能机制。方法:尾静脉注射阿霉素建立NS大鼠模型，随机分为模型组、小檗碱治疗组、激素治疗组、AMPK抑制剂组、小檗碱+AMPK抑制剂组，每组15只，另取15只对照组大鼠。各组连续给药治疗5周后，收集尿液检测24 h尿蛋白；取动脉血检测血浆白蛋白、血脂水平；PAS染色观察肾组织形态变化；Western blot法检测肾组织AMPK、p-AMPK、NF-κB、p-NF-κB、TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)、脂肪酸移位酶(FAT/CD36)、P糖蛋白(P-gp)表达水平。结果:与对照组相比，模型组大鼠肾小球血管袢与球囊壁黏连、肾小管管腔狭窄、肾小管上皮细胞水肿、坏死及空泡化等病理损伤严重，24 h尿蛋白、血脂水平升高，血浆白蛋白含量、AMPK活性、与AMPK有关的炎性反应蛋白及促脂质吸收相关蛋白表达降低(P<0.05)。小檗碱治疗或激素治疗，均可改善NS大鼠肾脏损伤，降低24 h尿蛋白、血脂水平，升高血浆中白蛋白含...     

核因子-κBp65特异性小干涉核糖核酸重组腺病毒的抑制作用

目的 在大鼠关节内观察核因子-κB(NF-κB)p65特异性小干涉核糖核酸(siRNA)重组腺病毒对靶基因的抑制作用.方法 在SD大鼠膝关节内,筛选合适的病毒剂量.利用β-gal染色鉴定重组腺病毒感染组织的特异性,应用凝胶电泳迁移率分析(EMSA)测定重组腺病毒对NF-κB转录活性的影响,应用Western blot测定重组腺病毒对软骨和滑膜细胞内NF-κB65的抑制作用.结果 重组腺病毒在大鼠膝关节内的最佳剂量为1.6×108 pfu/ml,可以感染关节内软骨和滑膜组织,并在软骨和滑膜细胞内减低NF-κB转录活性,抑制目的 基因的表达.结论 特异性NF-κBp65siRNA的重组腺病毒载体可以在关节软骨和滑膜细胞内抑制目的 基因的表达.     

骨髓间充质干细胞对膝关节炎大鼠软骨损伤及KDM6A/SOX9信号通路的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞对膝关节骨性关节炎大鼠的影响,并探讨其机制。方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组(Control)、膝关节骨性关节炎组(KOA)、骨髓间充质干细胞组(BMSCs),每组10只,剩余10只用于骨髓间充质干细胞的分离。处理4周后进行大鼠关节指数(AI)评分;HE染色观察软骨组织病理学变化;免疫组化检测软骨组织Col II、IL-6、MMP-3、MMP-13表达;ELISA法检测血清IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量;qRT-PCR检测软骨组织Col II、Col I、TNF-α、IL-6、MMP-13、KDM6A、SOX9、Aggrecan mRNA表达;Western blot检测软骨组织KDM6A、SOX9、Aggrecan蛋白表达。结果 与Control组比较,KOA组大鼠AI评分、血清IL-6、TNF-α、MMP-3、MMP-13含量、软骨组织IL-6、MMP-3、MMP-13表达明显升高(P<0.05);Col II、KDM6A、Aggrecan、SOX9 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。与KOA组比较,BMS...     

丹皮酚通过CXCL16/ROCK通路发挥对肾小球肾炎大鼠的保护作用

目的:观察丹皮酚(PAE)对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠肾损伤的影响,并探究其对CXC配体16(CXCL16)/Rho相关蛋白激酶(ROCK)通路的作用。方法:将SD大鼠分为假手术(Sham组)、MsPGN组、PAE组、醋酸泼尼松(PAT)组、PAE+CXCL16组,10只/组,除Sham组均采用改良血清免疫法制备MsPGN模型。造模后1周,相应大鼠腹腔注射100 mg/kg PAE溶液、5 mg/kg PAT溶液、100 mg/kg PAE溶液+40 mg/kg CXCL16溶液,Sham组及MsPGN组给予生理盐水,连续给药28 d。采用考马斯亮蓝法检测24 h尿液总蛋白量,苏木素伊红(HE)、过碘酸-雪夫(PSA)染色观察肾组织形态,TUNEL法检测肾小球细胞凋亡,ELISA试剂盒检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平和肾组织匀浆中IL-18、IL-1β、TNF-α水平,Western blot检测肾组织CXCL16、RhoA、ROCK1、ROCK2及NF-κB蛋白表达。结果:Sham组大鼠状态正常,肾小球未见明显系膜增生,形态正常;MsPGN组大鼠活动、精神等状...     

不同剂量瘦素对大鼠机械通气肺损伤的影响

目的评价不同剂量瘦素对大鼠机械通气肺损伤的影响。方法健康清洁级SD雄性大鼠48只,6～8周龄,采用随机数字表法分为四组:气管切开保留自主呼吸的假手术组(A组)、机械通气模型组(B组)、瘦素10μg/kg组(C组)和瘦素50μg/kg组(D组),每组12只。采用10%水合氯醛3.5 ml/kg麻醉大鼠,疼痛反射消失后C组腹腔注射瘦素10μg/kg,D组腹腔注射瘦素50μg/kg,A、B组腹腔注射等容量生理盐水,注射后即刻进行气管切开,插管机械通气。A组气管插管后保留自主呼吸,B、C、D组机械通气建立VILI模型,参数设置:V_T 20 ml/kg,RR 80次/分,I∶E 1∶1,FiO_2 21%,PEEP 0 mmHg,通气时间4 h。分别于基础状态、通气结束时抽取股动脉血进行血气分析。通气结束后放血处死大鼠,在4℃下取肺组织并收集支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),光镜下进行中性粒细胞计数,采用ELISA法测定TNF-α、IL-6、IL-1β浓度;取肺组织称重,计算肺湿干重比(W/D);观察肺组织病理改变并进行病理评分;采用Western blot检测肺组织研磨液中NF-κB p65含量。结果与A组比较,B、C、D组W/D、肺损伤评分、BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织NF-κB p65含量明显升高(P0.01)。与B组比较,C、D组BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织肺损伤评分、NF-κB p65含量明显降低(P0.05)。与C组比较,D组BALF中性粒细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β浓度及肺组织肺损伤评分、NF-κB p65含量明显降低(P0.05)。结论瘦素可降低大鼠机械通气肺损伤中炎性因子的表达水平,减轻肺损伤,50μg/kg较10μg/kg作用明显。     

戊乙奎醚预先给药对大鼠急性肺损伤时NF-κB的影响

目的 探讨戊乙奎醚预先给药对大鼠急性肺损伤(ALI)时NF-κB的影响.方法 雄性SD大鼠35只,体重210～280 g,随机分为5组(n=7):对照组(C组)、ALI组和低、中、高剂量戊乙奎醚组(P1-3组).采用经尾静脉注射内毒素5 mg/kg的方法建立大鼠ALI模型.C组和ALI组经腹腔注射生理盐水0.5 ml,P1～3组分别经腹腔注射戊乙奎醚0.03、0.1和3 mg/kg,30 min后ALI组、P1～3组制备AU模型,C组不制备模型.于静脉注射LPS后4 h时,行血气分析,计算氧合指数;称量肺组织湿重(W)、干重(D),计算W/D;采用比色法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;采用RT-PCR法测定肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA、白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达水平;采用ELISA法测定肺组织TNF-α和IL-1β的含量;采用非放射性EMSA法测定肺组织NF-κB活性;采用免疫组织化学法测定肺组织NF-κB的表达水平.结果 与C组比较,其余各组氧合指数降低,肺组织W/D和MPO活性、TNF-α,IL-1β含量及其相应mRNA表达水平、NF-κB活性和表达水平均升高(P<0.05或0.01);与ALI组比较,P1～3组氧合指数升高,肺组织W/D和MPO活性降低,TNF-α、IL-1β含量及其相应mRNA表达水平降低,NF-κB活性和表达水平降低(P<0.05);P1～3组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 戊乙奎醚预先给药减轻大鼠急性肺损伤的机制可能与抑制NF-κB的活化,下调NF-κB的表达,降低肺组织炎性反应有关.     

银杏内酯对急性肾损伤大鼠的保护作用及机制研究

目的探讨银杏内酯对急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)大鼠的保护作用及对肾组织中腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)及沉默信息调节因子(silent information regulator 1,SIRT1)通路的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组(Control组)、AKI组和银杏内酯低(2.5 mg/kg)、中(5 mg/kg)、高(7.5 mg/kg)剂量组,每组10只。除Control组经皮下注射生理盐水外,其余各组大鼠均经皮下注射庆大霉素80 mg/kg,6 d,1次/d,建立AKI模型后,Control组、AKI组经腹腔给予生理盐水,银杏内酯各剂量组经腹腔给予相应剂量药物,1次/d,共给药14 d。末次给药1 h后,收集各组大鼠血液、尿液后处死大鼠,取肾组织标本,用酶联免疫吸附法检测肾功能指标血清肌酐(Scr)、血清尿素氮(BUN)、血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及尿液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和肾损伤因子1(KIM-1)含量;用苏木精-伊红染色(HE)检测各组大鼠肾组织病理变化;以试剂盒检测肾组织氧化应激反应物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;凝胶电泳迁移率转变分析法检测肾脏组织NF-κB活性;蛋白免疫印迹法检测肾组织pAMPK/AMPK、SIRT1蛋白表达情况。结果与Control组相比,AKI组大鼠可见肾小管上皮细胞崩解脱落、空泡变性等病理损伤,Scr、BUN、NGAL、KIM-1含量、肾组织TNF-α、IL-6、MDA含量及NF-κB活性均明显升高(P0.05),肾组织SOD活性、pAMPK/AMPK、SIRT1蛋白表达量明显下降(P0.05)。与AKI组相比,银杏内酯高、中、低剂量组肾小管病理损伤减轻,Scr、BUN、NGAL、KIM-1、TNF-α、IL-6、MDA含量及NF-κB活性均明显降低(P0.05),SOD活性、pAMPK/AMPK、SIRT1蛋白表达量明显升高(P0.05)。与银杏内酯低剂量组比较,中、高剂量组肾小管病理损伤减轻,Scr、BUN、NGAL、KIM-1、TNF-α、IL-6、MDA含量及NF-κB活性均明显降低(P0.05),SOD活性、pAMPK/AMPK、SIRT1蛋白表达量明显升高(P0.05)。结论银杏内酯可能通过激活AMPK/SIRT1通路,减轻肾脏氧化应激和炎性损伤,改善AKI大鼠病理损伤。     

槲皮素对Ⅲ型慢性前列腺炎/骨盆疼痛综合征模型大鼠作用及其机制研究

目的:探究槲皮素对Ⅲ型慢性前列腺炎/骨盆疼痛综合征模型大鼠作用及机制。方法:将大鼠随机分为对照组、模型组、槲皮素低剂量组(100mg/kg)和槲皮素高剂量组(200mg/kg),复制Ⅲ型慢性前列腺炎/骨盆疼痛综合征模型。病理检查前列腺,测定机械性痛阈,Western blotting检测前列腺中p38和环氧合酶-2(COX-2)水平,ELISA检测血清中核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:槲皮素低剂量组较模型组前列腺组织病理有所改善但不显著,槲皮素高剂量组较模型组前列腺组织病理有显著改善。槲皮素低剂量组的机械痛阈值高于模型组,但两组比较差异无统计学意义(P0.05),槲皮素高剂量组的机械痛阈值显著性高于模型组(P0.05);槲皮素低剂量组血清中NF-κB和TNF-α水平、前列腺组织中p38和COX-2水平低于模型组,但两组比较差异无统计学意义(P0.05),槲皮素高剂量组的血清中NF-κB和TNF-α、前列腺组织中p38和COX-2水平显著低于模型组(P0.05)。结论:槲皮素对Ⅲ型慢性前列腺炎/骨盆疼痛综合征模型大鼠的前列腺病理和痛觉敏感性均有改善作用,其作用机制可能为降低多种炎性因子的表达,抑制炎症反应和痛觉敏感性。     

转化生长因子β1对脂多糖刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响

目的 观察转化生长因子β1（TGF-β1）对脂多糖(LPS)刺激大鼠腹膜间皮细胞上调表达促炎症因子的影响，并探讨其可能的机制。 方法 把原代培养的第2代大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs）分成对照组、LPS刺激组（1 mg/L）、TGF-β1刺激组（5 μg/L）及LPS+TGF-β1刺激组。RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6） mRNA及蛋白的表达。蛋白印迹方法检测磷酸化核因子（p-NF）-κB/NF-κB值的变化。 结果 (1)LPS可刺激RPMCs上调TNF-α和IL-6表达。LPS刺激24 h后，p-NF-κB/NF-κB值升高。(2)TGF-β1可拮抗LPS刺激大鼠腹膜间皮细胞上调TNF-α和IL-6表达，同时，也降低p-NF-κB/NF-κB值。 结论 在体外培养的大鼠腹膜间皮细胞，TGF-β1可拮抗LPS的致炎作用，其作用机制可能是通过抑制NF-κB的活化而介导。