复方昆明山海棠颗粒对小鼠淋巴细胞体外增殖活化影响的研究

目的：研究复方昆明山海棠颗粒（composite tripterygium hypoglaucum hutch，CTHH）对小鼠脾淋巴细胞增殖、活化标志CD69和CD25及细胞因子IL-4及γ-IFN的影响，为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法：无菌分离小鼠脾淋巴细胞，加入不同浓度的复方昆明山海棠颗粒溶液，MTT法检测ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞增殖；流式细胞仪检测活化标志CD69及CD25；酶联免疫法检测细胞因子IL-4及γ-IFN。结果：CTHH对脾淋巴细胞增殖活化及分泌均有抑制作用。     

昆明山海棠片对银屑病动物模型的影响

目的 观察昆明山海棠片对银屑病模型动物的治疗作用。方法 采用豚鼠银屑病皮损模型、小鼠阴道上皮细胞有丝分裂模型和小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成模型,观察昆明山海棠片对银屑病各实验动物模型的影响。结果 昆明山海棠片能够降低豚鼠皮损组织白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量,使豚鼠耳部皮肤角化过度减轻,颗粒层恢复,棘层变薄,表皮突延伸、乳突上伸减轻,炎症细胞浸润减少;能够抑制小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂;促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成。结论 昆明山海棠片对银屑病模型动物有较好治疗作用。     

昆明山海棠胶囊对小鼠的生殖毒性研究

目的:探讨昆明山海棠胶囊的生殖系统毒性.方法:根据卫生部<中药新药研究指南>,进行该制剂的特殊毒理实验研究.结果:显性致死试验阳性;雌鼠均不能受孕;精子畸形率显著增高,随剂量增加而精子畸形率增高;对孕鼠重量、活胎重量及平均胎仔数等各项指标均无影响.结论:昆明山海棠胶囊具有低-中度的遗传毒性和一般生殖毒性,而无胚胎毒性.     

昆明山海棠对慢性肾炎大鼠血清中IL-1,IL-6及TNF-α的影响

目的:观察昆明山海棠对肾炎大鼠血清中IL-1,IL-6及TNF-α的影响,初步探讨昆明山海棠治疗慢性肾炎的作用机制。方法:将兔抗鼠肾毒血清注射入正常大鼠体内,诱导产生慢性肾小球肾炎,在该模型上,用昆明山海棠给药4周,用双抗夹心ELISA法检测IL-1,IL-6和TNF-α,同时测定相关指标,并设模型对照组及雷公藤和强的松阳性对照。结果:昆明山海棠能显著降低IL-1,IL-6,TNF-α的产生。结论:昆明山海棠治疗慢性肾炎作用机制可能与其对细胞因子的调节有关。     

Forskolin对小鼠体外T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响

目的：研究Forskolin对刀豆蛋白A（Con A）刺激的小鼠CD3^＋T淋巴细胞活化、增殖和周期的影响,初步探讨其免疫调节作用机制。方法：无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术来检测CD3^＋T细胞早期活化标志CD69的表达水平;用羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）染色技术结合流式细胞术和CELLQuest、Mod Fit^LT软件,分析T细胞增殖情况;用碘化丙锭（PI）染色技术分析细胞周期分布。结果：加入终浓度为10^-7、10^-6、10^-5M的Forskolin,孵育8 h后,CD3^＋T细胞CD69的表达水平和平均荧光强度（MFI）与Con A组相比都有显著的降低,且呈梯度依赖性;对Con A刺激的小鼠CD3^＋T细胞的增殖指数（PI）也有梯度性抑制;对细胞周期的影响表现为：随着Forskolin浓度升高,处于G0/G1期的细胞增加,S期细胞减少,G2/M期的细胞也有少量减少。结论：Forskolin能有效抑制小鼠T淋巴细胞的体外活化和增殖,阻滞细胞从G0/G1期进入S、G2/M期。由此推断Forskolin在某种程度上是一种潜在的免疫抑制剂。     

淫羊藿提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿水溶性提取物对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法无菌分离小鼠各部位淋巴结,制备单细胞悬液,加入不同终质量浓度(5、25、50mg/L)的淫羊藿提取物,以MTT法检测药物对T细胞活性的影响;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料CFDA-SE染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果MTT法检测淫羊藿提取物在50mg/L时细胞存活率达52.36%。ConA作用6h后,对照组CD69 表达率为(4.61±0.85)%,ConA组CD69 T细胞的比率上升至(38.30±2.54)%,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L时均抑制ConA诱导的CD3 T淋巴细胞CD69的表达(P<0.01),其表达率分别下调为(36.16±2.14)%,(30.5±1.72)%,(15.99±0.87)%。培养48、72后,对照组增殖指数(PI)分别为1.01±0.01和1.05±0.01,ConA组PI分别达到1.42±0.01、2.32±0.01,淫羊藿提取物在终质量浓度5、25、50mg/L均抑制T淋巴细胞增殖(P<0.01),48h时PI分别为1.28±0.01、1.26±0.01、1.21±0.01;72h时PI分别为2.30±0.03、2.13±0.02、2.10±0.01。结论淫羊藿提取物能明显抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性。     

昆明山海棠胶囊对大鼠佐剂性关节炎T淋巴细胞的影响

目的:探讨昆明山海棠胶囊对大鼠佐剂性关节炎T细胞的作用.方法:复制大鼠佐剂性关节炎动物模型,采用免疫组化法对大鼠外周血及关节滑膜T细胞亚群CD4 和CD8 进行检测.结果:与正常组相比较,模型组大鼠外周血中CD4 细胞数以及CD4 /CD8 比值均明显增高;关节滑膜CD4 细胞免疫组化反应阳性,呈现弥散性黄染.经昆明山海棠胶囊治疗后,外周血中CD4 细胞数明显减少;CD4 /CD8 比值明显降低;可改善滑膜淋巴细胞浸润情况.结论:昆明山海棠胶囊具有免疫调节作用.     

昆明山海棠总生物碱对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-αNO的影响

目的:研究THHta对LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞分泌TNF-α及NO的影响,探讨THHta的抗炎作用机理.方法:CCK8法测定THHta对RAW264.7细胞增殖的影响;LPS刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型;ELISA法检测THHta对LPS诱导的RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响;硝酸还原酶...     

类风湿关节炎大鼠模型的构建及昆明山海棠对大鼠佐剂性关节炎的干预研究

目的:制作和比较佐剂性关节炎大鼠模型及胶原性关节炎大鼠模型,选择外观及病理变化更明显的模型来观察昆明山海棠制剂对其的干预作用.方法:构建AA和CIA大鼠模型,采用肿胀度评分法观察造模前后大鼠关节变化情况,造模后28 d分离关节滑膜、切片HE染色,观察滑膜炎症,ELISA方法检测血清中细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)水平;观察昆明山海棠对大鼠关节肿胀度、血清细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)及关节滑膜组织炎症的影响.结果:从造模后16 d开始AA组和CIA组的关节肿胀度升高(P＜0.01);AA组在出现肿胀的时间及程度上与CIA组比较有显著差异(P＜0.01);造模后28 d,两个模型组血清中IL-1β、TNF-α水平升高,TGF-β水平下降(P＜0.01),同时,两个模型组间也存在显著差异(P＜0.05);造模后,AA组滑膜组织有大量炎性细胞浸润、纤维素样渗出及出现丰富的血管翳;经过昆明山海棠的干预,高、中剂量组关节肿胀得到明显改善(P＜0.01);昆明山海棠高、中剂量能抑制血清中IL-1β、TNF-α水平及提高TGF-β水平(P＜0.01).结论:AA大鼠模型与CIA模型比较出模时间更早,症状更明显;昆明山海棠能改善AA大鼠关节肿胀度,抑制血清中细胞因子的水平,对AA大鼠有明显的治疗作用.     

昆明山海棠提取物对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨昆明山海棠提取物(THW-4)对离体血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响。方法培养家兔主动脉平滑肌细胞,加入不同浓度的THW-4进行处理,用MTT法测定细胞生长曲线,以Annexin V-FITC／PI双标记、透射电镜、原位末端标记法检测细胞凋亡。结果THW-4可以明显抑制VSMC增殖,呈剂量和时间依赖性,作用48h的半有效抑制浓度(IC50)为15．6μg／L;VSMC在含10～100μg／L THW-4的培养液中孵育56h,可检测到细胞早期凋亡,且凋亡率随THW-4浓度增加而升高;延长孵育时间至72h,透射电镜下可观察到典型的凋亡细胞形态学改变,原位末端标记法显示DNA片段化增多,有核碎裂、固缩等改变;细胞周期时相分布显示THW-4主要阻滞VSMC于G2/M期。结论THW-4能有效抑制体外培养的VSMC增殖及诱导其凋亡,提示THW-4可能会作为防治血管成形术后再狭窄的候选药物。     

昆明山海棠种子检验规程研究

目的研究昆明山海棠种子检验规程。方法参照农作物种子质量检验规程对昆明山海棠种子扦样、种子净度、真实性、吸水特性、种子质量、含水量、生活力、发芽率等进行研究,建立起了昆明山海棠的种子质量检验规程并对30份样品进行检测。结果种子质量采用百粒法,昆明山海棠千粒重为6.01~11.81 g;种子含水量为8.21%~9.81%;生活力测定采用TTC法:在70℃恒温避光条件下,种子在0.05%TTC溶液中染色8 h。结论本规程适用于昆明山海棠种子检验。     

雷公藤与昆明山海棠采样调查报告

目的:通过采样调查,获取雷公藤与昆明山海棠野生资源现状、种植、商品流通等方面的资料。方法:在全国13个样地采集样品,比较雷公藤和昆明山海棠的形态特征与生长习性的差异;调查雷公藤与昆明山海棠的野生资源现状、种植信息、民间混淆种及不同市售药材的商品特征。结果:(1)雷公藤和昆明山海棠主要采集于林下或林地边缘,光照和水分对雷公藤属植物的分布有一定的影响;(2)雷公藤与昆明山海棠的野生资源量正在萎缩,两种植物种植历史较短,种植技术水平较低;(3)雷公藤的采收加工尚缺乏规范,市售药材将雷公藤属植物的根、根茎、茎均作商品药材销售,饮片规格多样。结论:雷公藤与昆明山海棠的野生资源正在萎缩,人工种植、采收加工及市售药材的管理等方面的研究尚需规范深入的开展。     

昆明山海棠提取物对异基因骨髓移植小鼠调节性T细胞的影响

目的 研究昆明山海棠（THH）提取物减轻异基因骨髓移植小鼠移植物抗宿主病（GVHD）作用及可能机制。     

昆明山海棠根皮化学成分研究

目的:对昆明山海棠根皮进行化学成分研究。方法:利用各种色谱方法进行化学成分分离,根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果:分离得到11个化合物,分别鉴定为:4'-O-(-)甲基-表没食子儿茶素(1)、3,4-二甲氧基苯基-β-D-葡萄糖苷(2)、3,4,5-三甲氧基苯基-β-D-葡萄糖苷(3)、(2R,3R)-3,5,7,3',5'-五羟基黄烷(4)、2-O-deacetyleuonine(5)、tripfordine C(6)、peritassine A(7)、hypoglaunine C(8)、雷公藤春碱(9)、雷公藤晋碱(10)、雷公藤碱(11)。结论:化合物1～6为首次从该植物中分离得到。     

落地生根对小鼠脾淋巴细胞增殖、IL-2的影响

目的：探讨落地生根的免疫调节作用。方法；用药地生根水浸出液给小鼠灌胃，检测小鼠脾淋巴细胞增殖和IL－2的产生。结果：高浓度的落地生根能明显的增强脾淋巴细胞增殖反应，与生理盐水对照组比较有非常显著差异（P＜0．01）。对细胞因子IL－2的产生也有促进作用（P＜0．05）。结论：落地生根可增强小鼠的免疫功能。     

昆明山海棠诱导HL-60细胞凋亡的初步研究

目的 探讨中药昆明山海棠（THH）诱导急性白血病细胞凋亡的规律及发生机制。方法 应用染料排除法、活细胞荧光染色、DNA电泳、流式细胞仪、斑点杂交、原位杂交和荧光Ca^2 指示剂进行检测和观察。结果 HL-60细胞在THH作用下出现典型的细胞凋亡特征,包括细胞形态改变,DNA梯状带以及亚G1峰,并且存在明显的量效和时效关系。进一步研究表明,Bcl-2基因在凋亡过程中的表达持续下凋,细胞内游离Ca^2 浓度未发生明显变化。结论：THH有较强的诱导白血病HL-60细胞凋亡的能力,其作用机制与下凋Bcl-2基因表达有关。     

Sesquiterpene alkaloids from Tripterygium hypoglaucum and Tripterygium wilfordii: a new class of potent anti-HIV agents

Five new sesquiterpene pyridine alkaloids [triptonines A (1) and B (2), and wilfordinines A (3), B (4), and C (5)] and two known compounds (peritassine A and hypoglaunine C) were isolated from Tripterygium hypoglaucum and a clinically used extract of Tripterygium wilfordii. The structures of 1-5 were elucidated by spectroscopic methods. The anti-HIV activity of 1, 2, and several related compounds was evaluated. Triptonine B (2) demonstrated potent anti-HIV activity with an EC(50) value of <0.10 microg/mL and an in vitro therapeutic index value of >1000.     

昆明山海棠总生物碱提取新工艺的研究

目的昆明山海棠总生物碱提取新工艺的研究。方法采用大孔吸附树脂法。结果与结论用0.5%酸水提取,H型大孔吸附树脂吸附昆明山海棠总生物碱,提取量可以达到500mg·kg-1,生物碱在50,25mg·kg-1对正常大鼠棉球肉芽肿有明显的抑制作用(P<0.001),对角叉菜胶致正常大鼠足跖肿胀在6h后有抑制作用。     

Studies on tannins from Tripterygium hypoglaucum (lévl.) hutch.]

OBJECTIVE: To study the tannins from Tripterygium hypoglaucum. METHOD: Compounds were isolated by column chromatography and elucidated on the basis of spectroscopic analysis and comparison of references. RESULT: The compounds obtained were determined as (+)catechin, (-)epigallocatechin, procyanidin B-3, procyanidin B-4 and gallocatechin-(4 alpha-->8) epicatechin. CONCLUSION: All the compounds were obtained from this plant for the first time.