尿液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶连续监测法试剂盒性能评估

本文就国产尿液 NAG活力连续监测法试剂盒进行了评价。该试剂盒酶促反应延迟时间应选为 3m in,监测时间选择 6 0 s。线性 0～ 15 0 U / L ,r=0 .9998,线性误差小于 7%。重复实验 ,水平 批内为 2 6 .3± 1.1U / L ,CV4.2 % ,随机误差 8.2 % ;批间 s 1.77U / L ,CV 6 .7% ,随机误差 13.2 %。水平 批内 91.3U / L± 2 .43U / L ,CV2 .6 % ,随机误差 5 .2 % ;批间 s 4.44 U / L ,CV 4.9% ,随机误差 9.5 %。平均回收率 99.5 %。测定体检健康者尿样 6 0例 ,经统计学分析 ,结果呈偏态分布 ,男女间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,单侧 95 %上限为 2 .4U / mm ol Cr(37℃ )     

腺苷脱氨酶双试剂测定的全自动分析方法

目的在全自动生化仪上建立双试剂测定腺苷脱氨酶(ADA)活性的方法。方法在全自动生化仪上编写测定程序,孵育时间240s,读空白时间60s,延迟时间30s,连续监测时间120s,主波长340nm,副波长410nm。结果本法试剂稳定,精密度良好,批内CV3.1%,批间CV3.9%,线性范围200U/L,参考范围4～25U/L。结论双试剂全自动分析腺苷脱氨酶,方法设计符合全自动分析条件,精密度高,结果准确。     

血清芳香基酰胺酶连续监测法测定

报道了血清芳香基酰胺酶的连续监测法。酶促反应最适pH为7．6，用0．1mol／LTris—HCl缓冲液可发挥酶的最大催化活性。线性范围0～400U／L。批内CV1．9％～2．5％，批间CV3．1％～3．8％。121例健康成人血清酶活性为23.8±6．0U/L（x±s），男女性别间无差异（P＞0．05）。临床初步应用表明肝胆疾病时明显升高，特别是肝内外胆道阻塞时升高幅度较大。     

一种糖化血红蛋白自动分析法的实验探讨

目的对糖化血红蛋白(HbAlc)免疫抑制比浊法(TINIA)测定的原理及自动化分析法的精密性、准确性等内容进行较深入的探讨,为临床提供方法学的支持。方法使用Roche公司生产的HbAlc免疫抑制比浊法试剂盒在OLYMPUSAU600全自动生化仪上建立分析参数,并以其正常参考范围、精密性、准确性、线性等内容进行测定。结果HbAlc(%)正常参考范围(-x±2s)=4.85~6.13,HbAlc批内及批间CV(%)分别为2.44,1.99,4.55,4.91,Hb批内及批间CV(%)分别为1.61,2.04,3.83,3.95,线性范围HbAlc0.5~18.5g/L,Hb60~220g/L,回收率(%)HbAlc97.7~103.3,Hb97.4~102.9。结论此法测HbAlc(%)简便快速,结果准确可靠,是目前较为理想的方法。     

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定及其应用

本文介绍速率法测定血清甘氨酰脑氨酸二肽氨基肽酶(Glycylprolinc dipcptidylaminopeptidase,GPDA)的方法.并应用于自动生化分析仪,测定的最适pH 为8.6,酶活力在1300 U/L 以下成线性,三份高、中、低值酶活力标本批内CV 0.7%～1.4%,批间CV1.2%～4.4%.132例正常人GPDA 为185.2±28.6((?)±s)U/L,65例原发性肝癌组为408.0±216.1 U/L((?)±s),明显高于正常组(p<0.001),且与AFP 水平无相关意义(r=0.0361),24例胃癌和18例肺癌,分别为99.5±16.6 U/L 和111.8±23.0U/L 明显低于正常组(p<0.001),并发现GPDA 在食道癌及贲门癌病人亦有下降趋势(p<0.01)。     

连续监测法测定尿亮氨酸氨基肽酶及初步临床应用

目的探讨应用连续监测法测定尿亮氨酸氨基肽酶(LAP)及其临床应用价值.方法用连续监测法对检测条件及干扰因素进行试验观察,选择最适反应条件,同时观测121名正常人和61例糖尿病患者尿LAP水平.结果 LAP在1～3 min时间内吸光度变化与时间成比例,线性范围可达400 U/L.批内CV分别为1.68%,0.72%;批间CV分别为2.86%,2.68%.171μmol/L胆红素、1 000 mg/L血红蛋白、30 g/L葡萄糖对LAP测定无干扰,抗坏血酸对LAP有负干扰.正常人尿LAP参考值范围(x±2s)15.5～48.3 U/g·Cr.糖尿病合并肾损伤组尿LAP明显高于正常对照组和未发生肾损伤组,差异有非常显著性意义(P＜0.001).结论连续监测法检测尿LAP简便、快速,测定尿LAP对诊断糖尿病早期肾损害有一定的价值.     

血清和胸腹水腺苷脱氨酶测定

利用2，4-二氯酚参与的Trinder反应检测体液中腺着脱氨酶（ADA）。该法简便、快速、重复性好、特异性高。酶促反应时间短（10min），线性范围宽（0～100U／L）。批内CV3．0％、批间CV4．3％。127例健康人血清ADA活性X±s为20．5±46U／L。11例结核性胸腹水ADA为77．9±16．6U／L，而11例非结核性胸腹水ADA为23．1±17．0U／L，两组有显著性差异（P＜0．01）。     

血清β—N—乙酰氨基己糖苷酶自动分析法改进

目的　对血清 β N 乙酰氨基己糖苷酶总活性自动分析法进行改进 ,使其整个试验过程实现全自动。方法　利用SYNCHRONCX9ALX全自动生化分析仪的操作功能 ,对原法的试验过程、试验条件、测定参数等重新设计 ,并对本法进行评价。结果　本法的检测波长为 4 10 / 5 2 0nm ,酶促反应时间 8.2 6 6 7min ,色原PNP在4 10 / 5 2 0nm下的毫摩尔吸光系数为 18.5 ,线性达 80 0U/L ,批内CV为 0 .4 9%～ 2 .2 1% ,批间CV为 0 .6 9%～2 .93% , x± 2s参考范围为 7.5 8～ 2 8.4 6U/L。本法无须另做样品空白 ,从样品上机到结果打印一气呵成。结论　本法不但简便快捷 ,真正实现了全自动 ,而且精密度及线性优于原法。     

血清碱性磷酸酶连续监测法及其实验条件的探讨

参考国际临床化学联合会正式推荐方法,使用国产仪器和试剂连续监测血清碱性磷酸酶活性,对其实验条件进行了探讨。测得反应最适 pH 为10.0,DEA 缓冲液的最适浓度为0.8～1.0mol/L,4—NPP 的 Km 为1.26×10~(-3)mol/L,选择4—NPP 终浓度为19.05mmol/L,0.95～2.0mmol/L 的 Mg~(2 )对酶活性反应时间为5min。批内CV 为2.40%～3.96%,批间 CV 为3.28%～4.66%,和 Beckman 试剂盒比较两者显著相关(r=0.9762),98例健康成人参考值为93.8±21.4((?)±s)u/L。方法简便,快速准确,适合基层实验室推广应用。     

以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷为底物测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活性

目的 评价以2-甲氧基-4-(2'-硝基乙烯基)酚-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MNP-NAG)为底物的全液体试剂两点终点法测定尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性.方法 尿样中NAG作用于底物MNP-NAG水解产生游离MNP,其生成速率与酶活性在一定范围内成正比.结果 该法显色最大吸收波长为505 nm,试剂1和试剂2最适pH值分别为4.6和10.2,最适底物浓度为16 mmol/L,线性范围达198 U/L,批内变异系数(CV)和批间CV分别为2.2%和3.8%.166例健康体检者尿样NAG活性参考范围为:(6.21±4.53)U/gCr((x)±1.96 s).结论 MNP-NAG底物法测定尿NAG灵敏度高,操作简便,结果可靠,适合临床应用.     

腺苷脱氨酶活力测定方法的自动化及临床应用

目的在罗氏P800全自动生化分析仪上应用速率法通过偶联酶反应测定H2O2生成量来推算腺苷脱氨酶(ADA)活性。方法利用一系列酶促反应测定H2O2的生成量计算ADA活性的方法对该院61例住院患者和60例健康人群血清ADA活性进行测定。结果60例正常人血清ADA活性为(10.9±2.6)U/L,7例结核性胸水ADA活性为(48.1±26.5)U/L,19例非结核性胸水ADA活性(9.2±5.7)U/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。17例肝硬化患者血清ADA活性为(36.0±4.8)U/L。结论该方法快速、简单、重复性好、精密度高,试剂稳定性好,批内CV为3.38%,批间CV为4.56%。     

血管紧张素转化酶(ACE)试剂盒的性能评价

目的自建血管紧张素转化酶检测系统的性能评价。方法依据临床和实验室标准化协会(CLSI)标准中EP5-A2,EP9-A文件的要求,采用全自动生化分析仪对九强公司的ACE试剂盒的精密度、线性、与比对试剂的相关性以及可报告范围等一些性能进行评价。结果自建系统血清ACE高低值的批内CV分别为6.87%和2.39%,批间CV分别为6.09%和1.81%,日间CV分别为8.00%和2.8%均在厂家提供的小于10%的范围内;线性结果R2=0.99;与比对试剂相关系数r=0.990 56,且平均偏倚为8.55%有良好的相关性;血清ACE检测试剂盒可报告范围为9.0U/L-600U/L。结论自建ACE检测系统各项性能可以满足临床应用的要求。     

氧化法测定血清超氧化物歧化酶及临床应用

目的 探讨氧化法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)及临床应用价值.方法 根据测定条件采用氧化法直接测定血清SOD,对其精密度、准确度、线性、干扰性等性能进行评价.结果 批内CV<2.83%,批间CV<3.98%,总CV<4.01%,回收率达101.3%,线性:0～250 U/ml(Y=0.980 2X+6.254 2,R2=0.992 3);加入TG<3.5 mmol/L,BIL<200 μmol/L;Hb<100 g/L时无显著干扰;血清生物参考区间值(±2s)130～220 U/ml.结论 在生化仪上进行血清超氧化物歧化酶检测方便、准确、快速.     

5'-核苷酸酶的自动化分析

目的评价一种5'-核苷酸酶(5'-NT)的测试方法.方法在日立7060上对其进行重复性试验、线性试验、干扰试验、回收试验,建立临床正常值参考范围结果本试验线性范围达328.0U/L;批内试验低值CV 1.68%,高值CV 1.3%,批间试验低值CV 4.86%,高值CV 4.21%;平均回收率99.5%;血红蛋白(Hb)＜800mg/L,总胆红素(TBil)＜56μmol/L及碱性磷酸酶(ALP)对5'-NT测定无干扰;正常值范围为0.32～10.14U/L(n=86).结论该法具快速、灵敏、简便、准确等优点,适合临床自动化分析.     

5''''-核苷酸酶的自动化分析

目的评价一种5'-核苷酸酶(5'-NT)的测试方法.方法在日立7060上对其进行重复性试验、线性试验、干扰试验、回收试验,建立临床正常值参考范围结果本试验线性范围达328.0U/L;批内试验低值CV 1.68%,高值CV 1.3%,批间试验低值CV 4.86%,高值CV 4.21%;平均回收率99.5%;血红蛋白(Hb)＜800mg/L,总胆红素(TBil)＜56μmol/L及碱性磷酸酶(ALP)对5'-NT测定无干扰;正常值范围为0.32～10.14U/L(n=86).结论该法具快速、灵敏、简便、准确等优点,适合临床自动化分析.     

血清5''''-核苷酸酶酶法测定的实验研究

目的 对血清5'-核苷酸酶(5'-NT)酶法测定的原理及自动化分析法之精密性、准确性等内容进行较深入的探讨,为其临床应用提供方法学支持。方法 使用浙江东瓯公司5'-NT酶法试剂盒在SYNCHRON CX9全自动生化分析仪上建立自动化分析程序,并对其检测时间、精密性、准确性、线性等内容进行测定。结果 本法λmax=510nm,开始检测时间定为419s(739s-320s),结束检测时间定为515s(835s-320s)。批内和批间CV(％)分别为1.98-2.52和4.53-4.92,线性范围达0-250 U／L,回收率(％)为98.7-102.3,正常参考范围(x±2s)为3.66-10.5 U／L。结论 酶法测定5'-NT简便快捷、结果准确可靠,是目前5'-NT测定较为理想的方法。     

连续监测法测定血清丙氨酸氨基肽酶

目的　建立血清丙氨酸氨基肽酶 (AAP)连续监测法。方法　以丙氨酰对硝基苯胺 (Ala pNA)为底物 ,研究AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP作用于此底物的动力学特征 ,选择最适反应条件 ,建立血清AAP测定速率法及参考值 ,同时观测肝胆疾病患者血清AAP水平。结果　酶反应最适pH8 0 ,Tris HCl缓冲液的最佳浓度 15 0mmol/L ,Ala pNa浓度以 3mmol/L为宜 ,米氏常数 (Km) 0 74mmol/L ,在 8min观测时间内吸光度变化与时间成比例 ,线性范围可达 180 0U/L ,平均批内、批间CV分别为 1 0 4%和 2 0 2 %。 2 0mmol/L甘油三酯、2g/L血红蛋白、340 μmol/L胆红素对酶活力测定无干扰 ,正常成年人群参考范围 ( x± 2s) 4 1～ 77U/L。肝胆疾病组血清AAP明显高于健康对照组。结论　血清AAP活力是鉴别诊断肝胆疾病的一项特异、灵敏的指标 ;连续监测法适用于各种类型的自动化分析仪 ,便于临床推广     

血清铁5-Br-PADAP直接光度法自动分析试剂盒的研究与评价

目的　研制、评价血清铁 5 - Br- PADAP自动分析法试剂盒。方法　在表面活性剂存在下 ,用 2 - ( 5 -溴 - 2 -吡啶偶氮 ) - 5 -二乙氨基酚 ( 5 - Br- PADAP)作显色剂双试剂两点终点法测定血清铁。结果　该法线性范围 0～ 85 μmol/L,平均回收率为 99.7% ,批内变异系数 ( CV)和批间变异系数分别为 0 .0 1 4%～0 .0 1 6%和 0 .0 1 6%～ 0 .0 2 5 % ,与原子吸收分光光度法比较具有良好的相关性 ,Y=0 .9939X+ 0 .1 1 69,r= 0 .9889,P>0 .0 5。 1 0 7例健康人血清铁含量为 9.2 2～ 2 9.62 μmol/L( x± 2 s)。结论　用该试剂盒双试剂自动化分析法测定血清铁方法简便、灵敏可靠 ,适合临床应用     

血清镁测定方法的比较

目的　了解临床常用的血清镁测定方法的性能。方法　对 4种常用的测定法做了精密度、线性、抗脂血能力等实验并进行了比较。结果　二甲苯胺兰法和偶氮氯磷Ⅰ法的精密度分别为CV批内 =2 .17%、CV批间 =3.4 0 %和CV批内 =2 .18%、CV批间 =3.4 %、线性达 3.0mmol/L、试剂稳定性优于甲基麝香草酚兰法和Calmagite染料法。甲基麝香草酚兰法和Calmagite染料法精密度分别为CV批内 =2 .38%、CV批间 =3.6 5 %和CV批内 =2 .38%、CV批间 =3.6 1%、线性达 2 .5mmol/L。扣除样本空白的甲基麝香草酚兰法和Calmagite染料法抗三酰甘油的能力优于二甲苯胺兰法和偶氮氯磷Ⅰ法。 4种镁测定方法的准确度较好 (偏倚 <5 % ) ,平均回收率都在95 %～ 10 5 %。 4种镁测定方法的结果相关性好 (r均 >0 .995 ) ,而灵敏度以偶氮氯磷Ⅰ法最高。结论　偶氮氯磷Ⅰ法测血清镁较适于临床使用。     

硫酸肼还原法测定血清中硝酸盐浓度

目的 建立一种简便可靠的血清硝酸盐浓度测定方法.方法 在碱性介质中用硫酸肼将去蛋白血清中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,再用Griess试剂测定亚硝酸盐的浓度.结果 在NaOH介质(pH13.2)中,硫酸肼有最佳的还原率,56℃水浴10min,反应即可完成.该法批内CV3.58%(41.6±1.49μmol/L,n=15),批间CV6.40%(79.8±5.11μmoL/L,n=10);平均还原率94.7%;平均回收率95.1%;线性范围10～200μmol/L;参考范围32.7±15.0(±s,μmol/L).结论 该法还原反应快速、高效,重复性好,且操作简便,试剂价格低廉.