外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中CD36表达的影响

为研究抑癌基因Rb基因在U937细胞泡沫化过程中的表达，应用重组腺病毒载体导入外源性Rb基因。采用逆转录聚合酶链反应和流式细胞术检测氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中清道夫受体CD36和Rb基因的表达和外源性Rb基因导入U937细胞后CD36和Rb基因的表达。结果发现，氧化型低密度脂蛋白致U937细胞泡沫化过程中，Rb mRNA和蛋白的表达随作用时间延长呈下调趋势，CD36 mRNA和蛋白的表达则呈上调趋势；随着外源性Rb导入U937细胞并表达，CD36表达呈下调趋势。结果提示，外源性Rb基因的导入可以下调清道夫受体CD36的表达。     

外源性Rb基因对神经细胞衰老的影响

目的　观察外源性 Rb基因对神经细胞衰老的影响 ,并探讨 Rb基因对神经细胞 P2 1基因表达的调控。方法　用外源性 Rb基因重组腺病毒载体感染体外培养的胚胎大鼠神经细胞 ,以β-半乳糖苷酶染色观察神经细胞的衰老变化 ,用免疫组化法测定 P2 1蛋白表达水平。结果　外源性Rb基因导入神经细胞后 ,P2 1蛋白水平显著增高 ,与衰老相关的 β-半乳糖苷酶表达也增加。结论　 Rb基因可能通过上调 P2 1基因表达促进神经细胞衰老。     

视网膜母细胞瘤中P^53蛋白的免疫组化研究

为探讨P^53基因与视网膜母细胞瘤（Rb）发病的关系,应用免疫组化法检测了49例Rb患儿肿瘤组织中P^53基因蛋白的表达状况,并与正常视网膜组织进行对照。结果显示,正常视网膜及Rb组织中均无P^53阳性染色。提示P^53基因突变与人类原发性Rb的发病无关。     

陕西地区老年动脉粥样硬化群体Rb基因XbaI酶切位点多态性研究

目的 :探讨陕西地区老年动脉粥样硬化 （AS）群体 Rb基因内含子 17多态性分布 ,及其该位点与 AS遗传易感性的关系。方法 :应用 PCR对 10 0例老年 AS患者及 10 0例对照组老年人 Rb基因内含子 17Xba I酶切位点的限制性片段长度多态性 （RFL P）进行对比分析。结果 :在 AS组及对照组中该位点共检出 2种等位基因片段 :945 bp（S1 ）及 6 30 bp加 315 bp（S2 ） . AS组基因频率 S1:0 .46 ,S2 :0 .5 4,对照组基因频率 S1 :0 .42 ,S2 :0 .5 8;二者的等位基因频率无显著差异。结论 :Rb基因内含子 17Xba I酶切位点在 AS群体中稳定性较高 ,不易发生突变 ,对 AS的形成、发展可能影响较小     

松花粉对衰老大鼠睾丸p53/Rb细胞转导通路相关基因和蛋白表达的影响

目的 通过检测p53、Rb、p16、p19、p21在D-半乳糖所致衰老大鼠睾丸组织的表达,探讨松花粉对睾丸组织p53/Rb细胞传导通路的影响.方法 采用RT-PCR检测p53、Rb基因在睾丸的表达;Westem印迹检测大鼠睾丸磷酸化Rb(p-Rb)、p16、p19、p21蛋白表达.结果 模型组睾丸组织p53、Rb基因和p16、p19、p21蛋白的表达明显高于正常组(P<0.01);p-Rb蛋白表达显著低于正常组(P<0.01).而松花粉能降低p53、Rb基因和p16、p19、p21蛋白的表达提高p-Rb的表达,且明显好于阳性对照组(P<0.05).结论 松花粉通过调节睾丸组织p53/Rb细胞传导通路相关蛋白及基因的表达,起到延缓睾丸组织衰老的作用.     

Cdc42，Rb基因在哈萨克族食管癌中的表达及其意义的研究

目的 研究Cdc42和Rb基因在哈萨克族食管癌组织中的表达.方法 采用逆转录多聚酶链反应技术检测Cdc42和Rb基因在20例食管癌组织及其相应癌旁组织中的表达.结果 Cdc42基因在20例癌组织中有15例表达阳性,占75%,20例癌旁组织中有11例表达,占55%,其中癌组织表达量明显高于癌旁组织的有7例,占35%.Rb基因在20例癌组织中有13例表达阳性,占65%,20例癌旁组织中有9例表达,占45%,其中癌组织表达量明显高于癌旁组织的有10例,占50%,癌旁组织表达量高于癌组织的有6例,占30%.结论 Cdc42基因表达的改变,提示它们所参与的细胞凋亡及细胞周期过程的变化在哈萨克族食管癌的发生、发展过程中起了一定的作用.抑癌基因Rb在哈萨克族食管癌的发生发展中与其在其他民族中的作用可能有所不同.     

急性淋巴细胞白血病患者Rb蛋白的表达及意义

Rb基因是一种抑癌基因 ,Rb基因所表达的产物称为 Rb蛋白。目前 ,已在多种恶性肿瘤中发现有 Rb基因的缺失、突变 ,以及 Rb蛋白的表达减低。白血病是起源于造血系统的一类恶性疾病 ,其病因尚不完全清楚。本文拟就 Rb蛋白在急性淋巴细胞白血病中的表达及意义进行探讨。临床资料 :急性淋巴细胞白血病患者 2 8例 ,均经骨髓穿刺细胞学检查确诊 ,其中男 19例、女 9例 ,年龄 5 1～ 82岁。非白血病患者 2 6例 ,男 15例、女 11例 ,年龄 5 0～ 6 2岁。白血病患者均采用 VDCP方案化疗一疗程。方法　非白血病患者、白血病患者化疗前及后 2 0天各抽取…     

MTS1／P16、P53、Rb和增殖细胞核心抗原表达与胃癌临床病理特征的关系

胃癌的发生、发展是非常复杂的病变过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的表达和调控。MTS1／P16、P53、Rb基因被认为对多种肿瘤细胞的增殖和转移有负性调节和抑制作用，增殖细胞核心抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表达与细胞的增殖状态密切相关。本研究采用S—P免疫组化方法，以胃癌及其癌旁组织连续切片同步进行了P16、P53、Rb蛋白产物和PCNA的检测，分析它们在胃癌形成过程中的变化规律和临床病理特征的相互关系。     

MCM2和Rb蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨微小染色体维持蛋白2（MCM2）和视网膜母细胞瘤易感基因（Rb）在胃癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测MCM2和Rb蛋白在80份胃癌组织（胃癌组）、30份非典型增生组织（增生组）及20份正常胃黏膜（正常组）中的表达,以标记指数（LI）量化其阳性表达,并分析两者表达的相关性及其与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组、增生组MCM2蛋白的LI明显高于正常组,Rb蛋白的LI明显低于正常组,P均〈0.05;MCM2和Rb蛋白表达与胃癌临床分期、浆膜浸润、术后复发、肝转移及淋巴结转移密切相关,与肿瘤大小及组织学类型无明显相关。胃癌组织中MCM2和Rb的LI表达呈显著负相关。结论MCM2表达升高和Rb蛋白表达下降与胃癌的发生、发展密切相关,检测MCM2和Rb有助于判断胃癌恶性程度及预后。     

肿瘤抑制基因P53-Rb系统变化与食管癌变关系研究及展望

食管癌变多阶段演进过程中关键的分子变化事件及其相互关系,特别是这些变化在食管癌变中的生物学意义尚不十分清楚。我们及其他实验室最近的研究提示:食管癌变演进是多种基因变化先后累积或叠加综合作用的结果。肿瘤抑制基因p53-Rb系统变化是河南食管癌高发区人群食管癌变过程中发生频率最高的分子生物学改变;食管癌组织同时发生p53-Rb基因功能丧失的频率约为59％;p53的变化主要为基因突变和蛋白聚集,Rb的主要变化为基因丢失和(或)杂合缺失(LOH)。如果把p16和p15的变化归类为Rb系统改变,将p14归类为p53系统改变,那么,Rb和p53通路变化频率约为91％。这些研究结果提示,p53-Rb系统变化可能是河南食管癌高发区人群食管癌变最重要的分子机制。     

Rb/E2F1调控途径在新疆哈萨克族食管鳞癌发生中的作用

目的:探讨Rb基因与转录因子E2F1在新疆哈萨克族食管鳞癌中的表达及临床意义.方法:应用RT-PCR法对48例新疆哈萨克族食管鳞癌组织及其配对的癌旁正常组织进行Rb和E2F1表达检测,分析Rb/E2F1通路与新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展之间的关系.结果:新疆哈萨克族食管鳞癌组织中Rb的阳性表达高于癌旁正常组织(64.6%,43.8%)差异有统计学意义(P<0.05);转录因子E2F1的阳性表达率与癌旁正常组织阳性表达率(70.8%,75%)差异无统计学意义(P>0.05).Rb、E2F1的表达与组织学分级及临床分期无关(P>0.05).Rb阳性表达强度与E2F1的阳性表达强度之间呈正相关(r=0.867,P<0.05).结论:Rb的高表达伴随新疆哈萨克族食管鳞癌的发生,E2F1可能作用于食管癌发生的早期阶段,二者在新疆哈萨克族食管鳞癌的发生发展中起拮抗作用.     

胃癌组织中cyclin D1 P16和Rb蛋白表达的意义

正常细胞周期中,cyclin D1(细胞周期蛋白D1)与CDK4(细胞周期蛋白激酶)结合形成复合物促进细胞分裂增殖,p16和Rb抑制细胞分裂,从而保证机体细胞的正常生长.当这一促增生系统成分过表达以及抑制增生系统成分缺失或失活都会导致细胞增殖失控而发生癌变.研究表明许多肿瘤中均有cyclinD1的过度表达及p16 Rb基因的缺失[1-5].我们用免疫组化方法检测了30例胃癌标本中cyclin D1,P16和Rb蛋白的表达,并与手术切缘正常粘膜组织进行比较,旨在探讨三者的相关性及其在胃癌形成中的作用.     

细胞凋亡及cyclinD1、Rb基因与乳腺癌生物学行为的相关性

我们对1983～1992年救治的、有随访资料的86例乳腺癌和24例乳腺良性病变行细胞凋亡、雌激素受体(ER)和cyclinD1、Rb基因产物免疫组化染色,末端缺口标记凋亡细胞(TUNEL法),探讨细胞凋亡水平和cyclinD1、Rb基因产物表达与乳腺癌生物学行为的关系.现报告如下.     

胃癌及癌前病变组织中幽门螺杆菌感染与视网膜母细胞瘤基因表达的相关性研究

目的 探讨胃癌和胃黏膜癌前病变组织中幽门螺杆菌(Hp)感染和视网膜母细胞瘤基因(Rb基因)的表达及两者的相关性.方法 采用免疫组化S-P法检测19例慢性浅表性胃炎(CG)、20例胃黏膜不典型增生(Dys)和41例胃癌组织标本(Gc)中Rb蛋白的表达,并采用War-thin-Starry细菌染色及免疫组化S-P法检测Hp感染率.结果 慢性浅表性胃炎Hp感染率(36.8%)明显低于不典型增生组(70.0%)和胃癌组(65.9%),P<0.05.胃癌中Rb阳性表达率(48.8%)明显低于胃炎组(94.7%)及不典型增生组(80.0%),P<0.05.胃癌中Hp感染与Rb阳性表达呈明显负相关(P<0.01).结论 Hp感染可能在胃癌发生中起重要作用,Hp感染可能通过诱导Rb基因突变从而导致胃癌的发生.     

变性高压液相色谱法分析肺癌患者痰标本Rb2/p130、p53基因突变

目的 探讨变性高压液相色谱(DHPLC)法分析肺癌患者痰标本Rb2／p130和p53突变及其作为分子诊断标记的可行性。方法 DHPLC法分析47例患者痰标本[35例肺癌(男22例,女13例,年龄16～81岁;其中腺癌17例,鳞癌12例,小细胞癌4例,肺泡癌1例,腺鳞癌1例),12例对照(男7例,女5例,年龄38～68岁;其中结核1例,肺炎1例,支气管扩张症2例,肺泡蛋白沉积症1例,结节病1例,多发性软骨炎1例,慢性阻塞性肺疾病5例)]Rb2／p130基因Exon19～22和p53基因Exon5～9突变。结果 肺癌患者Rb2／p130突变检出率为22．86％(8／35),p53突变检出率为28．57％(10／35),对照者均未检出1例(P=0．049,P=0．046)。作为肺癌诊断分子标记,Rb2／p130特异度100％,灵敏度22．86％;p53特异度100％,灵敏度28．57％;联合检测Rb2／p130和p53特异度100％,灵敏度51．43％。结论 联合分析痰标本Rb2／p130和p53基因突变可提高诊断的灵敏度。     

siRNA介导的E2F-1基因沉默对胃癌细胞MGC803中Rb蛋白表达水平的影响

目的应用RNA干扰技术研究E2F-1基因沉默在人胃癌MGC803细胞中对Rb蛋白表达的影响。方法将重组质粒E2F-1-siRNA转染MGC803细胞,筛选稳定株,利用RT-PCR检测转染前后细胞E2F-1mRNA表达水平,并通过蛋白免疫印记法(Western blot)检测各组细胞E2F-1蛋白的表达水平来验证质粒转入胃癌细胞的情况。采用Western blot检测三组细胞中总Rb蛋白和磷酸化Rb蛋白的表达情况,计算出非磷酸化Rb蛋白表达情况,统计各组间的差异。结果重组质粒E2F-1-siRNA成功转入胃癌细胞中;有效抑制了E2F-1 mRNA的表达,E2F-1蛋白水平显著下降,与阴性对照组及未转染组相比分别降低了83.2%和84.6%,去磷酸化Rb蛋白分别增加了61.22%(P0.05)和66.60%(P0.05),差异有统计学意义。结论沉默表达E2F-1基因后,可以有效降低Rb蛋白的水平,促进其活化形式去磷酸化Rb蛋白的产生。     

INK4a/ARF基因与结肠肿瘤

真核细胞按顺序进行的分裂是由各种活性蛋白复合物所启动的一系列生命周期活动。近年来的研究表明,细胞周期与细胞癌变的关系密切。其中,癌基因或抑癌基因对细胞周期正负调节的失控是细胞癌变的重要原因之一。细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)、抑制蛋白基因(INK48)及其可变读框基因(ARF),是继p53和Rb等数十个抑癌基因之后发现的专职调控细胞周期的抑癌基因。它们与结肠肿瘤之间的关系已倍受关注。     

P16、Rb和P53在喉鳞癌组织中的表达及意义

目的探讨抑癌基因P16、Rb和P53蛋白表达与喉鳞癌发生的关系及三者的相关性.方法采用免疫组化(SABC)方法检测80例喉鳞癌患者癌组织及癌旁组织(30例),30例声带息肉患者手术标本中抑癌基因P16、Rb和P53的表达情况.结果声带息肉、癌旁组织及癌组织P53表达率分别为6.66%、46.6%和66.2%(P＜0.0001);P16表达率分别为86.6%、63.3%和41.2%(P＜0.0001);Rb表达率分别为80.3%、66.6%和52.5%(P＜0.05).P53蛋白表达与临床分期、癌细胞分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05).癌组织中P16和Rb蛋白的表达呈负相关(P＜0.05).P16和Rb的表达与临床分期、细胞分化程度和淋巴结转移无关.结论 P16、Rb和P53的异常表达与喉鳞癌的发生与进展有关;P53可作为判定喉鳞癌患者预后的一个指标.     

食管癌变过程中CyclinB1、CDK1及细胞周期调控因子p53、Rb的表达及意义

目的:探讨食管癌变过程中细胞周期蛋白B1(CyclinB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinases 1,CDK1)的变化及其相关细胞周期调控因子p53、Rb的表达及相互关系.方法:选取35例食管鳞癌组织(同一个病例同时存在鳞癌、上皮内瘤变组织及正常食管黏膜),采用组织芯片及免疫组织化学En Vision二步法,分别观察食管鳞状上皮癌变各阶段Cyclin B1、CDK1、p53和Rb的蛋白表达变化并分析其相互关系.结果:(1)Cyclin B1、CDK1与p53在食管鳞癌组中均呈高表达,且与正常上皮、低级别及高级别上皮内瘤变组间比较均有统计学差异(P0.05);(2)Rb除鳞癌组与高级别上皮内瘤变组表达率接近外(P0.05),其他各组间表达率均具有显著统计学差异(P0.01);(3)Cyclin B1、CDK1、p53及Rb在食管鳞癌组中的表达均呈显著正相关(P0.01).结论:(1)在食管癌变的过程中,Cyclin B1、CDK1、p53及Rb基因蛋白过表达并协同作用;(2)Rb蛋白的过表达参与了食管上皮内瘤变的演进过程,是食管癌变的早期事件;(3)联合检测Cyclin B1、CDK1、p53和Rb蛋白表达将有助于食管癌的早期诊断及病变发展的评估.     

P16、Rb和PCNA在非小细胞肺癌的表达及临床意义

目的检测P16、Rb和PCNA在非小细胞肺癌中表达的改变，并探讨其临床意义。方法收集88例NSCLC手术切除标本存档蜡块，其中鳞癌63例，腺癌25例；Ⅰ～Ⅱ期48例，Ⅲ～Ⅳ期40例。取正常肺组织20例作对照。应用免疫组织化学SABC法检测全部标本中P16、Rb、PCNA的表达情况，并计数PCNA增殖指数（PI）。结果P16蛋白表达缺失率为51．1％（45／88），Rh表达缺失率为21．6％（19／88），P16与Rb表达呈负相关；Rb表达缺失表现为较高的细胞增殖活性，Rb（＋）与Rb（-）组PCNA增殖指数分别为30．8±17．1，58．1±19．2，组间差异有显著性（P〈0．01），P16（＋）与P16（-）组间PCNA增殖指数分别为39．5±18．7，34．0±22．5，差异无显著性（P〉0．05）。结论p16基因改变在NSCLC发生中起重要作用，是NSCLC早期诊断的有用指标。Rh基因改变不是NSCLC发生发展的重要机制，P16与Rb表达呈负相关，P16和Rh作用于细胞周期和肿瘤抑制的单一途径，存在负反馈回路。Rb表达缺失表现为较高的细胞增殖活性，可能在预后估计上有一定意义。