转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用

目的:明确转录因子Sp1和Sp3对食管癌细胞ezrin基因的表达调控作用.方法:将转录因子表达载体CMV-Sp1和CMV-Sp3分别转染食管癌EC109细胞,采用定量RT-PCR和Western blot技术检测过表达转录因子Sp1和Sp3对ezrin mRNA和蛋白表达的影响;将ezrin基因启动子驱动的报告基因表达载体与内参照质粒pRL-TK和转录因子表达载体共转染EC109细胞,采用双荧光素酶报告基因分析系统检测转录因子Sp1和Sp3对ezrin基因启动子的激活作用以及这种激活作用是否依赖于ezrin基因的Sp1结合位点-75/-69.结果:过表达转录因子Sp1和Sp3显著提高EC109细胞ezrin mRNA和蛋白表达水平以及启动子活性.Sp1和Sp3增强ezrin基因启动子活性的作用位点不同,只有Sp1通过-75/-69位点调控ezrin基因启动子活性.结论:转录因子Sp1和Sp3可调控EC109细胞ezrin基因的表达.     

uPA基因表达调控研究进展

uPA的高表达与肿瘤侵袭转移密切相关。研究表明在乳腺癌、肺癌、结肠癌等肿瘤组织中都有uPA的高表达。已经证实细胞内uPA蛋白合成增加主要由基因的转录水平引起 ,uPA基因启动子上含有AP1、NFκB、PEA3等增强子元件 ,可与相应转录因子结合增强uPA的基因转录 ,许多调节分子如细胞内cAMP、生长因子和佛波酯等都是通过核内转录因子起调节作用的。另外肿瘤细胞内外信号传导通路的某种改变也导致了uPA表达的增高 ,促进细胞浸润转移。     

转录因子GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节Tie2基因的表达

目的：探讨在炎症刺激因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）介导的炎症反应中转录因子GATA家族成员是否参与了Tie2基因的转录调控。方法: 采用实时定量PCR测定TNF-α作用前后人主动脉内皮细胞（HAECs）和肺动脉内皮细胞（HPAECs）中GATA家族成员GATA2、GATA3 mRNA的表达,利用荧光素酶活性检测研究GATA转录因子能否激活Tie2基因启动子,并采用电泳迁移变动分析（EMSAs）和超级迁移率变动试验（supershift）研究GATA转录因子是否通过与Tie2基因启动子结合,从而激活Tie2基因的表达。结果: TNF-α可诱导人血管内皮细胞HAECs和HPAECs中转录因子GATA2的表达,高表达的GATA2可与Tie2基因启动子上的（T/A）GATA(A/G)序列结合,激活Tie2基因启动子,从而上调Tie2基因的表达。结论: GATA转录因子家族成员GATA2在TNF-α介导的炎症反应中调节了Tie2基因的表达。     

转录因子c-Jun调控成骨细胞Mepe基因表达的研究

目的:探讨转录因子c-Jun对Mepe基因的转录调控作用,并寻找c-Jun在Mepe启动子上的特异性结合位点。方法:利用免疫组织化学方法定位c-Jun与Mepe在小鼠骨组织的表达;采用real-time PCR的方法检测c-Jun的表达量改变对Mepe mRNA表达的影响;应用双萤光素酶报告基因检测系统及定点突变技术分析c-Jun对Mepe基因启动子转录活性的影响。结果:转录因子c-Jun在小鼠骨细胞胞核中呈阳性表达,而Mepe在小鼠骨细胞的胞浆中有表达;real-time PCR显示c-Jun过表达后,Mepe mRNA的表达显著增加(P0.05);双萤光素酶报告基因检测系统检测显示,在成骨细胞中转染p CMV-3Tag-1-c-Jun的实验组Mepe启动子的转录活性升高(P0.05);定点突变c-Jun的潜在结合位点后,Mepe启动子的转录活性显著下降(P0.05)。结论:转录因子c-Jun可通过Mepe启动子上潜在的c-Jun结合位点上调成骨细胞中该基因的转录。     

c-jun原癌基因及其表达产物的研究进展

c- jun原癌基因属于 b ZIP家族核内转录因成员子之一 ,可以结合在许多基因的启动子上参与基因转录的调控。其蛋白编码产物能通过亮氨酸拉链形成同源二聚体或与 AP- 1家族其他成员形成异源二聚体 ,与某些基因的 DNA区域特异结合以调控下游基因的转录活性。c- jun可与其他家族转录因子 ,如 :TNF- α,PU.1、Sp1、fas、ras,C/EBP、ATF/CREB等相互作用 ,发挥协同效应。 c- jun的调控范围十分广泛 ,能被各组织中的多种化学物质激活并受其影响。本文综述了近年来有关 c- jun与其他转录因子相互作用及其参与各组织发生、病理变化等方面的最新研究进展     

组织特异性转录调控序列及在肿瘤基因治疗研究中的应用

肿瘤特征性蛋白“持家基因”转录调控序列是肿瘤细胞内特异活化的基因调控序列，可使外源基因在肿瘤细胞中特征性地表达。本文综述了普通启动子及组织特异性启动子的基本结构与功能，转录调控因子对启动子的调节以及目前在肿瘤基因治疗研究领域中应用价值的人酪氨酸酶（Tyr）启动子，甲胎蛋白（AFP）启动子，癌胚抗原（CEA）启动子等的研究进展。     

小鼠白蛋白基因的特异性调控及其在转基因动物中的应用

白蛋白是肝脏表达的血清蛋白 ,其组织特异性表达的基础在于白蛋白基因存在特异性调控序列如启动子、增强子 ,可与肝脏富含的转录因子如 HNF1、C/ EBP及 e H- TF等特异性结合 ,刺激基因高效转录。自 1 989年 Izban克隆并提交了小鼠白蛋白调控序列 ,其在转基因动物及基因治疗中得到了广泛的应用 ,实现了基因转移的器官靶向性。近年的研究发现 ,与其他启动子如 CMV、PGK相比 ,白蛋白启动子引导的基因转移引起的免疫反应较轻 ,并可克服因启动子失活而导致的转基因沉默现象 ,相信随着转基因技术的不断发展 ,其将有越来越广泛的应用     

人LAIR-1/CD305基因启动子的生物信息学分析

目的:研究人LAIR-1/CD305启动子及其5′上游调控序列。方法:通过检索NCBI中的人类基因组数据库,获得LAIR-1的转录本序列及翻译起始位点上游2500bp的序列。利用Promoter2.0等软件预测LAIR-1的启动子序列,然后利用MatInspector等软件对启动子序列的转录因子结合位点和启动子功能模块进行预测。结果:LAIR-1基因的核心启动子区位于翻译起始密码子上游的600～200bp区域内。在转录调控区发现了一些重要的转录因子结合位点,并预测到13种启动子功能模块。结论:LAIR-1基因的表达可能受到多种转录因子和5′端上游调控序列的调控。     

VEGF基因表达调控机制的研究进展

VEGF基因的表达受多种细胞因子、瘤基因、抑瘤基因产物及缺氧等因素的调控。不同细胞因子诱导VEGF表达的信号通路与特定的转录因子有关 ,这些转录因子的结合位点位于VEGF启动子附近的区域 ;瘤基因和抑瘤基因产物对VEGF基因的表达调控作用是通过直接或间接作用于VEGF基因启动子来实现的 ,前者可激活VEGF启动子诱导VEGF基因表达 ,后者通过抑制VEGF启动子的活性使VEGF的表达水平下降 ;缺氧上调VEGF基因表达的作用与一种缺氧诱导的特异性的DNA结合蛋白—缺氧诱导因子 1(HIF 1 )有关。     

白细胞介素6基因表达的转录和转录后调控

ＩＬ—６基因启动子上有许多顺式调控序列，已经鉴定出ＮＦ－ｋＢ、ＮＦ－ＩＬ６、糖皮质激素受体等反式调节因子也作用于启动子上相应的调控序列。许多诱导剂通过其可诱导的反式调节因子作用于ＩＬ－６启动子，或选择性控制ＩＬ－６ｍＲＮＡ的稳定性从而实现转录和转录后水平的基因调控。     

人间皮素基因中Wnt/β-catenin通路调控元件分析及在卵巢癌细胞中启动子区鉴定

目的分析人间皮素基因启动子区中Wnt/β-catenin信号通路相关转录因子T细胞因子/淋巴细胞增强因子(T cell factor/lymphoid enhancer factor,TCF/LEF)结合位点,鉴定间皮素基因在卵巢癌细胞表达相关核心启动子区。方法采用生物信息学方法分析人间皮素基因启动子区域内可能的TCF/LEF转录因子结合位点。克隆人间皮素基因5'端附近1 764 bp启动子序列,对该片段做5'端的不同截短,克隆至p GL3-basic报告基因载体,分别转染人卵巢癌细胞系SKOV3和3-AO,双荧光酶报告基因系统检测不同启动子片段活性。结果人间皮素基因启动子区含有多个潜在的TCF/LEF结合位点。成功克隆扩增间皮素基因启动子区-1456～+308、-164～+308、+47～+308三个片段,经测序证明无误,构建p GL3载体。转染SKOV-3与3-AO细胞后,双荧光酶报告基因系统检测显示-1456～+308与-164～+308片段在两个细胞系中均有较高启动活性,+47～+308片段活性较前两者显著下降(P均0. 01)。结论含有TCF/LEF转录因子结合位点的-164～+47序列是卵巢癌中间皮素基因表达的核心启动子区,为进一步观察卵巢癌中间皮素基因的表达调控机制奠定基础。     

转录因子EGR—1及其抑癌作用的研究进展

EGR 1是一具有 3个锌指结构的转录因子。其基因Egr 1的转录和表达受多种因素调控。EGR 1能与许多基因的启动子区类似或相同于SP1和WT1的DNA序列结合 ,与WT1或SP1竞争或协同调控目的基因的转录。Egr 1在多种恶性肿瘤细胞中转录及表达减低或缺失 ,这是由于这些细胞缺乏转录和表达潜力。外源高表达EGR 1能抑制一些肿瘤的生长和恶性表型 ,其作用与下调bcl 2及激活TGFβ1 ,FN ,p2 1和FAK的表达有关。故认为该基因是一具基因治疗价值的Ⅱ类抑癌基因。Egr 1基因启动子的放射可诱导性也被用于一些肿瘤的治疗研究。     

转录因子Runx2调控前成骨细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达

背景：细胞外基质磷酸化糖蛋白基因在骨的矿化和吸收、成骨细胞与破骨细胞的平衡中起重要的作用,研究细胞外基质磷酸化糖蛋白的功能及其调控机制可为骨质疏松症的治疗提供新的思路。目的：分析转录因子Runx2在小鼠前成骨细胞中对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的调控作用,进而初步研究转录因子Runx2在骨形成发育过程中的作用。方法：首先根据Genbank中Runx2的基因序列构建Runx2真核表达载体;然后利用双荧光素酶基因检测报告系统分析Runx2对不同长度的细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响,以确定Runx2有明显作用的启动子区段,分析3种MAPK信号通路抑制剂调控Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子转录活性的影响;最后利用定时定量RT-PCR法分析Runx2对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子表达活性的影响。结果与结论：成功构建Runx2真核表达载体;双荧光素酶基因检测报告系统分析显示Runx2能够上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子在前成骨细胞中的转录活性,在(-300-+66)366 bp片段区域内上调效果较为显著,Runx2可通过激活MEK激酶MAPK通路上调细胞外基质磷酸化糖蛋白启动子活性;定时定量RT-PCR法检测再次验证Runx2上调细胞外基质磷酸化糖蛋白基因启动子的表达水平。提示转录因子Runx2可以通过MEK激酶MAPK信号通路对细胞外基质磷酸化糖蛋白基因表达进行调节,为探讨细胞外基质磷酸化糖蛋白在骨形成发育过程中的意义奠定基础。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

组织特异性表达基因PLUNC调控元件的生物信息学分析

目的分析组织特异性表达基因PLUNC的调控元件。方法采用进化足迹法,结合生物信息学工具,预测PLUNC基因的顺式作用元件和反式作用因子。结果预测的PLUNC基因的转录起始位点位于-1～＋10bp区域间、-29bp存在TATA盒子,启动子集中在-490bp～＋89bp内,在人和小鼠PLUNC基因的启动子保守区内存在29个共同的转录因子结合部位及5个增强子。结论PLUNC基因调控元件的分析可为探讨上呼吸道特异性表达基因的调控机制提供模型。生物信息学技术结合进化足迹法,在基因表达调控机制的研究中具有重要的应用价值。     

小鼠白蛋白基因的特异性调控及其在转基因动物中的应用

白蛋白是肝脏表达的血清蛋白，其组织特异性表达的基础在于白蛋白基因存在特异性调控序列如启动子、增强子，可与肝脏富含的转录因子如HNFl、C／EBP及eH-TF等特异性结合，刺激基因高效转录。自1989年Izban克隆并提交了小鼠白蛋白调控序列，其在转基因动物及基因治疗中得到了广泛的应用，实现了基因转移的器官靶向性。近年的研究发现，与其他启动子如CMV、PGK相比，白蛋白启动子引导的基因转移引起的免疫反应较轻，并可克服因启动子失活而导致的转基因沉默现象，相信随着转基因技术的不断发展，其将有越来越广泛的应用。     

组织特异性转录调控序列及在肿瘤基因治疗研究中的应用

肿瘤特征性蛋白“持家基因”转录调控序列是肿瘤细胞内特异活化的基因调控离列，可使外源基因在肿瘤细胞中特征性地表达。本文综述了普通启动子及组织特异性启动子的基本结构与洋调控因子对启动子的调节以及目前在肿瘤基因治疗研究领域中的应用价值的人酪氨酸酶（Ｔｙｒ）启动了，甲胎蛋白（ＡＦＰ）启动子，癌胚抗原（ＣＥＡ）启动子等的研究进展。     

转录因子MAZ对c1orf109基因转录表达调控的体外研究

目的:本文旨在研究转录因子Myc相关锌指蛋白(MAZ)在体外对人类1号染色体开放阅读框109(c1orf109)基因的转录表达调控。方法:体外条件下,采用凝胶电泳迁移实验筛选c1orf109基因启动子区MAZ的结合位点,并利用本室构建的由c1orf109启动子驱动的增强型绿色荧光蛋白报告载体与MAZ和转录因子特化蛋白1(Sp1)的表达质粒共转染He La细胞,24 h后,用激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测c1orf109基因的转录表达情况。结果:c1orf109启动子区可与MAZ结合,且有与Sp1共享的结合位点;MAZ与Sp1皆可抑制c1orf109的转录表达,且Sp1的抑制作用大于MAZ(P0.05)。结论:MAZ与Sp1两个转录因子共同调控c1orf109基因在生理及病理条件的表达,且调控方向一致。这种冗余机制调控方式的存在提示该基因的精确表达调控对于细胞行使其生物学功能可能具有重要意义     

转录因子YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6基因表达的影响

 目的：研究肿瘤相关转录因子YY1 对口腔鳞癌细胞整合素β6（integrin β6, ITGB6）基因表达调控的影响。方法：用生物信息学方法预测分布在ITGB6启动子区域的转录因子YY1潜在的结合位点,构建萤光素酶报告基因质粒,利用双萤光素酶报告基因系统检测ITGB6启动子片段的转录活性;利用染色质免疫沉淀技术检测在天然染色质条件下转录因子YY1与ITGB6启动子的结合情况;采用定点突变方法检测YY1结合位点对ITGB6启动子活性的影响;利用RT-PCR方法检测过表达转录因子YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6 mRNA表达水平的影响。结果：ITGB6启动子-421~-150 nt区域存在多个转录因子YY1潜在的结合位点。在口腔鳞癌细胞的天然染色质中,转录因子YY1结合于ITGB6启动子-421~-150 nt区域;定点突变YY1潜在结合位点对口腔鳞癌细胞中ITGB6启动子活性无显著影响。另外,过表达的YY1对口腔鳞癌细胞ITGB6 mRNA的表达水平也无影响。结论:转录因子YY1在口腔鳞癌细胞中结合于ITGB6基因启动子-421~-150 nt区域,但对ITGB6基因的基础转录水平无影响。     

研究短文伊贝沙坦对系膜增生肾炎大鼠肾核因子-κB及MMP-9的作用

核因子-κB(nuc lear factor-kappaB,NF-κB)是一种重要的核转录因子,参予细胞内信号传递,调控多种基因表达,许多肾脏疾病均伴有NF-κB转录活性异常。基质金属蛋白酶-9(m atrix m etalloprote inase-9,MMP-9)基因5′端启动子内有NF-κB的结合位点,许多细胞因子可通过这些结合位点来诱导MMP-9的表达。MMP-9的表达和活性与肾小球内的细胞增生呈正相关。血管紧张素II(angiotensinII,AngII)有调节血管张力、血流和促进细胞生长、增生以及致炎等作用,它可激活肾脏NF-κB表达,从而使NF-κB调控下的炎症因子表达上升。系膜增生性肾小…     

转录因子c-fos/c-jun调控成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的表达

背景：基质金属蛋白酶20是在成釉细胞中特异性表达的一种蛋白酶,其在牙齿釉质发育过程中具有重要作用。从分子角度研究基质金属蛋白酶20可受到的调控机制,为进一步做动物实验奠定基础。目的：通过研究转录因子c-fos/c-jun对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的调控作用,初步确定c-fos/c-jun在牙釉质发育中的作用。方法：首先构建c-fos真核表达载体重组质粒,分别利用双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析c-jun、c-fos转染成釉细胞对基质金属蛋白酶20基因活性的影响;并利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统进一步分析c-jun、c-fos对基质金属蛋白酶20基因活性的影响。结果与结论：双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析显示c-jun、c-fos转染转染小鼠成釉细胞后,基质金属蛋白酶20基因表达显著上调;突变基质金属蛋白酶20启动子的AP1结合位点后,c-fos/c-jun失去上调基质金属蛋白酶20启动子的转录活性的作用。结果提示c-fos/c-jun对基质金属蛋白酶20基因表达具有重要的调节作用,表明其在釉质发育过程中有其重要的生物学意义。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：