C1-通道在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 探讨C1-通道在溶血磷脂酸(LPA)引起的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 采用细胞计数和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验,并结合激光共聚焦显微镜上测定细胞内Ca2 浓度等技术,研究不同C1-通道阻断剂对LPA促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响.结果 C1-通道阻断剂DIDS(二异硫氰酸二丙乙烯二磺酸,0.01～O.1mmol/L)可浓度依赖式的抑制溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖,其他C1-通道阻断剂如5-硝基苯丙氨基苯甲(NPPB)、4乙酰氨基4异硫氰酸2,2二磺酸(SITs)、二苯丙氨基2,2二羧酸(DPC)(浓度均为10-7～10-3mol/L)和速尿(浓度均为10-5～10-3mol/L)等均无此作用,且DIDS对电压依赖性钙通道没有直接的影响.结论 溶血磷脂酸可以开放DIDS敏感的C1-通道,且该通道可能在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖的调控上起一定的作用.     

氯离子通道阻断剂对豚鼠离体气管条收缩的影响

目的 研究氯离子通道阻断剂对豚鼠离体气管条收缩反应的影响及其作用机制。方法 制备离体孵育的豚鼠气管条，分别在浴液中加入药物，测定KCl和5－羟色胺（5－HT）收缩气管条的作用以及氯离子通道阻断剂和维拉帕米（Ver)对KCl和5－HT作用的影响。结果 两种氯离子通道阻断剂氮氟灭酸（NFA）和5－硝基－2－3苯酚丙胺苯甲酸盐（NPPB）均能使KCl或5－HT引起的气管条收缩显著抑制，解痉百分率分别为100％和30％，Ver的抑制效应位于NFA与NPPB之间，NFA，NPPB和Ver对细胞内Ca^2 释放和细胞外Ca^2 内流引起的收缩均有抑制作用。结论 氯离子通道阻断剂NPPB和NFA可抑制KCl和5－HT引起的气管条收缩，其机制可能是氯离子通道阻断剂影响细胞钙运动。     

ClC-3氯通道调节氧糖剥夺所诱导的小胶质细胞的表型转化

目的:研究ClC-3氯通道在氧糖剥夺所致小胶质细胞表型转化中的作用?方法:应用小胶质细胞株(BV-2)制备氧糖剥夺模型,分别给予氯通道阻断剂DIDS和NPPB预处理BV-2细胞?通过MTT活性测定确定BV-2细胞损伤及药物的有效浓度;通过实时荧光定量PCR法测定细胞表型相关分子,如M1型相关分子[肿瘤坏死因子-?琢(tumor necrosis factor-?琢,TNF-?琢)?白介素-1β(interleukin 1?茁,IL-1?茁)?CD86]和M2型相关分子[转化生长因子?茁(transforming growth factor β,TGF-β)?CD206]mRNA水平的表达;通过RNA干扰的方法下调ClC-3的表达,再给予氯通道阻断剂DIDS和NPPB干预,进一步检测细胞的MTT活性,观察药物作用效果?结果:预先给予DIDS(1和10 μmol/L)和NPPB(1 μmol/L)能够改善氧糖剥夺所诱导的BV-2细胞MTT活性下降,抑制M1型相关分子如TNF-?琢?IL-1?茁和CD86的表达并促进M2型相关分子(TGF-?茁和CD206)的表达;通过RNA干扰下调ClC-3的表达,能够消除DIDS和NPPB的作用?结论:ClC-3氯通道参与调控氧糖剥夺所致小胶质细胞的表型转化,阻断ClC-3氯通道抑制氧糖剥夺诱导小胶质细胞向M1型转化?     

Cl^-通道在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的探讨Cl-通道在溶血磷脂酸(LPA)引起的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用。方法采用细胞计数和氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验,并结合激光共聚焦显微镜上测定细胞内Ca2 浓度等技术,研究不同Cl-通道阻断剂对LPA促大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。结果Cl-通道阻断剂DIDS(二异硫氰酸二丙乙烯二磺酸,0.01~0.1mmol/L)可浓度依赖式的抑制溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖,其他Cl-通道阻断剂如5-硝基苯丙氨基苯甲酸(NPPB)、4乙酰氨基4异硫氰酸2,2二磺酸(SITS)、二苯丙氨基2,2二羧酸(DPC)(浓度均为10-7~10-3mol/L)和速尿(浓度均为10-5~10-3mol/L)等均无此作用,且DIDS对电压依赖性钙通道没有直接的影响。结论溶血磷脂酸可以开放DIDS敏感的Cl-通道,且该通道可能在溶血磷脂酸引起的血管平滑肌细胞增殖的调控上起一定的作用。     

氯通道在藤黄酸诱导低分化鼻咽癌细胞凋亡中的作用

目的探讨氯离子通道在藤黄酸诱导低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡过程中的作用。方法采用MTT比色法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色法分析细胞凋亡,全细胞膜片钳技术记录氯电流。结果藤黄酸明显抑制CNE-2Z细胞增殖,其抑制作用呈时间和浓度依赖性,IC50为3.1μmol/L;8μmol/L藤黄酸诱导细胞凋亡作用可被氯离子通道阻断剂NPPB和Tamoxifen抑制。藤黄酸诱发CNE-2Z细胞产生一个有明显外向优势的氯电流,可被NPPB明显抑制。结论藤黄酸可能通过激活氯离子通道而诱导CNE-2Z细胞凋亡和抑制细胞增殖,提示氯通道参与藤黄酸诱导的细胞凋亡。     

氯通道阻断剂DIDS对过氧化氢诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨氯通道阻断剂DIDS抗PC12细胞凋亡的作用机制。方法:取处于对数生长期的PC12细胞,随机分为对照组、模型组(用400 nmol/L H2O2诱导细胞凋亡)和DIDS组(H2O2+DIDS),培养12 h后,用MTT法测定各组细胞的存活率,Western blot法观察凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:400 nmol/L H2O2可以明显诱导PC12细胞损伤,细胞存活率为(35.07±1.23)%;DIDS组细胞存活率明显高于模型组,且具有一定浓度依赖性(F=640.420,P<0.001)。与对照组比较,模型组细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,DIDS组Caspase-3表达降低,Bcl-2蛋白表达增加,细胞凋亡率降低(P<0.05)。结论:DIDS可能通过抑制Caspase-3依赖性凋亡信号通路发挥抗凋亡作用。     

肺腺癌细胞调节性容积减小过程及其离子通道机制

目的 观察人肺腺癌细胞调节性细胞容积减小(RVD)的过程,探讨其离子通道机制.方法 用细胞体积测量系统分析人肺腺癌细胞(A549)在细胞外低渗刺激下细胞容积改变;用通道阻断剂和全细胞膜片钳方法 阐明容积敏感性氯通道在RVD中的作用.结果 细胞外低渗刺激使人肺腺癌细胞系A549细胞膨胀并诱发RVD,该RVD过程可被氯通道阻断剂NPPB(100 μmol/L)和钾通道阻断剂CsCl(5 mmoL/L)所阻抑;全细胞膜片钳方法 记录A549细胞容积敏感性氯通道电流呈外向整流特性,电流可被NPPB、DIDS(100 μmol/L)阻抑.结论 人肺腺癌A549细胞具有RVD功能,RVD过程的完成有赖于氯通道和钾通道的平行激活,容积敏感性氯通道参与该RVD过程.     

钾通道阻断剂对低氧/复氧诱导的培养海马神经元死亡的防护作用

目的研究钾通道阻断剂对单纯低氧/复氧诱导的培养海马神经元死亡的防护作用。方法培养8 d的海马神经元置于低氧环境(95% N2/5% CO2)6 h,复氧再培养直至72 h,复氧后0.5 h培养液内分别给予不同钾通道阻断剂,用细胞计数及MTT比色法检测神经元死亡情况。结果低氧/复氧诱导培养海马神经元出现迟发性死亡;四乙铵以剂量依赖性的方式防护低氧/复氧诱导的培养海马神经元免于死亡;大电导钙激活钾通道(BK通道)阻断剂iberiotoxin(IbTX)可完全消除低氧/复氧诱导的神经元死亡(P<0.001);A型钾通道阻断剂4-氨基吡啶不能防护低氧/复氧诱导的神经元免于死亡(P>0.05)。结论钾通道阻断剂四乙铵和IbTX能防护低氧/复氧诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道尤其是BK通道活动增强可能参与了低氧/复氧诱导的培养海马神经元死亡。     

氯通道阻断剂对NMDA诱导培养海马神经元凋亡的保护作用

NMDA受体的激活在缺血性脑损伤神经元死亡中起重要作用。本研究利用NMDA诱导大鼠培养海马神经元凋亡．模拟建立缺血性脑损伤的细胞模型,观察了3种氯通道阻断剂对神经元凋亡的保护作用。离体培养12d的SD大鼠海马神经元．在NMDA处理前和处理后使用氯通道阻断剂,对神经元的存活率影响不同,仅NMDA处理前给药才有保护作用。SITS对NMDA诱导神经元凋亡的保护作用最强并有浓度依赖性．D1DS次之,NPPB没有明显的保护作用。结果表明．SITS和D1DS可阻断NMDA的毒性效应．作用机制可能与NMDA的效应和氯通道活动均被阻断有关。     

NPPB 对肝癌细胞增殖的影响

目的观察氯通道阻断剂 5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)对人肝癌 HHCC 细胞增殖的影响.方法将 NPPB 作用于 HHCC 细胞,应用细胞计数法及 MTT 比色分析法观察细胞增殖情况;同时应用流式细胞仪检测其细胞周期时相的变化.结果 NPPB 使 HHCC 细胞数及 MTT 光吸收值(OD)较对照组均显著降低,去除 NPPB 后,OD 值便可逐渐恢复;经 100 μmol/L 的 NPPB 处理 48 h 时,HHCC 细胞 G1 期细胞比例比对照组明显增高,S 期及 G2 期细胞比例则明显低于对照组.结论 NPPB 能可逆抑制肝癌细胞增殖,并具有浓度依赖性;NPPB 使细胞增殖停滞在 G1 期.     

植物性钙拮抗剂颅通定的抗心律失常临床疗效及其电生理作用

报告钙拮抗剂颅通定对45例次快速型室上性心律失常的疗效及其电生理作用。对快速型室上性心律失常有效率 81.8％(9/11)。电生理研究显示该药主要作用是延长房室传导系统有效不应期(从 284±65 ms延长至 328±58 ms)和心房有效不应期(从 211±36 ms延长至 238±34 ms,P<0.01),且减慢房室传导。该药无严重副作用。以临床疗效结合电生理作用研究结果对颅通定抗心律失常机理进行了探讨。     

N-型钙通道及其阻断剂研究进展

N-型电压依赖性钙通道主要分布于疼痛传递与调控通路的神经元突触末梢，参与疼痛介质(如谷氨酸和P物质)的释放和调节，在疼痛传递和调控过程中具有重要作用。因此，阻断N 型钙通道可以产生镇痛作用，特别是慢性疼痛和神经病理性疼痛。FDA已批准肽类阻断剂齐考诺肽鞘内给药，治疗全身性疼痛以及吗啡耐受或无效患者的严重慢性疼痛，证实N型钙通道是一个非常有意义的镇痛药物研究新靶标。近年来，口服有活性的小分子化合物研究越来越受到人们的重视，各种文献和专利报道的新结构类型层出不穷。本文就相关研究进行了综述。     

钾通道拮抗剂IBTX对大鼠低氧海马脑片的保护作用

目的探讨钾通道拮抗剂IBTX对低氧损伤的海马脑片的保护作用及其机制。方法建立海马脑片低氧模型,将脑片分为空白对照组、低氧对照组、IBTX处理组。采用苏木精-伊红染色分别观察不同条件下培养的海马脑片CA1区的病理改变,计算海马区神经元的密度。应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记(TUNEL)法及免疫组化Caspase-3染色法检测海马脑片CA1区神经元凋亡数目。结果空白对照组、低氧对照组、IBTX处理组海马脑片CA1区神经元密度分别为(114.67±5.72)(、51.22±4.71)、(72.25±2.55)个/mm,三者差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。高倍镜下低氧对照组海马脑片CA1区神经元凋亡细胞数显著高于IBTX处理组,两者差异具有显著性意义(P<0.05)。结论钾通道拮抗剂IBTX可以减轻低氧海马脑片的损伤,其作用机制可能与减少细胞凋亡有关。     

钙通道阻滞剂对大鼠离体不稳定逼尿肌收缩性和自律性的影响

目的探讨L型、T型钙通道阻滞剂对膀胱出口梗阻(bladder outlet obstruction, BOO)引起的不稳定逼尿肌的收缩性、自律性的影响. 方法建立SD雌性大鼠BOO动物模型,6周后行充盈性膀胱测压及离体逼尿肌条机械牵拉、钙通道阻滞剂刺激试验.结果 BOO后逼尿肌不稳定(detrusor instability, DI)的发生率为75.9%;DI组与正常对照组相比,收缩性、自律性明显升高,收缩力增强;正常对照组、DI组逼尿肌条在L型、T型钙通道阻滞剂作用下,自律性、收缩力均明显降低,其中正常组更明显(P<0.05).结论 DI的发生与逼尿肌自身的钙通道数量表达和功能改变有密切关系.     

钙离子拮抗剂对大鼠局灶性脑缺血环氧酶-2的影响

为观察钙离子拮抗剂对环氧酶 2 (COX 2 )表达的影响及探讨COX 2在缺血损伤过程中的作用 ,应用免疫组化方法 ,观察脑缺血模型大鼠缺血和尼莫通干预时环氧酶 2蛋白的表达。结果 :2组的假手术亚组、缺血 1h和 4h亚组均无阳性染色细胞 ,缺血 1 2h后 ,开始出现阳性染色细胞。尼莫通组的阳性着色细胞数显著高于单纯缺血组 ,分别为 :缺血 1 2h 56± 1 1 /mm2 与 4 5± 1 8/mm2 (P <0 .0 5) ;缺血 2 4h 1 1 7± 1 6/mm2 与 69± 1 4 /mm2 (P <0 .0 1 ) ;缺血 4 8h 81± 1 4 /mm2 与 4 1± 1 3/mm2 (P <0 .0 1 )。阳性染色仅见于梗死周围区形态完整的神经元。尼莫通组的脑梗死面积[( 2 8.30 8± 3.959)mm2 ]显著小于对照组 [( 46.780± 6.1 67)mm2 ,P <0 .0 1 ]。提示 :钙离子拮抗剂可有效减轻缺血性脑损伤 ,在梗死周围区COX 2延迟表达以及钙离子拮抗剂增加其表达 ,提示COX 2存在抗缺血损伤的作用     

尼群地平对人胃酸分泌的影响

作者采用双盲随机分组法,测定钙通道阻滞剂尼群地平(nitrendipine)对健康志愿者胃酸分泌的影响。与安慰剂相比,口服尼群地平20mg基础胃酸抑制率为35.9％(P<0.05),但仍在正常范围内;注射少量五肽胃泌素[0.02μg/(kg·h)]后,胃酸分泌的抑制率达87％(P<0.01);五肽胃泌素注射量为1μg/kg·h时,胃酸分泌抑制率达85％(P<0.01)。表明尼群地平对五肽胃泌素刺激所致胃酸的分泌,有较强的抑制作用。     

间尼索地平对鼠类的抗炎及中枢作用

小鼠间尼索地平灌胃34mg/kg有明显的抗炎作用,51mE/kg抑制小鼠电激怒反应,70mg/kg表现镇痛效应,上述作用与间尼索地平的剂量显著相关(P<0.05,P<0.01)。间尼索地平24,49,74mg/kg灌胃,对小鼠有显著的降低血压作用(P<0.01),但无剂量相关性(P>0.05)。提示间尼索地平的抗炎及中枢作用似与其降压作用无关。间尼索地平LD_(50)灌胃剂量为226±30mE/kg(95％可信限)。     

循证医学对钙拮抗剂在心血管病治疗地位的评价

近10年来随着多中心、随机、双盲、安慰剂对照、长期和大规模临床试验的开展，钙拮抗剂在心血管病治疗中的地位日渐明朗。现将循证医学对钙拮抗剂在心血管病治疗现状的评价及未来研究的方向进行综述。     

氨氯地平对原发性高血压患者主动脉根部顺应性的影响

目的:观察氨氯地平对原发性高血压患者主动脉根部顺应性的影响。方法:选择冠脉造影正常的原发性高血压患者64例,随机分为A、B两组,每组32例,其中A组采用氨氯地平为基础降低治疗,B组采用以美多心安为基础降压治疗,共治疗8周另选24例血压正常者作对照。于治疗前后用食管超声检测主动脉根部扩张度(D值)和僵硬度(β值),并检测治疗前后血浆BNP水平。结果:相对于对照组,原发性高血压患者主动脉根部顺应性减弱,表现为D值的降低和β值的升高,其差异有统计学意义(P均<0.05)。氨氯地平和美多心安均能有效的改善主动脉根部顺应性,表现为D值的升高和β值的降低,其差异有统计学意义(P均<0.05)治疗前血浆脑钠肽(BNP)浓度与D值存在显著负相关(r=0.524,P<0.01)与β值存在显著正相关(r=0.425,P<0.01);治疗后血浆BNP浓度与D值仍呈显著负相关(r=0.521,P<0.01)与β值呈显著正相关(r=0.354,P<0.01)。结论:相对于选择性的β1受体阻滞剂,钙离子拮抗剂-氨氯地平能有效的改善原发性高血压患者的主动脉根部顺应性。血浆BNP水平可能是反应主动脉根部顺应性的指标,其浓度的降低可以是主动脉根部顺应性改善的预测因子之一。     

一种新型N-型电压敏感性钙通道拮抗剂虎纹蜘蛛毒素-Ⅰ对大鼠内脏痛模型镇痛作用的研究

目的研究一种新型N-型电压敏感性钙通道拮抗剂虎纹蜘蛛毒素-Ⅰ(HWAP-I)经蛛网膜下腔用药对福尔马林诱导的大鼠急性炎性内脏疼痛的抑制作用.方法福尔马林快速注入SD大鼠乙状结肠壁粘膜下层作为疼痛模型,以数种可评估的反映内脏疼痛的固定性行为作为疼痛评分指标(疼痛分数).此前30 min经留置的导管注射各待测试剂于蛛网膜下腔内,以观察其对该模型疼痛行为的作用.结果以生理盐水阴性对照组和美国同类镇痛新药SNX-111(0.2,0.5和0.75μg/kg·b.w.)和盐酸吗啡(0.05,0.1和0.2μg/kg·b.w.)两个阳性对照组比较,HWAP-I(0.1～1.0μg/kg·b.w.)均能以剂量依赖方式明显抑制福尔马林结肠壁粘膜下注射所诱导的大鼠急性伤害性行为反应.HWAP-I和SNX-111在0.2μg/kg·b.w.时即有稳定和明显的疼痛抑制作用.虽然在同等剂量时SNX-111镇痛效果略大于HWAP-I,但在≥0.5μg/kg·b.w.的较高剂量时SNX-111会引起大鼠产生明显的运动能力障碍,而HWAP-I在此剂量范围内则未见明显的这类毒副作用.盐酸吗啡镇痛作用起效快于HWAP-I和SNX-111,但维持时间较后二者短.结论作为一种新型的多肽类N-型电压敏感性钙通道拮抗剂,HWAP-I和其类似物SNX-111经蛛网膜下腔用药后,对结肠壁粘膜下注射福尔马林引起的大鼠急性炎性内脏疼痛具有和盐酸吗啡类似的、剂量依赖性抑制作用,且维持时间更长.