过氧化物酶体增殖物激活受体γ在胶质瘤中的表达

目的 探讨胶质瘤组织及细胞株中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达及其意义.方法 应用免疫组化检测40例胶质瘤中PPARγ蛋白的表达;Western blotting检测3株胶质瘤细胞SWO-38、U251和SHG-44中PPARγ及神经胶质酸性蛋白蛋白的表达;RT-PCR检测3株胶质瘤细胞PPARγ mRNA的表达.结果 PPARγ在胶质瘤组织中阳性表达率为37.5%,与肿瘤的分化程度无明显相关性(P=0.154);PPARγ蛋白及mRNA在SWO-38和U251中表达,而SHG-44不表达:神经胶质酸性蛋白则在SHG-44中高表达.结论 PPARγ可能与胶质瘤的发生相关,可为胶质瘤治疗提供新的靶点.     

Survivin在2株人脑胶质瘤细胞系中的表达

目的:探讨凋亡蛋白抑制因子(IAP)Survivin mRNA及蛋白在人脑胶质瘤细胞系BT325和SHG-44中的表达水平及意义. 方法:采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法分别检测Survivin mRNA及蛋白在BT325和SHG-44细胞系中的表达水平. 结果:BT325细胞高表达Survivin mRNA及蛋白,并表达少量的Survivin剪接变异体Survivin-2B,Survivin蛋白定位于瘤细胞的胞质. Survivin mRNA及蛋白在SHG-44细胞中均无表达. 结论:Survivin对于维持BT325细胞株的生物学特性具有重要作用;BT325和SHG-44细胞株可分别作为Survivin基因抑制和基因转移研究的良好细胞模型.     

CAPE对神经胶质瘤生长抑制作用研究

目的:探讨咖啡酸苯乙酯(Caffeic acid phenethyl ester,CAPE)在人神经胶质瘤巾的治疗作用.方法:建立裸鼠胶质瘤模型,观察CAPE在体内对肿瘤的影响.运用实时荧光定量PCR、Western blotting检测CAPE对胶质瘤细胞株U251异常Wnt/β-catenin通路及靶基因c-myc的影响.结果:通过对荷瘤鼠模型的观察,发现口服GAPE可以抑制神经胶质瘤的生长.CAPE可以抑制β-catenin基因mRNA及蛋白的表达,下游靶基因c-myc的mRNA及蛋白表达也相应降低.结论:CAPE可以抑制神经胶质瘤异常Wnt/β-catenin通路中β-catenin基因及c-myc基因的表达,对神经胶质瘤的生长有抑制作用.     

Mir-148a 慢病毒表达载体构建及其稳定表达细胞系的筛选

目的：构建人源性 mir-148a 慢病毒过表达载体,并筛选过表达 mir-148a 稳定细胞株 U251、U87、BT325,鉴定 mir-148a 在稳定细胞系中的表达水平。方法：设计并合成 mir-148a 上下游引物,PCR 扩增 mir-148a基因片段,经过酶切后克隆至慢病毒载体上,构建 pGC-FU-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin-mir-148a 过表达载体,在293T 细胞中与 pHelper1.0、pHelper2.0包装产生慢病毒,测定 mir-148a 慢病毒滴度。用构建好的慢病毒感染神经胶质瘤细胞系 U251、U87、BT325,用嘌呤霉素筛选,筛选稳定细胞系后 qRT-PCR 检测 mir-148a 的表达情况。结果：测序结果证明 mir-148a 慢病毒载体构建成功并获得了相应的慢病毒。嘌呤霉素筛选后获得稳定表达mir-148a 的 U251、U87、BT325细胞系,mir-148a 表达水平在三种细胞中分别升高167.38倍、7.19倍、11.46倍。结论：成功构建了 mir-148a 的慢病毒载体,筛选得到了 mir-148a 过表达稳定胶质瘤细胞系 U251、U87、B325。     

胶质瘤细胞BT325和U251凋亡相关因子的表达差异

目的比较BT325和U2512种胶质瘤细胞中凋亡相关因子的表达差异及其在凋亡中的作用。方法应用Western blot方法检测细胞中Fas、Caspase-3、Caspase-7、Survivin和Livin的表达情况。结果U251与BT325均有Fas、Caspase-3和Livin蛋白表达,BT325的Caspase-3含量高于U251,U251的Livin含量高于BT325;Survivin仅表达于U251;Caspase-7仅表达于BT325。结论BT325胶质瘤细胞中凋亡效应因子呈高表达,U251胶质瘤细胞中凋亡抑制因子呈高表达。     

CCND1表达沉默促进胶质母细胞瘤细胞株对替莫唑胺的敏感性

目的 利用已构建的CCND1表达沉默及过表达的人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44,筛选能够与CCND1协同抑制胶质母细胞瘤细胞增殖的化学治疗药物.方法 用蛋白质印迹法检测CCND1表达沉默及过表达的人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44中多药耐药基因MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp)及凋亡因子Bcl-2、Caspase-3的表达.使用卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、替莫唑胺(TMZ)3种化学治疗药物分别处理CCND1过表达或表达沉默的SHG-44细胞,筛选能够与CCND1表达沉默协同抑制肿瘤细胞生长的化学治疗药物,并在人源性胶质母细胞瘤细胞株系U251中进一步验证.结果 蛋白质印迹结果示CCND1表达沉默能够下调P-gp、Bcl-2的表达,上调Caspase-3的表达(P均＜0.01).BCNU (0.05、0.25 μg/mL)、CCNU(20、80 μg/mL)处理CCND1过表达或表达沉默的SHG-44细胞的第2、3、4、5天时,细胞生长曲线的差异均无统计学意义;而在药物处理后细胞培养的第4、5天,CCND1表达沉默SHG-44细胞的生长受到TMZ(9.1μg/mL)的抑制作用较亲代SHG-44细胞强(P＜0.05).U251细胞实验证实CCND1表达沉默促进TMZ的化学治疗敏感性.结论 CCND1表达沉默联合TMZ较两者单独作用能更有效地抑制人源性胶质母细胞瘤细胞株SHG-44的增殖,提示CCND1可能参与TMZ化学治疗耐药机制.     

FasL基因转染NIH3T3细胞对BT325和U251胶质瘤细胞诱导凋亡作用的比较

目的比较FasL诱导2种胶质细胞瘤细胞凋亡作用的差异。方法用脂质体将FasL基因转染NIH3T3纤维母细胞,应用免疫组织化学染色法和RT-PCR法检测NIH3T3/FasL细胞目的基因的表达和转录,用Hochest 33342荧光染色法检验共培养体系中凋亡细胞种类,用TUNEL法检测共培养条件下胶质瘤细胞BT325和U251诱导凋亡作用的差异。结果NIH3T3/FasL细胞可有效表达FasL,与NIH3T3细胞(对照组)相比,有显著的诱导BT325和U251细胞凋亡的作用,对BT325胶质瘤细胞诱导凋亡的作用较U251胶质瘤细胞更为显著(P<0.05)。结论转染了FasL基因的NIH3T3细胞对BT325胶质瘤细胞诱导凋亡的作用比U251胶质瘤细胞更为显著。     

神经黏附分子NECL1抑制神经胶质瘤细胞的迁移、侵袭并诱导其分化

目的 在NECL1表达缺失的神经胶质瘤细胞系中探讨神经黏附分子NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响.方法 在U251胶质瘤细胞系中,通过划痕及Transwell实验观察NECL1恢复表达后对肿瘤细胞迁移及侵袭的影响,通过对细胞外金属蛋白酶活性的检测证明NECL1恢复表达后对肿瘤侵袭能力的影响.利用不同培养密度的U251细胞,对NECL1恢复表达后细胞形态进行观察,并通过Western blot实验验证相关蛋白的表达.结果 在NECL1表达缺失的胶质瘤细胞系U251中,恢复NECL1的表达后,肿瘤细胞的迁移及侵袭受到了抑制. NECL1恢复表达的U251细胞有向星形胶质细胞分化的趋势,星形胶质细胞标志蛋白神经胶质纤维酸性蛋白的表达上调.结论 神经黏附分子NECL1作为一个潜在的胶质瘤抑制因子,对肿瘤细胞的迁移和侵袭能力均有不同程度抑制作用,同时,NECL1具有诱导神经胶质瘤U251细胞向星形胶质细胞方向分化的潜能.     

ARHI基因mRNA和蛋白表达水平与胶质瘤恶性度相关性探讨

目的：探讨ARHI基因表达水平与人脑胶质瘤恶性度的相关性。方法采用RT-PCR和Western blot法检测10例正常脑组织、59例胶质瘤组织、4种胶质瘤细胞系（U251,SHG44,BT325,U87）中 ARHI基因mRNA和蛋白的表达强度,结合临床病理资料统计分析。结果胶质瘤组织、细胞系中ARHI基因的表达水平显著低于正常脑组织,胶质瘤组织中ARHI的表达水平随肿瘤恶性程度增加而明显降低（P＜0．01）。结论ARHI基因mRNA和蛋白在胶质瘤中低表达,且表达水平与胶质瘤恶性程度负相关,提示ARHI基因低表达对胶质瘤的形成和恶性演变具有重要作用。     

miR-638通过靶向调控Notch 4促进神经胶质瘤细胞的侵袭能力

目的 研究微小RNA-638(miR-638)在恶性胶质瘤中的表达,探讨miR-638在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及可能机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测正常神经组织、胶质瘤组织、正常胶质细胞株、胶质瘤细胞株中miR-638的表达水平;Transwell实验检测分别转染miR-638模拟物和miR-638抑制物后U251细胞侵袭水平的改变;生物信息学预测和验证miR-638对Notch 4的靶向调控关系;构建Notch 4真核表达重组质粒(pCMV-Notch 4 cDNA)过表达U251细胞中的Notch 4表达水平,并检测U251细胞侵袭水平的改变.结果 miR-638在胶质瘤组织和细胞株中表达上调,而Notch 4在胶质瘤细胞中表达下调,两者表达呈负相关性;过表达miR-638使U251细胞的侵袭细胞数上升(P<0.01),而抑制miR-638表达后U251细胞的侵袭细胞数减少(P<0.01);miR-638在U251细胞中能直接靶向抑制Notch 4的表达,提升Notch 4在U251细胞中的表达能使侵袭细胞数减少(P<0.01).结论 miR-638在胶质瘤中高表达,其可能通过靶向抑制Notch 4的表达促进胶质瘤细胞的侵袭能力.     

MSH5抑制对恶性胶质瘤细胞表型的影响

目的研究MSH5抑制对恶性胶质瘤细胞表型的影响,寻找治疗恶性胶质瘤的新的治疗靶点。方法通过TCGA数据库中查阅MSH5与恶性胶质瘤患者的临床分期和预后的关系;向U251、SHG-44和SNB-19细胞中转染干扰MSH5慢病毒,通过PCR检测MSH5 mRNA的表达,验证干扰效率;通过CCK-8和流式细胞技术检测胶质瘤细胞的增殖和周期;采用平板克隆、划痕实验和Transwell进一步检测敲降MSH5对细胞侵袭和转移能力的影响;最后,通过流式细胞仪检测胶质瘤细胞的凋亡情况。结果随着MSH5表达的升高,胶质瘤患者的预后和生存率是明显下降的;转染MSH5干扰慢病毒后,MSH5 mRNA的表达水平明显下降(P <0.05);敲降MSH5,U251、SHG-44和SNB-19胶质瘤细胞的存活率明显受到抑制(P <0.05);敲降MSH5,U251、SHG-44和SNB-19的细胞周期明显抑制了胶质瘤细胞的S期(P <0.05);敲降MSH5基因明显抑制了胶质瘤细胞的数目(P <0.05);敲降MSH5后,U251、SHG-44和SNB-19胶质瘤的愈合率明显下降(P <... 更多     

HOXA4调控Wnt/β-cateni n信号通路对裸鼠移植胶质瘤的抑制作用

目的：建立人胶质瘤荷瘤裸鼠模型,探讨HOXA4对胶质瘤U251细胞体内生长的影响以及对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用及其机制。方法：采用慢病毒转染,建立胶质瘤U251细胞稳转同源异型盒基因A4（HOXA4） siRNA细胞系（si-HOXA4）和稳转空载体阴性对照U251细胞系（si-NC）。取对数生长期U251、si-NC和si-HOXA4细胞接种于BALB/c裸鼠颈背部皮下,建立荷瘤裸鼠模型,命名为对照组、si-NC组和si-HOXA4组。观察各组裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线;培养21 d处死裸鼠后剥离肿瘤组织,测量肿瘤体积和质量;qRT-PCR法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、CTNNB1和Gsk3β mRNA相对表达量;免疫组织化学（IHC）法检测各组裸鼠肿瘤组织中HOXA4、β-catenin、Gsk3β、CyclinD1和P53蛋白表达水平。结果：si-HOXA4组裸鼠肿瘤体积和质量小于si-NC组和对照组（P<0.05）;si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中HOXA4 mRNA相对表达量和HOXA4蛋白表达水平低于其他2组（P<0.05）;与si-NC组和对照组比较,si-HOXA4组裸鼠肿瘤组织中CTNNB1 mRNA相对表达量降低（P<0.05）,β-catenin和CyclinD1蛋白表达水平亦降低（P<0.05）,但Gsk3β和P53蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：抑制人胶质瘤U251细胞HOXA4表达可在体内通过Wnt/β-catenin信号通路调控CyclinD1和P53蛋白的表达,从而抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长。     

MiR-148a-3p靶基因的预测与验证

目的:预测和验证miR-148a-3p的靶基因.方法:利用生物信息学方法预测miR-148a-3p的靶基因;在神经胶质瘤细胞U87/U251中建立miR-148a过表达及抑制表达稳定细胞系.利用qPCR实验验证miR-148a-3p与靶基因的靶向关系;利用Western Blot实验检测靶蛋白表达水平.结果:生物信息学方法预测结果显示dynein light chain LC8-type 2(DYNLL2)为miR-148a-3p靶基因之一;qPCR实验结果显示DYNLL2在神经胶质细胞HA1800与神经胶质瘤细胞U87/U251中的表达有差异,在神经胶质瘤细胞miR-148a过表达及抑制表达的细胞中表达有差异;Western Blot实验结果显示DYNLL2的蛋白表达水平在神经胶质细胞HA1800与胶质瘤细胞U87/U251中有差异.结论:miR-148a-3p与DYNLL2有确切的靶向关系,DYNLL2在神经胶质细胞与胶质瘤细胞中均有表达,与正常胶质细胞相比,DYNLL2在神经胶质瘤细胞中表达下调,包括基因水平和蛋白水平,miR-148a-3p能够负向调控DYNLL2的表达.     

蛋白激酶Cα介导人神经胶质瘤细胞株多药耐药机制的研究

目的 探讨蛋白激酶Ca(protein kinase Cα,PKCα)在人神经胶质瘤细胞株SHG-44发生多药耐药过程中的作用和机制.方法 应用阿霉素浓度递增和间歇诱导法建立SHG-44/ADM耐药株,采用PKCα激活剂PMA和抑制剂Staurosporine分别干预SHG-44/WT和SHG-44/ADM细胞株,免疫印迹法检测PKCα和MDR-1的表达量,激酶分析PKCα活性,荧光分光光度计检测细胞内阿霉素浓度.结果 PKCα激活剂PMA增强细胞PKCα活性,同时增加MDR-1表达和活性;PKCα抑制剂Staurosporine抑制细胞PKCα活性,减少MDR-1表达和活性.结论 PKCα通过MDR-1参与神经胶质瘤细胞的多药耐药.     

3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)体外趋化组织细胞淋巴瘤细胞(U937)的实验研究

目的 观察胶质瘤细胞株U87(人脑星形胶质母细胞瘤细胞)、U251(人神经胶质细胞瘤细胞)及T98G(人胶质母细胞瘤细胞)对U937(组织细胞淋巴瘤细胞)的趋化活性.方法 体外传代培养U87、U251、T98G及U937细胞,应用Transwell法观察3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)对U937细胞的趋化活性.结果 Transwell小室下孔细胞离心浓缩后白血球计数板计数;3种胶质瘤细胞株对于U937细胞趋化活性明显高于正常对照组(P＜0.05);U87对于U937细胞趋化活性明显高于U251及T98G (P＜0.05);U251及T98G对于U937细胞趋化活性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 3种胶质瘤细胞株(U87、U251及T98G)可促进U937细胞的趋化迁移,U87趋化活性更为明显.     

正、反义β-1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的转染与鉴定

目的：构建β-1，4-半乳糖基转移酶-V(β-1，4-GalTV)正、反义表达质粒，并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中，为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1，4-GalTV的生物学意义提供研究基础。方法：构建β-1，4-GalTV表达质粒，并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中；用Western印迹和Northern印迹鉴定转染情况。结果：通过酶切鉴定和测序分析，实验成功构建β-1，4-GalTV表达质粒。将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中，经鉴定表明，转染的正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1，4-GalTV表达量，而转染反义质粒则能降低细胞中β-1，4-GalTV表达量。结论：正、反义β-1，4-GalTV表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达，对分析胶质瘤细胞表达β-1，4-GalTV的意义如对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响提供了研究基础。     

CAPE体内对Tcf-4蛋白作用研究

目的探讨咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）在人神经胶质瘤移植瘤中对Tcf-4蛋白的作用。方法建立人神经胶质瘤细胞株裸鼠模型,运用Western blot技术检测CAPE对胶质瘤细胞株U251移植瘤Tcf-4蛋白的作用。结果通过对移植瘤模型的观察,发现CAPE可以抑制神经胶质瘤细胞株Tcf-4蛋白的表达。结论 CAPE可以抑制U251移植瘤Tcf-4蛋白的表达,可能对神经胶质瘤的生长有抑制作用。     

抑制泛素特异性蛋白酶9X表达对胶质瘤U251细胞生长及凋亡的影响

目的:研究抑制泛素特异性蛋白酶(USP)9X对胶质瘤U251细胞生长及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:CCK-8法检测抑制USP9X表达对U251细胞生长的影响,流式细胞术检测抑制USP9X对U251细胞凋亡的影响,Western Blot法检测USP9X对U251细胞蛋白水平的调控。结果:抑制USP9X表达对U251细胞生长有显著抑制作用;与对照组相比,实验组U251细胞凋亡率上升,实验组β-catenin蛋白的表达较对照组下调。结论:抑制USP9X表达可以抑制胶质瘤U251细胞的生长,促进细胞凋亡,抑制Wnt/β-catenin信号通路,是一个潜在的治疗胶质瘤的分子靶点。     

CAPE对人神经胶质瘤细胞株U251凋亡作用研究

目的探讨咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）在人神经胶质瘤凋亡中的作用。方法建立人神经胶质瘤细胞株模型,观察CAPE在体外神经胶质瘤凋亡的影响。运用流式细胞术检测CAPE对胶质瘤细胞株U251的作用。结果通过对细胞株模型的观察,发现CAPE可以促进神经胶质瘤细胞株的凋亡。结论 CAPE可以促进神经胶质瘤细胞株U251的凋亡,可能对神经胶质瘤的生长有抑制作用。     

Klf4基因在人神经胶质瘤细胞U251中的稳定表达

目的:建立稳定表达Klf4基因的神经胶质瘤细胞U251 ,为探讨该基因在神经胶质瘤细胞中的功能奠定基础.方法:以低表达Klf4基因的人胶质瘤细胞系U251为材料,以Klf4基因转染U251细胞系,G418筛选,获取G418抗性单克隆进行培养,扩增后分别用免疫荧光技术、免役印迹技术(Western blot)验证获得的表达细胞株.结果:经转染和G418筛选后,荧光显微镜下见有明显表达Klf4基因的细胞,Western blot检测到转染基因Klf4后细胞KLF4蛋白的表达增高,而作为对照的转空载体的细胞Klf4的表达较低.结论:该方法成功建立了稳定转染基因Klf4的人胶质瘤U251细胞系,为进一步探讨该基因在肿瘤细胞的功能奠定了一定基础.