细胞衰老与p16INK4a的转录调控

抑癌基因p16~(INK4a)可特异地抑制CDK4及CDK6,在抑制细胞生长、促进细胞衰老等方面发挥重要的生物学作用。由于p16~(INK4a)功能的重要性,近年来,针对p16~(INK4a)转录调控方面的研究取得了一系列进展,发现了一系列正性和负性调控元件和转录调控因子,如:E47、Id1、Jun B、Bmi-1、RREB等,为进一步认识细胞增殖规律以及衰老进程具有重要的理论意义。     

p19—INK4家族的新成员

ＩＮＫ４ａ位点含有２个重叠的基因：ｐ１６基因和ｐ１９基因。它们具有相同的ＤＮＡ序列，但氨基酸顺序安全不同。ｐ１９基因是新近报道的肿瘤抑制基因，与细胞衰老有一定的相关性。本就ｐ１９基因做一综述。     

细胞周期调控基因——p21~(CIP1/WAF1)

p21~(CIPWAF1)基因编码的产物是一种细胞周期蛋白依赖性激酶的抑制蛋白。它通过调控细胞周期的进程,参与细胞的生长、分化、衰老及死亡。在细胞DNA损伤反应及肿瘤的发生、发展中也占有一席之地。本文对p21基因的发现、基因及蛋白质结构、生物化学特性、生物学特性以及研究前景作一概述。     

p19-INK4家族的新成员

INK4a位点含有 2个重叠的基因 :p1 6基因和 p1 9基因。它们具有相同的 DNA序列 ,但氨基酸顺序完全不同。 p1 9基因是新近报道的肿瘤抑制基因 ,与细胞衰老有一定的相关性。本文就 p1 9基因做一综述     

银屑病患者皮损p16INK4a基因CpG甲基化位点和频度

目的研究皮损表皮p16INK4a甲基化阳性的银屑病患者基因启动子区CpG甲基化的位点和频度。方法采集50例银屑病患者皮损处皮肤,分离表皮,提取DNA。采用甲基化特异性PCR和测序法检测p16INK4a基因启动子区CpG甲基化的位点和频度。结果p16INK4a基因启动子甲基化阳性的患者,约50%CpG发生甲基化,均出现于特定位点。结论p16INK4a甲基化阳性银屑病患者p16INK4a基因启动子并非完全发生甲基化。     

细胞周期抑制蛋白Kip及Ink4研究进展

真核细胞的细胞周期由细胞周期素依次激活相应的Cdk所推动。细胞能否通过限制点从G_1期进入S期很大程度上取决于G_1期细胞内CyclinD1/CyclinE/CyclinA的积累,Cdk4/Cdk6/Cdk2与Kip的化学剂量关系及Ink4的活性。Kip和Ink4是目前已知的两类结构不同、作用方式也不尽相同的细胞周期抑制蛋白:Kip主要以化学剂量方式,一方面抑制与DNA复制相关的蛋白质的mRNA的转录;另一方面通过抑制H1组蛋白的磷酸化进而抑制细胞周期。Ink4则通过抑制Cdk4的激酶活性间接抑制mRNA的合成而抑制细胞周期。     

p27^kip1的功能研究及其与肿瘤的关系

p2 7kip1是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂 ,具有多种生物学功能。它参与调控细胞周期 ,调节细胞凋亡 ,增强细胞间的粘附 ,诱导细胞分化等。p2 7kip1基因被认为是候选的肿瘤抑制基因 ,其表达下降与肿瘤的发生、侵袭密切相关 ,可作为某些肿瘤预后的独立判定指标。     

补体第四成分(C4)的基因

C4A3的基因由41个外显子与40个内含子组成。外显子1～16、16～33、33～41分别编磅码C4的β链、α链及γ链。唯一甘露糖型糖基化位点由第6外显子(207位aa)编码,三个两天线型糖基化部位分别与20(843aa)、30(1309aa)及32(1372aa)外显子有关。C4硫酯键、同种型区分部位及Rg/Ch抗原的基因集中在外显子23～30的C4d编码区。C4基因第9内含子特大,它含不含HERV-K(C4)是决定C4基因长与短的关键。C4基因的表达调控区没有TATA盒由Inr启动。     

宫颈液基细胞中p16INK4a和cyclin E蛋白表达及其对CIN Ⅰ患者预后的评估价值

目的:探讨宫颈液基细胞中p16INK4a和cyclin E蛋白表达及其对CINI患者预后的评估价值。方法:收集我院病理科2005-10/2008-10液基细胞学诊断CIN Ⅰ级患者86例,均经病理组织学证实为CIN Ⅰ级。采用免疫细胞化学染色检测p16INK4a及cyclin E蛋白,同时随访1年,观察其表达与患者病情转归的相关性。结果:86例CIN Ⅰ级患者宫颈液基细胞中p16INK4a阳性表达59例(68.6%),cyclin E阳性表达70例(81.4%)。随访1年,54例CINI病变治愈,21例CIN Ⅰ病变未愈,11例进展为CIN Ⅱ及CIN Ⅲ(恶化)。59例pl6INK4A阳性表达病例中28例治愈,20例未愈,11例恶化;而27例pl6INK4A表达阴性者中26例治愈,1例仍未愈,均无恶化。两者比较有统计学差异(P0.01)。70例cyclin E阳性表达病例中29例治愈,26例未愈,15例恶化;而16例cyclin E表达阴性者均治愈。两者比较有统计学差异(P0.01)。结论:p16INK4a及cyclin E蛋白联合检测对判断宫颈CIN Ⅰ患者预后可能具有重要的临床价值。     

子宫颈病变中p16INK4A 蛋白表达及其与HPV16/18感染的关系

目的 探讨p16INK4A 蛋白在子宫颈鳞癌(SCC)和子宫颈上皮内肿瘤(CIN)中的表达及其与HPV16/18感染的关系.方法 用原位杂交法检测HPV16/18在25例子宫颈癌、45例CIN及10例慢性子宫颈炎中的表达,同时用免疫组化EliVision法检测p16INK4A 蛋白的表达.结果 (1)与慢性子宫颈炎相比,CIN Ⅱ级、CIN Ⅲ级、浸润癌HPV16/18杂交信号阳性率显著增高(P<0.01);(2)子宫颈鳞癌组织、CIN Ⅰ级、CIN Ⅱ级、Ⅲ级及慢性子官颈炎标本中p16INK4A 蛋白阳性率分别为100.0%、20.0%、46.7%、100.0%和10.0%;(3)在子宫颈鳞癌及CIN HPV16/18感染的标本中p16INK4A 蛋白表达均是阳性.结论 子宫颈鳞癌的形成与HPV感染、p16INK4A 蛋白过表达是呈正相关关系,p16INK4A蛋白可能作为子宫颈鳞癌及CIN的标志物,对子宫颈癌筛查和预防有重要意义.     

兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)多克隆抗体制备与应用

目的 制备兔抗人乳酸脱氢酶C4(LDHC4)的多克隆抗体。方法 采用PCR点突变LDHC基因,并将该基因构建到pET-28a载体上,形成pET-28a-LDHC重组表达载体、将重组载体转化至大肠杆菌表达宿主BL21(DE3),诱导表达获得重组人LDHC4蛋白,将重组蛋白作为抗原免疫新西兰兔,3次加强免疫后得到抗血清,采用ELISA检测抗血清效价,采用Western blot法检测抗血清的特异性,采用免疫组织化学法检测人三阴性乳腺癌组织中LDHC4的表达。结果 获得了特异性的兔抗人LDHC4多克隆抗体,抗体效价达1∶51 200,该抗体可用于Western blot法和免疫组织化学法。结论 成功制备了特异性兔抗人LDHC4多克隆抗体。     

circDCUN1D4调节miR-18a-5p/FBP1轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的 探讨环状RNA(circRNA)DCUN1D4调节微小RNA(miR)-18a-5p/果糖-1,6-二磷酸酶1(FBP1)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法 选取人肺癌细胞系（H1975、H1650、A549、SPCA-1）和人正常肺表皮细胞（HPL-1）,qRT-PCR检测各种细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平。取对数生长期的A549细胞并分为空白组、circDCUN1D4过表达质粒（circDCUN1D4）组、过表达质粒阴性对照（NC）组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物阴性对照（circDCUN1D4+mimics NC）组、circDCUN1D4+miR-18a-5p模拟物（circDCUN1D4+miR-18a-5p mimics）组。CCK-8法检测各组A549细胞活力,流式细胞术检测各组A549细胞凋亡水平,qRT-PCR检测各组A549细胞中circDCUN1D4、miR-18a-5p、FBP1 mRNA表达水平,Western blot检测各组A549细胞中FBP1、caspase-3、Ki...     

p27~(kip1)在胃癌中的表达及与临床病理分期和预后的关系

目的 :探讨 p2 7kip1在胃癌中的表达状况及其预后价值。方法 :应用免疫组化技术 (S P法 )检测了 p2 7kip1在 6 7例胃癌中的表达。结果 :p2 7kip1在胃癌中的阳性表达率为 5 0 7% ,表达呈异质性。p2 7kip1的表达与胃癌的浸润深度 (P <0 0 5 )、淋巴结转移 (P <0 0 0 5 )、分化程度 (P <0 0 5 )及临床病理分期 (P <0 0 0 5 )显著相关 ,而与肿瘤大小、部位无关。结论 :p2 7kip1在胃癌中低表达反映了其恶性进展 ,是一个有价值的预后因子     

σ~(32)(sigma-32)及其对热应激蛋白的调控

σ~(32)是由 E.coli rPoH基因编码的分子量为32 kD的热应激蛋白转录调控因子。当热应激或其它应激反应发生时,它迅速激活热应激基因的启动子,大量转录其mRNA,合成热应激蛋白。本文综述了σ~(32)在细胞内的表达及其对热应激基因转录的调控。     

新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中FHIT、P16~(INK4a)、RARβ蛋白的表达及意义

目的探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)、P16INK4a与视黄酸受体β(retinoic acid receptor-beta,RARβ)蛋白在新疆维吾尔族妇女宫颈上皮内瘤变(cervical intra-epithelial neoplasia,CIN)及宫颈癌中的表达及其意义。方法采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶链接(SP)法检测20例慢性宫颈INK4a炎、30例CIN(CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ各10例)以及40例浸润性宫颈鳞癌组织标本中FHIT、P16INK4a及RARβ蛋白的表达。结果(1)FHIT蛋白阳性表达率依次为慢性宫颈炎(90.00%)CIN(66.67%)浸润性宫颈鳞癌INK4a(27.50%)(P=0.000);P16和RARβ蛋白阳性表达率依次为浸润性宫颈鳞癌(82.50%;90.00%)CIN(46.67%;53.33%)慢性宫颈炎(0.00%;10.00%)(P=0.000;P=0.000)。(2)在宫颈各组织中,FHIT蛋白INK4a与P16INK4a蛋白表达呈负相关(r=-0.384,P=0.000);FHIT蛋白与RARβ蛋白表达呈负相关(r=-0.291,P=0.006);P16INK4a蛋白与RARβ蛋白表达呈正相关(r=0.445,P=0.000)。结论抑癌基因FHIT表达缺失与P16INK4a和RARβ过度表达与宫颈癌的发生发展密切相关,并且FHIT、P16INK4a、RARβ具有协同作用。FHIT蛋白与P16INK4a蛋白和RARβ蛋白的联合检测可作为宫颈癌早期诊断和宫颈癌进展的分子指标。     

血清IgG4、CA19-9 水平对IgG4 相关性胆管炎的诊断及鉴别诊断价值

目的:探讨血清IgG4、CA19-9 及自身抗体对IgG4 相关性胆管炎(IgG4-SC)的诊断及鉴别价值。方法:选取41例IgG4-SC 患者、162 例非IgG4-SC 患者及40 例健康对照血清样本,采用免疫比浊法和直接化学发光法检测IgG4 和CA19-9水平、采用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)、抗平滑肌抗体(SMA)和抗线粒体抗体(AMA),并进行结果统计分析。结果: IgG4-SC 患者的ANA、ANCA、SMA 和AMA 阳性率分别为41.46%、7.32%、0 和2.44%。其中,ANA 阳性率与正常对照组、ANCA 阳性率与原发性硬化性胆管炎(PSC)组、SMA 和AMA 阳性率与非IgG4-SC组均存在差异,且具有非常显著统计学意义(P<0.01)。于血清IgG4(n =36/41)和CA19-9(n =21/41)升高情况与正常对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);其ROC 曲线下面积(AUC)分别为0.979 和0.646,P<0.05。结论:血清IgG4 和CA19-9水平的高表达和自身抗体检测,对于IgG4-SC 的鉴别诊断具有准确性和重要临床价值。     

乳腺浸润性导管癌中p57kip2、cyclin D1和cyclin E的表达及意义

目的探讨p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白在乳腺癌发生、发展中作用.方法用免疫组化S-P法检测64例乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)、15例乳腺导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)和15例癌旁正常乳腺组织中p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白的表达情况.结果p57kip2、cyclin D1和cyclin E蛋白在IDC的阳性率与在乳腺不同组织之间相比,cyclin D1、cyclin E蛋白在DCIS的阳性率与癌旁正常乳腺组织之间相比差异均有显著性(P≤0.05,P＜0.01).在IDC中,三者表达均与腋窝淋巴结转移有关(P≤0.05,P＜0.01),cyclin D1蛋白的表达与组织学分级有关(P＜0.01),cyclinE蛋白的表达与肿块大小有关(P＜0.01);p57kip2与cyclin D1之间、p57kip2与cyclin E之间的表达均呈负相关(P＜0.01)、cyclinD1与cyclin E之间的表达呈正相关(P＜0.01).结论p57kip2蛋白低表达、cyclin D1和cyclin E蛋白高表达可能是乳腺组织恶性转变以及乳腺癌发生淋巴结转移的重要生物学标志,cyclin D1和cyclin E蛋白异常表达是乳腺癌发生的早期事件.联合检测p57kip2、cyclin D1及cyclin E蛋白对预测乳腺癌淋巴结转移有重要意义.     

婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎Toll样受体4(TLR4)的检测及分析

目的:观察婴幼儿呼吸道合胞病毒(RSV)肺炎急性期外周血单核细胞表面TLR4的表达以及TLR4表达和急性感染期疾病严重程度之间的关联,并对RSV感染的发病机制作讨论。方法:应用直接免疫荧光法对2374例急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物标本进行RSV病毒抗原检测,对其中40名婴幼儿鼻咽部脱落上皮细胞RSV阳性患儿,用流式细胞仪检测其外周血单核细胞表面TLR4的表达,同时设30名同龄健康儿童为对照组。结果:1岁以内患儿RSV阳性率为50.89%,男性阳性比例高于女性,但阳性率无显著性差异(χ2=2.106,P>0.05);患儿组TLR4为87.57%±7.49%,对照组TLR4为54.92%±4.21%,两者存在显著性差异(P<0.05)。结论:①RSV是婴幼儿期间的急性下呼吸道感染的主要病原体。②RSV阳性肺炎感染患儿早期外周血单核细胞表面TLR4表达明显升高。     

创造性4C认知量表(PC4CS)中文版的信、效度检验

目的:对创造性4C认知量表(PC4CS)中文版进行信、效度检验,探讨创造性4C理论在中国本土文化中的适用性。方法:从在线大学生QQ群中招募全国各地3360名在校大学生为被试,填写PC4CS中文版初测量表,分析其信效度。结果:1各项目的区分度与鉴别性较好(t=14.01~34.77,r=0.31~0.55;P均0.001);2经探索性因子分析,得到与原量表一致的创造性4C结构,累积方差解释率为55.22%;3总量表Cronbachα系数为0.85,重测信度为0.88,各分量表的α系数在0.72~0.82之间,重测信度在0.81~0.90之间;与Lawdsei认知创造力量表和Rudowicz—Hui创造力概念调查量表的关联效度分别为0.67、0.77;各分量表与总分以及各分量表之间的相关分别在0.53~0.74、0.10~0.60之间,结构效度良好。结论:PC4CS中文版具有良好的心理测量学指标,适用于在中国文化背景下大学生的创造性4C认知测量。