黄连素对体外培养肝癌细胞生物学行为的影响

目的研究黄连素对体外培养肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响并探讨分子机制。方法不同浓度黄连素体外作用肝癌HepG2细胞后,MTT法检测增殖,流式细胞法检测凋亡,划痕法及Transwell法检测细胞迁移及侵袭,免疫印迹法检测MMP-9及VEGF蛋白表达。结果 12.5～200μmol/L黄连素均可对肝癌HepG2细胞产生明显的抑制增殖和诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),浓度越高作用时间越长效果越好;50～200μmol/L黄连素还可抑制HepG2细胞迁移及侵袭并下调MMP-9和VEGF蛋白表达。结论黄连素可通过下调MMP-9以及VEGF蛋白表达对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为产生影响。     

积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的:观察积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法:用不同浓度的积雪草酸处理人肝癌SMMC-7721细胞;MTT法检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响;流式细胞术检测积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测积雪草酸对肝癌细胞迁移的影响;Western blot法检测积雪草酸对凋亡相关基因Bcl-2和Bax及上皮间质转化标志基因E-cadherin表达的影响。结果:与对照组比较,25、50、100μmol/L的积雪草酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖均有明显的抑制作用,差异均有统计学意义(P0.01)。流式细胞术结果显示,50μmol/L的积雪草酸处理后,肝癌细胞凋亡率显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。Transwell小室法检测结果发现,TGF-β能显著促进人肝癌SMMC-7721细胞迁移,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。1、10μmol/L的积雪草酸处理能够显著抑制TGF-β诱导的肝癌细胞迁移。积雪草酸处理后,人肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2蛋白水平显著下降,Bax蛋白水平显著上调。TGF-β处理24 h后,SMMC-7721细胞E-cadherin表达水平显著降低,而不同浓度的积雪草酸均能抑制TGF-β诱导的E-cadherin表达水平下调。结论:积雪草酸能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

枸杞多糖对人肝癌细胞HepG2生长的影响及其分子机制

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarumpolysaccharides,LBP)对人肝癌细胞HepG2生长的影响及可能机制。方法人肝癌HepG2细胞用100~1 000 mg/L LBP处理1~5 d,分别用MTT方法、流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。用Western blotting分析周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinase,CDK)表达的变化。结果 LBP以质量浓度依赖方式抑制肝癌细胞的生长,阻滞细胞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡;其分子机制为引起cyclin Dc、yclin E和CDK2蛋白表达下降。结论 LBP抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制包括阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究

目的:探讨β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其作用机制.方法:以MTT法检测细胞增殖活力,高内涵活细胞成像系统检测细胞周期变化、凋亡率、线粒体膜电位的变化,Western Blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bcl-2,Bax,tBid,cytochrome c的表达.结果:β-谷甾醇剂量依赖性地抑制肝癌细胞HepG2的生长、降低线粒体膜电位并诱导其凋亡;上调细胞Bax及tBid表达,下调细胞Bcl-2表达;诱导Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9等蛋白酶原表达逐渐降低而激活的大片段表达逐渐增加;胞浆中cytochrome c表达逐渐增加而线粒体中的cytochrome c表达逐渐减少.β-谷甾醇对正常肝细胞QSG7701的生长及凋亡相关蛋白几乎没有影响.结论:β-谷甾醇对人肝癌HepG2细胞生长具有较强的抑制作用,并通过线粒体途径及膜死亡受体途径诱导该细胞凋亡.     

半枝莲提取物逆转上皮间质转化抑制肝癌细胞迁移侵袭研究

目的:探讨半枝莲提取物(Extracts from Scutellaria barbata,ESB)对肝癌HepG2细胞迁移、侵袭的抑制作用及分子机制。方法:利用转化生长因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)诱导肝癌HepG2细胞上皮间质转化模型,通过MTT法、Transwell实验测定细胞增殖、迁移及侵袭能力,Western blot检测各组细胞相关蛋白表达情况。结果:MTT结果显示ESB抑制HepG2细胞增殖,且呈浓度及时间依赖性,24 h及48 h IC_(50)分别为317.3μg/mL,243.8μg/mL。Transwell实验显示,与对照组比较,TGF-β组细胞迁移与侵袭能力增强(P 0.05);与TGF-β组比较,TGF-β+5μg/mL ESB组,TGF-β+10μg/mL ESB组细胞迁移及侵袭能力减弱(P 0.05)。Western blot实验显示,在建立上皮间质转化模型后,与TGF-β组比较,TGF-β+ESB (5μg/mL、10μg/mL)组E钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调(P 0.05),N钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达下调(P 0.05),同时磷酸化的Smad2蛋白(Phosphorylated Smad2,p-Smad2)、磷酸化的Smad3蛋白(Phosphorylated Smad3,p-Smad3)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(Phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNk)、磷酸化的p38蛋白(Phosphorylated p-38,pp38)、磷酸化的胞外信号调节激酶(Phosphorylated extracellular regulated protein kinases,p-ERK)、整合素αV亚单位(IntegrinαV)、整合素β3亚单位(Integrinβ3)、基质金属蛋白酶2 (matrix metalloprotein2, MMP2)、基质金属蛋白酶9 (matrix metalloprotein9,MMP9)表达显著下调(P 0.05)。结论:ESB可能通过阻断TGF-β/Smad/AMPK信号通路,下调IntegrinαV、Integrinβ3、MMP2及MMP9逆转TGF-β诱导的上皮间质转化,抑制肝癌HepG2细胞迁移及侵袭。     

黄芪甲苷通过Wnt/β-catenin途径影响HepG-2细胞的增殖和凋亡

目的:分析黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)对HepG2细胞作用后产生的效应及其具体机制。方法:使用不同浓度AS-IV(25、50、100 nmoL/L)干预HepG2细胞,采用Trans-well法、细胞划痕实验和免疫荧光法分析HepG2细胞系的侵袭和迁移情况。Westeblot检测Caspase-3、Caspase-9、VEGF、MMP-14、E-cadherin、N-cadherin、Wnt、β-catenin和TCF-4等蛋白的表达的变化。结果:CCK-8法检测显示AS-IV刺激HepG2细胞时可抑制HepG2细胞的生长,促进细胞凋亡。细胞划痕实验以及Trans-well实验显示AS-IV能明显抑制HepG2细胞的侵袭和迁移。Western blotting检测显示AS-IV干预HepG2细胞后,VEGF和MMP-14蛋白水平、N-cadherin和vimentin的表达量降低(P<0.05),Caspase-3和Caspase-9表达量上升。同时,AS-IV还可抑制HepG2细胞的Wnt、β-catenin和TCF-4蛋白的表达。结论:黄芪甲苷通过调节Wnt/β-catenin途径影响HepG-2细胞的生物学过程。     

二脱甲氧基姜黄素对体外HepG2 Caspase-3活性的影响

目的:研究二脱甲氧基姜黄素对体外培养人肝癌细胞HepG2 Caspase-3蛋白酶活性的作用。方法:MTT法检测二脱甲氧基姜黄素对体外培养人肝癌细胞HepG2的抑制作用;分光光度检测其对Caspase-3酶活性的影响;免疫组化法检测其对人肝癌细胞HepG2 Caspase-3蛋白的表达。结果:二脱甲氧基姜黄素对人肝癌细胞HepG2有明显的抑制作用(P<0.001)且呈剂量关系,与姜黄素有显著差异(P<0.001);二脱甲氧基姜黄素能增强Caspase-3酶活性,增强Caspase-3蛋白的表达。结论:二脱甲氧基姜黄素能激活Caspase-3蛋白活性,这可能也是它体外抑制肝癌细胞HepG2生长的机理之一。     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的 研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用.方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响.结果 莱菔硫烷10、20、40 μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性(P＜0.01);可使HepG2细胞Fas、FasL蛋白的表达显著升高(P＜0.01);莱菔硫烷20、40 μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达(P＜0.01),上述作用均呈剂量相关性.结论 激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一.     

化痰通瘀解毒方水提取物通过Wnt/β-catenin信号通路抑制人胃癌细胞株MKN-45上皮-间质转化及侵袭迁移

目的:观察化痰通瘀解毒方对人胃癌细胞MKN-45侵袭迁移能力和上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响,并探讨其与Wnt/β-catenin信号通路的相关性。方法:以转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1) 10 ng/m L诱导MKN-45细胞构建EMT模型;采用Transwell小室实验和划痕愈合实验检测细胞的侵袭、迁移能力;采用Western Blot法检测EMT标志蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:TGF-β1能够明显增强MKN-45细胞侵袭、迁移能力,诱导MKN-45细胞发生EMT:E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达上调;同时,TGF-β1能诱导MKN-45细胞Wnt1和β-catenin蛋白表达上调。化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)均可显著抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞侵袭迁移及EMT:E-cadherin蛋白表达上调,N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白表达下调;同时,化痰通瘀解毒方(10、20、40μg/m L)还可下调Wnt1和β-catenin蛋白表达,且上述结果中化痰通瘀解毒方在10、20、40μg/m L剂量组间存在剂量依赖性; Wnt/β-catenin信号通路特异性抑制剂XAV939与化痰通瘀解毒方40μg/m L均可明显抑制TGF-β1诱导的MKN-45细胞EMT和侵袭迁移,且XAV939可协同化痰通瘀解毒方40μg/m L抑制TGF-β1诱导的EMT和侵袭迁移。结论:化痰通瘀解毒方能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制TGF-β1诱导的EMT,进而降低MKN-45细胞侵袭迁移能力。     

β-榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究

目的：研究中药莪术提取物β-榄香烯对人肝癌HepG2 细胞增殖抑制及诱导凋亡,以及小鼠肝癌H22 荷瘤小鼠凋亡相关蛋白表达的作用。方法:体外培养人肝癌HepG2 细胞,MTT 法检测β-榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI 双染检测细胞凋亡。通过建立H22 小鼠肝癌荷瘤模型,观察β-榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对HepG2 细胞具有抑制增殖的作用,呈剂量和时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI 法检测到早期凋亡细胞。不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,各药物浓度组Caspase-3 蛋白均上调（P<0.05）,P65 蛋白均下调。结论：β-榄香烯可有效抑制人肝癌HepG2 细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡,并且与上调凋亡相关蛋白Caspase-3、下调NF-κB P65 相关。     

四川藏羌地区五加属主要资源种类的HPLC 指纹图谱特征和种类鉴定

目的:建立四川藏羌地区五加属主要资源种类的HPLC指纹图谱,为鉴别其种类提供依据.方法:采用梯度洗脱方法,以Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),柱温30℃,以甲醇-0.5％磷酸水溶液为流动相.建立四川藏羌地区五加属药材的指纹图谱,并采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件进行相似度的计算.结果:建立的方法重现性较好,并根据检测结果确定了12个共有特征峰.应用DPSv3.0统计软件对获得的HPLC数量化特征进行系统聚类分析(组间距离法,欧氏距离),聚类分析结果为S1与S2,S3红毛五加药材的不同药用部位,成分最为接近;其次是S5(糙叶藤五加茎皮);再其次分别是S4(蜀五加茎皮)、S8(香加皮药材)、S6(刺五加药材)和S7(五加皮药材).结论:所建立的HPLC指纹图谱对四川藏羌地区五加属主要资源种类的鉴别具有参考价值.     

Regulation effects on abnormal glucose and lipid metabolism of TZQ-F,a new kind of Traditional Chinese Medicine

Aim of the study

Based on the recipe of the traditional anti-diabetic formula TZQ, we developed TZQ-F, a new formula including 8 fractions isolated from Red Paeony root, Mulberry leaf, Lotus leaf, Danshen root and Hawthorn leaf with a good quality assurance. The study was aimed at fraction preparation and effects of the fractions on abnormal glucose and lipid metabolism.

Materials and methods

The active fractions were obtained by macroporous resin, ion-exchange resin and polyamide resin column chromatographies. HPLC analyses were used for quality control. In vitro mechanism study included DPPH radical scavenging, AGEs formation inhibition, α-glucosidase inhibition and lipase inhibition, and rats on high-fat diet were used for in vivo study.

Results

In vitro mechanism study showed that among the 8 fractions, three of them had inhibition effects on intestinal disaccharase, three with inhibition effects on lipase, and five with effects of free radical scavenging. In vivo study showed that after 4 weeks of treatment, TZQ-F significantly decreased the levels of serum total cholesterol, TG, glucose, LDL-C and HDL-C in rats on high-fat diet. Consistent with the in vitro and in vivo results, histology study demonstrated that TZQ-F alleviated hepatic steatosis induced by high-fat diet.

Conclusions

TZQ-F possesses the potential regulation effects on abnormal glucose and lipid metabolism.     

丛枝菌根真菌与哈茨木霉菌合用对连作丹参生长及质量的影响

该文探讨田间条件下丛枝菌根真菌(AMF)与哈茨木霉菌合用对丹参生长及质量的影响。采用田间小区试验来进行研究,使用HPLC测定丹参地上部分和地下部分有效成分含量,通过形态观察并计算根部发病率,并结合方差统计学方法对各指标的测定结果进行分析。结果显示,单独接种AMF以及AMF与哈茨木霉菌合用能够有效的降低连作丹参根部病害的发生率,其中AMF与哈茨木霉菌合用效果更佳,比CK组降低了61.50%。几种处理对丹参生物量影响没有显著差异,但都能提高丹参根部各种有效成分的含量。单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉都能显著提高丹参根中丹酚酸B的含量(P<0.05),其中AMF对丹酚酸B促进作用最明显,提高了27.97%;接种AMF能显著提高丹参根丹参酮I和丹参酮ⅡA的含量(P<0.05),其中丹参酮I约提高了70.14%;丹参酮ⅡA约提高了51.42%。另外,单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉均能显著提高丹参根中隐丹参酮的含量,提高了约30.67%。从而得出单独接种AMF以及AMF+哈茨木霉能够有效减低连作丹参病害的发生率,同时提高连作丹参药材的质量。     

Comparative study on hemostatic, cytotoxic and hemolytic activities of different species of Paris L

Ethnopharmacological relevance

The rhizoma of Paris polyphylla var. yannanensis or P. polyphylla var. chinensis called Rhizoma Paridis as a traditional Chinese medicine has an effect of heat-clearing and detoxicating, detumescence and acesodyne in folk for a long time. The increasing application of Rhizoma Paridis resulted in the shortage of wildlife resources. Here, we compared the major activities of other species of genus Paris to find the replacement plants.

Materials and methods

Six species (P. polyphylla var. yunnanensis, P. delavayi var. delavayi, P. fargesii var. Fargesii, P. bashanensis Wang et Tang, P. polyphyllar var. minora, and P. polyphylla var. pseudothibetical) were collected from three Provinces in China, and compared the hemostatic, cytotoxic and hemolytic activities by different assays.

Results

For the hemostatic activity, all the plants except Paris fargesii var. Fargesii could significantly shorten the tail bleeding time and blood clotting time (P<0.05). For further mechanism study, they reduced the prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT), but they had no significant effect on thrombin time (TT). P. fargesii var. Fargesii showed the similar cytotoxicity to P. polyphylla var. yunnanensis (IC₅₀: 18.21 and 15.73 μg/mL, respectively). HD₅₀ was used as the index of hemolytic activity. P. delavayi var. delavayi and P. bashanensis Wang et Tang were the last to have this activity as the values were 3.027 and 1.222 mg/mL.

Conclusions

The different species of genus Paris have different activities. Paris delavayi var. delavayi and Paris bashanensis Wang et Tang could be used as the resources of hemostatic drugs and P. fargesii var. Fargesii as the antitumor medicine.     

光质对灵芝生长与灵芝多糖含量的影响

目的:研究不同光质对灵芝生长发育和灵芝多糖含量的影响,为灵芝优质高产栽培提供理论依据。方法:栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化并测量多糖含量。结果:不同光质处理形态上弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹的数目与对照差异显著,灵芝多糖含量出现最高值时期不同。蓝色光质处理在现蕾期、开伞期、弹孢后期多糖含量均高于对照,且差异显著。绿色光质处理有助于生长末期多糖积累。不同光质处理对灵芝子实体产量与灵芝孢子粉产量均有影响。结论:对照处理灵芝子实体产量高,性状好;蓝色光质处理可以提高灵芝多糖含量。     

仿生胶对枸杞木虱及其天敌种群动态的影响

目的:研究新型植保产品-仿牛胶对枸杞木虱及其天敌枸杞木虱啮小蜂、大草蛉试验种群的影响.方法:于枸杞萌芽期是在树冠上喷洒仿牛胶,定期调查枸杞木虱成虫、若虫及枸杞木虱啮小蜂成虫、大草蛉卵的数量,统计分析仿生胶对种群数量的影响.结果与结论:仿生胶处理能够明显抑制枸杞木虱种群的扩张,对枸杞木虱啮小蜂及大草蛉的种群数量影响不明显,仿生胶作为新型植保产品值得深入研究.     

对何首乌基原和品种的再认识

何首乌的安全性近期成为关注的焦点,其肝毒的诱因众说纷纭,经考证发现了品种、使用习惯方面的一些问题,也许能为剖析其诱因提供一些线索。何首乌有赤(雄)、白(雌)之分,传统应用多雌雄合用,赤何首乌即何首乌Fallopia multiflora,白何首乌即何首乌原变种F.multiflora var. multiflora。供同行参考。     

麻黄药材原植物资源和市场品种调查

目的:调查近年我国麻黄的资源分布和市售品情况,为麻黄的资源保护和品种整理研究提供依据.方法:采用实地调查、委托调查和访问调查等相结合的方法.结果:由于20世纪末对麻黄资源的掠夺式开发,生态环境和野生资源遭严重破坏,正品麻黄的资源急剧减少,内蒙古中、西部已少见草麻黄,宁夏和甘肃西北部曾有的数万公顷中麻黄资源已完全消失,尤其是木贼麻黄资源已濒临灭绝,仅见零星分布于新疆阿勒泰山脉一带.全国市场七的主流品种为草麻黄(33/38份商品药材),中麻黄次之(5/38份商品药材),但中麻黄在分布区(青海和新疆)的小规模诊所中常见,未见木贼麻黄商品药材.结论:应大力发展麻黄的栽培技术,尤其是推广中麻黄和木贼麻黄的栽培,同时也要积极采取措施保护并恢复麻黄的野生资源(如采用适当的采收方法).     

Study of the anti-proliferative effects and synergy of phthalides from Angelica sinensis on colon cancer cells

Angelica sinensis is a Chinese medicinal herb for treating gynecological and gastrointestinal disorders, and also in conjunction with cancer chemotherapy.     

大戟属根类有毒中药醋制前后的毒性比较研究

目的:研究京大戟、甘遂、狼毒炮制前后的毒性变化并比较三者的毒性强弱。方法:采用肠推进运动模型及巨噬细胞炎症模型,评价3种大戟属根类有毒中药炮制前后的毒性。结果:京大戟、甘遂、狼毒生品及醋品均可明显促进小鼠小肠推进运动及巨噬细胞释放NO的能力,强弱顺序为甘遂>京大戟>狼毒,醋制后三者均可明显缓和这一作用。结论:京大戟、甘遂、狼毒可诱导炎症反应的发生并促进肠推进运动,产生强烈的泻下作用,醋制后致炎及肠推进作用显著减弱,表明醋制可缓和京大戟、甘遂、狼毒的泻下作用。