新加达原饮对HepG2.2.15细胞表达HBsAg、HBeAg的影响

目的 观察新加达原饮(IXJDY)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法 采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测IXJDY对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0);在TC0基础上观察不同浓度药物作用于HepG2.2.15细胞,分别在第72小时和144小时收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定上清液HbsAg和HbeAg的滴度.结果 TC50=14.22mg·ml-1,TC0=8.13 mg·ml-1,新加达原饮对HepG2.2.15细胞毒性较低.无毒浓度的新加达原饮在HepG2.2.15细胞培养中可有效地抑制HBsAg和HBeAg的分泌(P＜0.05,P＜0.01);且呈现量效和时效关系.结论 IXJDY在体外有显著的抗HBV的作用,且毒性较低.     

甲基阿魏酸对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的:研究甲基阿魏酸(meth-ferulic acid,MFA)对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg分泌的影响。方法:采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测MFA对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0);在TC0基础上观察5个不同浓度药物作用于HepG2.2.15细胞,分别在第4 d和8 d收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液HBsAg和HBeAg的滴度。结果:TC0=6.6μg/ml,TC50=179.7μg/ml。提示MFA对HepG2.2.15细胞毒性作用较低。在无毒浓度下,MFA能有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg(乙型肝炎表面抗原)和HBeAg(乙型肝炎E抗原);且治疗指数(TI)均大于2,说明MFA为高效低毒的抗HBV药物。结论:MFA可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBsAg(乙型肝炎表面抗原)和HBeAg(乙型肝炎E抗原)的分泌,且毒性较低。     

鸡骨草对HepG2.2.15细胞HBeAg和HBsAg的抑制作用

目的观察鸡骨草(JGC)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测鸡骨草对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0);在TC0基础上观察不同浓度药物作用于HepG2.2.15细胞,分别在第72小时和144小时收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定上清液HBsAg和HBeAg的滴度。结果 TC50为41.85 g/L,TC0为8.93 g/L,鸡骨草可有效地抑制细胞HBsAg和HBeAg的分泌;在作用144 h、浓度为8 g/L时对HBsAg、HBeAg抑制作用最为明显,抑制率分别为29.8%和32.4%。结论鸡骨草在体外有一定的抗HBV的作用,且毒性较低。     

盐酸千金藤碱抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨盐酸千金藤碱(CH)对乙型肝炎病毒的体外抑制作用.方法 MTT法检测CH对HepG2.2.15的细胞毒性;酶联免疫吸咐(ELISA)法检测不同浓度CH对细胞上清液中HBsAg和HBeAg的影响;荧光定量聚合酶链反应(FQ- PCR)法检测CH在用药后第9天对细胞内外HBV DNA拷贝数的影响.结果 CH对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为10.24 μmol/L;对HBsAg和HBeAg分泌的半数抑制浓度(IC50)分别为7.01,6.64 μmol·L-1,治疗指数(TI)分别为1.46,1.54;对细胞上清液中HBV DNA拷贝数的IC50为3.49 μmol·L-1,对细胞内HBV DNA拷贝数的IC50为4.25 μmol·L-1,TI值分别为2.93,2.41.结论 CH在体外对HBsAg和HBeAg的分泌和对细胞内外HBV DNA的复制均有明显的抑制作用.     

波棱素脂质体对乙肝病毒复制和抗原表达的影响

目的:以Hep G2.2.15细胞系为体外实验模型,研究波棱素脂质体体外抑制乙肝病毒的生物学活性。方法:MTT法检测药物对细胞的毒性,将不同安全浓度的波棱素脂质体及阳性对照药物拉米夫定(3TC)作用于此细胞系,同时实验设不加药物的细胞对照,给药3,6d后收集细胞培养上清液。采用ELISA法测定各组细胞培养上清液中HBs Ag,HBsAg水平,实时定量PCR检测HBV-DNA的含量。结果:波棱素脂质体对HepG2.2.15细胞的TC50为1443.68μg/ml。波棱素脂质体对HepG2.2.15分泌的HBs Ag和HBeAg的IC50分别为131.08μg/ml,109.50μg/ml,治疗指数为11.01和13.18。同时,浓度范围在25~200μg/ml时明显抑制HBV-DNA表达,最高抑制率达到55.04%。结论:波棱素脂质体具有一定的体外抑制乙肝病毒复制及抗原表达的作用。     

白背叶根抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的观察白背叶根体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法以HepG2.2.15细胞株为模型,用微粒酶免疫测定技术(MEIA)检测细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg含量,用PCR荧光定量技术检测细胞上培养上清液中HBV DNA的变化,以MTT比色法观察药物的细胞毒性。结果白背叶根对HepG 2.2.15细胞的TC50为48.25 mg/m l,对抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg的治疗指数分别为13.26和43.08。对HBVDNA仅有微弱抑制作用。结论白背叶根在体外细胞培养中具有直接抗HBV活性。     

肝必康胶囊体外抗乙肝病毒的实验研究

目的:观察肝必康胶囊对乙肝病毒的抑制作用.方法:采用HepG 2.2.15细胞的培养,MTT比色法检测药物对细胞的毒性,定量PCR检测HBV-DNA,ELISA法检测HBsAg、HBeAg的含量,研究肝必康胶囊对HepG 2.2.15细胞的毒性,HBsAg与HBeAg表达及HBV-DNA含量的影响.结果:肝必康半数细胞毒浓度(TC50)为4.677 mg/mL,最大无毒浓度(TC0)为0.118 mg/mL.各组在用药后72、144 h细胞上清中HBV DNA拷贝数降低,肝必康在0.1 mg/mL时抑制率最高.各组用药后细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg浓度显著降低.肝必康在0.1 mg/mL时抑制率最高.肝必康各组含药血清在用药后72、144 h细胞上清中HBsAg和HBeAg浓度显著降低,高剂量组抑制率最高.显示明显抗HBV的作用,TI均大于2.结论:肝必康胶囊体外培养细胞实验证实其有较强的抗乙肝病毒作用,且毒性较低.     

鸡矢藤挥发油体外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的 对鸡矢藤挥发油抗HBV作用进行体外抗病毒实验研究.方法 采用水蒸气蒸馏法提取鸡矢藤挥发油,以HepG 2.2.15细胞为实验对象,检测鸡矢藤挥发油对HepG 2.2.15肝癌细胞株的细胞毒性.并在最大无毒浓度下观察鸡矢藤挥发油对HepG 2.2.15细胞表达HBsAg,HBeAg的影响.结果 鸡矢藤挥发油在31～2 000 mg/L的浓度范围内,对HepG 2.2.15细胞有明显抑制作用,TC50为1 550 mg/L, TC0为500 mg/L.在最大无毒浓度下,鸡矢藤挥发油对HBsAg最大抑制率为72.49%,治疗指数为6.74,对HBeAg最大抑制率为23.64%.结论 鸡矢藤挥发油对HepG2.2.15细胞HBsAg,HBeAg分泌有较好抑制作用.     

六月青含药血清对HepG2.2.15细胞系HBsAg与HBeAg表达的影响

目的 观察六月青(Liuyueqing,LYQ)含药血清的体外抗乙型肝炎病毒的作用.方法 以MTT法检测药物在体外对HepG2.2.15细胞的生长抑制作用,采用酶联免疫法(ELISA法)检测HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg、HBeAg的滴度.结果 LYQ含药血清对HepG2.2.15细胞50%生长抑制率的给药剂量为11.56 g·(kg·d)-1;而对HepG2.2.15细胞分泌HBsAg 50%生长抑制率的给药剂量为0.178 g·(kg·d)-1,其治疗指数(TI)为64.94;另外,LYQ含药血清对HBeAg抑制作用不明显.结论 LYQ含药血清在体外有显著的抗HBV的作用,且毒性较低.     

槐定碱体外抗乙肝病毒的实验研究

目的 观察槐定碱对HepG 2.2.15细胞分泌HbsAg、HBeAg和Pre-S1的影响,探讨槐定碱的体外抗乙型肝炎病毒作用.方法 采用HepG 2.2.15细胞模型进行体外培养,给予不同浓度槐定碱,作用9天后收集上清液,用MTT法观察槐定碱对HepG 2.2.15细胞的抑制作用,用ELISA法检测上清液中HBsAg、HBeAg和Pre-S1的分泌,观察药物对HepG 2.2.15细胞分泌HBV病毒抗原的影响,从而评价药物的抗HBV作用.结果 槐定碱对HepG 2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)为6.86E-3M.在该浓度下对HBsAg和HBeAg的50%抑制浓度(IC50)分别为0.339 mmol和0.356 mmol,治疗指数分别为20.21和19.26;浓度为0.001 mmol时对Pre-S1的抑制率为62.20%.结论 :槐定碱具有一定的抗HBV作用,属低毒有效药物.     

毛鸡骨草醇提液对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面 抗原及乙型肝炎E抗原的影响

目的:观察毛鸡骨草体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:采用MTT法检测毛鸡骨草对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0),采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定相似文献   

乙肝转阴散对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的抑制作用

目的 :研究乙肝转阴散(YGZYS)对HepG2.2.15细胞乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎E抗原(HBeAg)分泌的影响。 方法 :采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测YGZYS对HepG2.2.15细胞的半数毒性浓度(TC₅₀)和最大无毒浓度(TC₀);在TC₀基础上观察药物5个不同浓度作用于HepG2.2.15细胞,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养4 d和8 d的细胞上清液HBsAg和HBeAg的滴度。 结果 :TC₅₀ 5.386 g ·L^-1,TC₀ 0.736 g ·L^-1。提示YGZYS对HepG2.2.15细胞毒性作用较低。在无毒浓度下,YGZYS能有效地抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg和HBeAg;且治疗指数(TI)均大于2,说明YGZYS为高效低毒的抗HBV药物。 结论 :YGZYS可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的分泌,且毒性较低。     

氧化苦参碱体外抗乙型肝炎病毒作用

目的:体外观察氧化苦参碱(OM)抗乙型肝炎病毒(HBV)作用,并初步探讨其作用机制.方法:用125,250,500,1000,2000 mg·L-1OM连续作用于90％汇合度的HepG2.2.15细胞9d,以MTT比色法观察药物细胞毒性;用酶联免疫法测定细胞上清液中乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg),乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg);采用荧光定量PCR法(FQ-PCR)测定细胞上清液中HBV DNA,细胞中HBV DNA和共价闭合环状DNA(cccDNA).结果:OM对细胞内HBV DNA和cccDNA,以及细胞外HBV DNA均有抑制作用,随着浓度升高抑制作用加强,2000 mg·L-1OM对细胞内HBV DNA,cccDNA和细胞外HBV DNA的抑制率分别为64.56％,52.12％,54.25％;对HBsAg和HBeAg的分泌也有抑制作用,且浓度越高、处理时间越长,抑制作用越明显;在相同条件下对HBsAg的抑制作用强于HBeAg,OM浓度为2000 mg·L-1时对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为51.59％,17.88％.结论:OM能有效抑制HepG2.2.15细胞中HBV复制,该作用是抑制病毒核酸复制和基因表达的结果.     

蛞蝓多糖体外抗乙型肝炎病毒作用研究

目的:研究蛞蝓多糖体外抗乙型肝炎病毒的作用。方法:以不同浓度的蜗牛多糖和拉米夫定与HepG2.2.15细胞混合培养,通过MTT法检测药物的细胞毒性,9d后用ELISA法检测细胞培养液中的HBsAg和HBeAg分泌水平,用实时荧光定量PCR技术检测培养液中的HBV-DNA含量。结果:蛞蝓多糖在1mg·mL^-1浓度以下对细胞无毒性。蛞蝓多糖在所稀释的各浓度下,对HBsAg、HBeAg均有抑制作用,最大抑制率分别为56.2%和58.1%;HBsAg、HBeAg的治疗指数分别大于19.98%、22.78%。蛞蝓多糖可抑制HBV-DNA的复制(P<0.05)。结论:蛞蝓多糖在体外具有显著抑制HBV的作用。     

艾叶提取物的化学成分及抗HBV活性分析

目的:研究菊科艾Artemisia argyi干燥叶的化学成分及抗乙型肝炎病毒(HBV)活性。方法:采用硅胶柱色谱分离其化学成分,并根据理化性质、核磁共振波谱法、质谱法以及参考相关文献鉴定化合物结构,采用噻唑蓝(MTT)法测定化合物对Hep G 2.2.15细胞的毒性以及酶联免疫(ELISA)法检测各组分对Hep G 2.2.15细胞上清液中HBe Ag和HBs Ag分泌的影响。结果:从艾叶乙酸乙酯部位分离鉴定了5个化合物,分别为豆甾醇(1),5,4'-二羟基-6,7,3'-三甲氧基黄酮(3'-甲氧基蓟黄素)(2),达玛二烯醇乙酸酯(3),5,7,4'-三羟基-3',8-二甲氧基黄酮(4),十六烷酸丙酯(5)。结论:化合物2~4为首次从艾叶中分离得到,其中3'-甲氧基蓟黄素对HBs Ag和HBe Ag有抑制作用,其对HBs Ag的半数抑制浓度(IC50)为8.09 mg·L-1,对HBe Ag的IC50小于2.5 mg·L-1。     

松果菊苷对乙肝病毒复制和抗原表达的影响

以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞为体外模型,研究松果菊苷对乙肝病毒(HBV)复制和抗原表达的影响,采用ELISA法测定细胞上清乙肝表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)水平;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平。以HBV转基因小鼠为体内模型,研究松果菊苷对HBV复制的影响,首先采用荧光定量PCR法检测转基因小鼠肝组织HBV DNA水平,采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;同时检测血清转氨酶水平和肝组织病理变化;然后将HBV表达阳性的转基因小鼠随机分为5组:对照组、拉米夫定(50 mg·kg^-1)组和松果菊苷高、中、低剂量(50,25,12.5 mg·kg^-1)组。每天灌胃给药1次,连续给药30 d。第31天分离小鼠血清检测HBV DNA,HBsAg和HBeAg水平;提取肝组织DNA测定其HBV DNA水平,同时作肝组织病理检查。结果表明:松果菊苷在50,100 mg·L^-1作用HepG2.2.15细胞6 d后能显著抑制HBsAg和HBeAg表达,其最高抑制率分别为42.68%,46.29%;同时在100 mg·L^-1对HBV DNA具有抑制作用。此外,松果菊苷在50 mg·kg^-1剂量时能显著抑制HBV转基因小鼠HBsAg与HBeAg表达,其抑制率分别为42.82%,29.12%,同时对转基因小鼠血清HBV DNA水平有显著抑制作用。提示松果菊苷对HBV复制和抗原表达具有较强抑制作用。     

毛鸡骨草含药血清体外抗乙型肝炎病毒作用的研究

目的:观察毛鸡骨草(Abrus mollis)含药血清体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法:采取中药血清药理实验方法,以HepG2.2.15细胞为研究模型,将毛鸡骨草含药血清加入HepG2.2.15细胞培养液中培养,分别在72 h和144 h收集细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附实验法(ELISA法)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞株表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和HBV DNA复制的影响。结果:毛鸡骨草含药血清对HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg的表达和HBV DNA复制都有不同程度的抑制,以给药剂量为30 g·kg-1·d-1的毛鸡骨草含药血清组作用144 h对HBsAg的抑制率和对HBV DNA复制的抑制率最明显,抑制率分别为34.4%和41.7%。结论:毛鸡骨草在体外有一定的抗HBV作用。     

In vitro and in vivo anti-hepatitis B virus activities of the lignan niranthin isolated from Phyllanthus niruri L.

Ethnopharmacological relevance

Niranthin is a lignan isolated from Phyllanthus niruri L. This plant has long been used in folk medicine for liver protection and antihepatitis B in many Asian countries. This study was designed to evaluate the anti-hepatitis B virus activity of niranthin using HepG2.2.15 cells and duck hepatitis B virus (DHBV) infected ducks as in vitro and in vivo models.

Materials and methods

Niranthin was isolated from Phyllanthus niruri L. (Euphorbiaceae) by extraction and chromatographic procedures and the anti-hepatitis B virus activity was evaluated both in vitro and in vivo. The human HBV-transfected liver cell line HepG2.2.15 was used in vitro assay. And the in vivo anti-hepatitis B virus activity was evaluated on the expression of HBV replication, HBsAg, HBeAg, ALT and AST on day 0, 7, 14, 17 after niranthin was dosed intragastricly (i.g.) once a day for 14 days at the dosages of 25, 50 and 100 mg/kg/day in the duck hepatitis B virus (DHBV) infected ducks.

Results

In the human HBV-transfected liver cell line HepG2.2.15, the secretion of HBsAg and HBeAg were significantly decreased after treatment with niranthin for 144 h, with IC₅₀ values for HBsAg of 15.6 µM, IC₅₀ values for HBeAg of 25.1 µM. In DHBV-infected ducklings, niranthin significantly reduced the serum DHBV DNA, HBsAg, HBeAg, ALT and AST. Furthermore, analysis of the liver pathological changes confirmed the hepatoprotective effect of niranthin.

Conclusion

The experimental data demonstrated that niranthin exhibits anti-hepatitis B virus activity both in vitro and in vivo.     

白藜芦醇及其衍生物抗乙型肝炎病毒体外实验研究

 目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,反式3,4′,5-三羟基-二苯乙烯)及其衍生物体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用,及相关 的量效关系与构效关系。方法 将白藜芦醇及其衍生物作用于HepG2.2.15细胞系,MTT法检测样品对HepG2.2.15细胞的毒 性,ELISA法检测细胞上清中HBsAg,HBeAg的变化,实时荧光定量PCR法检测细胞与其上清中总HBV DNA含量,流式细胞仪 检测白藜芦醇时HepG2.2.15的凋亡作用,进行综合评价。结果 白藜芦醇对抑制HepG2.2.15细胞分泌HBsAg,HBeAg治疗指 数(TI)分别为(3.26±0.39),(2.91±0.12);在低毒或无毒浓度(0.11 mol·L^-1)下降低DNA拷贝数;呈浓度依赖性诱导 HepG2.2.15细胞凋亡。结论 白藜芦醇及其衍生物在体外有一定的抗乙型肝炎病毒作用,可能是通过抑制HBV DNA复制, 诱导感染HBV的HepG2.2.15细胞凋亡而发挥抗病毒活性。综合评价白藜芦醇及其衍生物的活性,即白藜芦醇苷(Rn1)、甲氧 基取代羟基的苷[4′-甲氧基-3,3′,5-二苯乙烯-3-葡萄糖苷(Rn3)]效果较好。     

Hepatoprotective and antiviral properties of isochlorogenic acid A from Laggera alata against hepatitis B virus infection

Ethnopharmacological relevance

The aim of this study was to determine the anti-hepatitis B effect of isochlorogenic acid A isolated from Laggera alata (Asteraceae), a traditional Chinese herbal medicine.

Materials and methods

The anti-hepatitis B activity of isochlorogenic acid A was evaluated by the d-galactosamine (D-GalN)-induced HL-7702 hepatocyte damage model and the HBV-transfected HepG2.2.15 cells.

Results

Isochlorogenic acid A significantly improved HL-7702 hepatocyte viability and markedly inhibited the productions of HBsAg and HBeAg. The inhibitory rates of isochlorogenic acid A on the HBsAg and HBeAg expressions were 86.9% and 72.9%, respectively. In addition, isochlorogenic acid A declined markedly the content of hepatitis B virus covalently closed circular DNA (HBV cccDNA) and induced significantly the heme oxygenase-1 (HO-1) expression in HepG2.2.15 cells.

Conclusions

Isochlorogenic acid A was verified to possess the potent anti-hepatitis B activity. The anti-HBV target of isochlorogenic acid A is probably associated with blocking the translation step of the HBV replication. Overexpression of HO-1 may contribute to the anti-HBV activity of isochlorogenic acid A by reducing the stability of the HBV core protein and thus blocking the refill of nuclear HBV cccDNA. Additionally, the hepatoprotective effect of isochlorogenic acid A could be achieved by its antioxidative property and induction of HO-1.