胰岛素对人成骨细胞胰岛素受体底物-2的作用

胰岛素受体底物(IRS)是胰岛素受体、胰岛素样生长因子 1受体酪氨酸蛋白激酶的主要底物 [1]。IRS 2在糖尿病的发生和发展中起着一定作用,它调节胰岛β细胞数目及功能 [2]。IRS 2还是骨代谢的调节因子,在胰岛素、胰岛素样生长因子 1等骨代谢因子的信号传递中起重要作用,IRS 2     

雌二醇对成骨细胞护骨素基因表达的影响

目的 研究在MG－63细胞和成人成骨细胞培养的不同阶段,雌激素对护骨素（OPG）基因mRNA表达的影响,探讨雌激素对成骨细胞的作用机制。方法 在细胞培养的不同时间,测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙素（OC）含量和进行Van Gieson胶原染色,以确定细胞培养的增殖、成熟、矿化,于成熟阶段用17β－雌二醇（E2）对培养细胞进行处理,用半定量RT－PCR技术测定雌二醇对成骨细胞OPG基因mRNA表达的影响。结果 ALP活性、骨钙素含量及胶原染色均表明,细胞培养汇片后12天达到成熟。正常成人髂骨分离的成骨细胞（HOB）及成骨肉瘤细胞株MG－63均能表达OPG,且表达量与培养的时程有关。培养12天时,两各OPG基因mRNA表达均达最高峰（P＜0．01）。10^-8mol/L的E2能使MG－63细胞OPG基因mRNA的表达至基础值的10倍（P＜0．001）,HOB的OPG基因mRNA表达增加至基础值的7－8倍（P＜0．01）。结论 OPG在成骨细胞表达。雌激素使成骨细胞OPG基因mRNA表达的增加是雌激素缺乏导致骨质疏松的重要机制之一。     

吸烟对大鼠骨骼肌胰岛素受体底物2基因表达的影响

应用RT-PCR和免疫组化检测被动吸烟大鼠骨骼肌胰岛素受体底物2(IRS-2)mRNA和蛋白表达变化,结果显示吸烟使正常组、高脂饲养组大鼠骨骼肌IRS-2 mRNA(0.27±0.02 vs 0.41±0.25,0.40±0.04 vs 0.51±0.02)及蛋白(2.91±0.42 vs 4.90±0.29,2.43 vs 0.36±3.80+0.30)表达显著降低(均P<0.01).糖尿病吸烟组大鼠与对照组则差异无统计学意义(P>0.05),提示IRS-2基因表达的变化可能在吸烟致大鼠胰岛素抵抗发生机制中起一定的作用.     

胰岛素受体底物—2和2型糖尿病

胰岛素受体底物－2（IRS－2）作为接头蛋白,主要连接胰岛素受体和含SH2区蛋白,介导胰岛素、胰岛素样生长因子－1等信号通道,而调节细胞新陈代谢、生长和分化。剔除IRS－2基因的纯合子动物（IRS－2^-/-)具有2型糖尿病的全部特征,因此IRS－2基因被确定为2型糖尿病的候选基因。人类IRS－2基因有两个内含子,孕酮可以增强IRS－2的转录。     

胰岛素受体底物及其基因多态性与胰岛素抵抗

胰岛素受体底物(IRS)是胰岛素信息传递的重要介质。IRS-1主要介导胰岛素在外周组织的效应,调节β细胞分泌;IRS-2主要介导胰岛素在肝脏的作用,对β细胞发育有重要影响;IRS-3、IRS-4的作用尚存争论。IRS-1、IRS-2基因多态性可致肝脏、外周组织及β细胞胰岛素抵抗;IRS-3、IRS-4基因多态性尚缺乏相关的报道。     

胰岛素受体底物-2和2型糖尿病

胰岛素受体底物 2 (IRS 2 )作为接头蛋白 ,主要连接胰岛素受体和含SH2区蛋白 ,介导胰岛素、胰岛素样生长因子 1等信号通道 ,而调节细胞新陈代谢、生长和分化。剔除IRS 2基因的纯合子动物 (IRS 2 / )具有 2型糖尿病的全部特征 ,因此IRS 2基因被确定为 2型糖尿病的候选基因。人类IRS 2基因有两个内含子 ,孕酮可以增强IRS 2的转录。     

胰岛素受体底物及其基因多态性与胰岛素抵抗

胰岛素受体底物(IRS)是胰岛素信息传递的重要介质。IRS-1主要介导胰岛素在外周组织的效应，调节β细胞分泌；IRS-2主要介导胰岛素在肝脏的作用，对β细胞发育有重要影响；IRS-3、IRS-4的作用尚存争论。IRS-1、IRS-2基因多态性可致肝脏、外周组织及β细胞胰岛素抵抗；IRS-3、IRS-4基因多态性尚缺乏相关的报道。     

胰岛素对大鼠骨骼肌细胞脂联素受体基因表达的影响

目的了解体外胰岛素对原代培养大鼠骨骼肌细胞脂联素受体1表达的影响。方法体外原代培养骨骼肌细胞,应用SYBRGreenⅠ染料建立一种快速、可靠的实时定量PCR,对其主要要素进行优化。观察不同胰岛素浓度不同作用时间下,大鼠骨骼肌细胞脂联素受体基因表达水平的动态变化。结果建立敏感、特异、快速检测脂联素受体1mRNA的实时定量PCR方法,随着胰岛素浓度的增加,脂联素受体1表达逐渐降低。在较低浓度（胰岛素浓度〈1nmol/L）时,脂联素受体1表达的降低无统计学意义,当胰岛素浓度增加到10nmol/L及以上时,骨骼肌细胞脂联素受体1表达的降低有统计学意义（P〈0.05）,这种抑制作用1h后出现,24h后达到高峰。结论成功地建立SYBRGreenⅠ实时定量PCR检测脂联素受体基因的表达方法,体外高胰岛素对骨骼肌细胞脂联素受体1mRNA表达有抑制作用,并呈时间和剂量依赖性。     

成骨细胞的雌激素受体

本文介绍雌激素在骨代谢中的重要作用,着重阐述雌激素受体对其作用机制的意义。文章还较详细讨论该受体的发现、特征、生物活性及mRNA转录等内容。     

胰岛素受体底物-1与骨代谢

胰岛素受体底物(insulin receptor substrate,IRS)是胰岛素信号传导通路中受体后水平的重要信号蛋白。IRS-1对骨骼生长、骨转换以及骨折愈合等均具有重要作用,为代谢性骨病和骨质疏松的防治提供了新思路。     

体外培养人成骨细胞OPG、ODF基因表达与增龄相关

选择≤ 5岁 ,3 0～ 40岁 ,5 0～ 60岁 ,≥ 70岁四个年龄组的松质骨进行成骨细胞培养 ,第二代细胞培养至 14天用RT PCR检测骨保护蛋白 (OPG)、破骨细胞分化因子 (ODF)基因表达 ,结果显示不同年龄组人成骨细胞OPGmRNA、ODFmRNA表达量与年龄明显相关     

雌二醇对人成骨细胞护骨素、护骨素配体及其相关因子的调节

目的 观察17β雌二醇(17β—E2)和雌激素受体拮抗剂IC1182780(ICI)对人成骨细胞(HOB)表达护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及其相关因子[肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、巨噬细胞集落刺激因子(TRAIL、M-CSF)]的影响，探讨它们在骨转换过程中的重要作用。方法 接种人成骨细胞，再分别用不同浓度17β-E2和ICI干预，用RT-PCR法检测基因表达情况，用Western blot分析法检测蛋白表达情况。结果 (1)17β-E2能上调人成骨细胞中OPG的表达，下调OPGL、M-CSF及TRAIL的表达；(2)ICI对被检基因有不同的调节活性，与17β-E2合用时，表现出对后者的拮抗作用或协同作用。结论 雌激素缺乏时，成骨细胞中OPG的表达减少，而OPGL、M—CSF和TRAIL等细胞因子的表达增加，使破骨细胞的数量和活性增加，导致骨吸收增强和骨量丢失，这可能是绝经后骨质疏松症的重要的发病机制之一；ICI在对雌激素受体调节中，具有拮抗和激动的双重效应，属一种选择性雌激素受体调节剂。     

游离脂肪酸抑制大鼠肝细胞胰岛素受体和胰岛素受体底物-1酪氨酸磷酸化

目的　探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响胰岛素在肝细胞内的信号传导。方法　分离培养Ｗｉｓｔａｒ 大鼠肝细胞,以软脂酸（０ ．２５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ） 或油酸（０．１２５ ｍ ｍｏｌ／Ｌ） 与肝细胞共同孵育６ 、１２ 、２４ 小时,提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹方法检测胰岛素受体和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１） 的蛋白水平,同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体β亚单位和ＩＲＳ１ 的酪氨酸磷酸化程度。结果　（１） 软脂酸和油酸实验组肝细胞的胰岛素受体蛋白表达量在各个时间点均无改变。（２） 肝细胞与软脂酸和油酸共同孵育１２ 和２４ 小时后胰岛素受体β亚单位的酪氨酸磷酸化显著降低（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。（３） 肝细胞与软脂酸或油酸共同孵育６ 小时,ＩＲＳ１ 蛋白量无明显变化,而１２ 和２４ 小时后则显著降低。（４）软脂酸和油酸实验组的肝细胞在胰岛素刺激后ＩＲＳ１ 的酪氨酸磷酸化在各个时间点均显著降低。结论　游离脂肪酸可能通过抑制ＩＲＳ１蛋白表达、胰岛素受体和ＩＲＳ１ 的酪氨酸磷酸化阻滞胰岛素信号传导,引起胰岛素抵抗。     

Effects of estradiol and progesterone on the proinflammatory cytokine production by mononuclear cells from patients with chronic hepatitis C

AIM：To investigate the effects of estradiol （E2） and progesterone on the unstimulated and oxidative stressstimulated production of tumor necrosis factor （TNF）-α, interleukin （IL）-1β, IL-8, and macrophage chemotactic protein （MCP）-1 by peripheral blood mononuclear cells （PBMCs） from patients with chronic hepatitis C and healthy controls. METHODS：The PBMCs were separated from agematched 72 males and 71 females with and without chronic hepatitis C, who were divided into two groups based on a mean menopausal age of 50 years. Oxidative stress was induced by hydrogen peroxide in the cells incubated in serum-free media. Cytokines in the culture supernatant were measured by an enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS：The highest levels of the spontaneous production of TNF-α, IL-1β, IL-8, and MCP-1 by the unstimulated PBMCs were in the older male patients with chronic hepatitis C and the lowest levels were in the premenopausal female healthy controls. E2 inhibited the cytokine production by the unstimulated PBMCs from the older male and post-menopausal female patients, which was further stimulated by progesterone. The exposure to hydrogen peroxide in the PBMCs from the younger male and pre-menopausal female healthy subjects induced the production of cytokines. The change rates of the hydrogen peroxide-stimulated cytokine production were suppressed by E2 and enhanced by progesterone. CONCLUSION：These findings suggest that E2 may play a favorable role in the course of persistent liver injury by preventing the accumulation of monocytes-macrophages and by inhibiting proinflammatory cytokine production, whereas progesterone may counteract the favorable E2 effects.     

人胰岛素基因在NIH3T3细胞中的基因转染和表达的研究

人胰岛素基因（PCMV．INS）经壳聚糖中介，成功地转染到NIH3T3细胞并证明表达有效。这有助于1型糖尿病基因治疗的研究。     

体外培养人成骨细胞Ⅰ型胶原合成与表达的增龄性改变

目的探讨体外培养不同年龄组人成骨细胞Ⅰ型胶原（COL-1）表达的增龄性改变. 方法选择＜5岁、30～40岁、50～60岁及70～79岁4个年龄组骨折患者的松质骨,用1：1 DMEM-Ham F-12培养液进行培养.第2代细胞培养至7 d和13 d,分别定量留取培养48 h的条件培养液,第2代细胞一部分经诱导培养至14 d进行电镜观察,另一部分培养至14 d抽提细胞内总RNA,用逆转录聚合酶链反应方法半定量检测COL-1基因表达,并进行各年龄组比较. 结果成骨细胞经体外诱导培养后透射电镜下观察,细胞外基质中可见大量原胶原;细胞培养至7 d和13 d Ⅰ型前胶原羧基端前肽（PICP）检测值均随年龄增长逐渐降低,与年龄之间呈显著负相关（男性7 d： r=-0.503, P＜0.05, 13 d： r=-0.662, P＜0.01; 女性7 d： r=-0.658, P＜0.01, 13 d： r=-0.770, P＜0.01）;各年龄组成骨细胞均检测到COL-1基因mRNA表达,表达量＜5岁组较低,30～40岁组最高,之后随年龄增长逐渐降低,其表达量和年龄呈显著正相关（男性r=0.331,女性r= 0.327,均为P＜0.05）,性别间差异无统计学意义. 结论体外培养人成骨细胞可合成原胶原,PICP分泌随增龄而降低,不同年龄组人成骨细胞均表达COL-1 mRNA,30～40岁后表达量随年龄增长而降低.     

雌二醇与抗坏血酸对成骨细胞的协同作用

目的研究雌二醇(17β-estradiol,E2)和抗坏血酸(VitC)对成骨肉瘤样细胞株MG-63的协同作用,从而探讨E2治疗骨质疏松的作用机制.方法利用10-8mol/L的E2与100μg/ml的VitC单独或共同处理成骨样细胞株MG-63,3H掺入法(3H-TdR)测定细胞的增殖,α-磷酸奈酚法测细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性的变化,半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测I型胶原(collagenI)、基质金属蛋白酶(matrix     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞护骨素、RANKL表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、核因子-kB受体活化因子配体(RANKL)mRNA表达的影响。方法用酶消化法分离24h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养。在培养液中加入不同浓度的淫羊藿甙(10~(10)～10~(14)mol/L),培养48h后,抽提总RNA,采用半定量RT-PCR法检测成骨细胞中OPG和RANKL mRNA表达的变化。结果淫羊藿甙可明显促进成骨细胞OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达,且呈浓度依赖性,均以10~(-7)mol/L时作用最显著(P＜0.05)。预先用淫羊藿甙干预成骨细胞,可逆转地塞米松的降低OPG mRNA(0.570±0.093vs 1.083±0.081)、升高RANKL mRNA(1.079±0.050vs 0.718±0.082)的作用(均P＜0.05)。结论淫羊藿甙可以上调OPG基因表达,下调RANKL基因表达,从而调节骨吸收,这可能是淫羊藿甙防治骨质疏松症的重要机制之一。     

肝型丙酮酸激酶启动子与人胰岛素基因逆转录病毒介导感染pT67、HepG2细胞的蛋白质表达

目的检测新构建肝型丙酮酸激酶启动子（LPKp）与人胰岛素基因（hInsg）逆转录病毒表达载体（pM54,LPKp-hInsg）在pT67、HepG2细胞的表达情况,为基因治疗或基因结合干细胞治疗糖尿病寻找新的优化生物载体。方法（1）限制酶切父、母本质粒p54、pMDN-SIN,取相关片段构建含人Ins基因一逆转录病毒载体pM54（pMDN-SIN＋p54;LPKp-hInsg）;pM54扩增、纯化、酶切鉴定;（2）脂质体FuGENE6转染pM54质粒进入pT67、PhoenixE和3T3细胞系,同时转染pCMVβGal和父本质粒p54做对照;（3）制备转染后细胞培养拟逆转录病毒上清液;（4）用转染后细胞培养上清液旋转感染pT67、HepG2细胞;（5）ELISA法检测转染、感染后细胞培养上清液Ins含量。结果酶切鉴定质粒与构建预期相符;ELISA法检测出转染、感染上清液中均含较高水平Ins。对照结果均为阴性。结论LPKp-hlnsg基因逆转录病毒表达载体pM54构建成功。人胰岛素基因逆转录病毒介导旋转感染pT67等细胞,目的蛋白Ins获得了预期的表达。实验为基因治疗或基因结合于细胞治疗糖尿病的进一步相关研究奠定了基础。