游离脂肪酸对基础状态β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原mRNA表 …

目的：研究游离脂肪酸（油酸和软脂酸）对基础状态大鼠β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原ｍＲＮＡ表达的影响。方法：体外分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠β细胞，与软脂酸或油酸共同孵育２４ｈ后，测定胰岛素浓度和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测前胰岛素原ｍＲＮＡ表达。结果：（１）软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）组β细胞胰岛素分泌量明显高于对照组。（２）经软脂酸和油酸共同培养２４ｈ     

游离脂肪酸对基础状态β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原mRNA表达的影响

目的：研究游离脂肪酸（油酸和软脂酸）对基础状态大鼠β细胞胰岛素分泌和前胰岛素原ｍＲＮＡ表达的影响。方法：体外分离培养Ｗｉｓｔａｒ乳鼠β细胞，与软脂酸或油酸共同孵育２４ｈ后，测定胰岛素浓度和３ＨＴｄＲ掺入量，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测前胰岛素原ｍＲＮＡ表达。结果：（１）软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ）组β细胞胰岛素分泌量明显高于对照组。（２）经软脂酸和油酸共同培养２４ｈ后，β细胞３ＨＴｄＲ掺入量增高。（３）软脂酸和油酸试验组β细胞前胰岛素原ｍＲＮＡ表达均高于未经游离脂肪酸培养的对照组。结论：游离脂肪酸可能通过促进基础状态β细胞前胰岛素原ｍＲＮＡ表达和细胞增生，造成基础状态β细胞分泌胰岛素过多，从而参与了高胰岛素血症的发生。     

游离脂肪酸和胰岛素的分泌

游离脂肪酸(FFA)对胰岛β细胞有脂毒性，阻碍胰岛素的分泌，这种毒性作用在正餐后体内甘油三酯水平升高时更为明显。而高甘油三酯或高游离脂肪酸血症在2型糖尿病患者中是一种很常见的代谢紊乱，尤其是在未控制血糖的患者中。另外，FFA升高还可促进机体胰岛素抵抗，后者使胰岛素分泌增加。因此，为探明FFA和2型糖尿病发病的关系，有关FFA和胰岛素分泌的研究引起了普遍关注。     

钙通道对β细胞胰岛素分泌的调节作用

作为胰岛的主要构成细胞,β细胞具有可兴奋性且对葡萄糖十分敏感,对于血糖稳态的维持起着独特的作用,而电压门控钙通道(CaV通道)在这一过程中更是处于中心地位。除了控制胰岛素分泌之外,CaV通道还影响着β细胞的发育、生长与存活。来自对糖尿病易感或已患糖尿病动物模型的β细胞均表现出CaV通道性质和数量的改变。生理范围内,β细胞CaV通道活性和(或)密度的上调将导致胰岛素分泌的增加和更为有效的血糖稳态。同样,CaV通道活性和(或)密度的下调将导致胰岛素分泌减少和糖耐量受损,这与某些2型糖尿病的发病有关。本文就钙通道对β细胞胰岛素分泌的调节作用进行综述。     

在β细胞中脂肪酸信号和胰岛素分泌

脂肪酸和其他脂质分子对于许多细胞功能,包括小囊胞吐作用都是很重要的,本文旨在解释通过3个相互相关的途径或称为β细胞脂质信号的"三叉模式"。首先模式的2个途径影响细胞内脂肪酸的代谢,而第3个途径是膜上的游离脂肪酸受体的激活作用,第1个途径包括环腺苷酸活化蛋白激酶/丙二酸单酰辅酶A/长链乙酰辅酶A信号网络,增加胞内丙二酸单酰辅酶A,隔开脂肪酸氧化,从而有利于长链乙酰辅酶A的信号作用,第2个途径包括葡萄糖对三酰甘油/游离脂肪酸循环的作用,第3个途径包括G蛋白耦联受体40/游离脂肪酸受体1的游离脂肪酸刺激作用,造成葡萄糖刺激增加,胞内钙的积聚,胰岛素分泌。     

游离脂肪酸对βTC6细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌的影响及吡格列酮的干预作用

目的：观察游离脂肪酸（FFA）对体外培养的βTC6细胞胰岛素分泌功能的影响及盐酸吡格列酮作用的干预。方法：体外培养βTC6细胞,0.5mmol/LFFA分别干预1h、48h,放射免疫法检测胰岛素。不同浓度的吡格列酮（0.1、1.0、10.0μmol/L）与FFA共同干预βTC6细胞48h,放射免疫法检测胰岛素浓度。结果：FFA干预1h后,βTC6细胞的葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）增加（P〈0.05）,FFA干预48h后,βTC6细胞的GSIS较干预前下降（P〈0.05）。FFA与吡格列酮共同干预时,随着吡格列酮浓度的升高,GSIS呈上升的趋势,1.0μmol/L和10.0μmol/吡格列酮与FFA共同干预组GSIS较FFA干预48h增加（P〈0.05）。结论：FFA对B细胞具有短期刺激作用及脂毒性作用,吡格列酮可以部分改善脂毒性作用。     

正常糖调节人群中基础胰岛素分泌与游离脂肪酸浓度的关系

目的研究糖调节正常者基础胰岛素分泌与游离脂肪酸(FFA)浓度的关系。方法按空腹FFA四分位间距,将308名糖调节正常者(男133名,女175名)分为A组[FFA为(0.41±0.11)mmol/L]、B组[FFA为(0.66±0.05)mmol/L]、C组[FFA为(0.91±0.08)mmol/L]和D组[(1.31±0.28)mmol/L],比较4组的空腹及糖负荷后糖、脂代谢和胰岛素分泌的异同,并分析空腹胰岛素(FINS)与空腹FFA(FFA0’)的相关性。分析正常体重组[NW组,体质指数(BMI)≥18且<25 kg/m~2,131名]、超重组(OW组,BMI≥25且<30 kg/m~2,122名)、肥胖组(OB组,BMI≥30 kg/m~2,55名)中FINS与FFA0’的关系。结果校正年龄、性别、BMI后,B、C、D组的FINS、糖负荷2 h胰岛素(2hINS)均明显升高(P值均<0.01)。偏相关和多元逐步回归分析显示,FINS与FFA0’呈正相关(r=0.278,P<0.01)。NW组和OW组中也发现,FINS与FFA0’呈正相关(r值分别=0.329、0.315,P值均<0.01),OB组中两者不相关(P>0.05)。结论①FFAM度升高与基础胰岛素分泌增加密切相关;②FFA浓度是独立于血糖之外的影响基础胰岛素分泌的重要因素之一;③肥胖群体中,FFA0’与FINS的相关性消失。     

胰岛β细胞胰岛素分泌的调节及其机制

胰岛素是机体内促进合成代谢的蛋白质激素,它由51个氨基酸组成α、β两条肽链,通过两个二硫键连接在一起。主要作用是促进葡萄糖的氧化代谢和糖原生成,抑制糖异生,维持血糖浓度的恒定。调节胰岛素分泌的因素有很多,其中,葡萄糖、内分泌激素和细胞因子是较为重要的调节因素。机体能够整合这几大类调节因素的信号,使胰岛素的分泌量维持在     

胰岛素,胰岛素原对肝胚胎瘤细胞PAI—1分泌的影响

选择在合成PAI－1方面与肝细胞相似的肝胚胎瘤细胞株（HEPG2），用不同浓度的胰岛素、胰岛素原在不同时间内刺激单层HEPG2细胞，测培液中PAI—1活性。结果发现：胰岛素和胰岛素原均能刺激PAI－1的分泌，具有时间和剂量依赖性。不同浓度的胰岛素、胰岛素原在刺激8h内PAI－1的分泌差异性不明显，8h后超生理量的胰岛素、胰岛素原的刺激作用明显高于生理浓度的胰岛素和胰岛素原。     

膀胱移行细胞癌中间隙连接蛋白Cx43mRNA、Bcl-2mRNA和Bax mRNA的表达及其相关性研究

目的 探讨间隙连接蛋白Cx43、Bcl-2及Bax在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及其意义.方法 用半定量RT-PCR的方法检测Cx43、Bcl-2及Bax在35例BTCC和21例癌旁组织中的表达情况,并分析其与BTCC临床病理因素的关系.同时取正常膀胱组织15例做对照.结果 BTCC组织中Cx43 mRNA的表达比值[Cx43/人肌动蛋白(β-actin)]为(0.34±0.37),低于BTCC癌旁组织中的(0.79±0.70)和正常膀胱组织的(0.81±0.47),差异有统计学意义(P＜0.01);Bcl-2 mRNA表达比值为(0.35±0.43),高于癌旁组织中的(0.16±0.33)和正常膀胱组织的(0.15±0.23),差异有统计学意义(P＜0.01).癌旁组织与正常膀胱组织Cx43 mRNA及Bcl-2 mRNA的表达比值比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).Cx43 mRNA在BTCC病理分级G3的表达为(0.30±0.16),G2的表达为(0.54±0.22),G1的表达为(0.60±0.25),3个级别比较差异有统计学意义(P＜0.05).Bcl-2 mRNA在BTCC病理分级G3的表达为(0.47±0.15),G2的表达为(0.35±0.11),G1的表达为(0.24±0.10),3个级别间比较差异有统计学意义(P＜0.01).复发BTCC组织中Bcl-2 mRNA的表达水平(0.40±0.15)高于初发癌组织(0.28±0.11),差异有统计学意义(P＜0.05).Bax mRNA在BTCC组织、癌旁组织及正常膀胱组织中的表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Bax mRNA的表达水平与BTCC患者的肿瘤分期、病理分级以及肿瘤有无复发比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Cx43 表达下调与BTCC的发生、进展及其恶性特征有关,Cx43基因可能与凋亡相关基因Bcl-2(或Bcl-2/Bax)在BTCC的发展中起拮抗作用,与细胞的凋亡过程有关.     

肝癌组织GPC3 mRNA与AFP mRNA的表达

目的: 探讨肝细胞肝癌(HCC)中GPC3 mRNA与AFP mRNA的表达以及二者单独和联合检测的诊断价值.方法: 半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测HCC 41例,其他肝肿瘤15例,健康人11例肝组织标本中两个基因的表达.结果: GPC3 mRNA在HCC、癌旁、其他肿瘤、远离HCC与正常肝组织的相对表达量分别为78.9±35.5,30.6±21.6,36.6±25.2,23.8±15.5;而AFP mRNA的相对表达量依次为61.2±32.6,31.5±23.6,29.0±24.7,21.2±15.9;各基因在HCC与其他组织间表达差异显著(P<0.01).以各自远离癌灶与正常组织相对表达量的上限(x 1.96s)为界值,HCC中GPC3 mRNA,AFP mRNA的高表达比率分别为80.5 %与63.4 %,而两者联合检测的比率达92.7 %.AFP mRNA与血清AFP水平和HCC分级有关,GPC3 mRNA的表达与HCC的分级及侵袭性有关.HCC中两个指标相对表达量无显著相关性(r=-0.145,P=0.365).结论: GPC3 mRNA可能是一个潜在的特异性HCC标记,与AFP mRNA联检可提高HCC筛查与诊断的比率.     

不同载铁状态下HL-60细胞转铁蛋白受体和铁蛋白mRNA的表达

目的:探讨不同载铁情况下HL-60细胞中转铁蛋白受体(TfR)mRNA和铁蛋白(Fn)mRNA的表达情况.方法:取HL-60细胞分5组培养.FeCl3-20组和FeCl3-40组培养液中加入FeCl3,终浓度分别为20 μmol/L,40 μmol/L;DFO-50和DFO-100组培养液中分别加入去铁胺(DFO)50 μmol/L,100 μmol/L;对照组用单纯培养液,不加FeCl3或DFO.分别于细胞培养12 h、24 h和48 h收集细胞,采用RT-PCR半定量法测定TfR mRNA和Fn mRNA的相对表达量.结果:与对照组比较,DFO-50和DFO-100组TfR mRNA表达量随培养时间的延长而升高,Fn mRNA表达量变化不大(P＞0.05).FeCl3-20和FeCl3-40组TfR mRNA的表达随培养时间的延长,先增高后降低,Fn mRNA的表达则逐渐降低.结论:TfR 和Fn 不同程度地参与了HL-60细胞铁代谢过程.     

肺癌外周血中EGFR mRNA、SP-D mRNA、LUNX mRNA表达的临床意义

目的:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肺癌患者肿瘤组织和外周血中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达,探讨其作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法:应用RT-PCR技术检测40例非小细胞肺癌组织和15例肺良性病变组织中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达;检测40例肺癌患者外周血中靶基因的表达,并以15例良性肺疾病患者和10名健康人外周血作为对照。结果:40例肺癌患者病理组织中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA的表达率为77.5%(31/40)、100%(40/40)、100%(40/40),外周血中EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA表达阳性率分别为55.0%(22/40)、52.5%(21/40)和57.5%(23/40);对照组中15例肺良性病变患者病理组织中EGFRmRNA表达率为13.3%(2/15),无SP-DmRNA和LUNXmRNA表达,15例肺良性病变患者和10名健康人的外周血中无EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA表达。结论:EGFRmRNA、SP-DmRNA、LUNXmRNA作为检测肺癌组织及肺癌外周血微转移的分子标志物具有良好的敏感度和特异性;三者表达与肺癌TNM分期、组织学类型和癌细胞分化程度关系密切。     

桂枝汤对脾虚大鼠NFAT mRNA,IL-4 mRNA,IFN-γ mRNA的干预作用

目的:采用RT-PCR方法来探讨桂枝汤对脾虚NFAT mRNA,IL-4 mRNA,IFN-γ mRNA的影响以及干预Th1/Th2细胞漂移的机制.方法:40只大鼠随机分为空白对照组(A组)、脾虚组(B组)、桂枝汤大剂量组(C组)和桂枝汤小剂量组(D组)等4组,每组10只;用规范的脾气虚证大鼠模型造模方法将B,C和D组大鼠造模,B,C和D组分别用蒸馏水、桂枝汤大剂量、桂枝汤小剂量灌胃,标本采集后用RT-PCR检测NFAT mRNA, IL-4 mRNA和IFN-γ mRNA表达水平.结果:脾虚组的NFAT mRNA,IL-4 mRNA表达上调;而IFN-γ mRNA表达下调,经桂枝汤大、小剂量组治疗后,NFAT mRNA,IL-4 mRNA表达下调,IFN-γ mRNA表达上调.结论:桂枝汤对Th1/Th2细胞漂移作用途径可能是通过下调NFAT mRNA的表达,恢复了IFN-γ mRNA正常转录水平,进而下调IL-4 mRNA的表达,使脾虚大鼠Th1/Th2细胞达到一种新的平衡.     

环氧化酶2和乙酰肝素酶mRNA在肾癌中的表达

目的探讨环氧化酶2（COX 2）和乙酰肝素酶（Hpa）mRNA在肾癌（RCC）组织中的表达,分析其与RCC发生发展及预后的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(半定量RT PCR)方法检测56例RCC组织标本及28例癌旁正常组织标本中COX 2 mRNA与Hpa mRNA的表达（β actin作为定量标准物）,观察其在RCC组织和癌旁组织中的表达差异以及与临床病理参数和预后的关系。结果56例RCC组织中COX 2 mRNA与Hpa mRNA阳性率分别为73.2％和67.9％,均高于癌旁正常组织（χ2＝17.719,χ2＝21.429,P均＜0.05）;COX 2 mRNA阳性表达率G1～G2高于G3～G4（χ2＝30.727,P＜0.05）,COX 2 mRNA表达与患者预后不相关（χ2＝0.890,P＞0.05）;Hpa mRNA阳性表达率与RCC病理分级、临床分期、淋巴转移密切相关（χ2＝7.718,χ2＝3.963,χ2＝3.852,P均＜0.05）,Hpa mRNA表达与患者预后相关（χ2＝12.72,P＜0.05）;COX 2 mRNA与Hpa mRNA的阳性表达不相关（r＝-0.244,P＞0.05）。结论COX 2 mRNA高表达是RCC发生的早期分子事件;Hpa mRNA高表达与RCC进展、转移、预后等密切相关。     

胃癌组织中基质金属蛋白酶-2和E-钙黏附素检测

目的:探讨胃癌组织中基质金属蛋白酶 -2(MMP- 2)和E 钙黏附素 (E- CD)的表达。方法:采用原位杂交法,检测 72例胃癌(其中复发 39例)组织中MMP- 2mRNA和E- CDmRNA的表达,并观察 2者与浸润深度和淋巴结转移之间的关系。结果:胃癌组织中MMP -2mRNA和E CDmRNA的阳性表达与浸润深度和淋巴结转移有关。复发患者的 2种胃癌组织 (复发前手术切除标本;本次胃镜活检标本)与非复发胃癌组织标本的MMP 2mRNA和E- CDmRNA的阳性表达率差异有统计学意义(MMP 2:P<0. 01;E CD:P<0. 05)。MMP- 2mRNA阳性表达的胃癌组织中E CDmRNA的阳性表达率低于MMP 2mRNA阴性表达的胃癌组织, 2者呈负相关 (r=-0. 273,P<0. 05)。结论:MMP- 2mRNA和E- CDmRNA的表达与胃癌的浸润、转移及复发有关。检测MMP- 2mRNA和E- CDmRNA在胃癌患者胃镜活检组织中的表达可能有助于判断预后及胃癌转移复发潜能。     

丹参对LDL受体及apoA－Ⅰ mRNA水平的影响

研究了丹参对高脂喂饲大鼠的血清脂质水平、肝低来度脂蛋白（ＬＤＬ）受体ｍＲＮＡ和载脂蛋白（ａｐｏ）Ａ－ＩｍＲＮＡ水平的影响，以及对培养的人成纤维细胞上述两种ｍＲＮＡ水平的影响。发现丹参能升高鼠肝及人成纤维细胞ＬＤＬ受体ｍＲＮＡ水平，但降血清总胆固醇及ＬＤＬ胆固醇作用不明显。提示ＬＤＬ受体可能存在翻译或翻译后水平的调节。丹参对鼠肝及人成纤维细胞ａｐｏＡ－１ｍＲＮＡ水平未见有影响。     

MsPGN中活化NF-κBp65mRNA、IL-1βmRNA、IL-4mRNA的检测及其意义

目的:研究系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)肾组织中活化核因子-κBp65、IL-1β及IL-4基因表达的意义,探讨MsPGN的发病机制.方法: 应用原位杂交技术分别检测正常对照组9例与病例组41例MsPGN肾组织中NF-κBp65mRNA、IL-1βmRNA及IL-4 mRNA水平,并分析3项检测指标之间的相互关系及其与MsPGN病变程度的关系.结果:(1)正常对照组中肾小球系膜区活化NF-κBp65mRNA、IL-1DmRNA阳性检出率分别为11.1%、33.3%,而IL-4 mRNA为0;病例组3项检测指标阳性率分别为70.7%、75.6%、61.1%.2组肾小球中3项检测指标阳性率差异有统计学意义(P＜0.05).(2) MsPGN肾小球组织中NF-κBp65mRNA活化与IL-1βmRNA之间呈显著正相关(r=0.383 6,P＜0.05),IL-1βmRNA与IL-4mRNA之间亦呈显著正相关(r=0.477 1,P＜0.01).(3)活化NF-κBp65mRNA、IL-1βmRNA及IL-4mRNA阳性率均随着病变程度加重增高,但差异无统计学意义.(4)正常肾组织及MsPGN的肾小管中3项指标检测结果无一定规律性.结论:3项指标在MsPGN发病环节中共同起着作用.MsPGN对致病原的反应更接近于Th2反应.