基于TCGA数据库和免疫组化法对整合素茁4与肺腺癌的关系研究

目的研究肺腺癌组织中整合素茁4mRNA和蛋白的表达情况,并分析其对肺腺癌患者预后的影响。方法通过TCGA数据库中肺腺癌患者的临床和mRNA数据,分析整合素茁4mRNA在肺腺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及对肺腺癌患者的预后影响。通过免疫组化的方法,对20例肺腺癌患者的肺腺癌组织及相应癌旁正常组织中的整合素茁4蛋白进行检测,分析整合素茁4蛋白在肺腺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及对肺腺癌患者的预后影响。结果整合素茁4mRNA与蛋白在肺腺癌组织的表达水平均高于在癌旁正常组织的表达水平（均P＜0.05）。整合素茁4蛋白在T2~3期肺腺癌患者癌组织中的表达水平高于在T1期肺腺癌患者癌组织中的表达水平（P＜0.05）。肺腺癌组织整合素茁4mRNA高表达患者5年生存率明显低于低表达患者（22.4%vs44.1%,P＜0.05）,蛋白高表达患者5年生存率亦明显低于低表达患者（25.0%vs57.1%,P＜0.05）。结论整合素茁4在肺腺癌组织中表达上调,且高表达的患者预后较差。整合素茁4或可作为治疗肺腺癌患者新的潜在靶点和预后指标。     

肺腺癌Ubiquilin1蛋白的表达与临床病理关系的研究

目的探讨肺腺癌组织中Ubiquilin1蛋白的表达与临床病理特征的关系。方法选取90例肺腺癌患者,应用免疫组化组织芯片,评估癌组织中Ubiquilin1蛋白高表达与临床病理关系,评估癌及癌旁组织中的表达及与远期生存的关系。结果肺腺癌组织中Ubiquilin1蛋白的表达高于配对的癌旁组织,差异有统计学意义（Z=-5.831,P＜0.01）。肺腺癌高表达与配对癌旁高表达相关（字2=17.222,P＜0.01）,与5年生存率相关（字2=25.989,P＜0.01）。TNM分期、性别、肺癌中高表达、癌旁中高表达是回归模型筛选出来的有统计学意义的预后因子（P＜0.05）,Kaplan-Meier生存率曲线提示高表达与不良预后有关（P＜0.01）。结论Ubiquilin1蛋白可以作为预测肺腺癌临床及预后的指标,对筛选肺腺癌手术后高危患者有重要的临床意义。     

胃腺癌组织中IMP3 蛋白的表达及临床意义

目的 探讨IMP3 蛋白在胃腺癌（GAC）中的表达及意义。方法 选取2007 年2 月—2011 年 2 月在丹东市第一医院行手术切除的92 例GAC 患者的组织蜡块标本,应用免疫组织化学染色检测其GAC 及其癌旁胃组织,16 例转移淋巴结组织标本中IMP3 的表达,结合临床相关因素及生存数据进行分析。 结果 GAC、癌旁组织及淋巴结组织中IMP3 阳性表达率分别为76.1%、50.0% 及87.5%,癌组织和转移淋巴 结组织中IMP3 阳性表达率高于癌旁组织（P <0.05）;转移淋巴结组织中IMP3 强阳性表达率高于癌组织; GAC 组织中IMP3 阳性表达与Ki-67 表达、临床分期、是否有淋巴转移及是否侵犯浆膜层有关（P <0.05）; IMP3 阳性表达患者无病生存率及5 年生存率均高于阴性表达患者（P <0.05）,且浆膜侵犯[H^R=1.851（95% CI ：1.180,2.906）,P =0.000]、临床分期高[H^R=3.145（95% CI ：1.820,5.434）,P =0.000],IMP3 阳性表达是 GAC 患者预后不良的独立危险因素[H^R=1.614（95% CI ：1.032,2.523）,P =0.036]。结论 检测IMP3 蛋白 表达水平对GAC 的诊断及预后评估有重要临床意义,有望成为GAC 新的标志物。     

GPRC5A基因在肺腺癌中的表达及临床意义

目的了解G蛋白偶联受体C型家族5A（GPRC5A）基因在肺腺癌组织及癌旁正常组织中的表达,并探讨其临床意义。方法分别采用Real-timePCR和Westernblot法检测25例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5AmRNA和蛋白表达水平。应用免疫组化法检测93例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5A蛋白的表达情况,并分析GPRC5A蛋白的表达与临床病理特征及预后的关系。结果25例肺腺癌组织中GPRC5AmRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织（均P＜0.05）。93例肺腺癌中GPRC5A蛋白低表达率为55.9％,均表达在胞质和胞膜中。GPRC5A蛋白的表达与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移均有关（均P＜0.05）,而与性别、年龄、肿瘤大小均无关（均P＞0.05）。Kaplan-Meier生存曲线显示,GPRC5A高表达的患者3年生存率为73.7%,高于低表达患者的39.4%,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论GPRC5A在肺腺癌组织中低表达,其低表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关,可作为估计生存率的独立指标。     

共刺激因子B7同源体4在肺腺癌组织中的表达及临床意义

目的分析共刺激因子B7同源体4 (B7H4)在肺腺癌组织中的表达及临床意义。方法选择2012年1月至2012年12月河南科技大学第一附属医院手术切除的100例肺腺癌患者癌组织及配对的癌旁组织(距肿瘤组织边缘> 5 cm)石蜡包埋标本为观察对象,采用免疫组织化学法检测肺腺癌组织及癌旁组织中B7H4蛋白表达,分析B7H4蛋白表达与肺腺癌患者临床病理特征的关系;采用COX回归分析各因素对肺腺癌患者预后的影响,采用Kaplan-Meier生存曲线及Log-rank检验分析B7H4蛋白表达与患者生存时间的关系。结果肺腺癌组织及癌旁组织中均可见细胞膜及细胞质出现棕黄色颗粒,B7H4蛋白呈阳性表达。肺腺癌组织中B7H4蛋白表达免疫组织化学总评分及高、中、低分化癌组织B7H4表达免疫组织化学评分均显著高于癌旁组织(P <0. 05);随着癌组织分化程度的降低,B7H4蛋白表达免疫组织化学评分逐渐升高(P <0. 05)。B7H4蛋白表达与肺腺癌患者分化程度、淋巴结转移、TNM分期和5 a生存情况有关(P <0. 05),与患者的性别、年龄、吸烟及饮酒无关(P> 0. 05)。淋巴结转移、TNM分期及B7H4蛋白表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素(P <0. 05)。B7H4蛋白表达阳性和B7H4蛋白表达阴性患者5 a生存率分别为2. 17%和27. 78%,B7H4蛋白表达阳性患者5 a生存率低于B7H4蛋白表达阴性患者(χ2=31. 020,P <0. 05)。结论 B7H4蛋白高表达可能促进了肺腺癌的发生、发展,抑制B7H4蛋白表达可能是肺腺癌靶向治疗的潜在靶点之一。     

白介素17与Foxp3在ⅢA期肺鳞癌和腺癌中的表达及与预后的关系研究

目的检测ⅢA期肺鳞癌和腺癌患者术后癌及癌旁组织中的白介素17(IL-17)、Foxp3的表达情况,分析IL-17与Foxp3的相关性及与患者预后的关系,探讨肺鳞癌和腺癌组织中辅助性17(Th17)与Foxp3+调节性T(Foxp3+Treg)细胞浸润的临床意义。方法采用免疫组织化学法检测62例术前未行化疗或放疗的汉族肺鳞癌和腺癌患者的手术切除标本癌组织、癌旁组织中IL-17和Foxp3表达。结果 IL-17在肺鳞癌和腺癌组织中阳性表达53例(85.5%),相应癌旁组织中阳性表达35例(56.5%),癌组织和癌旁组织的IL-17阳性表达率比较,差异有统计学意义(χ2=6.779,P=0.009)。Foxp3在肺鳞癌和腺癌组织中阳性表达48例(77.4%),相应癌旁组织中阳性表达34例(54.8%),癌组织和癌旁组织的Foxp3阳性表达率比较,差异有统计学意义(χ2=5.038,P=0.025)。肺癌组织中IL-17表达与Foxp3表达呈正相关(r=0.309,P=0.010)。IL-17阳性表达组和阴性表达组的生存率比较,差异有统计学意义(χ2=9.386,P=0.002);Foxp3阳性表达组和阴性表达组的生存率比较,差异有统计学意义(χ2=14.069,P=0.000)。Cox回归模型分析显示IL-17阳性表达(P=0.046,OR=2.359)及Foxp3阳性表达(P=0.003,OR=3.180)是影响肺鳞癌和腺癌患者预后的独立危险因素;组织学类型(P=0.162,OR=1.518)及年龄(P=0.292,OR=1.019)不是影响预后的危险因素。结论 Th17细胞特异性分泌IL-17,Treg细胞最可靠的特征性标记是Foxp3,肺鳞癌和腺癌患者肿瘤组织中IL-17和Foxp3较自身癌旁组织阳性表达率高,癌组织中IL-17与Foxp3表达呈正相关。IL-17和Foxp3阳性表达均是影响预后的独立危险因素;IL-17及Foxp3是影响肺鳞癌和腺癌发展和预后的重要免疫学指标。提示Th17和Foxp3+Treg细胞与肺鳞癌、腺癌的发生、发展有关,但尚需大规模的临床研究进一步证实。     

DNMT3B通过Hippo信号通路促进肝癌细胞的增殖与侵袭

目的 探索DNMT3B 对肝癌细胞的增殖与侵袭的影响。方法 收集2008年5月~2013年5月在重庆医科大学附二院确诊的175例肝癌患者并制作成组织芯片,分析DNMT3B蛋白表达水平的差异与患者的预后情况及患者肿瘤无瘤生存率与肿瘤特异性生存率的关系。使用单因数与多因素Cox回归分析DNMT3B 的表达对肝癌患者预后的影响。使用小干扰RNA（siRNA） 与慢病毒过表达干扰DNMT3B 的表达,利用CCK-8及EDU染色检测肝癌细胞增殖情况,对细胞进行Transwell 实验检测细胞迁移侵袭能力分析。结果 免疫组化显示DNMT3B 蛋白在肝癌中的表达率（67.4%）高于配对癌旁组织的表达率（41.1%）。DNMT3B 的高表达与肿瘤大小（P=0.001）、血管侵犯（P=0.004）、肝内转移（P=0.018）密切相关。DNMT3B 高表达患者其肿瘤无瘤生存率与肿瘤特异性生存率低于DNMT3B 低表达患者（P<0.005）。沉默DNMT3B 显著抑制Huh-7 细胞增殖,Transwell 实验检测结果表明,与对照组相比沉默DNMT3B 抑制Huh-7 细胞的迁移与侵袭能力。Western blot 检测显示,沉默DNMT3B 的表达升高了LATS1 的表达水平,降低了YAP1 的表达,激活了Hippo 信号通路。同时,甲基化特异性PCR显示LATS1 的甲基化水平降低。结论 肝癌中DNMT3B的表达高于癌旁组织,并且DNMT3B 的高表达与患者的低生存率密切相关。沉默DNMT3B 抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力。DNMT3B 主要通过甲基化LATS1 并抑制其表达,促进癌基因YAP1的表达进而抑制Hippo信号通路的抑癌作用,从而促进肝癌恶性发展。     

PD-L1在NSCLC组织中的表达及对患者预后影响的多因素分析

目的探讨程序性死亡配体-1(PD-L1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达及对患者预后的影响。方法选取江苏省中医院病理科收集的90例NSCLC组织(NSCLC组)、40例癌旁正常肺组织作为癌旁正常组进行免疫组化检测,对比两组标本中的PD-L1蛋白阳性表达率。根据PD-L1蛋白表达是否为阳性,将90例NSCLC分为PD-L1阳性组和PD-L1阴性组。 结果NSCLC组的PD-L1蛋白阳性表达(80.00%)高于癌旁正常组(5.00%,P＜0.05)。90例NSCLC中PD-L1阳性组72例和PD-L1阴性组18例。 PD-L1蛋白阳性表达的NSCLC患者3年生存率(19.70%)显著低于阴性患者(52.94%,P＜0.05);PD-L1蛋白阳性表达的NSCLC患者的生存时间21.0月显著低于PD-L1蛋白阴性表达患者的28.0月(P＜0.05)。肿瘤淋巴结转移(TNM)分期增高、发生淋巴结转移、PD-L1蛋白阳性表达是NSCLC患者不良预后的独立危险因素(P＜0.05)。结论PD-L1在NSCLC组织中表达程度上调,并且与患者肿瘤发生、发展及不良预后具有显著的关系。     

β-TrCP在乳腺癌组织中的表达及其对患者预后的影响

目的：探讨β-TrCP蛋白在乳腺癌组织中的表达及其对患者预后的影响。方法：采用免疫组化SP法检测56例乳腺癌及对应癌旁组织中β-TrCP蛋白表达情况,分析其表达与乳腺癌患者预后的关系。结果：β-TrCP蛋白在乳腺癌组织中的阳性率为71.4%（40/56）,在对应癌旁组织中的阳性率为14.3%（8/56）,差异具有统计学意义（χ2=37.333,P=0.000）;β-TrCP蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达与雌激素受体阳性（P=0.002)、孕激素受体阳性（P=0.004)、淋巴结转移（P=0.007)和TNM分期（P=0.004）有关;β-TrCP阴性表达患者5年生存率100%（16/16）,β-TrCP阳性表达患者5年生存率72.5%（29/40）,95%CI=0.559～0.837。log-rank检验差异有统计学意义（P=0.015）。Cox多因素分析提示β-TrCP蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达是乳腺癌患者预后不良的独立影响因素（RR=0.287,95%CI=0.120～0.683,P=0.005）。结论：β-TrCP蛋白在乳腺癌组织中的表达异常升高,且与乳腺癌患者不良预后相关,提示β-TrCP蛋白在乳腺癌发生发展中可能发挥重要作用。     

胰岛素样生长因子1在肺腺癌中的表达及意义

目的 研究胰岛素样生长因子(IGF)1在肺腺癌组织中的表达,探讨其与肺腺癌生存期的关系.方法 采用免疫组织化学方法检测49例肺腺癌组织(均含癌旁肺组织)中的IGF1表达.采用X2检验检测IGF1表达与临床病理学特征的关系,Log-rank检验分析IGF1表达与生存期的关系.结果 49例肺腺癌标本中IGF1表达阴性或弱阳性24例,阳性或强阳性25例.女性患者的肺腺癌组织中的IGF1阳性表达率显著高于男性患者(P=0.020),伴有局部淋巴结转移患者的肺腺癌组织中的IGF1阳性表达率显著高于无淋巴结转移患者(P=0.000),不同分化程度患者的肺腺癌组织中的IGF1阳性表达率的差异无统计学意义(P=0.284).IGF1表达阴性或弱阳性患者的中位生存时间为58.2个月(95％CI为48.4～68.0),显著长于IGF1表达阳性或强阳性患者的40.0个月(95％CI为31.3～48.4,P=0.01).结论 肺腺癌组织中的IGF1表达与性别和淋巴结转移情况有关,检测IGF1有助于肺腺癌的预后判断.     

DNA甲基转移酶1基因在人肝外胆管癌组织和细胞中的表达及意义

目的:研究DNA甲基转移酶1(DNMT1)在人肝外胆管癌组织和人胆管癌细胞系QBC939中的表达,并分析DNMT1的表达与胆管癌临床病理因素之间的关系,探讨其在胆管癌发生发展过程中的作用.方法:用免疫组织化学法检测DNMT1在24例人肝外胆管癌组织和20例慢性胆管炎组织中的阳性细胞表达率,将二者进行对比并分析其与胆管癌...     

DNMT1蛋白通过沉默MEG3基因促进视网膜母细胞瘤增殖

目的 探讨 DNMT1 蛋白是否通过沉默 MEG3 基因诱导视网膜母细胞瘤增殖。方法 通过转染 pcDNA-DNMT1 或si-DNMT1上调或干扰DNMT1的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3或si-MEG3上调或干扰MEG3的表达水平;用Western blot检测视网膜母细胞瘤细胞系中DNMT1蛋白表达量;用CCK-8法及EdU法检测细胞的增殖能力;用实时荧光定量PCR技术检测转染后的视网膜母细胞瘤细胞中MEG3表达量的变化;干扰DNMT1表达后,用甲基化特异性PCR检测MEG3基因启动子DNA甲基化水平的变化。结果 视网膜母细胞瘤SO-RB50及HXO-RB44细胞中DNMT1蛋白表达量显著升高（P<0.05）。转染了 pcDNA-DNMT1 的 HXO-RB44 细胞中 DNMT1 蛋白表达增加,细胞增殖能力增加,MEG3 表达量降低;转染了 siRNADNMT1的SO-RB50细胞DNMT1蛋白表达减少,细胞增殖能力降低,MEG3表达量增加（P<0.05）。干扰DNMT1蛋白表达后,MEG3基因启动子DNA甲基化水平降低（P<0.05）。逆转DNMT1蛋白对MEG3基因的调控后,DNMT1蛋白调控RB细胞增殖的能力减弱（P<0.05）。结论 在视网膜母细胞瘤细胞中,DNMT1蛋白表达的上调,诱导了MEG3基因启动子DNA甲基化失活,最终导致细胞异常增殖。     

甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a及DNMT3b在子宫内膜异位症中的表达

目的:检测DNA甲基化转移酶DNMT1,DNMT3a, DNMT3b在子宫内膜异位症(dendometriosis, EMs)异位内膜、在位内膜及正常对照子宫内膜的表达。方法:收集子宫内膜异位症巧克力囊肿20例为实验组,行输卵管吻合术者、宫颈病变行手术者20例为对照组,抽提总RNA,反转录制备cDNA。采用real-time RT-PCR 检测DNMT1,DNMT3a及DNMT3b基因的表达,并通过免疫荧光验证DNMTI在EMs异位内膜和在位内膜以及正常对照组子宫内膜中的表达。结果:Real-time RT-PCR检测表明DNMT1, DNMT3a和DNMT3b 在EMs异位内膜和在位内膜的表达较正常内膜低(P<0.05)。DNMT1, DNMT3a和DNMT3b在异位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.44,0.12和0.27;三者在在位内膜的表达较对照组正常内膜的表达的倍数变化分别是0.27,0.13和0.15;三者在异位内膜与在位内膜的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光检测结果表明DNMT1蛋白在EMs患者异位内膜及在位内膜中表达显著降低。结论:DNMT1,DNMT3a 及DNMT3b在EMs中的异常低表达可能导致患者表观遗传学异常,参与EMs的发病。     

HBx抑制RXRα表达对肝细胞癌DNMT3a表达的影响及初步机制研究

目的 探讨维甲酸X受体α(retinoid X receptor α,RXRα)在乙肝病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)上调肝细胞癌DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferases 3a,DNMT3a)表达中的作用及机制.方法 采用RT-PCR和Western blot检测12例正常肝组织、56例HBV阳性的肝细胞癌和癌旁组织中DNMT3a、RXRα的基因和蛋白表达变化;在培养的SMMC-7721细胞中,转染HBx基因和RXRα基因,观察对其DNMT3a表达的影响;在转染HBx基因的SMMC-7721细胞中,分别加入信号通路阻断剂,观察何种信号通路在HBx调节RXRα的表达中发挥作用.结果 与正常肝组织相比,肝癌组织与癌旁组织中DNMT3a的基因和蛋白表达量显著升高(P＜0.01),肝癌组织与癌旁组织中RXRα的基因和蛋白表达量显著降低(P＜0.01);在SMMC-7721细胞中,HBx的过表达使RXRα的蛋白表达量显著降低(P＜0.01),DNMT3a的蛋白表达量显著升高(P＜0.01),而RXRα与HBx共转染,则可降低HBx升高的DNMT3a蛋白表达量(P＜0.01);MKK/MEK抑制剂PD98059和p38 MAPK抑制剂SB203580可显著升高HBx下调的RXRα基因和蛋白表达(P＜0.01).结论 HBV产生的HBx蛋白可能通过MAPK信号通路,降低RXRα表达,引起促癌基因DNMT3a蛋白含量增加.     

胃癌中miR-148a通过DNMT1调控E-cadherin的表达

目的:研究胃癌中miR-148a与E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的相关性,并进一步探索miR-148a对E-cadherin的内在调控机制?方法:通过qRT-PCR或Western blot检测胃癌组织中E-cadherin及miR-148a的表达,使用Pearson相关分析检测E-cadherin与miR-148a表达的相关性;通过去甲基化药物处理,研究启动子异常甲基化与E-cadherin表达的关系;通过转染miR-148a mimics 提高miR-148a的表达水平,转染DNA化转移酶1(DNMT1)siRNA干扰DNMT1的表达水平,进一步研究miR-148a对E-cadherin的调控机制?结果:与正常胃黏膜相比,E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平在胃癌组织中显著下调,并与miR-148a的表达呈正相关?去甲基化药物5-aza-dC处理后,胃癌细胞MGC-803及SGC-7901中E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著上升?胃癌细胞转染miR-148a mimics后,E-cadherin的蛋白表达水平明显提高,并且干扰DNMT1的表达后,E-cadherin的蛋白表达水平也显著上调?结论:miR-148a能通过DNMT1进一步调控E-cadherin的表达?     

DNMT3b 基因在人膀胱癌组织中的表达及与临床预后的相关性

目的 探讨DNMT3b 在人膀胱癌组织的表达和意义及与膀胱癌患者术后生存期的相关性。方法 采用免疫组织化学技术（IHC）分别检测 DNMT3b 基因在 38 例手术切除人膀胱癌组织和38例相应癌旁组织的蛋白表达水平,分析其表达水平与患者年龄、性别、病理分级、肿瘤大小、T分期,淋巴转移和TNM分期临床病理参数的相关性,探讨DNMT3b对患者预后影响。结果 在38例膀胱癌组织中,DNMT3b 高表达率为 63.16%,而在对应的38例癌旁组织中高表达率为13.16%,两者间具有显著差异（P<0.05）。DNMT3b 在膀胱癌组织中高表达与患者病理分级（P=0.002）、肿瘤大小（P<0.001）、T分期（P<0.001）、淋巴转移（P=0.039）和TNM分期（P<0.001）相关,而与性别、年龄无明确相关性。多因素Logistic 回归分析发现,DNMT3b 的蛋白表达水平与肿瘤大小（P=0.008）和TNM 分级（P=0.042）相关。Kaplan-Meier生存分析显示,DNMT3b高表达组患者的总生存期明显缩短,与低表达组相比具有显著差异性（P=0.021）。结论 DNMT3b在膀胱癌组织中高表达,与病理分级、肿瘤大小、原发肿瘤范围、淋巴转移和临床分期等临床病理特征及总生存期密切相关,结果提示DNMT3b有望成为判断膀胱癌预后的标志物和肿瘤防治的新的靶点。     

MMP1,TIMP1在肺癌组织中的表达及临床生物学意义

目的 :研究基质金属蛋白酶 1(MMP 1)和基质金属蛋白酶组织抑制剂 1(TIMP 1)在肺癌组织中表达及其临床生物学意义。方法 :常规石蜡包埋切片行SABC免疫组织化学检测 4 6例肺癌组织中MMP 1和TIMP 1的表达。结果 :4 6例肺癌和 15例正常肺组织中MMP1表达阳性的例数分别为 2 4例 (5 2 .2 % )和 3例 (2 0 % ) ,两者无相关性 ;TIMP1在正常肺组织和肺癌中的表达分别为 12例 (80 % )和 19例 (41.3% ) ,肺癌明显低于正常肺组织 ;MMP1和TIMP1在肺癌中表达与其分化程度、分期、淋巴结转移有明显相关性 ,且MMP1与TIMP1的表达呈明显负相关。结论 :MMP1和TIMP1蛋白的表达与肺癌的发生发展、生物学行为、侵袭和转移有关 ,可作为重要的生物学标记物